抗間皮素抗體和免疫偶聯(lián)物相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)依據(jù)35USC119(e)要求2010年12月20日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No.61/459,962的權(quán)益，通過(guò)提及而將其內(nèi)容收入本文。序列表本申請(qǐng)含有序列表，已經(jīng)以ASCII格式經(jīng)EFS-WEB提交且通過(guò)述及完整收入本文。2011年11月29日創(chuàng)建的所述ASCII拷貝命名為P4532R1-WO.txt，并且大小為53,169個(gè)字節(jié)。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及抗間皮素抗體和免疫偶聯(lián)物及其使用方法。發(fā)明背景間皮素是一種細(xì)胞表面糖蛋白，其表達(dá)通常局限于間皮（腹膜，心包，和胸膜）。然而，間皮素在多種腫瘤類型中顯著過(guò)表達(dá)。間皮素與MUC16（也稱作CA125）（先前鑒定為卵巢腫瘤抗原的一種粘蛋白樣糖蛋白）相互作用。MUC16具有胞外域，其包含至少14,000個(gè)殘基且特征在于每段156個(gè)氨基酸、稱作粘蛋白重復(fù)的串聯(lián)重復(fù)（參見(jiàn)例如O’Brienetal.,TumourBiol.22:348-366(2001);Yinetal.,J.Biol.Chem.276:27371-27375(2001)）。認(rèn)為間皮素和MUC16之間的相互作用在異型細(xì)胞粘附和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用（參見(jiàn)例如Rumpetal.,J.Biol.Chem.279:9190-9198(2004)）。間皮素作為71kDa前體蛋白合成，其成熟部分在細(xì)胞表面上表達(dá)。該前體蛋白被弗林蛋白酶蛋白水解切割成31kDa脫落組分（稱作巨核細(xì)胞嵌合因子，或MPF）和40kDa間皮素組分。后一種組分可經(jīng)GPI連接保持結(jié)合于細(xì)胞表面，但是也可經(jīng)由蛋白水解機(jī)制脫落。本領(lǐng)域需要靶向間皮素的藥劑來(lái)診斷和治療間皮素相關(guān)狀況，諸如癌癥。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)該需要且提供其它好處。發(fā)明概述本發(fā)明提供抗間皮素抗體和免疫偶聯(lián)物及其使用方法。一方面，提供一種結(jié)合間皮素的分離的抗體，其中該抗體選自：(i)一種抗體，其結(jié)合包含E153和D174的SEQIDNO:43表位且任選具有一項(xiàng)或多項(xiàng)下述特征：(a)不展現(xiàn)降低的對(duì)糖基化形式間皮素的結(jié)合；(b)不阻斷間皮素結(jié)合MUC16；和(c)以≤5nM的親和力結(jié)合間皮素；(ii)一種抗體，其結(jié)合包含E211的SEQIDNO:43表位且任選具有一項(xiàng)或多項(xiàng)下述特征：(a)不阻斷間皮素結(jié)合MUC16；和(b)以≤5nM的親和力結(jié)合間皮素；和(iii)一種抗體，其結(jié)合SEQIDNO:43氨基酸1-131內(nèi)的表位且以≤5nM的親和力結(jié)合間皮素。在某些實(shí)施方案中，該抗體為單克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，該抗體為人抗體，人源化抗體，或嵌合抗體抗體。在某些實(shí)施方案中，該抗體為結(jié)合間皮素的抗體片段。在某些實(shí)施方案中，該間皮素為SEQIDNO:43的人間皮素。在某些實(shí)施方案中，該抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22，(ii)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19，和(iii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:21；(b)(i)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:39，(ii)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:35，和(iii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:37；或(c)ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-H3，HVR-L3和HVR-H2。在某些實(shí)施方案中，該抗體包含(a)(i)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:20，(ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:21，和(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22；(b)(i)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:36，(ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:37，和(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:39；或(c)ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-H1，HVR-H2,和HVR-H3。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗體包含(a)(i)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:20，(ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:21，(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22，(iv)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:17，(v)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:18，和(vi)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19；(b)(i)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:36，(ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:37，(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:39，(iv)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:33，(v)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:34，和(vi)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:35；或(c)ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-H1，HVR-H2，HVR-H3，HVR-L1，HVR-L2和HVR-L3。在又一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含(i)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:20，(ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:21，(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22，(iv)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:17，(v)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:18，和(vi)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19，且進(jìn)一步包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含框架FR2序列SEQIDNO:25和FR3序列SEQIDNO:27。在某些實(shí)施方案中，該抗體包含(a)(i)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:17，(ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:18，和(iii)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19；(b)(i)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:33，(ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:34，和(iii)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:35；或(c)ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-L1，HVR-L2和HVR-L3。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:17，HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:18，和HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19，且進(jìn)一步包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含框架FR2序列SEQIDNO:25和FR3序列SEQIDNO:27。在某些實(shí)施方案中，該抗體包含(a)與氨基酸序列SEQIDNO:8具有至少95%序列同一性的VH序列；(b)與氨基酸序列SEQIDNO:4具有至少95%序列同一性的VL序列；(c)(a)中的VH序列和(b)中的VL序列；(d)與氨基酸序列SEQIDNO:16具有至少95%序列同一性的VH序列；(e)與氨基酸序列SEQIDNO:12具有至少95%序列同一性的VL序列；(f)(d)中的VH序列和(e)中的VL序列；(g)與ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VH序列的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列；(h)與ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VL序列的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列；或(i)(g)中的VH序列和(h)中的VL序列。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗體包含SEQIDNO:8的VH序列，SEQIDNO:16的VH序列，或ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VH序列。在另一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗體包含SEQIDNO:4的VL序列，SEQIDNO:12的VL序列，或ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VL序列。又一方面，本發(fā)明提供一種抗體，其包含(a)SEQIDNO:8的VH序列和SEQIDNO:4的VL序列；(b)SEQIDNO:16的VH序列和SEQIDNO:12的VL序列；(c)ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VH序列和VL序列；或(d)ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體。在某些實(shí)施方案中，依照任何上述實(shí)施方案的抗體為IgG1，IgG2a或IgG2b抗體。又一方面，本發(fā)明提供一種分離的核酸，其編碼依照任何上述實(shí)施方案的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種宿主細(xì)胞，其包含該核酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種生成抗體的方法，該方法包括培養(yǎng)該宿主細(xì)胞，使得該抗體生成。又一方面，提供一種免疫偶聯(lián)物，其具有式Ab-(L-D)p，其中：(a)Ab為任何上述實(shí)施方案的抗體；(b)L為接頭；(c)D為式DE的藥物且其中R2和R6各自為甲基，R3和R4各自為異丙基，R5為H，R7為仲丁基，每一個(gè)R8獨(dú)立選自CH3，O-CH3，OH和H；R9為H；且R18為-C(R8)2-C(R8)2-芳基；且(d)p范圍為1-8。在一個(gè)實(shí)施方案中，該藥物為auristatin。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該藥物為MMAE。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該接頭是蛋白酶可切割的。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該接頭包含val-cit二肽。在又一個(gè)實(shí)施方案中，該免疫偶聯(lián)物具有式：其中S為硫原子。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，p范圍為2-5。在另一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗體包含(i)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:20，(ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:21，(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22，(iv)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:17，(v)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:18，和(vi)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19。在另一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗體包含(i)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:36，(ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:37，(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:39，(iv)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:33，(v)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:34，和(vi)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:35。在另一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗體包含(a)SEQIDNO:8的VH序列和SEQIDNO:4的VL序列。在另一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗體包含(b)SEQIDNO:16的VH序列和SEQIDNO:12的VL序列。又一方面，本發(fā)明提供一種藥物配制劑，其包含任何上述實(shí)施方案的免疫偶聯(lián)物和藥學(xué)可接受載劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，該藥物配制劑進(jìn)一步包含別的治療劑。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該別的治療劑為吉西他濱。在另一個(gè)此類實(shí)施方案中，該別的治療劑為與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)的抗MUC16抗體。又一方面，本發(fā)明提供任何上述實(shí)施方案中的免疫偶聯(lián)物，其用作藥物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供任何上述實(shí)施方案中的免疫偶聯(lián)物，其用于治療間皮素陽(yáng)性癌癥。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該間皮素陽(yáng)性癌癥選自胰腺癌，卵巢癌，肺癌，子宮內(nèi)膜癌和間皮瘤。在另一個(gè)此類實(shí)施方案中，該間皮素陽(yáng)性癌癥為雙重陽(yáng)性癌癥。又一方面，本發(fā)明提供任何上述實(shí)施方案中的免疫偶聯(lián)物在制備藥物中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，該藥物用于治療間皮素陽(yáng)性癌癥。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該間皮素陽(yáng)性癌癥選自胰腺癌，卵巢癌，肺癌，子宮內(nèi)膜癌和間皮瘤。在另一個(gè)此類實(shí)施方案中，該間皮素陽(yáng)性癌癥為雙重陽(yáng)性癌癥。另一方面，提供一種治療具有間皮素陽(yáng)性癌癥的個(gè)體的方法，該方法包括對(duì)個(gè)體施用有效量的任何上述實(shí)施方案中的免疫偶聯(lián)物。在一個(gè)實(shí)施方案中，該間皮素陽(yáng)性癌癥選自胰腺癌，卵巢癌，肺癌，子宮內(nèi)膜癌和間皮瘤。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該間皮素陽(yáng)性癌癥為雙重陽(yáng)性癌癥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包含包括對(duì)個(gè)體施用別的治療劑。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該別的治療劑為吉西他濱。在另一個(gè)此類實(shí)施方案中，該別的治療劑為與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)的抗MUC16抗體。另一方面，提供一種抑制間皮素陽(yáng)性細(xì)胞增殖的方法，該方法包括在允許任何上述實(shí)施方案中的免疫偶聯(lián)物結(jié)合該細(xì)胞表面上的間皮素的條件下將該細(xì)胞暴露于該免疫偶聯(lián)物，由此抑制該細(xì)胞增殖。在一個(gè)實(shí)施方案中，該細(xì)胞為胰，卵巢，肺，間皮瘤，或子宮內(nèi)膜細(xì)胞。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該細(xì)胞為雙重陽(yáng)性細(xì)胞。另一方面，本發(fā)明提供任何上述實(shí)施方案中的抗體，其中該抗體與標(biāo)記物偶聯(lián)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該標(biāo)記物為正電子發(fā)射體。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該正電子發(fā)射體為89Zr。另一方面，提供一種檢測(cè)生物學(xué)樣品中的人間皮素的方法，該方法包括在允許任何上述實(shí)施方案中的抗間皮素抗體結(jié)合天然存在人間皮素的條件下將該生物學(xué)樣品與該抗間皮素抗體接觸，并檢測(cè)該抗間皮素抗體和該生物學(xué)樣品中的天然存在人間皮素之間是否形成復(fù)合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗間皮素抗體包含(a)ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-H1，HVR-H2，HVR-H3，HVR-L1，HVR-L2和HVR-L3；(b)ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VH序列和VL序列；或(d)ATCC登錄號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該生物學(xué)樣品為胰腺癌樣品，卵巢癌樣品，肺癌樣品，子宮內(nèi)膜癌樣品，或間皮瘤樣品。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括對(duì)組織切片實(shí)施免疫組織化學(xué)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該生物學(xué)樣品為血清。又一方面，提供一種檢測(cè)間皮素陽(yáng)性癌癥的方法，該方法包括將經(jīng)標(biāo)記的抗間皮素抗體（其中該抗間皮素抗體是任何上述實(shí)施方案中的抗間皮素抗體）施用于具有或懷疑具有間皮素陽(yáng)性癌癥的受試者，并檢測(cè)該受試者中的該經(jīng)標(biāo)記的抗間皮素抗體，其中檢測(cè)到該經(jīng)標(biāo)記的抗間皮素抗體指示該受試者中的間皮素陽(yáng)性癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，該經(jīng)標(biāo)記的抗間皮素抗體包含與正電子發(fā)射體偶聯(lián)的抗間皮素抗體。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該正電子發(fā)射體為89Zr。附圖簡(jiǎn)述圖1顯示通過(guò)前體蛋白蛋白水解切割成31kDa脫落組分（稱作巨核細(xì)胞強(qiáng)化因子，或MPF）和40kDa間皮素組分而生成間皮素。后一種組分可保持結(jié)合于細(xì)胞表面但也可脫落?！癈HO”代表四個(gè)糖基化位點(diǎn)，一個(gè)在MPF中，三個(gè)在間皮素中。圖2顯示各種組織中人間皮素基因表達(dá)的水平的圖示，如實(shí)施例A中描述的。圖3顯示分離的抗間皮素單克隆抗體的特性，如實(shí)施例B中描述的。圖4顯示小鼠(murine)抗體7D9（mu7D9）及其人源化變體（7D9.v1和7D9.v3）的可變輕鏈區(qū)序列的比對(duì)。圖5顯示小鼠抗體7D9（mu7D9）及其人源化變體（7D9.v1和7D9.v3）的可變重鏈區(qū)序列的比對(duì)。圖6顯示7D9的嵌合和人源化變體的特性，如實(shí)施例C中描述的。圖7顯示小鼠抗體22A10（22A10）及其人源化變體（hu22A10graft和22A10.v83）的可變輕鏈區(qū)序列的比對(duì)。圖8顯示小鼠抗體22A10（22A10）及其人源化變體（hu22A10graft和22A10.v83）的可變重鏈區(qū)序列的比對(duì)。圖9A顯示22A10的人源化變體在間皮素穩(wěn)定轉(zhuǎn)染BJAB細(xì)胞上的Scatchard分析，如實(shí)施例C中描述的。圖9B顯示22A10的人源化變體自相同穩(wěn)定轉(zhuǎn)染BJAB細(xì)胞對(duì)間皮素的免疫沉淀，如實(shí)施例C中描述的。圖10A顯示7D9的人源化變體的高變和框架區(qū)的序列。圖10B顯示22A10的人源化變體的高變和框架區(qū)的序列。圖11顯示來(lái)自不同物種的間皮素之間的序列同源性，如實(shí)施例D中描述的。圖11公開(kāi)SEQIDNO43和46-48，依呈現(xiàn)的次序。圖12顯示h7D9.v3和h22A10.v83與來(lái)自不同物種的間皮素的交叉反應(yīng)性，如實(shí)施例D中描述的。圖13顯示人源化抗間皮素抗體的親和力，通過(guò)穩(wěn)定表達(dá)間皮素的轉(zhuǎn)染細(xì)胞系和表達(dá)內(nèi)源間皮素的細(xì)胞系的Scatchard分析測(cè)定，如實(shí)施例E中描述的。圖14顯示抗體7D9或22A10和圖3中所列其它單克隆抗體之間的競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法的結(jié)果，如實(shí)施例F中描述的。圖15顯示用于表位定位的嵌合間皮素構(gòu)建物（依刻度繪制），如實(shí)施例G中描述的。圖15分別以SEQIDNO51-53公開(kāi)“EVEK”、“DAEQ”、和“DVER”。圖16顯示評(píng)估7D9和22A10對(duì)表達(dá)嵌合間皮素的細(xì)胞的結(jié)合的FACS的結(jié)果，如實(shí)施例G中描述的。圖17顯示一種用于鑒定h7D9.v3和h22A10.v83結(jié)合的氨基酸的突變策略，如實(shí)施例G中描述的。圖17以SEQIDNO:51公開(kāi)"EVEK"；分別以SEQIDNO54-57公開(kāi)"人132-212"、"獼猴132-212"、"大鼠132-212"和"小鼠132-212"；分別以SEQIDNO58-73公開(kāi)人和小鼠"MUT1"、"MUT3"、"MUT6"、"MUT7"、"MUT9"、"MUT10"、"MUT13"和"MUT15"；及分別以SEQIDNO73和74公開(kāi)"STKD"和"SVKD"。圖18A顯示評(píng)估h7D9.v3和h22A10.v83對(duì)表達(dá)人間皮素突變體的細(xì)胞的結(jié)合的FACS的結(jié)果，如實(shí)施例G中描述的。圖18B顯示評(píng)估h7D9.v3對(duì)表達(dá)獼猴間皮素突變體的細(xì)胞的結(jié)合的FACS的結(jié)果，如實(shí)施例G中描述的。圖19顯示7D9/h7D9.v3和22A10/h22A10.v83結(jié)合的表位內(nèi)的關(guān)鍵氨基酸殘基，如實(shí)施例G中描述的。圖19分別公開(kāi)SEQIDNO54-57，依出現(xiàn)的次序。圖20顯示h7D9.v3對(duì)糖基化間皮素的結(jié)合，如實(shí)施例H中描述的。圖21顯示測(cè)定抗體19C3，7D9和22A10是否阻斷間皮素結(jié)合MUC16及相反的兩項(xiàng)測(cè)定法的結(jié)果，如實(shí)施例I中描述的。圖22顯示胰管腺癌中間皮素的表達(dá)，通過(guò)免疫組織化學(xué)(IHC)，如實(shí)施例J中描述的。圖23顯示卵巢漿液性腺癌腫瘤中間皮素的表達(dá)，通過(guò)免疫組織化學(xué)(IHC)，如實(shí)施例J中描述的。圖24顯示非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)腺癌中間皮素的表達(dá)，通過(guò)免疫組織化學(xué)(IHC)，如實(shí)施例J中描述的。圖25顯示來(lái)自獼猴（右邊小圖）的組織中間皮素的表達(dá)，通過(guò)免疫組織化學(xué)(IHC)，如實(shí)施例J中描述的。圖26顯示免疫偶聯(lián)物h7D9.v3-vcMMAE在HPAC胰異種移植物中展現(xiàn)出功效，如實(shí)施例L中描述的。圖27顯示免疫偶聯(lián)物h7D9.v3-vcMMAE在原代胰異種移植物中展現(xiàn)出功效，如實(shí)施例M中描述的。圖28顯示免疫偶聯(lián)物h7D9.v3-vcMMAE在卵巢腫瘤異種移植物模型中展現(xiàn)出功效，如實(shí)施例N中描述的。圖29顯示免疫偶聯(lián)物h7D9.v3-vcMMAE在肺鱗狀細(xì)胞癌異種移植物模型中展現(xiàn)出功效，如實(shí)施例O中描述的。圖30顯示在轉(zhuǎn)染BJAB異種移植物腫瘤模型中，免疫偶聯(lián)物h7D9.v3-vcMMAE針對(duì)人間皮素的功效與免疫偶聯(lián)物h22A10.v83-vcMMAE針對(duì)獼猴間皮素的功效相似，如實(shí)施例P中描述的。圖31顯示在間皮瘤和卵巢腫瘤模型中，免疫偶聯(lián)物h7D9.v3-vcMMAE的功效與免疫偶聯(lián)物h22A10.v83-vcMMAE的功效相似，如實(shí)施例P中描述的。圖32顯示MUC16與間皮素形成復(fù)合物，而且這兩種蛋白質(zhì)自雙重陽(yáng)性細(xì)胞系共脫落，如實(shí)施例Q中描述的。圖33顯示19C3自間皮素置換預(yù)結(jié)合的MUC16，但是7D9不然。發(fā)明詳述I.定義出于本文中的目的，“受體人框架”指包含自人免疫球蛋白框架或如下文定義的人共有框架衍生的輕鏈可變域(VL)框架或重鏈可變域(VH)框架的氨基酸序列的框架。自人免疫球蛋白框架或人共有框架“衍生”的受體人框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有氨基酸序列變化。在一些實(shí)施方案中，氨基酸變化的數(shù)目是10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少、或2或更少。在一些實(shí)施方案中，VL受體人框架與VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列在序列上相同?！坝H和力”指分子（例如抗體）的單一結(jié)合位點(diǎn)與其結(jié)合配偶體（例如抗原）之間全部非共價(jià)相互作用總和的強(qiáng)度。除非另有指示，如本文中使用的，“結(jié)合親和力”指反映結(jié)合對(duì)的成員（例如抗體和抗原）之間1:1相互作用的內(nèi)在結(jié)合親和力。分子X(jué)對(duì)其配偶體Y的親和力通?？梢杂媒怆x常數(shù)(Kd)來(lái)表述。親和力可以通過(guò)本領(lǐng)域知道的常用方法來(lái)測(cè)量，包括本文中所描述的方法。下文描述了用于測(cè)量結(jié)合親和力的具體的說(shuō)明性和例示性的實(shí)施方案?！坝H和力成熟的”抗體指在一個(gè)或多個(gè)高變區(qū)(HVR)中具有一處或多處改變的抗體，與不擁有此類改變的親本抗體相比，此類改變導(dǎo)致該抗體對(duì)抗原的親和力改善。術(shù)語(yǔ)“抗間皮素抗體”和“結(jié)合間皮素的抗體”指能夠以足夠親和力結(jié)合間皮素，使得該抗體可作為診斷劑和/或治療劑用于靶向間皮素的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)例如通過(guò)放射免疫測(cè)定法(RIA)的測(cè)量，抗間皮素抗體結(jié)合無(wú)關(guān)的、非間皮素的蛋白質(zhì)的程度小于該抗體對(duì)間皮素的結(jié)合的約10%。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合間皮素的抗體具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM、或≤0.001nM（例如10-8M或更少，例如10-8M到10-13M，例如10-9M到10-13M）的解離常數(shù)(Kd)。在某些實(shí)施方案中，抗間皮素抗體結(jié)合在來(lái)自不同物種的間皮素中保守的間皮素表位。本文中的術(shù)語(yǔ)“抗體”以最廣義使用，并且涵蓋各種抗體結(jié)構(gòu)，包括但不限于單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體（例如雙特異性抗體）、和抗體片段，只要它們展現(xiàn)出期望的抗原結(jié)合活性?！翱贵w片段”指與完整抗體不同的分子，其包含完整抗體的一部分且結(jié)合完整抗體結(jié)合的抗原?？贵w片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子（例如scFv）；和由抗體片段形成的多特異性抗體。與參照抗體“結(jié)合相同表位的抗體”指在競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法中將參照抗體對(duì)其抗原的結(jié)合阻斷50%或更多的抗體，且相反，參照抗體在競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法中將該抗體對(duì)其抗原的結(jié)合阻斷50%或更多。本文中提供了例示性的競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法。術(shù)語(yǔ)“癌癥”和“癌性”指向或描述哺乳動(dòng)物中特征通常為細(xì)胞生長(zhǎng)/增殖不受調(diào)控的生理疾患。癌癥的例子包括但不限于癌、淋巴瘤（例如何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤）、母細(xì)胞瘤、肉瘤和白血病。此類癌癥的更具體例子包括鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺的腺癌、肺的鱗癌、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃腸癌、胰腺癌、膠質(zhì)瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌(livercancer)、膀胱癌、肝瘤(hepatoma)、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)、白血病和其它淋巴增殖性病癥、及各種類型的頭和頸癌。術(shù)語(yǔ)“嵌合”抗體指其中的重和/或輕鏈的一部分自特定的來(lái)源或物種衍生，而重和/或輕鏈的剩余部分自不同來(lái)源或物種衍生的抗體。抗體的“類”指其重鏈擁有的恒定域或恒定區(qū)的類型?？贵w有5大類：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，并且這些中的幾種可以進(jìn)一步分成亞類（同種型），例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、和IgA2。與不同類免疫球蛋白對(duì)應(yīng)的重鏈恒定域分別稱作α、δ、ε、γ、和μ。在用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞毒劑”指抑制或阻止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞死亡或破壞的物質(zhì)。細(xì)胞毒劑包括但不限于：放射性同位素（例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素）；化學(xué)治療劑或藥物（例如甲氨蝶呤(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)、長(zhǎng)春花生物堿類(vincaalkaloids)（長(zhǎng)春新堿(vincristine)、長(zhǎng)春堿(vinblastine)、依托泊苷(etoposide)）、多柔比星(doxorubicin)、美法侖(melphalan)、絲裂霉素(mitomycin)C、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔紅霉素(daunorubicin)或其它嵌入劑）；生長(zhǎng)抑制劑；酶及其片段，諸如溶核酶；抗生素；毒素，諸如小分子毒素或者細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物起源的酶活性毒素，包括其片段和/或變體；及下文公開(kāi)的各種抗腫瘤或抗癌劑。術(shù)語(yǔ)“雙重陽(yáng)性癌癥”指包含間皮素和MUC16二者呈陽(yáng)性的細(xì)胞的癌癥。術(shù)語(yǔ)“雙重陽(yáng)性細(xì)胞”指在其表面上表達(dá)間皮素和MUC16二者的細(xì)胞。“效應(yīng)器功能”指那些可歸于抗體Fc區(qū)且隨抗體同種型而變化的生物學(xué)活性。抗體效應(yīng)器功能的例子包括：C1q結(jié)合和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)；Fc受體結(jié)合；抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細(xì)胞表面受體（例如B細(xì)胞受體）下調(diào)；和B細(xì)胞活化。藥劑（例如藥物配制劑）的“有效量”指在必需的劑量和時(shí)段上有效實(shí)現(xiàn)期望的治療或預(yù)防結(jié)果的量。術(shù)語(yǔ)“表位”指抗原分子上抗體所結(jié)合的特定位點(diǎn)。本文中的術(shù)語(yǔ)“Fc區(qū)”用于定義免疫球蛋白重鏈中至少含有恒定區(qū)一部分的C端區(qū)。該術(shù)語(yǔ)包括天然序列Fc區(qū)和變體Fc區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，人IgG重鏈Fc區(qū)自Cys226，或自Pro230延伸至重鏈的羧基端。然而，F(xiàn)c區(qū)的C端賴氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文中另有規(guī)定，F(xiàn)c區(qū)或恒定區(qū)中的氨基酸殘基的編號(hào)方式依照EU編號(hào)系統(tǒng)，又稱作EU索引，如記載于Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD,1991。“框架”或“FR”指除高變區(qū)(HVR)殘基外的可變域殘基。一般地，可變域的FR由4個(gè)FR域組成：FR1、FR2、FR3、和FR4。因而，HVR和FR序列在VH（或VL）中一般以如下的順序出現(xiàn)：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。術(shù)語(yǔ)“全長(zhǎng)抗體”、“完整抗體”、和“全抗體”在本文中可互換使用，指與天然抗體結(jié)構(gòu)具有基本上類似的結(jié)構(gòu)或者具有含有如本文中所限定的Fc區(qū)的重鏈的抗體。術(shù)語(yǔ)“間皮素的糖基化形式”指通過(guò)添加碳水化合物殘基經(jīng)過(guò)翻譯后修飾的間皮素天然存在形式。術(shù)語(yǔ)“宿主細(xì)胞”、“宿主細(xì)胞系”、和“宿主細(xì)胞培養(yǎng)物”可互換使用，并且指已經(jīng)導(dǎo)入外源核酸的細(xì)胞，包括此類細(xì)胞的后代。宿主細(xì)胞包括“轉(zhuǎn)化體”和“經(jīng)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞”，其包括原代的經(jīng)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞及自其衍生的后代而不考慮傳代的次數(shù)。后代在核酸內(nèi)容物上可以與親本細(xì)胞不完全相同，而是可以含有突變。本文中包括具有與在初始轉(zhuǎn)化細(xì)胞中篩選或選擇的相同功能或生物學(xué)活性的突變體后代?！叭丝贵w”指擁有與由人或人細(xì)胞生成的或利用人抗體全集或其它人抗體編碼序列自非人來(lái)源衍生的抗體的氨基酸序列對(duì)應(yīng)的氨基酸序列的抗體。人抗體的此定義明確排除包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體?！叭斯灿锌蚣堋敝复砣嗣庖咔虻鞍譜L或VH框架序列選集中最常存在的氨基酸殘基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列選集來(lái)自可變域序列亞組。通常，序列亞組是如Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第五版,NIHPublication91-3242,BethesdaMD(1991),第1-3卷中的亞組。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于VL，亞組是如Kabat等，見(jiàn)上文中的亞組κI。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于VH，亞組是如Kabat等，見(jiàn)上文中的亞組III?！叭嗽椿笨贵w指包含來(lái)自非人HVR的氨基酸殘基和來(lái)自人FR的氨基酸殘基的嵌合抗體。在某些實(shí)施方案中，人源化抗體會(huì)包含至少一個(gè)，通常兩個(gè)基本上整個(gè)可變域，其中所有或基本上所有HVR（例如，CDR）對(duì)應(yīng)于非人抗體的那些，且所有或基本上所有FR對(duì)應(yīng)于人抗體的那些。任選地，人源化抗體可以至少包含自人抗體衍生的抗體恒定區(qū)的一部分。抗體，例如非人抗體的“人源化形式”指已經(jīng)經(jīng)歷人源化的抗體。在用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)“高變區(qū)”或“HVR”指抗體可變域中在序列上高變的和/或形成結(jié)構(gòu)上限定的環(huán)（“高變環(huán)”）的每個(gè)區(qū)。一般地，天然的4鏈抗體包含6個(gè)HVR；三個(gè)在VH中（H1、H2、H3），且三個(gè)在VL中（L1、L2、L3）。HVR一般包含來(lái)自高變環(huán)和/或來(lái)自“互補(bǔ)決定區(qū)”(CDR)的氨基酸殘基，后一種是最高序列變異性的和/或牽涉抗原識(shí)別。例示性高變區(qū)存在于氨基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)、和96-101(H3)(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。例示性CDR（CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、和CDR-H3）存在于氨基酸殘基L1的24-34、L2的50-56、L3的89-97、H1的31-35B、H2的50-65、和H3的95-102(Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991))。除了VH中的CDR1外，CDR一般包含形成高變環(huán)的氨基酸殘基。CDR還包含“特異性決定殘基”，或“SDR”，其是接觸抗原的殘基。SDR包含在稱作縮短的-CDR，或a-CDR的CDR區(qū)內(nèi)。例示性的a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2、和a-CDR-H3)存在于L1的氨基酸殘基31-34、L2的50-55、L3的89-96、H1的31-35B、H2的50-58、和H3的95-102(見(jiàn)Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))。除非另有指示，可變域中的HVR殘基和其它殘基（例如，F(xiàn)R殘基）在本文中依照Kabat等，見(jiàn)上文編號(hào)?！懊庖呔Y合物”指與一種或多種異源分子，包括但不限于細(xì)胞毒劑綴合的抗體?！皞€(gè)體”或“受試者”是哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物包括但不限于馴養(yǎng)的動(dòng)物（例如，牛、綿羊、貓、犬、和馬）、靈長(zhǎng)類（例如，人和非人靈長(zhǎng)類諸如猴）、家兔、和嚙齒類（例如，小鼠和大鼠）。在某些實(shí)施方案中，個(gè)體或受試者是人。“分離的抗體”指已經(jīng)與其天然環(huán)境的組分分開(kāi)的抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體純化至大于95%或99%的純度，如通過(guò)例如電泳（例如，SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細(xì)管電泳）或?qū)游觯ɡ?，離子交換或反相HPLC）測(cè)定的。關(guān)于用于評(píng)估抗體純度的方法的綜述，見(jiàn)例如Flatman等,J.Chromatogr.B848:79-87(2007)?！胺蛛x的核酸”指已經(jīng)與其天然環(huán)境的組分分開(kāi)的核酸分子。分離的核酸包括通常含有核酸分子的細(xì)胞中含有的核酸分子，但是核酸分子在染色體外或在與其天然染色體位置不同的染色體位置處存在?！熬幋a抗間皮素抗體的分離的核酸”指編碼抗體重和輕鏈（或其片段）的一種或多種核酸分子，包括單一載體或不同載體中的此類核酸分子，和存在于宿主細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)位置的此類核酸分子。如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“間皮素”指源自細(xì)胞中間皮素前體蛋白加工的任何天然、成熟間皮素。該術(shù)語(yǔ)包括來(lái)自任何脊椎動(dòng)物來(lái)源的間皮素，包括哺乳動(dòng)物諸如靈長(zhǎng)類動(dòng)物（例如人和獼猴）和嚙齒類動(dòng)物（例如小鼠和大鼠），除非另有說(shuō)明。該術(shù)語(yǔ)還包括間皮素的天然存在變體，例如剪接變體或等位變體。一種例示性人間皮素前體蛋白的氨基酸序列顯示于SEQIDNO:42，而一種例示性人間皮素顯示于SEQIDNO:43。本文中描述了別的例示性間皮素序列。術(shù)語(yǔ)“間皮素陽(yáng)性癌癥”指包含在其表面上表達(dá)間皮素的細(xì)胞的癌癥。術(shù)語(yǔ)“間皮素陽(yáng)性細(xì)胞”指在其表面上表達(dá)間皮素的細(xì)胞。在用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”指從一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗體，即構(gòu)成群體的各個(gè)抗體是相同的和/或結(jié)合相同表位，除了例如含有天然存在的突變或在單克隆抗體制備物的生成期間發(fā)生的可能的變體抗體外，此類變體一般以極小量存在。與通常包含針對(duì)不同決定簇（表位）的不同抗體的多克隆抗體制備物不同，單克隆抗體制備物的每種單克隆抗體針對(duì)抗原上的單一決定簇。如此，修飾語(yǔ)“單克隆”指示抗體自一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的特性，而不應(yīng)解釋為要求通過(guò)任何特定方法來(lái)生成抗體。例如，可以通過(guò)多種技術(shù)來(lái)生成要依照本發(fā)明使用的單克隆抗體，包括但不限于雜交瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法、和利用含有所有或部分人免疫球蛋白基因座的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法，本文中描述了用于生成單克隆抗體的此類方法和其它例示性方法。術(shù)語(yǔ)“MUC16陽(yáng)性癌癥”指包含在其表面上表達(dá)MUC16的細(xì)胞的癌癥。術(shù)語(yǔ)“MUC16陽(yáng)性細(xì)胞”指在其表面上表達(dá)MUC16的細(xì)胞。“裸抗體”指未與異源模塊（例如細(xì)胞毒性模塊）或放射性標(biāo)記物綴合的抗體。裸抗體可以存在于藥物配制劑中?！疤烊豢贵w”指具有不同結(jié)構(gòu)的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗體是約150,000道爾頓的異四聚糖蛋白，由二硫化物鍵合的兩條相同輕鏈和兩條相同重鏈構(gòu)成。從N至C端，每條重鏈具有一個(gè)可變區(qū)(VH)，又稱作可變重域或重鏈可變域，接著是三個(gè)恒定域（CH1、CH2、和CH3）。類似地，從N至C端，每條輕鏈具有一個(gè)可變區(qū)(VL)，又稱作可變輕域或輕鏈可變域，接著是一個(gè)恒定輕(CL)域。根據(jù)其恒定域氨基酸序列，抗體輕鏈可歸入兩種類型中的一種，稱作卡帕(κ)和拉姆達(dá)(λ)。術(shù)語(yǔ)“包裝插頁(yè)”用于指治療產(chǎn)品的商業(yè)包裝中通常包含的用法說(shuō)明書，其含有關(guān)于涉及此類治療產(chǎn)品應(yīng)用的適應(yīng)癥、用法、劑量、施用、聯(lián)合療法、禁忌癥和/或警告的信息。關(guān)于參照多肽序列的“百分比(%)氨基酸序列同一性”定義為比對(duì)序列并在必要時(shí)引入缺口以獲取最大百分比序列同一性后，且不將任何保守替代視為序列同一性的一部分時(shí)，候選序列中與參照多肽序列中的氨基酸殘基相同的氨基酸殘基的百分率。為測(cè)定百分比氨基酸序列同一性目的的對(duì)比可以以本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的多種方式進(jìn)行，例如使用公眾可得到的計(jì)算機(jī)軟件，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以決定用于比對(duì)序列的合適參數(shù)，包括對(duì)所比較序列全長(zhǎng)獲得最大對(duì)比所需的任何算法。然而，為了本發(fā)明的目的，%氨基酸序列同一性值是使用序列比較計(jì)算機(jī)程序ALIGN-2產(chǎn)生的。ALIGN-2序列比較計(jì)算機(jī)程序由Genentech,Inc.編寫，并且源代碼已經(jīng)連同用戶文檔一起提交給美國(guó)版權(quán)局(USCopyrightOffice,WashingtonD.C.,20559)，其中其以美國(guó)版權(quán)注冊(cè)號(hào)TXU510087注冊(cè)。公眾自Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,California可獲得ALIGN-2程序，或者可以從源代碼編譯。ALIGN2程序應(yīng)當(dāng)編譯成在UNIX操作系統(tǒng)，包括數(shù)碼UNIXV4.0D上使用。所有序列比較參數(shù)由ALIGN-2程序設(shè)定且不變。在采用ALIGN-2來(lái)比較氨基酸序列的情況中，給定氨基酸序列A相對(duì)于(to)、與(with)、或針對(duì)(against)給定氨基酸序列B的%氨基酸序列同一性（或者可表述為具有或包含相對(duì)于、與、或針對(duì)給定氨基酸序列B的某一%氨基酸序列同一性的給定氨基酸序列A）如下計(jì)算：分?jǐn)?shù)X/Y乘100其中X是由序列比對(duì)程序ALIGN-2在該程序的A和B比對(duì)中評(píng)分為相同匹配的氨基酸殘基數(shù)，且其中Y是B中的氨基酸殘基總數(shù)。應(yīng)當(dāng)領(lǐng)會(huì)，若氨基酸序列A的長(zhǎng)度與氨基酸序列B的長(zhǎng)度不相等，則A相對(duì)于B的%氨基酸序列同一性將不等于B相對(duì)于A的%氨基酸序列同一性。除非另有明確說(shuō)明，本文中所使用的所有%氨基酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2計(jì)算機(jī)程序獲得的。術(shù)語(yǔ)“藥物配制劑”指處于如下的形式，使得容許其中含有的活性成分的生物學(xué)活性是有效的，且不含對(duì)會(huì)接受配制劑施用的受試者具有不可接受的毒性的別的組分的制劑。“藥學(xué)可接受載體”指藥物配制劑中與活性成分不同的，且對(duì)受試者無(wú)毒的成分。藥學(xué)可接受載體包括但不限于緩沖劑、賦形劑、穩(wěn)定劑、或防腐劑。在用于本文時(shí)，“治療”（及其語(yǔ)法變化形式，諸如“處理”或“處置”）指試圖改變所治療個(gè)體的自然進(jìn)程的臨床干預(yù)，可以是為了預(yù)防或在臨床病理學(xué)的進(jìn)程中進(jìn)行。治療的期望效果包括但不限于預(yù)防疾病的發(fā)生或復(fù)發(fā)、緩解癥狀、削弱疾病的任何直接或間接病理學(xué)后果、預(yù)防轉(zhuǎn)移、減緩疾病進(jìn)展的速率、改善或減輕疾病狀態(tài)、及免除或改善預(yù)后。在有些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體用于延遲疾病的發(fā)生/發(fā)展，或用于減緩疾病的進(jìn)展。術(shù)語(yǔ)“可變區(qū)”或“可變域”指抗體重或輕鏈中牽涉抗體結(jié)合抗原的域。天然抗體的重鏈和輕鏈可變域（分別為VH和VL）一般具有類似的結(jié)構(gòu)，其中每個(gè)域包含4個(gè)保守的框架區(qū)(FR)和3個(gè)高變區(qū)(HVR)。（見(jiàn)例如Kindt等KubyImmunology,第6版,W.H.FreemanandCo.,第91頁(yè)(2007)）。單個(gè)VH或VL域可以足以賦予抗原結(jié)合特異性。此外，可以分別使用來(lái)自結(jié)合抗原的抗體的VH或VL域篩選互補(bǔ)VL或VH域的文庫(kù)來(lái)分離結(jié)合特定抗原的抗體。見(jiàn)例如，Portolano等,J.Immunol.150:880-887(1993);Clarkson等,Nature352:624-628(1991)。在用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)“載體”指能夠增殖與其連接的另一種核酸的核酸分子。該術(shù)語(yǔ)包括作為自身復(fù)制型核酸結(jié)構(gòu)的載體及整合入接受其導(dǎo)入的宿主細(xì)胞的基因組中的載體。某些載體能夠指導(dǎo)與其可操作連接的核酸的表達(dá)。此類載體在本文中稱為“表達(dá)載體”。II.組合物和方法一方面，本發(fā)明部分基于結(jié)合間皮素的抗體和包含此類抗體的免疫偶聯(lián)物。本發(fā)明的抗體和免疫偶聯(lián)物可用于例如診斷或治療間皮素陽(yáng)性癌癥。A.例示性抗間皮素抗體一方面，本發(fā)明提供結(jié)合間皮素的分離的抗體。天然存在間皮素源自對(duì)細(xì)胞中間皮素前體蛋白的切割，產(chǎn)生間皮素和巨核細(xì)胞強(qiáng)化因子(MPF)，如圖1中所示。間皮素相對(duì)于前體蛋白含有C端截短。該截短可容許GPI錨附著。間皮素可保持結(jié)合于細(xì)胞表面，例如經(jīng)GPI錨，或者間皮素可自細(xì)胞釋放（例如GPI錨可被至今未鑒定的酶切割）以生成細(xì)胞培養(yǎng)物或動(dòng)物血清中脫落的間皮素。一種例示性天然存在人間皮素前體蛋白序列提供于SEQIDNO:42，而且相應(yīng)間皮素序列顯示于SEQIDNO:43（對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:42的氨基酸296-580）。一種備選間皮素序列對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:42的氨基酸296-598。SEQIDNO:44是SEQIDNO:42的一種天然存在變體，其加工產(chǎn)生具有序列SEQIDNO:45的間皮素。SEQIDNO:45相對(duì)于SEQIDNO:43在氨基酸116處含有一段八個(gè)氨基酸的插入。SEQIDNO:45中顯示的變體形式間皮素表現(xiàn)出占腫瘤細(xì)胞系中間皮素轉(zhuǎn)錄物的約5%。在某些實(shí)施方案中，抗間皮素抗體具有至少一項(xiàng)或多項(xiàng)下述特征（任意組合）：(a)結(jié)合包含(i)E153和D174或(ii)E211的SEQIDNO:43表位；(b)展現(xiàn)或不展現(xiàn)改變的或降低的對(duì)不同糖基化形式間皮素的結(jié)合；(c)阻斷或不阻斷間皮素結(jié)合MUC16；(d)以≤5nM，或者≤1nM，或者≤0.5nM，或者≤0.1nM，且任選≥0.0001nM的親和力結(jié)合間皮素。在任何上述實(shí)施方案中，不阻斷間皮素結(jié)合MUC16的抗體是增強(qiáng)間皮素結(jié)合MUC16的抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗間皮素抗體結(jié)合包含E153和D174的SEQIDNO:43表位。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗間皮素抗體進(jìn)一步具有一項(xiàng)或多項(xiàng)下述特征（任意組合）：(a)不展現(xiàn)降低的對(duì)糖基化形式間皮素的結(jié)合；(b)不阻斷間皮素結(jié)合MUC16；(c)以≤5nM，或者≤1nM，或者≤0.5nM，且任選≥0.0001nM的親和力結(jié)合間皮素。在此類實(shí)施方案中，不阻斷間皮素結(jié)合MUC16的抗體增強(qiáng)間皮素結(jié)合MUC16和/或抗體以≤1nM的親和力結(jié)合。一種具有上述特征的例示性抗體是本文中公開(kāi)的7D9及其人源化變體，諸如h7D9.v3。在任何上述實(shí)施方案中，抗間皮素抗體結(jié)合的間皮素是人間皮素。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗間皮素抗體結(jié)合包含E211的SEQIDNO:43表位。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗間皮素抗體進(jìn)一步具有一項(xiàng)或多項(xiàng)下述特征：(a)不阻斷間皮素結(jié)合MUC16；(b)以≤5nM，或者≤1nM，或者≤0.5nM，且任選≥0.0001nM的親和力結(jié)合間皮素。在此類實(shí)施方案中，不阻斷間皮素結(jié)合MUC16的抗體增強(qiáng)間皮素結(jié)合MUC16，和/或該抗體以≤1nM的親和力結(jié)合。一種具有上述特征的例示性抗體是本文中公開(kāi)的22A10及其人源化變體，諸如22A10.v83。在任何上述實(shí)施方案中，抗間皮素抗體結(jié)合的間皮素是人間皮素，獼猴間皮素，和/或大鼠間皮素。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗間皮素抗體：(a)結(jié)合SEQIDNO:43氨基酸1-131內(nèi)的表位；且(b)以≤5nM，或者≤1nM，或者≤0.5nM，或者≤0.1nM，且任選≥0.0001nM的親和力結(jié)合間皮素。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗體阻斷間皮素結(jié)合MUC16和/或結(jié)合SEQIDNO:43氨基酸1-64或1-70內(nèi)的表位。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，該抗體置換結(jié)合至間皮素的MUC16。一種具有上述特征的例示性抗體是本文中公開(kāi)的19C3。在任何上述實(shí)施方案中，抗間皮素抗體結(jié)合的間皮素是人間皮素。測(cè)定法為了確定抗間皮素抗體是否“結(jié)合包含E153和D174的SEQIDNO:43表位”或“結(jié)合包含E211的SEQIDNO:43表位”，在包含SEQIDNO:43的多肽中突變那些殘基，并如實(shí)施例G中所述通過(guò)FACS測(cè)試抗體與293細(xì)胞中表達(dá)的突變型多肽的結(jié)合，其中抗體與突變型多肽的結(jié)合的實(shí)質(zhì)性降低（≥70%降低）或消除指示該抗體結(jié)合包含E153和D174或包含E211的SEQIDNO:43表位。為了確定抗間皮素抗體是否“不展現(xiàn)降低的對(duì)糖基化形式間皮素的結(jié)合”，在CHO細(xì)胞中表達(dá)帶標(biāo)簽的人間皮素，純化（經(jīng)由標(biāo)簽）并依照電荷在MonoS柱上進(jìn)一步分開(kāi)成間皮素高度（級(jí)分A11），中度（A12），低度（B1）和低度至不（B5）糖基化的級(jí)分，如實(shí)施例H中描述的。使每種級(jí)分流過(guò)具有預(yù)結(jié)合的抗間皮素抗體的芯片，并為每種級(jí)分測(cè)量結(jié)合和解離速率。如果每種級(jí)分的親和力彼此在25%以內(nèi)，表明該抗體不展現(xiàn)降低的對(duì)糖基化形式間皮素的結(jié)合。為了確定抗間皮素抗體是否“阻斷間皮素結(jié)合MUC16”，“不阻斷間皮素結(jié)合MUC16”，或“增強(qiáng)間皮素結(jié)合MUC16”，如下實(shí)施MUC16結(jié)合測(cè)定法。具體而言，在抗間皮素抗體存在或缺失下將一種生物素化MUC16片段（涵蓋粘蛋白重復(fù)中的三個(gè)）與穩(wěn)定表達(dá)間皮素的A431細(xì)胞一起溫育，并用鏈霉親合素-PE通過(guò)FACS測(cè)定MUC16-生物素結(jié)合細(xì)胞的水平。間皮素的MUC16結(jié)合位點(diǎn)已經(jīng)暫時(shí)定位于間皮素的頭64個(gè)氨基酸（Kanekoetal.，J.BiolChem.284:3739-49(2009)）。相反，將穩(wěn)定表達(dá)MUC16的PC3細(xì)胞與純化的間皮素-his8（"his8"作為SEQIDNO:49公開(kāi)）（其經(jīng)過(guò)與抗間皮素抗體一起預(yù)溫育）一起溫育，并使用Alexa-647偶聯(lián)抗His6抗體（"His6"作為SEQIDNO:50公開(kāi)）通過(guò)FACS檢測(cè)純化的間皮素-his8:抗體復(fù)合物對(duì)表達(dá)MUC16的細(xì)胞的結(jié)合。如果在任一上述測(cè)定法中，F(xiàn)ACS信號(hào)在抗間皮素抗體存在下比在缺失下低≥50%，那么認(rèn)為該抗體阻斷間皮素結(jié)合MUC16。如果在后一種上述測(cè)定法中，F(xiàn)ACS信號(hào)在抗間皮素抗體存在下沒(méi)有降低≥50%，那么認(rèn)為該抗體不阻斷間皮素結(jié)合MUC16。如果在后一種上述測(cè)定法中，F(xiàn)ACS信號(hào)在抗間皮素抗體存在下比在抗間皮素抗體缺失下升高，那么認(rèn)為該抗體增強(qiáng)間皮素結(jié)合MUC16。如本文中II.A.1節(jié)所述依照Biacore測(cè)定法確定抗間皮素抗體是否“以≤5nM，或者≤1nM，或者≤0.5nM，或者≤0.1nM的親和力結(jié)合”。具體而言，Kd是使用表面等離振子共振測(cè)定法使用-2000或-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)于25℃使用固定化抗原CM5芯片在約10個(gè)響應(yīng)單位(RU)測(cè)量的。簡(jiǎn)言之，依照供應(yīng)商的用法說(shuō)明書用鹽酸N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。要使用的抗原是如實(shí)施例B中所述自大腸桿菌生成和分離的間皮素。將抗原用10mM乙酸鈉pH4.8稀釋至5μg/ml（約0.2μM），然后以5μl/分鐘的流速注射以獲得約10個(gè)響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團(tuán)。為了進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量，于25℃以約25μl/分鐘的流速注入在含0.05%聚山梨酯20(TWEEN-20TM)表面活性劑的PBS(PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab（0.78nM至500nM）。使用簡(jiǎn)單一對(duì)一朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(BIACOREEvaluationSoftwareversion3.2)通過(guò)同時(shí)擬合結(jié)合和解離傳感圖計(jì)算結(jié)合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率koff/kon計(jì)算。見(jiàn)例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果根據(jù)上文表面等離振子共振測(cè)定法，結(jié)合速率超過(guò)106M-1S-1，那么結(jié)合速率可使用熒光淬滅技術(shù)來(lái)測(cè)定，即根據(jù)分光計(jì)諸如配備了斷流裝置的分光光度計(jì)(AvivInstruments)或8000系列SLM-AMINCOTM分光光度計(jì)(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測(cè)量，在存在濃度漸增的抗原的情況中，測(cè)量PBSpH7.2中20nM抗抗原抗體（Fab形式）于25℃的熒光發(fā)射強(qiáng)度（激發(fā)=295nm；發(fā)射=340nm，16nm帶通）的升高或降低。抗體7D9及其它實(shí)施方案一方面，本發(fā)明提供一種抗間皮素抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:20；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:21；(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22；(d)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:17；(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:18；和(f)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19。一方面，本發(fā)明提供一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VHHVR序列：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:20；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:21；和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:22，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:19。在又一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-L2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:22，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:19，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:21。在又一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:20；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:21；和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22。另一方面，本發(fā)明提供一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VLHVR序列：(a)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:17；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:18；和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含：(a)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:17；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:18；和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19。另一方面，本發(fā)明的抗體包含：(a)VH結(jié)構(gòu)域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VHHVR序列：(i)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:20，(ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:21，和(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22；和(b)VL結(jié)構(gòu)域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:17，(ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:18，和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19。另一方面，本發(fā)明提供一種抗體，其包含：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:20；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:21；(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22；(d)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:17；(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:18；和(f)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19。在任何上述實(shí)施方案，抗間皮素抗體是人源化的。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗間皮素抗體包含任何上述實(shí)施方案中的HVR，而且進(jìn)一步包含受體人框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。在某些實(shí)施方案中，人受體框架是人VL卡帕I共有（VLKI）框架和/或VH框架VHATA，其在3個(gè)位置不同于人VH亞組III共有（VHIII）：R71A，N73T和L78A(Carteretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:4285(1992))。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗間皮素抗體包含任何上述實(shí)施方案中的HVR，而且進(jìn)一步包含輕鏈可變域，其包含框架FR2序列SEQIDNO:25和FR3序列SEQIDNO:27。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，所述輕鏈可變域框架是經(jīng)修飾人VL卡帕I共有（VLKI）框架，其具有FR2序列SEQIDNO:25和FR3序列SEQIDNO:27。另一方面，抗間皮素抗體包含與氨基酸序列SEQIDNO:8具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實(shí)施方案中，具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VH序列相對(duì)于參照序列包含替代（例如保守替代）、插入、或刪除，但是包含該序列的抗間皮素抗體保留結(jié)合間皮素的能力。在某些實(shí)施方案中，在SEQIDNO:8中替代、插入和/或刪除了總共1至10個(gè)氨基酸。在某些實(shí)施方案中，替代、插入、或刪除發(fā)生在HVR以外的區(qū)域中（即在FR中）。任選地，抗間皮素抗體包含VH序列SEQIDNO:8，包括該序列的翻譯后修飾。在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，該VH包含一種、兩種或三種選自下述的HVR：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:20，(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:21，和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:22。另一方面，提供一種抗間皮素抗體，其中該抗體包含與氨基酸序列SEQIDNO:4具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的輕鏈可變域(VL)。在某些實(shí)施方案中，具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VL序列相對(duì)于參照序列包含替代（例如保守替代）、插入、或刪除，但是包含該序列的抗間皮素抗體保留結(jié)合間皮素的能力。在某些實(shí)施方案中，在SEQIDNO:4中替代、插入和/或刪除了總共1至10個(gè)氨基酸。在某些實(shí)施方案中，替代、插入、或刪除發(fā)生在HVR以外的區(qū)域中（即在FR中）。任選地，抗間皮素抗體包含VH序列SEQIDNO:4，包括該序列的翻譯后修飾。在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，該VL包含一種、兩種或三種選自下述的HVR：(a)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:17；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:18；和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:19。另一方面，提供一種抗間皮素抗體，其中該抗體包含上文提供的任何實(shí)施方案中的VH和上文提供的任何實(shí)施方案中的VL。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含分別SEQIDNO:8和SEQIDNO:4中的VH和VL序列，包括那些序列的翻譯后修飾。又一方面，本發(fā)明提供與本文中提供的抗間皮素抗體結(jié)合相同表位的抗體。例如，在某些實(shí)施方案中，提供與包含VH序列SEQIDNO:8和VL序列SEQIDNO:4的抗間皮素抗體結(jié)合相同表位的抗體。在某些實(shí)施方案中，提供了一種抗體，其結(jié)合SEQIDNO:43中來(lái)自氨基酸152-175、在氨基酸152-175內(nèi)、或與氨基酸152-175交疊的表位。在某些實(shí)施方案中，提供了一種抗體，其結(jié)合SEQIDNO:43中包含E153和D174的表位。在某些此類實(shí)施方案中，所述抗體結(jié)合氨基酸殘基E153和D174。在本發(fā)明的又一個(gè)方面，依照任何上述實(shí)施方案的抗間皮素抗體是單克隆抗體，包括嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗間皮素抗體是抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙抗體、或F(ab’)2片段。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是基本上全長(zhǎng)抗體，例如IgG1抗體或其它抗體類或同種型，如本文中定義的。在又一個(gè)方面，依照任何上述實(shí)施方案的抗間皮素抗體可單一地或組合地?fù)饺胂挛?-7節(jié)中描述的任何特征：抗體22A10及其它實(shí)施方案一方面，本發(fā)明提供一種抗間皮素抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:36；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:37；(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:38或39；(d)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:33；(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:34；和(f)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:35。一方面，本發(fā)明提供一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VHHVR序列：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:36；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:37；和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:38或39。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:38或39。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:38或39，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:35。在又一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-L2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQIDNO:38或39，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQIDNO:35，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQIDNO:37。在又一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:36；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:37；和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:38或39。另一方面，本發(fā)明提供一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VLHVR序列：(a)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:33；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:34；和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:35。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含：(a)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:33；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:34；和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:35。另一方面，本發(fā)明的抗體包含：(a)VH結(jié)構(gòu)域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VHHVR序列：(i)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:36，(ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:37，和(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:38或39；和(b)VL結(jié)構(gòu)域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VLHVR序列：(i)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:33，(ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:34，和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:35。另一方面，本發(fā)明提供一種抗體，其包含：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:36；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:37；(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:38或39；(d)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:33；(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:34；和(f)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:35。在任何上述實(shí)施方案，抗間皮素抗體是人源化的。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗間皮素抗體包含任何上述實(shí)施方案中的HVR，而且進(jìn)一步包含受體人框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。在某些實(shí)施方案中，人受體框架是VLKI和/或VHIII受體框架。另一方面，抗間皮素抗體包含與氨基酸序列SEQIDNO:16具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實(shí)施方案中，具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VH序列相對(duì)于參照序列包含替代（例如保守替代）、插入、或刪除，但是包含該序列的抗間皮素抗體保留結(jié)合間皮素的能力。在某些實(shí)施方案中，在SEQIDNO:16中替代、插入和/或刪除了總共1至10個(gè)氨基酸。在某些實(shí)施方案中，替代、插入、或刪除發(fā)生在HVR以外的區(qū)域中（即在FR中）。任選地，抗間皮素抗體包含VH序列SEQIDNO:16，包括該序列的翻譯后修飾。在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，該VH包含一種、兩種或三種選自下述的HVR：(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:36，(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:37，和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:38或39。另一方面，提供一種抗間皮素抗體，其中該抗體包含與氨基酸序列SEQIDNO:12具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的輕鏈可變域(VL)。在某些實(shí)施方案中，具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VL序列相對(duì)于參照序列包含替代（例如保守替代）、插入、或刪除，但是包含該序列的抗間皮素抗體保留結(jié)合間皮素的能力。在某些實(shí)施方案中，在SEQIDNO:12中替代、插入和/或刪除了總共1至10個(gè)氨基酸。在某些實(shí)施方案中，替代、插入、或刪除發(fā)生在HVR以外的區(qū)域中（即在FR中）。任選地，抗間皮素抗體包含VH序列SEQIDNO:12，包括該序列的翻譯后修飾。在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，該VL包含一種、兩種或三種選自下述的HVR：(a)HVR-L1，其包含氨基酸序列SEQIDNO:33；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQIDNO:34；和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:35。另一方面，提供一種抗間皮素抗體，其中該抗體包含上文提供的任何實(shí)施方案中的VH和上文提供的任何實(shí)施方案中的VL。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含分別SEQIDNO:16和SEQIDNO:12中的VH和VL序列，包括那些序列的翻譯后修飾。又一方面，本發(fā)明提供與本文中提供的抗間皮素抗體結(jié)合相同表位的抗體。例如，在某些實(shí)施方案中，提供與包含VH序列SEQIDNO:16和VL序列SEQIDNO:12的抗間皮素抗體結(jié)合相同表位的抗體。在某些實(shí)施方案中，提供了一種抗體，其結(jié)合SEQIDNO:43中來(lái)自氨基酸211-327、在氨基酸211-327內(nèi)、或與氨基酸211-327交疊的表位。在某些實(shí)施方案中，提供了一種抗體，其結(jié)合SEQIDNO:43中包含E211的表位。在某些此類實(shí)施方案中，所述抗體結(jié)合氨基酸殘基E211。在本發(fā)明的又一個(gè)方面，依照任何上述實(shí)施方案的抗間皮素抗體是單克隆抗體，包括嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗間皮素抗體是抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙抗體、或F(ab’)2片段。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是基本上全長(zhǎng)抗體，例如IgG2a抗體或其它抗體類或同種型，如本文中定義的。在又一個(gè)方面，依照任何上述實(shí)施方案的抗間皮素抗體可單一地或組合地?fù)饺胂挛?-7節(jié)中描述的任何特征：抗體19C3及其它實(shí)施方案一方面，本發(fā)明提供一種抗間皮素抗體，其包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種HVR。在這一節(jié)中，HVR的稱謂對(duì)應(yīng)于本說(shuō)明書中定義的CDR的氨基酸范圍。一方面，本發(fā)明提供一種抗體，其包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的至少一種、至少兩種、或所有三種VHHVR序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-H3。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-H3和HVR-L3。在又一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2。在又一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3。另一方面，本發(fā)明提供一種抗體，其包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的至少一種、至少兩種、或所有三種VLHVR序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3。另一方面，本發(fā)明的抗體包含：(a)VH結(jié)構(gòu)域，其包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的至少一種、至少兩種、或所有三種VHHVR序列；和(b)VL結(jié)構(gòu)域，其包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的至少一種、至少兩種、或所有三種VLHVR序列。另一方面，本發(fā)明提供一種抗體，其包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3。在任何上述實(shí)施方案，抗間皮素抗體是人源化的。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，所述抗體是由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的人源化形式。在又一個(gè)實(shí)施方案中，抗間皮素抗體包含任何上述實(shí)施方案中的HVR，而且進(jìn)一步包含受體人框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。另一方面，抗間皮素抗體包含與由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VH具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的重鏈可變域(VH)序列。在某些實(shí)施方案中，VH序列相對(duì)于參照序列包含替代（例如保守替代）、插入、或刪除，但是包含該序列的抗間皮素抗體保留結(jié)合間皮素的能力。在某些實(shí)施方案中，在由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VH中替代、插入和/或刪除了總共1至10個(gè)氨基酸。在某些實(shí)施方案中，替代、插入、或刪除發(fā)生在HVR以外的區(qū)域中（即在FR中）。任選地，抗間皮素抗體包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VH序列，包括該序列的翻譯后修飾。在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，該VH包含一種、兩種或三種選自下述的HVR：由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3。另一方面，提供一種抗間皮素抗體，其中該抗體包含與由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VL具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的輕鏈可變域(VL)。在某些實(shí)施方案中，具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VL序列相對(duì)于參照序列包含替代（例如保守替代）、插入、或刪除，但是包含該序列的抗間皮素抗體保留結(jié)合間皮素的能力。在某些實(shí)施方案中，在由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VL中替代、插入和/或刪除了總共1至10個(gè)氨基酸。在某些實(shí)施方案中，替代、插入、或刪除發(fā)生在HVR以外的區(qū)域中（即在FR中）。任選地，抗間皮素抗體包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VH序列，包括該序列的翻譯后修飾。在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，該VL包含一種、兩種或三種選自下述的HVR：由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3。另一方面，提供一種抗間皮素抗體，其中該抗體包含上文提供的任何實(shí)施方案中的VH和上文提供的任何實(shí)施方案中的VL。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體分別包含由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體的VH和VL序列，包括那些序列的翻譯后修飾。又一方面，本發(fā)明提供與本文中提供的抗間皮素抗體結(jié)合相同表位的抗體。例如，在某些實(shí)施方案中，提供與由具有ATCC編號(hào)PTA-11464的雜交瘤19C3生成的抗體結(jié)合相同表位的抗體。在本發(fā)明的又一個(gè)方面，依照任何上述實(shí)施方案的抗間皮素抗體是單克隆抗體，包括嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗間皮素抗體是抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙抗體、或F(ab’)2片段。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是基本上全長(zhǎng)抗體，例如IgG2b抗體或其它抗體類或同種型，如本文中定義的。在又一個(gè)方面，依照任何上述實(shí)施方案的抗間皮素抗體可單一地或組合地?fù)饺胂挛?-7節(jié)中描述的任何特征：1.抗體親和力在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM、或≤0.001nM的解離常數(shù)(Kd)，且任選≥10-13M（例如10-8M或更少，例如10-8M至10-13M，例如，10-9M至10-13M）。在一個(gè)實(shí)施方案中，Kd是通過(guò)如下述測(cè)定法所述用Fab型式的感興趣抗體及其抗原實(shí)施的放射性標(biāo)記抗原結(jié)合測(cè)定法(RIA)來(lái)測(cè)量的。通過(guò)在存在未標(biāo)記抗原的滴定系列的情況中用最小濃度的(125I)標(biāo)記抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗體包被板捕捉結(jié)合的抗原來(lái)測(cè)量Fab對(duì)抗原的溶液結(jié)合親和力（見(jiàn)例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)）。為了建立測(cè)定法的條件，將多孔板(ThermoScientific)用50mM碳酸鈉(pH9.6)中的5μg/ml捕捉用抗Fab抗體(CappelLabs)包被過(guò)夜，隨后用PBS中的2%(w/v)牛血清清蛋白于室溫（約23℃）封閉2-5小時(shí)。在非吸附板(Nunc#269620)中，將100pM或26pM125I-抗原與連續(xù)稀釋的感興趣Fab（例如與Presta等,CancerRes.57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗體，F(xiàn)ab-12的評(píng)估一致）混合。然后將感興趣的Fab溫育過(guò)夜；然而，溫育可持續(xù)更長(zhǎng)時(shí)間（例如約65小時(shí)）以確保達(dá)到平衡。此后，將混合物轉(zhuǎn)移至捕捉板，于室溫溫育（例如1小時(shí)）。然后除去溶液，并用PBS中的0.1%聚山梨酯20洗板8次。平板干燥后，加入150μl/孔閃爍液(MICROSCINT-20TM;Packard)，然后在TOPCOUNTTM伽馬計(jì)數(shù)器(Packard)上對(duì)平板計(jì)數(shù)10分鐘。選擇各Fab給出小于或等于最大結(jié)合之20%的濃度用于競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法。依照另一個(gè)實(shí)施方案，Kd是使用表面等離振子共振測(cè)定法使用-2000或-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)于25℃使用固定化抗原CM5芯片在約10個(gè)響應(yīng)單位(RU)測(cè)量的。簡(jiǎn)言之，依照供應(yīng)商的用法說(shuō)明書用鹽酸N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。將抗原用10mM乙酸鈉pH4.8稀釋至5μg/ml（約0.2μM），然后以5μl/分鐘的流速注射以獲得約10個(gè)響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團(tuán)。為了進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量，于25℃以約25μl/分鐘的流速注入在含0.05%聚山梨酯20(TWEEN-20TM)表面活性劑的PBS(PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab（0.78nM至500nM）。使用簡(jiǎn)單一對(duì)一朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(BIACOREEvaluationSoftwareversion3.2)通過(guò)同時(shí)擬合結(jié)合和解離傳感圖計(jì)算結(jié)合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率koff/kon計(jì)算。見(jiàn)例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果根據(jù)上文表面等離振子共振測(cè)定法，結(jié)合速率超過(guò)106M-1S-1，那么結(jié)合速率可使用熒光淬滅技術(shù)來(lái)測(cè)定，即根據(jù)分光計(jì)諸如配備了斷流裝置的分光光度計(jì)(AvivInstruments)或8000系列SLM-AMINCOTM分光光度計(jì)(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測(cè)量，在存在濃度漸增的抗原的情況中，測(cè)量PBSpH7.2中20nM抗抗原抗體（Fab形式）于25℃的熒光發(fā)射強(qiáng)度（激發(fā)=295nm；發(fā)射=340nm，16nm帶通）的升高或降低。2.抗體片段在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體是抗體片段?？贵w片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv、和scFv片段，及下文所描述的其它片段。關(guān)于某些抗體片段的綜述，見(jiàn)Hudson等Nat.Med.9:129-134(2003)。關(guān)于scFv片段的綜述，見(jiàn)例如Pluckthün,于ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,第113卷,Rosenburg和Moore編,(Springer-Verlag,NewYork),第269-315頁(yè)(1994);還可見(jiàn)WO93/16185;及美國(guó)專利No.5,571,894和5,587,458。關(guān)于包含補(bǔ)救受體結(jié)合表位殘基，并且具有延長(zhǎng)的體內(nèi)半衰期的Fab和F(ab’)2片段的討論，見(jiàn)美國(guó)專利No.5,869,046。雙抗體是具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體片段，其可以是二價(jià)的或雙特異性的。見(jiàn)例如EP404,097;WO1993/01161;Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003);及Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993)。三抗體和四抗體也記載于Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)。單域抗體是包含抗體的整個(gè)或部分重鏈可變域或整個(gè)或部分輕鏈可變域的抗體片段。在某些實(shí)施方案中，單域抗體是人單域抗體（Domantis,Inc.,Waltham,MA；見(jiàn)例如美國(guó)專利No.6,248,516B1）?？梢酝ㄟ^(guò)多種技術(shù)，包括但不限于對(duì)完整抗體的蛋白水解消化及重組宿主細(xì)胞（例如大腸桿菌或噬菌體）的生成來(lái)生成抗體片段，如本文中所描述的。3.嵌合的和人源化的抗體在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體是嵌合抗體。某些嵌合抗體記載于例如美國(guó)專利No.4,816,567;及Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。在一個(gè)例子中，嵌合抗體包含非人可變區(qū)（例如，自小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、家兔、或非人靈長(zhǎng)類，諸如猴衍生的可變區(qū)）和人恒定區(qū)。在又一個(gè)例子中，嵌合抗體是“類轉(zhuǎn)換的”抗體，其中類或亞類已經(jīng)自親本抗體的類或亞類改變。嵌合抗體包括其抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方案中，嵌合抗體是人源化抗體。通常，將非人抗體人源化以降低對(duì)人的免疫原性，同時(shí)保留親本非人抗體的特異性和親和力。一般地，人源化抗體包含一個(gè)或多個(gè)可變域，其中HVR，例如CDR（或其部分）自非人抗體衍生，而FR（或其部分）自人抗體序列衍生。任選地，人源化抗體還會(huì)至少包含人恒定區(qū)的一部分。在一些實(shí)施方案中，將人源化抗體中的一些FR殘基用來(lái)自非人抗體（例如衍生HVR殘基的抗體）的相應(yīng)殘基替代，例如以恢復(fù)或改善抗體特異性或親和力。人源化抗體及其生成方法綜述于例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)，并且進(jìn)一步記載于例如Riechmann等,Nature332:323-329(1988);Queen等,Proc.Nat’lAcad.Sci.USA86:10029-10033(1989);美國(guó)專利No.5,821,337,7,527,791,6,982,321和7,087,409;Kashmiri等,Methods36:25-34(2005)（描述了SDR(a-CDR)嫁接）；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)（描述了“重修表面”）；Dall’Acqua等,Methods36:43-60(2005)（描述了“FR改組”）；及Osbourn等,Methods36:61-68(2005)和Klimka等,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)（描述了FR改組的“引導(dǎo)選擇”方法）?？梢杂糜谌嗽椿娜丝蚣軈^(qū)包括但不限于：使用“最佳擬合(best-fit)”方法選擇的框架區(qū)（見(jiàn)例如Sims等J.Immunol.151:2296(1993)）；自輕或重鏈可變區(qū)的特定亞組的人抗體的共有序列衍生的框架區(qū)（見(jiàn)例如Carter等Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992);及Presta等J.Immunol.,151:2623(1993)）；人成熟的（體細(xì)胞突變的）框架區(qū)或人種系框架區(qū)（見(jiàn)例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)）；和通過(guò)篩選FR文庫(kù)衍生的框架區(qū)（見(jiàn)例如Baca等,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)及Rosok等,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996)）。4.人抗體在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體是人抗體?？梢允褂帽绢I(lǐng)域中已知的多種技術(shù)來(lái)生成人抗體。一般地，人抗體記載于vanDijk和vandeWinkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)。可以通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物施用免疫原來(lái)制備人抗體，所述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物已經(jīng)修飾為響應(yīng)抗原性攻擊而生成完整人抗體或具有人可變區(qū)的完整抗體。此類動(dòng)物通常含有所有或部分人免疫球蛋白基因座，其替換內(nèi)源免疫球蛋白基因座，或者其在染色體外存在或隨機(jī)整合入動(dòng)物的染色體中。在此類轉(zhuǎn)基因小鼠中，一般已經(jīng)將內(nèi)源免疫球蛋白基因座滅活。關(guān)于自轉(zhuǎn)基因動(dòng)物獲得人抗體的方法的綜述，見(jiàn)Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。還可見(jiàn)例如美國(guó)專利No.6,075,181和6,150,584，其描述了XENOMOUSETM技術(shù)；美國(guó)專利No.5,770,429，其描述了技術(shù)；美國(guó)專利No.7,041,870，其描述了K-M技術(shù)，和美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)文本No.US2007/0061900，其描述了技術(shù)）?？梢岳缤ㄟ^(guò)與不同人恒定區(qū)組合進(jìn)一步修飾來(lái)自由此類動(dòng)物生成的完整抗體的人可變區(qū)。也可以通過(guò)基于雜交瘤的方法生成人抗體。已經(jīng)描述了用于生成人單克隆抗體的人骨髓瘤和小鼠-人異骨髓瘤細(xì)胞系（見(jiàn)例如KozborJ.Immunol.,133:3001(1984);Brodeur等,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,第51-63頁(yè)(MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987)；及Boerner等,J.Immunol.,147:86(1991)）。經(jīng)由人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)生成的人抗體也記載于Li等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。其它方法包括那些例如記載于美國(guó)專利No.7,189,826（其描述了自雜交瘤細(xì)胞系生成單克隆人IgM抗體）和Ni,XiandaiMianyixue,26(4):265-268(2006)（其描述了人-人雜交瘤）的。人雜交瘤技術(shù)（Trioma技術(shù)）也記載于Vollmers和Brandlein,HistologyandHistopathology,20(3):927-937(2005)及Vollmers和Brandlein,MethodsandFindingsinExperimentalandClinicalPharmacology,27(3):185-91(2005)。也可以通過(guò)分離自人衍生的噬菌體展示文庫(kù)選擇的Fv克隆可變域序列生成人抗體。然后，可以將此類可變域序列與期望的人恒定域組合。下文描述了自抗體文庫(kù)選擇人抗體的技術(shù)。5.文庫(kù)衍生的抗體可以通過(guò)對(duì)組合文庫(kù)篩選具有期望的一種或多種活性的抗體來(lái)分離本發(fā)明的抗體。例如，用于生成噬菌體展示文庫(kù)并對(duì)此類文庫(kù)篩選擁有期望結(jié)合特征的抗體的多種方法是本領(lǐng)域中已知的。此類方法綜述于例如Hoogenboom等于MethodsinMolecularBiology178:1-37(O’Brien等編,HumanPress,Totowa,NJ,2001)，并且進(jìn)一步記載于例如McCafferty等,Nature348:552-554;Clackson等,Nature352:624-628(1991);Marks等,J.Mol.Biol.222:581-597(1992);Marks和Bradbury,于MethodsinMolecularBiology248:161-175(Lo編,HumanPress,Totowa,NJ,2003);Sidhu等,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004);Lee等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004);Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA101(34):12467-12472(2004);及Lee等,J.Immunol.Methods284(1-2):119-132(2004)。在某些噬菌體展示方法中，將VH和VL基因的全集分別通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)克隆，并在噬菌體文庫(kù)中隨機(jī)重組，然后可以對(duì)所述噬菌體文庫(kù)篩選抗原結(jié)合噬菌體，如記載于Winter等,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)的。噬菌體通常以單鏈Fv(scFv)片段或以Fab片段展示抗體片段。來(lái)自經(jīng)免疫的來(lái)源的文庫(kù)提供針對(duì)免疫原的高親和力抗體，而不需要構(gòu)建雜交瘤。或者，可以（例如自人）克隆天然全集以在沒(méi)有任何免疫的情況中提供針對(duì)一大批非自身和還有自身抗原的抗體的單一來(lái)源，如由Griffiths等,EMBOJ,12:725-734(1993)描述的。最后，也可以通過(guò)自干細(xì)胞克隆未重排的V基因區(qū)段，并使用含有隨機(jī)序列的PCR引物編碼高度可變的CDR3區(qū)并在體外實(shí)現(xiàn)重排來(lái)合成生成未免疫文庫(kù)，如由Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所描述的。描述人抗體噬菌體文庫(kù)的專利公開(kāi)文本包括例如：美國(guó)專利No.5,750,373、和美國(guó)專利公開(kāi)文本No.2005/0079574,2005/0119455,2005/0266000,2007/0117126,2007/0160598,2007/0237764,2007/0292936和2009/0002360。認(rèn)為自人抗體文庫(kù)分離的抗體或抗體片段是本文中的人抗體或人抗體片段。6.多特異性抗體在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體是多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體是對(duì)至少兩個(gè)不同位點(diǎn)具有結(jié)合特異性的單克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合特異性之一針對(duì)間皮素，而另一種針對(duì)任何其它抗原。在某些實(shí)施方案中，雙特異性抗體可以結(jié)合間皮素的兩個(gè)不同表位。也可以使用雙特異性抗體來(lái)將細(xì)胞毒劑定位于表達(dá)間皮素的細(xì)胞。雙特異性抗體可以以全長(zhǎng)抗體或抗體片段制備。用于生成多特異性抗體的技術(shù)包括但不限于具有不同特異性的兩對(duì)免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(duì)的重組共表達(dá)（見(jiàn)Milstein和Cuello,Nature305:537(1983))、WO93/08829、和Traunecker等,EMBOJ.10:3655(1991)）、和“突起-入-空穴”工程化（見(jiàn)例如美國(guó)專利No.5,731,168）。也可以通過(guò)用于生成抗體Fc-異二聚體分子的工程化靜電操縱效應(yīng)(WO2009/089004A1)；交聯(lián)兩個(gè)或更多個(gè)抗體或片段（見(jiàn)例如美國(guó)專利No.4,676,980,及Brennan等,Science,229:81(1985)）；使用亮氨酸拉鏈來(lái)生成雙特異性抗體（見(jiàn)例如Kostelny等,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992)）；使用用于生成雙特異性抗體片段的“雙抗體”技術(shù)（見(jiàn)例如Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)）；及使用單鏈Fv(sFv)二聚體（見(jiàn)例如Gruber等,J.Immunol.,152:5368(1994)）；及如例如Tutt等J.Immunol.147:60(1991)中所描述的，制備三特異性抗體來(lái)生成多特異性抗體。本文中還包括具有三個(gè)或更多個(gè)功能性抗原結(jié)合位點(diǎn)的工程化改造抗體，包括“章魚抗體”（見(jiàn)例如US2006/0025576A1）。本文中的抗體或片段還包括包含結(jié)合間皮素及另一種不同抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)的“雙重作用FAb”或“DAF”（見(jiàn)例如US2008/0069820）。7.抗體變體在某些實(shí)施方案中，涵蓋本文中提供的抗體的氨基酸序列變體。例如，可以期望改善抗體的結(jié)合親和力和/或其它生物學(xué)特性?？梢酝ㄟ^(guò)將合適的修飾引入編碼抗體的核苷酸序列中，或者通過(guò)肽合成來(lái)制備抗體的氨基酸序列變體。此類修飾包括例如對(duì)抗體的氨基酸序列內(nèi)的殘基的刪除、和/或插入和/或替代?？梢赃M(jìn)行刪除、插入、和替代的任何組合以得到最終的構(gòu)建體，只要最終的構(gòu)建體擁有期望的特征，例如，抗原結(jié)合。a)替代、插入、和刪除變體在某些實(shí)施方案中，提供了具有一處或多處氨基酸替代的抗體變體。替代誘變感興趣的位點(diǎn)包括HVR和FR。保守替代在表1中在“優(yōu)選的替代”的標(biāo)題下顯示。更實(shí)質(zhì)的變化在表1中在“例示性替代”的標(biāo)題下提供，并且如下文參照氨基酸側(cè)鏈類別進(jìn)一步描述的?？梢詫被崽娲敫信d趣的抗體中，并且對(duì)產(chǎn)物篩選期望的活性，例如保留/改善的抗原結(jié)合、降低的免疫原性、或改善的ADCC或CDC。表1初始?xì)埢拘蕴娲鷥?yōu)選的替代Glu(E)Asp;GlnAspGly(G)AlaAlaHis(H)Asn;Gln;Lys;ArgArgIle(I)Leu;Val;Met;Ala;Phe;正亮氨酸LeuLeu(L)正亮氨酸;Ile;Val;Met;Ala;PheIleLys(K)Arg;Gln;AsnArgMet(M)Leu;Phe;IleLeuPhe(F)Trp;Leu;Val;Ile;Ala;TyrTyrPro(P)AlaAlaSer(S)ThrThrThr(T)Val;SerSerTrp(W)Tyr;PheTyrTyr(Y)Trp;Phe;Thr;SerPheVal(V)Ile;Leu;Met;Phe;Ala;正亮氨酸Leu依照共同的側(cè)鏈特性，氨基酸可以如下分組：(1)疏水性的：正亮氨酸,Met,Ala,Val,Leu,Ile；(2)中性、親水性的：Cys,Ser,Thr,Asn,Gln；(3)酸性的：Asp,Glu；(4)堿性的：His,Lys,Arg；(5)影響鏈取向的殘基：Gly,Pro；(6)芳香族的：Trp,Tyr,Phe。非保守替代會(huì)需要用這些類別之一的成員替換另一個(gè)類別的。一類替代變體牽涉替代親本抗體（例如人源化或人抗體）的一個(gè)或多個(gè)高變區(qū)殘基。一般地，為進(jìn)一步研究選擇的所得變體相對(duì)于親本抗體會(huì)具有某些生物學(xué)特性的改變（例如改善）（例如升高的親和力、降低的免疫原性）和/或會(huì)基本上保留親本抗體的某些生物學(xué)特性。例示性的替代變體是親和力成熟的抗體，其可以例如使用基于噬菌體展示的親和力成熟技術(shù)諸如本文中所描述的那些技術(shù)來(lái)方便地生成。簡(jiǎn)言之，將一個(gè)或多個(gè)HVR殘基突變，并將變體抗體在噬菌體上展示，并對(duì)其篩選特定的生物學(xué)活性（例如結(jié)合親和力）?？梢詫?duì)HVR做出變化（例如，替代），例如以改善抗體親和力。可以對(duì)HVR“熱點(diǎn)”，即由在體細(xì)胞成熟過(guò)程期間以高頻率經(jīng)歷突變的密碼子編碼的殘基（見(jiàn)例如Chowdhury,MethodsMol.Biol.207:179-196(2008)），和/或SDR(a-CDR)做出此類變化，其中對(duì)所得的變體VH或VL測(cè)試結(jié)合親和力。通過(guò)次級(jí)文庫(kù)的構(gòu)建和再選擇進(jìn)行的親和力成熟已經(jīng)記載于例如Hoogenboom等于MethodsinMolecularBiology178:1-37(O’Brien等編,HumanPress,Totowa,NJ,(2001))。在親和力成熟的一些實(shí)施方案中，通過(guò)多種方法（例如，易錯(cuò)PCR、鏈改組、或寡核苷酸指導(dǎo)的誘變）將多樣性引入為成熟選擇的可變基因。然后，創(chuàng)建次級(jí)文庫(kù)。然后，篩選文庫(kù)以鑒定具有期望的親和力的任何抗體變體。另一種引入多樣性的方法牽涉HVR指導(dǎo)的方法，其中將幾個(gè)HVR殘基（例如，一次4-6個(gè)殘基）隨機(jī)化?？梢岳缡褂帽彼釖呙枵T變或建模來(lái)特異性鑒定牽涉抗原結(jié)合的HVR殘基。特別地，經(jīng)常靶向CDR-H3和CDR-L3。在某些實(shí)施方案中，可以在一個(gè)或多個(gè)HVR內(nèi)發(fā)生替代、插入、或刪除，只要此類變化不實(shí)質(zhì)性降低抗體結(jié)合抗原的能力。例如，可以對(duì)HVR做出保守變化（例如，保守替代，如本文中提供的），其不實(shí)質(zhì)性降低結(jié)合親和力。此類變化可以在HVR“熱點(diǎn)”或SDR外部。在上文提供的變體VH和VL序列的某些實(shí)施方案中，每個(gè)HVR是未改變的，或者含有不超過(guò)1、2或3處氨基酸替代。一種可用于鑒定抗體中可以作為誘變靶位的殘基或區(qū)域的方法稱作“丙氨酸掃描誘變”，如由Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所描述的。在此方法中，將殘基或靶殘基的組（例如，帶電荷的殘基諸如arg、asp、his、lys、和glu）鑒定，并用中性或帶負(fù)電荷的氨基酸（例如，丙氨酸或多丙氨酸）替換以測(cè)定抗體與抗原的相互作用是否受到影響?？梢栽趯?duì)初始替代表明功能敏感性的氨基酸位置引入進(jìn)一步的替代?；蛘?另外，利用抗原-抗體復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)來(lái)鑒定抗體與抗原間的接觸點(diǎn)。作為替代的候選，可以靶向或消除此類接觸殘基和鄰近殘基?？梢院Y選變體以確定它們是否含有期望的特性。氨基酸序列插入包括長(zhǎng)度范圍為1個(gè)殘基至含有100或更多個(gè)殘基的多肽的氨基和/或羧基端融合，及單個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的序列內(nèi)插入。末端插入的例子包括具有N端甲硫氨酰基殘基的抗體?？贵w分子的其它插入變體包括抗體的N或C端與酶（例如對(duì)于ADEPT）或延長(zhǎng)抗體的血清半衰期的多肽的融合物。b)糖基化變體在某些實(shí)施方案中，改變本文中提供的抗體以提高或降低抗體糖基化的程度?？梢酝ㄟ^(guò)改變氨基酸序列，使得創(chuàng)建或消除一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)來(lái)方便地實(shí)現(xiàn)對(duì)抗體的糖基化位點(diǎn)的添加或刪除。在抗體包含F(xiàn)c區(qū)的情況中，可以改變其附著的碳水化合物。由哺乳動(dòng)物細(xì)胞生成的天然抗體通常包含分支的、雙觸角寡糖，其一般通過(guò)N連接附著于Fc區(qū)的CH2域的Asn297。見(jiàn)例如Wright等TIBTECH15:26-32(1997)。寡糖可以包括各種碳水化合物，例如，甘露糖、N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖、和唾液酸，以及附著于雙觸角寡糖結(jié)構(gòu)“主干”中的GlcNAc的巖藻糖。在一些實(shí)施方案中，可以對(duì)本發(fā)明抗體中的寡糖進(jìn)行修飾以創(chuàng)建具有某些改善的特性的抗體變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了抗體變體，其具有缺乏附著（直接或間接）于Fc區(qū)的巖藻糖的碳水化合物結(jié)構(gòu)。例如，此類抗體中的巖藻糖量可以是1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。通過(guò)相對(duì)于附著于Asn297的所有糖結(jié)構(gòu)（例如，復(fù)合的、雜合的和高甘露糖的結(jié)構(gòu)）的總和，計(jì)算Asn297處糖鏈內(nèi)巖藻糖的平均量來(lái)測(cè)定巖藻糖量，如通過(guò)MALDI-TOF質(zhì)譜術(shù)測(cè)量的，例如如記載于WO2008/077546的。Asn297指位于Fc區(qū)中的約第297位（Fc區(qū)殘基的Eu編號(hào)方式）的天冬酰胺殘基；然而，Asn297也可以由于抗體中的微小序列變異而位于第297位上游或下游約±3個(gè)氨基酸，即在第294位和第300位之間。此類巖藻糖基化變體可以具有改善的ADCC功能。見(jiàn)例如美國(guó)專利公開(kāi)文本No.US2003/0157108(Presta,L.);US2004/0093621(KyowaHakkoKogyoCo.,Ltd)。涉及“脫巖藻糖基化的”或“巖藻糖缺乏的”抗體變體的出版物的例子包括：US2003/0157108;WO2000/61739;WO2001/29246;US2003/0115614;US2002/0164328;US2004/0093621;US2004/0132140;US2004/0110704;US2004/0110282;US2004/0109865;WO2003/085119;WO2003/084570;WO2005/035586;WO2005/035778;WO2005/053742;WO2002/031140;Okazaki等J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004);Yamane-Ohnuki等Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能夠生成脫巖藻糖基化抗體的細(xì)胞系的例子包括蛋白質(zhì)巖藻糖基化缺陷的Lec13CHO細(xì)胞(Ripka等Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986);美國(guó)專利申請(qǐng)NoUS2003/0157108A1,Presta,L;及WO2004/056312A1,Adams等，尤其在實(shí)施例11)，和敲除細(xì)胞系，諸如α-1,6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因FUT8敲除CHO細(xì)胞（見(jiàn)例如Yamane-Ohnuki等Biotech.Bioeng.87:614(2004);Kanda,Y.等,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006);及WO2003/085107）。進(jìn)一步提供了具有兩分型寡糖的抗體變體，例如其中附著于抗體Fc區(qū)的雙觸角寡糖是通過(guò)GlcNAc兩分的。此類抗體變體可以具有降低的巖藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此類抗體變體的例子記載于例如WO2003/011878（Jean-Mairet等）；美國(guó)專利No.6,602,684（Umana等）；及US2005/0123546（Umana等）。還提供了在附著于Fc區(qū)的寡糖中具有至少一個(gè)半乳糖殘基的抗體變體。此類抗體變體可以具有改善的CDC功能。此類抗體變體記載于例如WO1997/30087（Patel等）；WO1998/58964(Raju,S.)；及WO1999/22764(Raju,S.)。c)Fc區(qū)變體在某些實(shí)施方案中，可以將一處或多處氨基酸修飾引入本文中提供的抗體的Fc區(qū)中，由此生成Fc區(qū)變體。Fc區(qū)變體可以包含在一個(gè)或多個(gè)氨基酸位置包含氨基酸修飾（例如替代）的人Fc區(qū)序列（例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc區(qū)）。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涵蓋擁有一些但不是所有效應(yīng)器功能的抗體變體，所述效應(yīng)器功能使其成為如下應(yīng)用的期望候選物，其中抗體的體內(nèi)半衰期是重要的，而某些效應(yīng)器功能（諸如補(bǔ)體和ADCC）是不必要的或有害的?？梢赃M(jìn)行體外和/或體內(nèi)細(xì)胞毒性測(cè)定法以確認(rèn)CDC和/或ADCC活性的降低/消減。例如，可以進(jìn)行Fc受體(FcR)結(jié)合測(cè)定法以確?？贵w缺乏FcγR結(jié)合（因此有可能缺乏ADCC活性），但是保留FcRn結(jié)合能力。介導(dǎo)ADCC的主要細(xì)胞NK細(xì)胞僅表達(dá)FcγRIII，而單核細(xì)胞表達(dá)FcγRI、FcγRII和FcγRIII。在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464頁(yè)上的表3中匯總了造血細(xì)胞上的FcR表達(dá)。評(píng)估感興趣分子的ADCC活性的體外測(cè)定法的非限制性例子記載于美國(guó)專利No.5,500,362（見(jiàn)例如Hellstrom,I.等Proc.Nat’lAcad.Sci.USA83:7059-7063(1986)）和Hellstrom,I等,Proc.Nat’lAcad.Sci.USA82:1499-1502(1985);5,821,337（見(jiàn)Bruggemann,M.等,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987)）?；蛘?，可以采用非放射性測(cè)定方法（見(jiàn)例如用于流式細(xì)胞術(shù)的ACTITM非放射性細(xì)胞毒性測(cè)定法(CellTechnology,Inc.MountainView,CA；和CytoTox非放射性細(xì)胞毒性測(cè)定法(Promega,Madison,WI)）。對(duì)于此類測(cè)定法有用的效應(yīng)細(xì)胞包括外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)和天然殺傷(NK)細(xì)胞。或者/另外，可以在體內(nèi)評(píng)估感興趣分子的ADCC活性，例如在動(dòng)物模型中，諸如披露于Clynes等Proc.Nat’lAcad.Sci.USA95:652-656(1998)的。也可以實(shí)施C1q結(jié)合測(cè)定法以確認(rèn)抗體不能結(jié)合C1q，并且因此缺乏CDC活性。見(jiàn)例如WO2006/029879和WO2005/100402中的C1q和C3c結(jié)合ELISA。為了評(píng)估補(bǔ)體激活，可以實(shí)施CDC測(cè)定法（見(jiàn)例如Gazzano-Santoro等,J.Immunol.Methods202:163(1996);Cragg,M.S.等,Blood101:1045-1052(2003);及Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood103:2738-2743(2004)）。也可以使用本領(lǐng)域中已知的方法來(lái)實(shí)施FcRn結(jié)合和體內(nèi)清除/半衰期測(cè)定（見(jiàn)例如Petkova,S.B.等,Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006)）。具有降低的效應(yīng)器功能的抗體包括那些具有Fc區(qū)殘基238,265,269,270,297,327和329中的一個(gè)或多個(gè)的替代的（美國(guó)專利No.6,737,056）。此類Fc突變體包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的兩處或更多處具有替代的Fc突變體，包括殘基265和297替代成丙氨酸的所謂的“DANA”Fc突變體（美國(guó)專利No.7,332,581）。描述了具有改善的或降低的對(duì)FcR的結(jié)合的某些抗體變體（見(jiàn)例如美國(guó)專利No.6,737,056;WO2004/056312，及Shields等,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)）。在某些實(shí)施方案中，抗體變體包含具有改善ADCC的一處或多處氨基酸替代，例如Fc區(qū)的位置298、333、和/或334（殘基的EU編號(hào)方式）的替代的Fc區(qū)。在一些實(shí)施方案中，對(duì)Fc區(qū)做出改變，其導(dǎo)致改變的（即，改善的或降低的）C1q結(jié)合和/或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)，例如，如記載于美國(guó)專利No.6,194,551、WO99/51642、及Idusogie等J.Immunol.164:4178-4184(2000)的。具有延長(zhǎng)的半衰期和改善的對(duì)新生兒Fc受體(FcRn)的結(jié)合的抗體記載于US2005/0014934A1(Hinton等)，新生兒Fc受體(FcRn)負(fù)責(zé)將母體IgG轉(zhuǎn)移至胎兒(Guyer等,J.Immunol.117:587(1976)及Kim等,J.Immunol.24:249(1994))。那些抗體包含其中具有改善Fc區(qū)對(duì)FcRn結(jié)合的一處或多處替代的Fc區(qū)。此類Fc變體包括那些在Fc區(qū)殘基238,256,265,272,286,303,305,307,311,312,317,340,356,360,362,376,378,380,382,413,424或434中的一處或多處具有替代，例如，F(xiàn)c區(qū)殘基434的替代的（美國(guó)專利No.7,371,826）。還可見(jiàn)Duncan和Winter,Nature322:738-40(1988);美國(guó)專利No.5,648,260;美國(guó)專利No.5,624,821;及WO94/29351，其關(guān)注Fc區(qū)變體的其它例子。d)經(jīng)半胱氨酸工程化改造的抗體變體在某些實(shí)施方案中，可以期望創(chuàng)建經(jīng)半胱氨酸工程化改造的抗體，例如，“thioMAb”，其中抗體的一個(gè)或多個(gè)殘基用半胱氨酸殘基替代。在具體的實(shí)施方案中，替代的殘基存在于抗體的可接近位點(diǎn)。通過(guò)用半胱氨酸替代那些殘基，反應(yīng)性硫醇基團(tuán)由此定位于抗體的可接近位點(diǎn)，并且可以用于將抗體與其它模塊，諸如藥物模塊或接頭-藥物模塊綴合，以創(chuàng)建免疫綴合物，如本文中進(jìn)一步描述的。在某些實(shí)施方案中，可以用半胱氨酸替代下列殘基之任一個(gè)或多個(gè)：輕鏈的V205（Kabat編號(hào)方式）；重鏈的A118（EU編號(hào)方式）；和重鏈Fc區(qū)的S400（EU編號(hào)方式）?？梢匀缋缑绹?guó)專利No.7,521,541所述生成經(jīng)半胱氨酸工程化改造的抗體。e)抗體衍生物在某些實(shí)施方案中，可以進(jìn)一步修飾本文中提供的抗體以含有本領(lǐng)域知道的且易于獲得的額外非蛋白質(zhì)性質(zhì)模塊。適合于抗體衍生化的模塊包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、右旋糖苷、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊環(huán)、聚-1,3,6-三口惡烷、乙烯/馬來(lái)酸酐共聚物、聚氨基酸（均聚物或隨機(jī)共聚物）、和右旋糖苷或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、環(huán)氧丙烷/環(huán)氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇（例如甘油）、聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的穩(wěn)定性，聚乙二醇丙醛在生產(chǎn)中可能具有優(yōu)勢(shì)。聚合物可以是任何分子量，而且可以是分支的或不分支的。附著到抗體上的聚合物數(shù)目可以變化，而且如果附著了超過(guò)一個(gè)聚合物，那么它們可以是相同或不同的分子。一般而言，可根據(jù)下列考慮來(lái)確定用于衍生化的聚合物的數(shù)目和/或類型，包括但不限于抗體要改進(jìn)的具體特性或功能、抗體衍生物是否將用于指定條件下的治療等。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了抗體和可以通過(guò)暴露于輻射選擇性加熱的非蛋白質(zhì)性質(zhì)模塊的綴合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，非蛋白質(zhì)性質(zhì)模塊是碳納米管(Kam等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA102:11600-11605(2005))。輻射可以是任何波長(zhǎng)的，并且包括但不限于對(duì)普通細(xì)胞沒(méi)有損害，但是將非蛋白質(zhì)性質(zhì)模塊加熱至抗體-非蛋白質(zhì)性質(zhì)模塊附近的細(xì)胞被殺死的溫度的波長(zhǎng)。B.重組方法和組合物可以使用重組方法和組合物來(lái)生成抗體，例如，如記載于美國(guó)專利No.4,816,567的。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了編碼本文中所描述的抗間皮素抗體的分離的核酸。此類核酸可以編碼包含抗體VL的氨基酸序列和/或包含VH的氨基酸序列（例如，抗體的輕和/或重鏈）。在又一個(gè)實(shí)施方案中，提供了包含此類核酸的一種或多種載體（例如，表達(dá)載體）。在又一個(gè)實(shí)施方案中，提供了包含此類核酸的宿主細(xì)胞。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞包含（例如，已經(jīng)用下列載體轉(zhuǎn)化）：(1)包含核酸的載體，所述核酸編碼包含抗體的VL的氨基酸序列和包含抗體的VH的氨基酸序列，或(2)第一載體和第二載體，所述第一載體包含編碼包含抗體的VL的氨基酸序列的核酸，所述第二載體包含編碼包含抗體的VH的氨基酸序列的核酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞是真核的，例如中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或淋巴樣細(xì)胞（例如，Y0、NS0、Sp20細(xì)胞）。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了生成抗間皮素抗體的方法，其中該方法包括在適合于表達(dá)抗體的條件下培養(yǎng)包含編碼抗體的核酸的宿主細(xì)胞，如上文提供的，并且任選地，自宿主細(xì)胞（或宿主細(xì)胞培養(yǎng)液）回收抗體。對(duì)于抗間皮素抗體的重組生成，將編碼抗體的核酸（例如如上文所描述的）分離，并插入一種或多種載體中，以在宿主細(xì)胞中進(jìn)一步克隆和/或表達(dá)?？梢允褂贸Ｒ?guī)規(guī)程將此類核酸容易地分離并測(cè)序（例如，通過(guò)使用寡核苷酸探針來(lái)進(jìn)行，所述寡核苷酸探針能夠特異性結(jié)合編碼抗體的重和輕鏈的基因）。適合于克隆或表達(dá)抗體編碼載體的宿主細(xì)胞包括本文中所描述的原核或真核細(xì)胞。例如，可以在細(xì)菌中生成抗體，特別是在不需要糖基化和Fc效應(yīng)器功能時(shí)。對(duì)于抗體片段和多肽在細(xì)菌中的表達(dá)，見(jiàn)例如美國(guó)專利No.5,648,237,5,789,199和5,840,523（還可見(jiàn)Charlton,MethodsinMolecularBiology,第248卷(B.K.C.Lo編,HumanaPress,Totowa,NJ,2003),第245-254頁(yè)，其描述了抗體片段在大腸桿菌(E.coli.)中的表達(dá)）。表達(dá)后，可以將抗體在可溶性級(jí)分中自細(xì)菌細(xì)胞團(tuán)糊分離，并可以進(jìn)一步純化。在原核生物外，真核微生物諸如絲狀真菌或酵母是適合于抗體編碼載體的克隆或表達(dá)宿主，包括其糖基化途徑已經(jīng)“人源化”，導(dǎo)致生成具有部分或完全人的糖基化樣式的抗體的真菌和酵母菌株。見(jiàn)Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004),及Li等,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。適合于表達(dá)糖基化抗體的宿主細(xì)胞也自多細(xì)胞生物體（無(wú)脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物）衍生。無(wú)脊椎動(dòng)物細(xì)胞的例子包括植物和昆蟲細(xì)胞。已經(jīng)鑒定出許多桿狀病毒株，其可以與昆蟲細(xì)胞一起使用，特別是用于轉(zhuǎn)染草地夜蛾(Spodopterafrugiperda)細(xì)胞。也可以利用植物細(xì)胞培養(yǎng)物作為宿主。見(jiàn)例如美國(guó)專利No.5,959,177,6,040,498,6,420,548,7,125,978和6,417,429（其描述了用于在轉(zhuǎn)基因植物中生成抗體的PLANTIBODIESTM技術(shù)）。也可以使用脊椎動(dòng)物細(xì)胞作為宿主。例如，適合于在懸浮液中生長(zhǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系可以是有用的。有用的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的其它例子是經(jīng)SV40轉(zhuǎn)化的猴腎CV1系(COS-7)；人胚腎系（293或293細(xì)胞，如記載于例如Graham等,J.GenVirol.36:59(1977)的）；幼年倉(cāng)鼠腎細(xì)胞(BHK)；小鼠塞托利(sertoli)細(xì)胞（TM4細(xì)胞，如記載于例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)的）；猴腎細(xì)胞(CV1)；非洲綠猴腎細(xì)胞(VERO-76)；人宮頸癌細(xì)胞(HELA)；犬腎細(xì)胞(MDCK；牛鼠(buffalorat)肝細(xì)胞(BRL3A)；人肺細(xì)胞(W138)；人肝細(xì)胞(HepG2)；小鼠乳房腫瘤(MMT060562)；TRI細(xì)胞，如記載于例如Mather等,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)的；MRC5細(xì)胞；和FS4細(xì)胞。其它有用的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞，包括DHFR-CHO細(xì)胞(Urlaub等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980))；和骨髓瘤細(xì)胞系諸如Y0、NS0和Sp2/0。關(guān)于適合于抗體生成的某些哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的綜述，見(jiàn)例如Yazaki和Wu,MethodsinMolecularBiology,第248卷(B.K.C.Lo編,HumanaPress,Totowa,NJ),第255-268頁(yè)(2003)。C.測(cè)定法可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的多種測(cè)定法對(duì)本文中提供的抗間皮素抗體鑒定、篩選、或表征其物理/化學(xué)特性和/或生物學(xué)活性。一方面，對(duì)本發(fā)明的抗體測(cè)試其抗原結(jié)合活性，例如通過(guò)已知的方法諸如ELISA、FACS或Western印跡來(lái)進(jìn)行。另一方面，可使用競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法來(lái)鑒定與本文所述任何抗體競(jìng)爭(zhēng)對(duì)間皮素的結(jié)合的抗體。在某些實(shí)施方案中，此類競(jìng)爭(zhēng)性抗體結(jié)合與本文所述任何抗體所結(jié)合表位相同的表位（例如線性或構(gòu)象表位）。用于定位抗體所結(jié)合表位的詳細(xì)例示性方法見(jiàn)Morris(1996)“EpitopeMappingProtocols”,MethodsinMolecularBiologyvol.66(HumanaPress,Totowa,NJ)。在一種例示性競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法中，在包含第一經(jīng)標(biāo)記抗體（其結(jié)合間皮素，例如本文所述任何抗體）和第二未標(biāo)記抗體（其要測(cè)試與第一抗體競(jìng)爭(zhēng)對(duì)間皮素的結(jié)合的能力）的溶液中溫育固定化間皮素。第二抗體可存在于雜交瘤上清液中。作為對(duì)照，在包含第一經(jīng)標(biāo)記抗體但不包含第二未標(biāo)記抗體的溶液中溫育固定化間皮素。在允許第一抗體結(jié)合間皮素的條件下溫育后，除去過(guò)量的未結(jié)合抗體，并測(cè)量與固定化間皮素聯(lián)合的標(biāo)記物的量。如果測(cè)試樣品中與固定化間皮素聯(lián)合的標(biāo)記物的量與對(duì)照樣品相比實(shí)質(zhì)性降低，那么這指示第二抗體與第一抗體競(jìng)爭(zhēng)對(duì)間皮素的結(jié)合。參見(jiàn)HarlowandLane(1988)Antibodies:ALaboratoryManualch.14(ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY)。D.免疫綴合物本發(fā)明還提供了包含與一種或多種細(xì)胞毒劑，諸如化療劑或藥物、生長(zhǎng)抑制劑、毒素（例如蛋白質(zhì)毒素，細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物起源的酶活性毒素，或其片段）、或放射性同位素綴合的本文中的抗間皮素抗體的免疫綴合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，免疫綴合物是抗體-藥物綴合物(ADC)，其中抗體與一種或多種藥物綴合，包括但不限于美登木素生物堿（見(jiàn)美國(guó)專利No.5,208,020、5,416,064和歐洲專利EP0425235B1）；auristatin諸如單甲基auristatin藥物模塊DE和DF（MMAE和MMAF）（見(jiàn)美國(guó)專利No.5,635,483和5,780,588及7,498,298)；多拉司他汀(dolastatin)；加利車霉素(calicheamicin)或其衍生物（見(jiàn)美國(guó)專利No.5,712,374,5,714,586,5,739,116,5,767,285,5,770,701,5,770,710,5,773,001和5,877,296;Hinman等,CancerRes.53:3336-3342(1993);及Lode等,CancerRes.58:2925-2928(1998)）；蒽環(huán)類抗生素諸如道諾霉素(daunomycin)或多柔比星(doxorubicin)（見(jiàn)Kratz等,CurrentMed.Chem.13:477-523(2006);Jeffrey等,Bioorganic&Med.Chem.Letters16:358-362(2006);Torgov等,Bioconj.Chem.16:717-721(2005);Nagy等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA97:829-834(2000);Dubowchik等,Bioorg.&Med.Chem.Letters12:1529-1532(2002);King等,J.Med.Chem.45:4336-4343(2002);及美國(guó)專利No.6,630,579）；甲氨蝶呤；長(zhǎng)春地辛(vindesine)；紫杉烷(taxane)諸如多西他賽(docetaxel)、帕利他塞、larotaxel、tesetaxel、和ortataxel；單端孢霉素(trichothecene)；和CC1065。在另一個(gè)實(shí)施方案中，免疫綴合物包含與酶活性毒素或其片段綴合的如本文中所描述的抗體，所述酶活性毒素包括但不限于白喉A鏈、白喉毒素的非結(jié)合活性片段、外毒素A鏈（來(lái)自銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)）、蓖麻毒蛋白(ricin)A鏈、相思豆毒蛋白(abrin)A鏈、蒴蓮根毒蛋白(modeccin)A鏈、α-帚曲霉素(sarcin)、油桐(Aleutitesfordii)毒蛋白、香石竹(dianthin)毒蛋白、美洲商陸(Phytolacaamericana)蛋白（PAPI、PAPII和PAP-S）、苦瓜(Momordicacharantia)抑制物、麻瘋樹(shù)毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、肥皂草(sapaonariaofficinalis)抑制劑、白樹(shù)毒蛋白(gelonin)、絲林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依諾霉素(enomycin)和單端孢菌素(trichothecenes)。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫綴合物包含與放射性原子綴合以形成放射性綴合物的如本文中所描述的抗體。多種放射性同位素可用于生成放射性綴合物。例子包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素。在使用放射性綴合物進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，它可以包含供閃爍法研究用的放射性原子，例如tc99m或I123，或供核磁共振(NMR)成像（又稱為磁共振成像，mri）用的自旋標(biāo)記物，諸如再一次的碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵?？梢允褂枚喾N雙功能蛋白質(zhì)偶聯(lián)劑來(lái)生成抗體和細(xì)胞毒劑的綴合物，諸如N-琥珀酰亞氨基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)，琥珀酰亞氨基-4-(N-馬來(lái)酰亞氨基甲基)環(huán)己烷-1-羧酸酯(SMCC)，亞氨基硫烷(IT)，亞氨酸酯（諸如鹽酸己二酰亞氨酸二甲酯）、活性酯類（諸如辛二酸二琥珀酰亞氨基酯）、醛類（諸如戊二醛）、雙疊氮化合物（諸如雙(對(duì)-疊氮苯甲?；?己二胺）、雙重氮衍生物（諸如雙(對(duì)-重氮苯甲?；?-乙二胺）、二異硫氰酸酯（諸如甲苯2,6-二異氰酸酯）、和雙活性氟化合物（諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯）的雙功能衍生物。例如，可以如Vitetta等,Science238:1098(1987)中所述制備蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14標(biāo)記的1-異硫氰酸芐基-3-甲基二亞乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于將放射性核苷酸與抗體偶聯(lián)的例示性螯合劑。參見(jiàn)WO94/11026。接頭可以是便于在細(xì)胞中釋放細(xì)胞毒性藥物的“可切割接頭”。例如，可使用酸不穩(wěn)定接頭、肽酶敏感性接頭、光不穩(wěn)定接頭、二甲基接頭或含二硫化物接頭(Chari等,CancerRes52:127-131(1992);美國(guó)專利No.5,208,020)。本文中的免疫綴合物或ADC明確涵蓋，但不限于用交聯(lián)試劑制備的此類綴合物，所述交聯(lián)試劑包括但不限于BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、sulfo-EMCS、sulfo-GMBS、sulfo-KMUS、sulfo-MBS、sulfo-SIAB、sulfo-SMCC、和sulfo-SMPB，及SVSB(琥珀酰亞氨基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)，它們是商品化的（例如，來(lái)自PierceBiotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A）。包含Auristatin和多拉司他汀的免疫偶聯(lián)物在有些實(shí)施方案中，免疫偶聯(lián)物包含與多拉司他汀(dolastatin)或多拉司他汀肽類似物或衍生物（例如auristatin）(美國(guó)專利No.5,635,483;5,780,588)偶聯(lián)的本發(fā)明抗體。多拉司他汀和auristatin已經(jīng)顯示出干擾微管動(dòng)力學(xué)、GTP水解、及核和細(xì)胞分裂(Woyke等(2001)Antimicrob.AgentsandChemother.45(12):3580-3584)且具有抗癌(美國(guó)專利No.5663149)和抗真菌活性(Pettit等(1998)Antimicrob.AgentsChemother.42:2961-2965)。多拉司他汀或auristatin藥物模塊可經(jīng)由肽藥物模塊的N（氨基）末端或C（羧基）末端附著于抗體(WO02/088172)。例示性的auristatin實(shí)施方案包括N-末端連接的單甲基auristatin藥物模塊DE和DF（參見(jiàn)美國(guó)專利No.7,659,241,7,498,298和7,745,394）。肽藥物模塊可以選自下文通式DE和DF：其中DE和DF的波形線指示抗體或抗體-接頭構(gòu)件的共價(jià)附著位點(diǎn)，且每個(gè)位置獨(dú)立地是R2選自H和C1-C8烴基；R3選自H、C1-C8烴基、C3-C8碳環(huán)、芳基、C1-C8烴基-芳基、C1-C8烴基-(C3-C8碳環(huán))、C3-C8雜環(huán)和C1-C8烴基-(C3-C8雜環(huán))；R4選自H、C1-C8烴基、C3-C8碳環(huán)、芳基、C1-C8烴基-芳基、C1-C8烴基-(C3-C8碳環(huán))、C3-C8雜環(huán)和C1-C8烴基-(C3-C8雜環(huán))；R5選自H和甲基；或者R4與R5一起形成碳環(huán)且具有通式-(CRaRb)n-，其中Ra和Rb獨(dú)立地選自H、C1-C8烴基和C3-C8碳環(huán)，而n選自2、3、4、5和6；R6選自H和C1-C8烴基；R7選自H、C1-C8烴基、C3-C8碳環(huán)、芳基、C1-C8烴基-芳基、C1-C8烴基-(C3-C8碳環(huán))、C3-C8雜環(huán)和C1-C8烴基-(C3-C8雜環(huán))；每個(gè)R8獨(dú)立地選自H、OH、C1-C8烴基、C3-C8碳環(huán)和O-(C1-C8烴基)；R9選自H和C1-C8烴基；R10選自芳基或C3-C8雜環(huán)；Z為O、S、NH或NR12，其中R12為C1-C8烴基；R11選自H、C1-C20烴基、芳基、C3-C8雜環(huán)、-(R13O)m-R14或-(R13O)m-CH(R15)2；m是范圍為1-1000的整數(shù)；R13為C2-C8烴基；R14為H或C1-C8烴基；R15每次出現(xiàn)獨(dú)立為H、COOH、-(CH2)n-N(R16)2、-(CH2)n-SO3H或-(CH2)n-SO3-C1-C8烴基；R16每次出現(xiàn)獨(dú)立為H、C1-C8烴基或-(CH2)n-COOH；R18選自-C(R8)2-C(R8)2-芳基、-C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8雜環(huán))和-C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8碳環(huán))；且n是范圍為0到6的整數(shù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，R3、R4和R7獨(dú)立為異丙基或仲丁基，而R5為-H或甲基。在一個(gè)例示性的實(shí)施方案中，R3和R4各自為異丙基，R5為-H，而R7為仲丁基。在又一個(gè)實(shí)施方案中，R2和R6各自為甲基，而R9為-H。在又一個(gè)實(shí)施方案中，R8每次出現(xiàn)為-OCH3。在一個(gè)例示性的實(shí)施方案中，R3和R4各自為異丙基，R2和R6各自為甲基，R5為-H，R7為仲丁基，R8每次出現(xiàn)為-OCH3，而R9為-H。在一個(gè)實(shí)施方案中，Z為-O-或-NH-。在一個(gè)實(shí)施方案中，R10為芳基。在一個(gè)例示性的實(shí)施方案中，R10為-苯基。在一個(gè)例示性的實(shí)施方案中，若Z為-O-，則R11為-H、甲基或叔丁基。在一個(gè)實(shí)施方案中，若Z為-NH，則R11為-CH(R15)2，其中R15為-(CH2)n-N(R16)2，而R16為-C1-C8烴基或-(CH2)n-COOH。在另一個(gè)實(shí)施方案中，若Z為-NH，則R11為-CH(R15)2，其中R15為-(CH2)n-SO3H。通式DE的一種例示性auristatin實(shí)施方案是MMAE（單甲基auristatinE），其中波形線指示共價(jià)附著至抗體-藥物偶聯(lián)物的接頭：通式DF的一種例示性auristatin實(shí)施方案是MMAF（單甲基auristatinF，auristatinE(MMAE)的一種變體，在藥物的C末端具有苯丙氨酸），其中波形線指示共價(jià)附著至抗體-藥物偶聯(lián)物的接頭(參見(jiàn)US2005/0238649及Doronina等(2006)BioconjugateChem.17:114-124)：一方面，可以將親水性基團(tuán)在R11處附著于藥物模塊，所述親水性基團(tuán)包括但不限于三乙二醇酯(triethyleneglycolester,TEG)，如上所示。不限于任何特定理論，所述親水性基團(tuán)有助于藥物模塊的內(nèi)在化和不聚集(non-agglomeration)。包含auristatin/多拉司他汀或其衍生物的ADC的例示性實(shí)施方案記載于US2005/0238649A1及Doronina等(2006)BioconjugateChem.17:114-124，明確收入本文作為參考。包含MMAE或MMAF及各種接頭構(gòu)件的ADC的例示性實(shí)施方案具有如下結(jié)構(gòu)和縮寫（其中“Ab”是抗體；p是藥物載荷（每個(gè)抗體的藥物模塊平均數(shù)）且范圍為約1到約8；“vc”是“val-cit”，即纈氨酸-瓜氨酸二肽；而“S”是硫原子）：包含MMAF及各種接頭構(gòu)件的ADC的例示性實(shí)施方案進(jìn)一步包括Ab-MC-PAB-MMAF和Ab-PAB-MMAF。有趣的是，包含經(jīng)不可蛋白水解切割的接頭附著于抗體的MMAF的免疫偶聯(lián)物顯示出具有與包含經(jīng)可蛋白水解切割的接頭附著于抗體的MMAF的免疫偶聯(lián)物相當(dāng)?shù)幕钚?。參?jiàn)Doronina等(2006)BioconjugateChem.17:114-124。在這種情況中，認(rèn)為藥物釋放是由細(xì)胞中的抗體降解來(lái)實(shí)現(xiàn)的。同上。典型的是，基于肽的藥物模塊可通過(guò)在兩個(gè)或更多氨基酸和/或肽片段之間形成肽鍵來(lái)制備。此類肽鍵可依照例如肽化學(xué)領(lǐng)域眾所周知的液相合成法來(lái)制備(參見(jiàn)E.和K.Lübke,“ThePeptides”,卷1,pp76-136,1965,AcademicPress)。auristatin/多拉司他汀藥物模塊可依照以下文獻(xiàn)中的方法來(lái)制備：US2005/0238649A1;美國(guó)專利No.5635483;美國(guó)專利No.5780588;Pettit等(1989)J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465;Pettit等(1998)Anti-CancerDrugDesign13:243-277;Pettit,G.R.等,Synthesis,1996,719-725;Pettit等(1996)J.Chem.Soc.PerkinTrans.15:859-863;及Doronina(2003)Nat.Biotechnol.21(7):778-784。具體而言，通式DF的auristatin/多拉司他汀藥物模塊諸如MMAF及其衍生物可以使用US2005/0238649A1及Doronina等(2006)BioconjugateChem.17:114-124中記載的方法來(lái)制備。通式DE的auristatin/多拉司他汀藥物模塊諸如MMAE及其衍生物可以使用Doronina等(2003)Nat.Biotech.21:778-784中記載的方法來(lái)制備?？梢酝ㄟ^(guò)常規(guī)方法方便地合成藥物-接頭模塊MC-MMAF、MC-MMAE、MC-vc-PAB-MMAF、和MC-vc-PAB-MMAE，例如Doronina等(2003)Nat.Biotech.21:778-784及美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)US2005/0238649A1中所記載的，然后將它們偶聯(lián)至感興趣的抗體。E.用于診斷和檢測(cè)的方法和組合物在某些實(shí)施方案中，本文中提供的任何抗間皮素抗體可用于檢測(cè)生物學(xué)樣品中間皮素的存在。在用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)“檢測(cè)”涵蓋定量或定性檢測(cè)?！吧飳W(xué)樣品”包括例如細(xì)胞或組織（例如活檢材料，包括癌性或潛在癌性的胰、卵巢、肺、或子宮內(nèi)膜組織，或間皮瘤）、或血清。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了在診斷或檢測(cè)方法中使用的抗間皮素抗體。在又一方面，提供了檢測(cè)生物學(xué)樣品中間皮素的存在的方法。在某些實(shí)施方案中，該方法包括在容許抗間皮素抗體結(jié)合間皮素的條件下使生物學(xué)樣品與抗間皮素抗體接觸，如本文中所描述的，并檢測(cè)是否在抗間皮素抗體與生物學(xué)樣品中的間皮素間形成復(fù)合物。此類方法可以是體外或體內(nèi)方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用抗間皮素抗體來(lái)選擇適合用抗間皮素抗體治療的受試者，例如其中間皮素是一種用于選擇患者的生物標(biāo)志。在又一個(gè)實(shí)施方案中，生物學(xué)樣品是血清，例如其中檢測(cè)自癌細(xì)胞脫落入血清的間皮素。在又一個(gè)實(shí)施方案中，體內(nèi)使用抗間皮素抗體來(lái)檢測(cè)（例如通過(guò)體內(nèi)成像）受試者中的間皮素陽(yáng)性癌癥，例如為了癌癥診斷、預(yù)后、或分期，確定適宜的治療過(guò)程，或監(jiān)測(cè)癌癥對(duì)治療的響應(yīng)的目的。本領(lǐng)域已知用于體內(nèi)檢測(cè)的一種方法是免疫-正電子發(fā)射體層攝影術(shù)(immuno-PET)，如記載于例如vanDongenetal.,TheOncologist12:1379-1389(2007)及Vereletal.,J.Nucl.Med.44:1271-1281(2003)。在此類實(shí)施方案中，提供了一種用于檢測(cè)受試者中的間皮素陽(yáng)性癌癥的方法，該方法包括將經(jīng)過(guò)標(biāo)記的抗間皮素抗體施用于具有或懷疑具有間皮素陽(yáng)性癌癥的受試者，并檢測(cè)所述受試者中所述經(jīng)過(guò)標(biāo)記的抗間皮素抗體，其中檢測(cè)到所述經(jīng)過(guò)標(biāo)記的抗間皮素抗體指示所述受試者中的間皮素陽(yáng)性癌癥。在某些此類實(shí)施方案中，經(jīng)過(guò)標(biāo)記的抗間皮素抗體包含與正電子發(fā)射體偶聯(lián)的抗間皮素抗體，諸如68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr、和124I。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，正電子發(fā)射體是89Zr。在又一些實(shí)施方案中，診斷或檢測(cè)方法包括使固定化至基片的第一抗間皮素抗體與要測(cè)試間皮素存在情況的生物學(xué)樣品接觸，使該基片暴露于第二抗間皮素抗體，并檢測(cè)該第二抗間皮素抗體是否結(jié)合至該第一抗間皮素抗體和該生物學(xué)樣品中的間皮素之間的復(fù)合物。基片可以是任何支持性介質(zhì)，例如玻璃、金屬、陶瓷、聚合物珠、載玻片、芯片、和其它基片。在某些實(shí)施方案中，生物學(xué)樣品包括細(xì)胞或組織（例如活檢材料，包括癌性或潛在癌性的胰、卵巢、肺或子宮內(nèi)膜組織，或間皮瘤）、或血清，其中脫落有間皮素的血清。在某些實(shí)施方案中，第一或第二抗間皮素抗體是本文所述任何抗體。在此類實(shí)施方案中，第二抗間皮素抗體可以是19C3或自19C3衍生的抗體，如本文中描述的?？梢勒杖魏紊鲜鰧?shí)施方案來(lái)診斷或檢測(cè)的例示性病癥包括間皮素陽(yáng)性癌癥，諸如間皮素陽(yáng)性胰腺癌（包括胰管腺癌）、間皮素陽(yáng)性卵巢癌（包括卵巢漿液性腺癌）、間皮素陽(yáng)性肺癌（包括非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)）、間皮瘤、和間皮素陽(yáng)性子宮內(nèi)膜癌。在一個(gè)實(shí)施方案中，間皮素陽(yáng)性癌癥是在實(shí)施例J中本文所述條件下得到大于“0”的抗間皮素免疫組織化學(xué)(IHC)得分的癌癥，這對(duì)應(yīng)于>90%的腫瘤細(xì)胞中染色很弱或無(wú)染色。在另一個(gè)實(shí)施方案中，間皮素陽(yáng)性癌癥以1+、2+或3+水平表達(dá)間皮素，如在實(shí)施例J中本文所述條件下定義的。依照任何上述實(shí)施方案的間皮素陽(yáng)性癌癥可以是雙重陽(yáng)性癌癥。在某些實(shí)施方案中，提供了經(jīng)標(biāo)記的抗間皮素抗體。標(biāo)記物包括但不限于直接檢測(cè)的標(biāo)記物或模塊（諸如熒光、發(fā)色、電子致密、化學(xué)發(fā)光、和放射性標(biāo)記物）、及例如經(jīng)由酶反應(yīng)或分子相互作用間接檢測(cè)的模塊，諸如酶或配體。例示性的標(biāo)記物包括但不限于放射性同位素32P、14C、125I、3H、和131I、熒光團(tuán)諸如稀土螯合物或熒光素及其衍生物、羅丹明(rhodamine)及其衍生物、丹酰、傘形酮、螢光素酶，例如，螢火蟲螢光素酶和細(xì)菌螢光素酶（美國(guó)專利No.4,737,456）、螢光素、2,3-二氫酞嗪二酮、辣根過(guò)氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖類氧化酶，例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶、和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、雜環(huán)氧化酶諸如尿酸酶和黃嘌呤氧化酶（其與采用過(guò)氧化氫氧化染料前體的酶諸如HRP偶聯(lián)）、乳過(guò)氧化物酶、或微過(guò)氧化物酶、生物素/親合素、自旋標(biāo)記物、噬菌體標(biāo)記物、穩(wěn)定的自由基、等等。在另一個(gè)實(shí)施方案中，標(biāo)記物是正電子發(fā)射體。正電子發(fā)射體包括但不限于68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr、和124I。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，正電子發(fā)射體是89Zr。F.藥物配制劑通過(guò)混合具有期望純度的此類抗體或免疫偶聯(lián)物與一種或多種任選的藥學(xué)可接受載體(Remington’sPharmaceuticalSciences第16版,Osol,A.編(1980))混合以凍干配制劑或水性溶液形式制備如本文中所描述的抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物的藥物配制劑。一般地，藥學(xué)可接受載體在所采用的劑量和濃度對(duì)接受者是無(wú)毒的，而且包括但不限于緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽、和其它有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑（諸如氯化十八烷基二甲基芐基銨；氯化己烷雙胺；苯扎氯銨、苯索氯銨；酚、丁醇或苯甲醇；對(duì)羥基苯甲酸烴基酯，諸如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；和間甲酚）；低分子量（少于約10個(gè)殘基）多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清清蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖類，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽相反離子，諸如鈉；金屬?gòu)?fù)合物（例如Zn-蛋白質(zhì)復(fù)合物）；和/或非離子表面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文中的例示性的藥學(xué)可接受載體進(jìn)一步包含間質(zhì)藥物分散劑諸如可溶性中性活性透明質(zhì)酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明質(zhì)酸酶糖蛋白，諸如rHuPH20(BaxterInternational,Inc.)。某些例示性的sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20記載于美國(guó)專利公開(kāi)文本No.2005/0260186和2006/0104968。在一方面，將sHASEGP與一種或多種別的糖胺聚糖酶諸如軟骨素酶組合。例示性的凍干抗體或免疫偶聯(lián)物配制劑記載于美國(guó)專利No.6,267,958。水性抗體或免疫偶聯(lián)物配制劑包括那些記載于美國(guó)專利No.6,171,586和WO2006/044908的，后一種配制劑包含組氨酸-乙酸鹽緩沖液。本文中的配制劑還可含有超過(guò)一種所治療具體適應(yīng)癥所必需的活性組分，優(yōu)選那些活性互補(bǔ)且彼此沒(méi)有不利影響的化合物。例如，可能希望進(jìn)一步提供吉西他濱，例如用于治療間皮素陽(yáng)性癌癥諸如間皮素陽(yáng)性胰腺癌（胰腺腺癌）。又例如，可能希望進(jìn)一步提供與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)的抗MUC16抗體，例如用于治療間皮素陽(yáng)性癌癥或雙重陽(yáng)性癌癥諸如間皮素陽(yáng)性卵巢癌（卵巢漿液性腺癌）或雙重陽(yáng)性卵巢癌。此類活性組分適于以有效用于所需目的的量而組合存在。活性成分可包載于例如通過(guò)凝聚技術(shù)或通過(guò)界面聚合制備的微膠囊中（例如分別是羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊），在膠狀藥物投遞系統(tǒng)中（例如脂質(zhì)體、清蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和納米膠囊），或在粗滴乳狀液中。此類技術(shù)披露于例如Remington'sPharmaceuticalSciences,第16版,Osol,A.編(1980)?？梢灾苽涑掷m(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑的合適的例子包括含有抗體或免疫偶聯(lián)物的固體疏水性聚合物的半透性基質(zhì)，該基質(zhì)為成形商品形式，例如膜，或微膠囊。用于體內(nèi)施用的配制劑一般是無(wú)菌的。無(wú)菌性可容易地實(shí)現(xiàn)，例如通過(guò)穿過(guò)無(wú)菌濾膜過(guò)濾。G.治療性方法和組合物可以在方法例如治療性方法中使用本文中提供的任何抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物。在一方面，本文中提供的抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物用于抑制間皮素陽(yáng)性細(xì)胞增殖的方法，該方法包括在允許抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物結(jié)合細(xì)胞表面上的間皮素的條件下將細(xì)胞暴露于抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物，由此抑制細(xì)胞增殖。在某些實(shí)施方案中，所述方法是體外或體內(nèi)方法。在又一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是胰、卵巢、肺、間皮瘤、或子宮內(nèi)膜細(xì)胞。在又一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是雙重陽(yáng)性細(xì)胞。體外細(xì)胞增殖抑制可使用可購(gòu)自Promega(Madison,WI)的CellTiter-GloTM發(fā)光細(xì)胞存活力測(cè)定法來(lái)測(cè)定。該測(cè)定法基于存在的ATP的量化來(lái)測(cè)定培養(yǎng)物中的可存活細(xì)胞數(shù)目。參見(jiàn)Crouchetal.(1993)J.Immunol.Meth.160:81-88;美國(guó)專利No.6602677。該測(cè)定法可以以96孔或384孔形式進(jìn)行，使之適應(yīng)自動(dòng)化高通量篩選(HTS)。參見(jiàn)Creeetal.(1995)AntiCancerDrugs6:398-404。該測(cè)定法規(guī)程牽涉直接向培養(yǎng)細(xì)胞添加單一試劑（CellTiter-試劑）。這導(dǎo)致細(xì)胞溶解和通過(guò)螢光素酶反應(yīng)產(chǎn)生的發(fā)光信號(hào)的生成。發(fā)光信號(hào)與存在的ATP的量成正比，后者直接與培養(yǎng)物中存在的可存活細(xì)胞數(shù)成正比。可以通過(guò)光度計(jì)或CCD照相機(jī)成像裝置來(lái)記錄數(shù)據(jù)。發(fā)光輸出表述成相對(duì)光單位(RLU)。在另一方面，提供了作為藥物使用的抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物。在其它的方面，提供了在治療方法中使用的抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物。在某些實(shí)施方案中，提供了用于治療間皮素陽(yáng)性癌癥的抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在治療具有間皮素陽(yáng)性癌癥的個(gè)體的方法中使用的抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物，所述方法包括對(duì)個(gè)體施用有效量的抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)個(gè)體施用有效量的至少一種其它的治療劑，在又一方面，本發(fā)明提供了抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物在制造或制備藥物中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物用于治療間皮素陽(yáng)性癌癥。在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物用于治療間皮素陽(yáng)性癌癥的方法，該方法包括對(duì)具有間皮素陽(yáng)性癌癥的個(gè)體施用有效量的所述藥物。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)個(gè)體施用有效量的至少一種其它的治療劑，例如如下文所描述的。在又一方面，本發(fā)明提供了治療間皮素陽(yáng)性癌癥的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括對(duì)具有此類間皮素陽(yáng)性癌癥的個(gè)體施用有效量的抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)個(gè)體施用有效量的至少一種其它的治療劑，如下文所描述的。依照任何上述實(shí)施方案的間皮素陽(yáng)性癌癥可以是例如間皮素陽(yáng)性胰腺癌（包括胰管腺癌）、間皮素陽(yáng)性卵巢癌（包括卵巢漿液性腺癌）、間皮素陽(yáng)性肺癌（包括非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)）、間皮瘤、和間皮素陽(yáng)性子宮內(nèi)膜癌。在一個(gè)實(shí)施方案中，間皮素陽(yáng)性癌癥是在實(shí)施例J中本文所述條件下得到大于“0”的抗間皮素免疫組織化學(xué)(IHC)得分的癌癥，這對(duì)應(yīng)于>90%的腫瘤細(xì)胞中染色很弱或無(wú)染色。在另一個(gè)實(shí)施方案中，間皮素陽(yáng)性癌癥以1+、2+或3+水平表達(dá)間皮素，如在實(shí)施例J中本文所述條件下定義的。依照任何上述實(shí)施方案的間皮素陽(yáng)性癌癥可以是雙重陽(yáng)性癌癥。依照任何上述實(shí)施方案的“個(gè)體”可以是人。在又一方面，本發(fā)明提供了藥物配制劑，其包含本文中提供的任何抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物，例如在任何上述治療性方法中使用。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物配制劑包含本文中提供的任何抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物和藥學(xué)可接受載體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物配制劑包含本文中提供的任何抗間皮素抗體或免疫偶聯(lián)物和至少一種其它的治療劑，例如如下文所描述的。可以單獨(dú)或與療法中的其它藥劑組合使用本發(fā)明的抗體或免疫偶聯(lián)物。例如，可以與至少一種其它的治療劑共施用本發(fā)明的抗體或免疫偶聯(lián)物。在某些實(shí)施方案中，其它的治療劑是吉西他濱。在某些實(shí)施方案中，其它的治療劑是與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)的抗MUC16抗體。上文記錄的此類聯(lián)合療法涵蓋聯(lián)合施用（其中兩種或更多種治療劑包含在相同或不同配制劑中），和分開(kāi)施用，在該情況中，可以在施用其它的治療劑和/或佐劑之前、同時(shí)、和/或之后發(fā)生本發(fā)明的抗體或免疫偶聯(lián)物的施用。也可以與放射療法組合使用本發(fā)明的抗體或免疫偶聯(lián)物?？梢酝ㄟ^(guò)任何合適的手段，包括胃腸外、肺內(nèi)、和鼻內(nèi)，及若期望用于局部治療的話，損傷內(nèi)施用來(lái)施用本發(fā)明的抗體或免疫偶聯(lián)物（和任何其它的治療劑）。胃腸外輸注包括肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、或皮下施用。部分根據(jù)施用是短暫的還是長(zhǎng)期的，劑量給藥可以通過(guò)任何合適的路徑，例如通過(guò)注射，諸如靜脈內(nèi)或皮下注射進(jìn)行。本文中涵蓋各種劑量給藥日程表，包括但不限于單次施用或在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)里的多次施用、推注施用、和脈沖輸注。本發(fā)明的抗體或免疫偶聯(lián)物應(yīng)當(dāng)以一種符合良好的醫(yī)學(xué)實(shí)踐的方式配制、確定劑量及給藥。關(guān)于這一點(diǎn)考慮的因素包括在治療的特定病癥、在治療的特定哺乳動(dòng)物、患者個(gè)體的臨床狀態(tài)、病因、藥物遞送部位、給藥方法、服藥日程以及其它為開(kāi)業(yè)醫(yī)生所知的因素?？贵w或免疫偶聯(lián)物無(wú)需但可任選地與一種或多種目前用于預(yù)防或治療所述病癥的藥物一起配制。上述其它藥物的有效量取決于配方中所存在的抗體或免疫偶聯(lián)物的量、所治療病癥的類型、以及其它上述討論的因素。這些藥物通常以相同的劑量使用并具有本文中所描述的給藥途徑，或以約1-99%的本文所描述的劑量使用，或以任何劑量并通過(guò)任何途徑使用，所述劑量和途徑是憑經(jīng)驗(yàn)確定的/經(jīng)臨床測(cè)定合適的。為了預(yù)防或治療疾病，本發(fā)明的抗體或免疫偶聯(lián)物（當(dāng)單獨(dú)或與一種或多種其它其它的治療劑聯(lián)合使用時(shí)）的合適劑量應(yīng)取決于所要治療的疾病的類型、抗體或免疫偶聯(lián)物的種類、疾病的嚴(yán)重性和病程、所給予抗體或免疫偶聯(lián)物的預(yù)防或治療目的、之前的治療、患者的臨床史和對(duì)抗體或免疫偶聯(lián)物的應(yīng)答、以及主治醫(yī)師的斟酌決定?？贵w或免疫偶聯(lián)物適合于在一次或一系列的治療中給予患者。取決于疾病的類型和嚴(yán)重性，約1μg/kg-15mg/kg（例如0.1mg/kg-10mg/kg）的抗體或免疫偶聯(lián)物可作為首次候選用量給予患者，無(wú)論是例如通過(guò)一次或多次單獨(dú)的給藥或通過(guò)連續(xù)輸注。取決予上述提及的因素，一個(gè)典型的日劑量可在約1μg/kg-100mg/kg或更多的范圍內(nèi)。對(duì)于幾天或更長(zhǎng)時(shí)間的重復(fù)給藥，取決于病情，治療應(yīng)通常持續(xù)直至出現(xiàn)病癥得到期望的抑制為止?？贵w或免疫偶聯(lián)物的一種例示性劑量會(huì)在約0.05mg/kg到約10mg/kg的范圍中。如此，可以對(duì)患者施用一劑或多劑約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg（或其任意組合）。上述劑量可間歇給予，如每周或每三周給予一次(如使得患者得到約2-約20個(gè)，或例如約6個(gè)劑量的抗體)?？山o予初始較高的負(fù)荷劑量，接著給予一個(gè)或多個(gè)較低的劑量。然而，可使用其它給藥方案。通過(guò)常規(guī)技術(shù)和測(cè)定方法易于監(jiān)測(cè)該治療的進(jìn)展。應(yīng)當(dāng)理解，可以使用本發(fā)明的免疫偶聯(lián)物和抗間皮素抗體二者實(shí)施任何上述配制劑或治療性方法。H.制品在本發(fā)明的另一方面，提供了一種制品，其含有可用于治療、預(yù)防和/或診斷上文所描述的病癥的材料。制品包含容器和容器上或與容器聯(lián)合的標(biāo)簽或包裝插頁(yè)。合適的容器包括例如瓶、管形瓶、注射器、IV溶液袋、等等。容器可以由多種材料諸如玻璃或塑料形成。容器容納單獨(dú)或與另一種組合物組合有效治療、預(yù)防和/或診斷病癥的組合物，并且可以具有無(wú)菌存取口（例如，容器可以是具有由皮下注射針可穿過(guò)的塞子的管形瓶或靜脈內(nèi)溶液袋）。組合物中的至少一種活性劑是本發(fā)明的抗體或免疫偶聯(lián)物。標(biāo)簽或包裝插頁(yè)指示使用組合物來(lái)治療選擇的狀況。此外，制品可以包含(a)具有其中含有的組合物的第一容器，其中組合物包含本發(fā)明的抗體或免疫偶聯(lián)物；和(b)具有其中含有的組合物的第二容器，其中組合物包含其它的細(xì)胞毒性或其它方面治療性的藥劑。在本發(fā)明的此實(shí)施方案中的制品可以進(jìn)一步包含包裝插頁(yè)，其指示可以使用組合物來(lái)治療特定的狀況?；蛘?另外，制品可以進(jìn)一步包含第二（或第三）容器，其包含藥學(xué)可接受緩沖液，諸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩沖鹽水、Ringer氏溶液或右旋糖溶液。它可以進(jìn)一步包含從商業(yè)和用戶觀點(diǎn)看期望的其它材料，包括其它緩沖液、稀釋劑、濾器、針、和注射器。I.生物材料的保藏下列生物材料已經(jīng)保藏于美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,10801UniversityBoulevard,Manassas,VA20110-2209,USA)(ATCC)：雜交瘤名稱ATCC號(hào)保藏日MPF:3542(19C3.1.2)PTA-114642010年11月9日上文所述保藏雜交瘤生成本文中提到的19C3抗體。此保藏是依據(jù)國(guó)際承認(rèn)用于專利程序的微生物保藏布達(dá)佩斯條約(BudapestTreaty)及其（布達(dá)佩斯條約）實(shí)施細(xì)則的規(guī)定進(jìn)行的。這保證了自保藏之日起30年和最近一次請(qǐng)求提供保藏物樣品后至少5年保存保藏的存活培養(yǎng)物。保藏物可根據(jù)布達(dá)佩斯條約的條款通過(guò)ATCC獲得，并服從Genentech公司與ATCC之間的協(xié)議，它保證了在有關(guān)美國(guó)專利授權(quán)后，保藏人對(duì)公眾獲取所保藏材料施加的所有限制將不可撤回的取消；保證了在有關(guān)美國(guó)專利授權(quán)后或者在任何美國(guó)或外國(guó)專利申請(qǐng)向公眾公開(kāi)后，以兩者中居先者為準(zhǔn)，公眾可永久且不受限制的獲得保藏培養(yǎng)物的后代；而且保證了依據(jù)35U.S.C.§122及依照它的管理章程（包括37C.F.R.§1.14，特別要提及886OG638）由美國(guó)專利和商標(biāo)局長(zhǎng)批準(zhǔn)的個(gè)人將有資格獲得保藏培養(yǎng)物的后代。III.實(shí)施例以下是本發(fā)明的方法和組合物的實(shí)施例。應(yīng)當(dāng)理解，鑒于上文提供的一般描述，可以實(shí)施各種其它實(shí)施方案。A.人間皮素基因表達(dá)使用一種含有基因表達(dá)信息的專有數(shù)據(jù)庫(kù)（GeneLogicInc.，Gaithersburg，MD）分析人間皮素基因表達(dá)。使用一種微陣列圖譜瀏覽器進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)的圖形分析。圖2是各種組織（其列于左邊）中人間皮素基因表達(dá)的圖形展示。穿過(guò)圖頂部的刻度指示基于雜交信號(hào)強(qiáng)度的基因表達(dá)水平。點(diǎn)出現(xiàn)在鄰近每種所列組織的線的上方和下方。出現(xiàn)在線上方的點(diǎn)代表正常組織中的基因表達(dá)，而出現(xiàn)在線下方的點(diǎn)代表腫瘤和患病組織中的基因表達(dá)。圖2顯示間皮素基因表達(dá)在某些腫瘤或患病組織中相對(duì)于它們的正常對(duì)應(yīng)物升高。特別地，間皮素顯示出在卵巢，胰，子宮內(nèi)膜和肺腫瘤，包括腺癌和間皮瘤中實(shí)質(zhì)性過(guò)表達(dá)。人間皮素表達(dá)在除正常間皮（腹膜，心包，和胸膜）外的正常組織中基本上缺失。B.抗體生成使用下述規(guī)程生成了針對(duì)人間皮素的單克隆抗體。均融合至N端unizymeHis（HQ）標(biāo)簽的任一人MPF：間皮素（SEQIDNO：42的氨基酸34-580）或人間皮素（SEQIDNO：43，對(duì)應(yīng)于SEQIDNO：42的氨基酸296-580）在大腸桿菌58F3中表達(dá)并在Ni-NTA柱（Qiagen）上純化，接著在20mMMESpH6.0，6MGdnHCl中在Superdex200柱上凝膠過(guò)濾，如先前所述（Kirchhofer等，2003）并透析入1mMHCl，供于-80℃儲(chǔ)存。將5只Balb/c小鼠（CharlesRiverLaboratories，Hollister，CA）用兩種抗原在Ribi佐劑（RibiImmunochemResearch，Inc.，Hamilton，MO）中的2μg混合物超免疫接種6次。通過(guò)直接ELISA基于高抗體滴度選擇最好的兩只小鼠，合并它們的B細(xì)胞，并使用類似于先前記載的一種方案（Koehler和Milstein，1975；Hongo等，1995）的一種改良方案與小鼠骨髓瘤細(xì)胞（X63.Ag8.653；美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，Manassas，VA）融合。10-12天之后，自雜交瘤收獲上清液并通過(guò)直接ELISA（分開(kāi)）篩選對(duì)兩種抗原的結(jié)合。為了驗(yàn)證對(duì)正確折疊的、糖基化的、細(xì)胞表面表達(dá)的間皮素的識(shí)別，通過(guò)gD-間皮素轉(zhuǎn)染的SVT2細(xì)胞（gD是與抗gD抗體一起作為陽(yáng)性對(duì)照使用的N端表位標(biāo)簽）上的FACS進(jìn)一步篩選ELISA陽(yáng)性上清液。通過(guò)有限稀釋將陽(yáng)性雜交瘤亞克隆兩次，將11個(gè)擴(kuò)大規(guī)模，并通過(guò)蛋白A層析純化抗體。圖3顯示分離的單克隆抗體，以及下文將進(jìn)一步詳細(xì)描述的某些特性。C.7D9和22A10的人源化如下所述將單克隆抗體7D9和22A10人源化。殘基編號(hào)依照Kabat等，Sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，5thEd.，PublicHealthService，NationalInstitutesofHealth，Bethesda，MD（1991）。1.7D9的人源化a）小鼠7D9可變域的克隆使用標(biāo)準(zhǔn)方法自生成小鼠7D9的雜交瘤細(xì)胞提取總RNA。用重鏈和輕鏈的簡(jiǎn)并引物使用RT-PCR擴(kuò)增輕鏈可變域（VL）和重鏈可變域（VH）。正向引物對(duì)VL和VH區(qū)的N端氨基酸序列特異性。LC和HC反向引物分別設(shè)計(jì)成與輕鏈恒定域（CL）和重鏈恒定域1（CH1）中在物種間高度保守的一個(gè)區(qū)域退火。使用常規(guī)測(cè)序方法測(cè)定插入物的多核苷酸序列。7D9VL和VH氨基酸序列分別顯示于圖4和5。b）受體人共有框架上的直接高變區(qū)嫁接物以IgG的形式評(píng)估7D9人源化期間構(gòu)建的變體。比對(duì)來(lái)自小鼠7D9的VL和VH域與人VL卡帕I（VLKI）和人VH亞組III（VHIII）共有序列。將來(lái)自小鼠7D9（mu7D9）抗體的高變區(qū)改造入VLKI和VHATA受體框架以生成7D9.v1。受體VH框架VHATA在3個(gè)位置與VHIII不同：R71A，N73T，和L78A（Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89：4285（1992））。將來(lái)自mu7D9VL域的位置24-34（L1），50-56（L2）和89-97（L3）嫁接入VLKI。將來(lái)自mu7D9VH域的位置26-35（H1），49-65（H2）和95-102（H3）嫁接入VHATA（圖1和2）。這些CDR定義包括由它們的序列高變性（Wu，T.T.&Kabat，E.A.（1970）），它們的結(jié)構(gòu)位置（Chothia，C.&Lesk，A.M.（1987））和它們?cè)诳乖?抗體接觸中的參與（MacCallum等，J.Mol.Biol.262：732-745（1996））定義的位置。使用針對(duì)每一個(gè)高變區(qū)分開(kāi)的寡核苷酸通過(guò)Kunkel誘變生成了直接嫁接物7D9.v1。將針對(duì)重鏈或輕鏈任一的三種磷酸化寡核苷酸添加至50mMTrispH7.5，10mMMgCl2中的571ngKunkel模板，終體積40μl。將混合物退火90℃2分鐘，50℃5分鐘，然后在冰上冷卻。然后通過(guò)添加0.5μl100mMATP，0.5μl25mMdNTP（dATP，dCTP，dGTP和dTTP各25mM），1μl100mMDTT，1μl10XTM緩沖液（0.5MTrispH7.5，0.1MMgCl2），80UT4連接酶，和4UT7聚合酶（總體積13.6μl），室溫2小時(shí)補(bǔ)平10μl退火模板。然后將10μl補(bǔ)平、連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入XL1-blue細(xì)胞（Stratagene）。通過(guò)DNA測(cè)序鑒定出正確的克隆并作為IgG表達(dá)。c）變體的評(píng)估通過(guò)CHO瞬時(shí)轉(zhuǎn)染作為IgG表達(dá)7D9變體。用蛋白G親和層析純化IgG。使用BIAcoreTM-2000通過(guò)表面等離振子共振測(cè)定每一種7D9IgG變體對(duì)人間皮素的親和力。Biacore研究級(jí)CM5芯片使用來(lái)自Biacore的胺偶聯(lián)試劑盒固定化大約110RU大腸桿菌衍生的重組人間皮素。以30μl/min的流速注射每一種7D9變體（0.488至1000nM，在含有0.05%Tween20的PBS中）的連續(xù)2倍稀釋液。每一份樣品分析5分鐘結(jié)合和3.5分鐘解離。每一次注射之后，使用10mM甘氨酸pH1.7再生芯片。通過(guò)減去來(lái)自以相似密度固定化無(wú)關(guān)IgG的流動(dòng)室的RU來(lái)校正結(jié)合響應(yīng)。使用同時(shí)擬合kon和koff的1:1Languir模型進(jìn)行動(dòng)力學(xué)分析。d）結(jié)果用于7D9人源化的人受體框架基于人VL卡帕I共有（VLKI）和受體VH框架VHATA，受體VH框架VHATA在3個(gè)位置與人VH亞組III共有（VHIII）不同：R71A，N73T，和L78A（Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89：4285（1992））。比對(duì)小鼠7D9的VL和VH域與人VLKI和VHIII域；鑒定高變區(qū)并嫁接入人受體框架以生成7D9.v1（圖4和5）。作為IgG，7D9.v1的親和力相對(duì)于mu7D9降低約2倍（型式為嵌合7D9），如通過(guò)Biacore評(píng)估的（圖6）。為了改進(jìn)7D9.v1的結(jié)合親和力，將輕鏈中的位置36和87和重鏈中的位置48，67，69，71，73，75，76，78和80變成在mu7D9中的這些位置處找到的殘基。將這些改變的輕鏈和重鏈與來(lái)自7D9.v1的鏈的組合轉(zhuǎn)染入CHO，作為IgG表達(dá)并純化，并通過(guò)Biacore評(píng)估對(duì)人間皮素的結(jié)合（圖6）。變體7D9.v2和7D9.v3（都含有改變的輕鏈）具有與嵌合7D9相當(dāng)?shù)挠H和力。變體7D9.v3在輕鏈中的2個(gè)位置與7D9.v1不同。單獨(dú)的改變均不足以改進(jìn)結(jié)合以與mu7D9相當(dāng)（圖6）。人源化7D9.v3的改變的匯總：將6個(gè)小鼠7D9CDR（定義為位置24-34（L1），50-56（L2）和89-97（L3），26-35（H1），49-65（H2）和93-102（H3））嫁接入人共有VLKI和VHATA受體域。將額外兩個(gè)框架殘基（輕鏈的36和87）變回小鼠殘基，產(chǎn)生親和力與mu7D9相當(dāng)?shù)?D9.v3。2.22A10的人源化a）小鼠22A10可變域的克隆使用標(biāo)準(zhǔn)方法自生成小鼠22A10的雜交瘤細(xì)胞提取總RNA。用重鏈（HC）和輕鏈（LC）的簡(jiǎn)并引物使用RT-PCR擴(kuò)增輕鏈可變域（VL）和重鏈可變域（VH）。正向引物對(duì)VL和VH區(qū)的N端氨基酸序列特異性。LC和HC反向引物分別設(shè)計(jì)成與輕鏈恒定域（CL）和重鏈恒定域1（CH1）中在物種間高度保守的一個(gè)區(qū)域退火。使用常規(guī)測(cè)序方法測(cè)定插入物的多核苷酸序列。22A10VL和VH氨基酸序列分別顯示于圖7和8。b）受體人共有框架上的直接高變區(qū)嫁接物以IgG或作為Fab在噬菌體上單價(jià)展示的形式評(píng)估22A10人源化期間構(gòu)建的變體。用于此項(xiàng)工作的噬菌粒是一種單價(jià)Fab-g3展示載體，其由在單一phoA啟動(dòng)子控制下的兩個(gè)可讀框組成。第一個(gè)可讀框由與受體輕鏈VL和CH1域融合的stII信號(hào)序列組成，而第二個(gè)由與受體重鏈VH和CH1域（接著是次要噬菌體外殼蛋白P3）融合的stII信號(hào)序列組成。比對(duì)來(lái)自小鼠22A10的VL和VH域與人VL卡帕I（VLKI）和人VH亞組III（VHIII）共有序列。將來(lái)自小鼠22A10（mu22A10）抗體的高變區(qū)改造入VLKI和VHIII受體框架以生成22A10嫁接物。將來(lái)自mu22A10VL域的位置24-34（L1），50-56（L2）和89-97（L3）嫁接入VLKI。將來(lái)自mu22A10VH域的位置26-35（H1），49-65（H2）和95-102（H3）嫁接入VHIII（圖7和8）。這些CDR定義包括由它們的序列高變性（Wu，T.T.&Kabat，E.A.（1970）），它們的結(jié)構(gòu)位置（Chothia，C.&Lesk，A.M.（1987））和它們?cè)诳乖?抗體接觸中的參與（MacCallum等，J.Mol.Biol.262：732-745（1996））定義的位置。使用針對(duì)每一個(gè)高變區(qū)分開(kāi)的寡核苷酸通過(guò)Kunkel誘變生成了22A10嫁接物。將針對(duì)重鏈或輕鏈任一的三種磷酸化寡核苷酸添加至50mMTrispH7.5，10mMMgCl2中的571ngKunkel模板，終體積40μl。將混合物退火90℃2分鐘，50℃5分鐘，然后在冰上冷卻。然后通過(guò)添加0.5μl100mMATP，0.5μl25mMdNTP（dATP，dCTP，dGTP和dTTP各25mM），1μl100mMDTT，1μl10XTM緩沖液（0.5MTrispH7.5，0.1MMgCl2），80UT4連接酶，和4UT7聚合酶（總體積13.6μl），室溫2小時(shí)補(bǔ)平10μl退火模板。然后將10μl補(bǔ)平、連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入XL1-blue細(xì)胞（Stratagene）。通過(guò)DNA測(cè)序鑒定出正確的克隆并作為IgG表達(dá)。c）高變區(qū)的軟隨機(jī)化使用一種軟隨機(jī)化(softrandomization)策略對(duì)22A10嫁接物進(jìn)行親和力成熟。將序列多樣性分開(kāi)導(dǎo)入每一個(gè)高變區(qū)，使得朝向小鼠高變區(qū)序列的傾向得以維持，這使用一種污染寡核苷酸合成策略(poisonedoligonucleotidesynthesisstrategy)來(lái)實(shí)現(xiàn)（Gallop等，JMedChem37：1233-51（1994））。對(duì)于每一個(gè)多樣化位置，用70-10-10-10核苷酸混合物污染編碼野生型氨基酸的密碼子，導(dǎo)致每一個(gè)位置處平均50%的突變率。使用Kunkel誘變?cè)?2A10嫁接物的高變區(qū)中導(dǎo)入序列多樣性以生成六個(gè)軟隨機(jī)化噬菌體文庫(kù)，分開(kāi)分選。生成的六個(gè)文庫(kù)每一個(gè)由單個(gè)軟隨機(jī)化高變區(qū)組成。d）噬菌體文庫(kù)的生成將設(shè)計(jì)用來(lái)將多樣性導(dǎo)入每一個(gè)高變區(qū)的寡核苷酸在含有660ng寡核苷酸，50mMTrispH7.5，10mMMgCl2，1mMATP，20mMDTT，和5U多核苷酸激酶的20μl反應(yīng)中37℃1小時(shí)分開(kāi)磷酸化。對(duì)于每一個(gè)文庫(kù)，將2μl磷酸化寡核苷酸添加至50mMTrispH7.5，10mMMgCl2中的300ngKunkel模板，終體積10μl。將混合物退火90℃2分鐘，50℃5分鐘，然后在冰上冷卻。然后通過(guò)添加0.5μl10mMATP，0.5μl10mMdNTP（dATP，dCTP，dGTP和dTTP各10mM），1μl100mMDTT，1μl10XTM緩沖液（0.5MTrispH7.5，0.1MMgCl2），80UT4連接酶，和4UT7聚合酶（總體積20μl），室溫2小時(shí)補(bǔ)平退火模板。然后將這些補(bǔ)平并連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入XL1-blue細(xì)胞，在0.5ml含有5μg/ml四環(huán)素和M13/KO7輔助噬菌體（MOI10）的2YT中于37℃培養(yǎng)2小時(shí)，然后合并并轉(zhuǎn)移至500ml含有50μg/ml羧芐青霉素的2YT并于37℃培養(yǎng)16小時(shí)。e）噬菌體選擇對(duì)于固相噬菌體選擇，將293衍生的人或獼猴間皮素在50mM碳酸氫鈉pH9.6中在MaxiSorp微量滴定板（Nunc，Rochester，NY）上于4℃固定化過(guò)夜。使用酪蛋白封閉劑（Pierce，Rockford，IL）將板封閉至少1小時(shí)。自培養(yǎng)物上清液收獲噬菌體并在含有5%奶粉和0.05%Tween20的PBS（PBSBT）中重懸浮。添加噬菌體文庫(kù)和1小時(shí)溫育之后，用含有0.05%Tween20的PBS（PBST）徹底清洗微量滴定孔并通過(guò)將孔用20mMHCl，500mMKCl溫育30分鐘來(lái)洗脫結(jié)合的噬菌體。用1MTris，pH8中和洗脫的噬菌體并使用XL1-Blue細(xì)胞和M13/KO7輔助噬菌體擴(kuò)增，在2YT，50μg/ml羧芐青霉素中于37℃培養(yǎng)過(guò)夜。將自含有靶物的孔洗脫的噬菌體的滴度與自不含靶物的孔回收的噬菌體的滴度比較以評(píng)估富集情況。對(duì)于液相噬菌體選擇，將生物素化的293衍生人或生物素化的獼猴間皮素添加至在含有5%奶粉和0.05%Tween20的PBS（PBSBT）中懸浮的噬菌體。溫育之后，在經(jīng)鏈霉親合素包被的微量滴定板上捕捉結(jié)合至生物素化的間皮素的噬菌體5分鐘。用含有0.05%Tween20的PBS（PBST）徹底清洗微量滴定孔并通過(guò)將孔用20mMHCl，500mMKCl溫育30分鐘來(lái)洗脫結(jié)合的噬菌體。用1MTris，pH8中和洗脫的噬菌體并使用XL1-Blue細(xì)胞和M13/KO7輔助噬菌體擴(kuò)增，在2YT，50μg/ml羧芐青霉素中于37℃培養(yǎng)過(guò)夜。將自含有靶物的孔洗脫的噬菌體的滴度與自不含靶物的孔回收的噬菌體的滴度比較以評(píng)估富集情況。對(duì)于液相噬菌體選擇，通過(guò)捕捉結(jié)合至溶液中遞減濃度的生物素化的間皮素的噬菌體接著在中性親合素上捕捉10分鐘（結(jié)合速率選擇）和通過(guò)延長(zhǎng)清洗時(shí)間和提高清洗溫度以容許洗掉弱結(jié)合噬菌體（解離速率選擇）二者來(lái)逐漸提高選擇嚴(yán)格性（Fuh等，J.Mol.Biol.340：1073-1093（2004））。f）IgG生成出于篩選目的，最初在293細(xì)胞中生成IgG變體。使用FUGENE系統(tǒng)（Roche，Basel，Switzerland）將編碼VL和VH的載體（25μg）轉(zhuǎn)染入293細(xì)胞。將500μlFuGene與4.5ml不含F(xiàn)BS的DMEM培養(yǎng)基混合并于室溫溫育5分鐘。將每條鏈（25μg）添加至此混合物并于室溫溫育20分鐘，然后轉(zhuǎn)移至五個(gè)T-150燒瓶，于37℃在5%CO2中轉(zhuǎn)染過(guò)夜。次日，除去含有轉(zhuǎn)染混合物的培養(yǎng)基并用23ml含0.1ml/L痕量元素（A0934）和10mg/L胰島素（A0940）的PS04培養(yǎng)基更換。將細(xì)胞再溫育5天，之后以1000rpm5分鐘收獲培養(yǎng)基并使用0.22μm低蛋白質(zhì)結(jié)合濾器無(wú)菌過(guò)濾。每125ml培養(yǎng)基添加2.5ml0.1%PMSF之后，樣品可儲(chǔ)存于4℃。用蛋白G親和層析純化IgG。g）親和力測(cè)定使用BIAcoreTM-2000通過(guò)表面等離振子共振測(cè)定22A10IgG變體對(duì)人或獼猴間皮素的親和力。Biacore研究級(jí)CM5芯片使用來(lái)自Biacore的胺偶聯(lián)試劑盒固定化大約110RU大腸桿菌衍生的重組人或獼猴間皮素。以30μl/min的流速注射每一種22A10變體（0.488至1000nM，在含有0.05%Tween20的PBS中）的連續(xù)2倍稀釋液。每一份樣品分析5分鐘結(jié)合和3.5分鐘解離。每一次注射之后，使用10mM甘氨酸pH1.7再生芯片。通過(guò)減去來(lái)自以相似密度固定化無(wú)關(guān)IgG的流動(dòng)室的RU來(lái)校正結(jié)合響應(yīng)。使用同時(shí)擬合kon和koff的1:1Languir模型進(jìn)行動(dòng)力學(xué)分析。h）結(jié)果用于22A10人源化的人受體框架基于共有人卡帕IVL域和共有人亞組IIIVH域。比對(duì)mu22A10的VL和VH域與人卡帕I和亞組III域；鑒定每一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）并嫁接入人受體框架以生成CDR嫁接物，其可作為IgG表達(dá)或作為Fab在噬菌體上展示（圖7和8）。生成了六個(gè)軟隨機(jī)化文庫(kù)，其中將多樣性分開(kāi)導(dǎo)入22A10CDR嫁接物的每一個(gè)CDR。使用固相和液相兩種策略針對(duì)人和獼猴間皮素（衍生自293細(xì)胞）淘選文庫(kù)（目的是改進(jìn)對(duì)糖基化形式的獼猴或人間皮素的結(jié)合）。溶液分選法容許經(jīng)由操作生物素化靶物濃度和噬菌體捕捉時(shí)間來(lái)選擇高親和力克隆，而添加未標(biāo)記靶物可用于消除較快解離速率的克?。‵uh等，J.Mol.Biol.340：1073-1093（2004））。挑取來(lái)自每一個(gè)文庫(kù)最后一輪的克隆進(jìn)行DNA序列分析，并揭示靶向除CDR-L2和CDR-H2以外的每一個(gè)CDR的序列變化，提示許多可能變異來(lái)改進(jìn)抗原結(jié)合。針對(duì)人或獼猴間皮素任一選擇的數(shù)個(gè)克隆具有CDR-H3中的變化，最豐富的是具有位置99處酪氨酸變成異亮氨酸的變化。作為IgG表達(dá)此變體以及數(shù)個(gè)其它變體，并通過(guò)Biacore和通過(guò)Scatchard分析表征對(duì)間皮素的結(jié)合（圖9A）。數(shù)個(gè)克隆超出了22A10的嫁接物的親和力。使用人源化22A10變體來(lái)自穩(wěn)定表達(dá)間皮素的細(xì)胞系免疫沉淀間皮素。人源化22A10變體（如圖9B所示；Gr，嫁接物；v1（1），v17（17）和v83（83））或h7D9.v3，h5B6抗gD或hIgG陰性對(duì)照（進(jìn)行比較）免疫沉淀穩(wěn)定表達(dá)帶gD標(biāo)簽的不同物種間皮素的BJAB細(xì)胞。清洗免疫沉淀物并用小鼠抗gD抗體進(jìn)行Western印跡以檢測(cè)gD-間皮素。h2210.v83是h22A10變體中在其免疫沉淀所有三個(gè)物種的間皮素的能力方面最佳的（獼猴，上部；人，中部；和大鼠，下部印跡）。最右邊的道顯示20%輸入裂解物（無(wú)免疫沉淀），進(jìn)行總表達(dá)水平的比較。分子量標(biāo)記物（kDa）示于左邊。人源化22A10.v83的改變的匯總：從六個(gè)小鼠22A10CDR（定義為位置24-34（L1），50-56（L2），89-97（L3），26-35（H1），49-65（H2）和95-102（H3））在人共有卡帕IVL和亞組IIIVH中的嫁接物開(kāi)始，使用CDR軟隨機(jī)化來(lái)鑒定CDRH3（Y99I）中改進(jìn)對(duì)人和獼猴間皮素的結(jié)合的變化。22A10.v83顯示出高親和力結(jié)合，而且還顯示出相對(duì)于其它人源化變體識(shí)別更多結(jié)合位點(diǎn)的能力。貫穿本申請(qǐng)，小鼠單克隆抗體7D9和22A10分別可互換地稱作7D9，m7D9或mu7D9；和22A10，m22A10或mu22A10。人源化單克隆抗體7D9.v3和22A10.v83分別可互換地稱作7D9.v3，h7D9.v3或hu7D9.v3；和22A10.v83，h22A10.v83或hu22A10.v83，除非另有說(shuō)明。D.物種交叉反應(yīng)性測(cè)試單克隆抗體以確定它們是否與來(lái)自人以外的物種的間皮素起交叉反應(yīng)。圖11顯示人（SEQIDNO：43），獼猴（SEQIDNO：46），大鼠（SEQIDNO：47）和小鼠（SEQIDNO：48）間皮素之間的序列同源性。標(biāo)有陰影的殘基在至少兩個(gè)物種之間相同。未標(biāo)陰影的殘基在四個(gè)物種中的至少兩個(gè)之間不同。圖12顯示經(jīng)帶gD表位標(biāo)簽的間皮素（人，獼猴，大鼠或小鼠間皮素）穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞的FACS分析的結(jié)果；用10μg/mlh7D9.v3，h22A10.v83或抗gDh5B6染色，并用Alexa647抗人抗體檢測(cè)。未轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞正常情況下不表達(dá)間皮素（“WT”）。h7D9.v3是對(duì)人間皮素特異性的，而h22A10.v83結(jié)合人，獼猴和大鼠間皮素，但不結(jié)合小鼠間皮素。抗gD染色驗(yàn)證了小鼠間皮素確實(shí)表達(dá)了。E.抗體親和力為了測(cè)定h7D9.v3和h22A10.v83的相對(duì)結(jié)合親和力，遵循標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程實(shí)施Scatchard分析（Holmes等，Science256：1205-1210（1992）），簡(jiǎn)言之，將脫離的細(xì)胞與經(jīng)[I125]標(biāo)記的h7D9.v3或h22A10.v83一起在漸增濃度的未標(biāo)記抗體存在下于室溫溫育2小時(shí)，清洗并通過(guò)閃爍計(jì)數(shù)來(lái)對(duì)細(xì)胞結(jié)合的放射性定量。用NewLigand程序（Genentech，Inc.，SouthSanFrancisco，CA）中的非線性回歸曲線擬合分析數(shù)據(jù)以評(píng)估Kd值（Munson等，Anal.Biochem.，107220-239（1980））。如圖13所示，h7D9.v3分別以0.2，0.25和0.97nM的親和力結(jié)合穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的293，BJAB和HT1080細(xì)胞系（它們都不表達(dá)內(nèi)源間皮素）上表達(dá)的帶gD標(biāo)簽的人間皮素。這些Kd值涵蓋在四種胰和兩種卵巢細(xì)胞系中對(duì)內(nèi)源間皮素看到的范圍（0.41-1nM）。h22A10.v83對(duì)相同穩(wěn)定細(xì)胞系上表達(dá)的人間皮素的親和力分別為2.7，1.8和6.2nM，符合它對(duì)內(nèi)源人間皮素的親和力（約9-10nM）。h22A10.v83分別以7.3nM和2.7nM的親和力結(jié)合穩(wěn)定轉(zhuǎn)染293細(xì)胞和BJAB細(xì)胞上表達(dá)的大鼠間皮素，這符合對(duì)正常胸膜細(xì)胞系4/4-RM4（Aronson等，InVitro17：61-70（1981））上的內(nèi)源大鼠間皮素觀察到的6.2nMKd。F.表位組為了確定7D9和22A10是否與圖3中所列其它抗間皮素抗體分享相同表位，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)交叉阻斷ELISA實(shí)施單克隆抗體的表位作圖。96孔Nunc免疫吸附板（NalgeNunc，USA）用包被緩沖液（50mM碳酸鈉，pH9.5）中的100μL1μg/mL人間皮素胞外域于4℃包被過(guò)夜。所有下述步驟于室溫實(shí)施。在200μL清洗緩沖液（含有0.05%Tween20的PBS，pH7.4）中清洗3次之后，將板用ELISA緩沖液（含有0.5%牛血清清蛋白（BSA）和0.05%Tween20的PBS，pH7.4）封閉60分鐘。然后在ELISA緩沖液中以20μg/mL添加小鼠單克隆抗體7D9或22A10，2小時(shí)（100μL每孔）。不清洗就添加生物素化形式的所有測(cè)試抗間皮素抗體（100μL2μg/mL）至終濃度1μg/mL，30分鐘。在200μL清洗緩沖液中清洗3次之后，通過(guò)以1:5000稀釋度添加鏈霉親合素-辣根過(guò)氧化物酶（HRP）（Zymed；Carlsbad，CA），30分鐘來(lái)檢測(cè)任何生物素化抗體結(jié)合。如上3次清洗之后，添加100μL顯色3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）底物（BioFXLaboratories；OwingsMills，MD），5分鐘。通過(guò)添加100μL終止試劑（BioFXLaboratories）來(lái)終止顯色反應(yīng)，并在UltramicroplateReader（BiotekInstruments；Winooski，VT）上于620nm讀取吸光度。通過(guò)將它們與間皮素一起在非生物素化抗體7D9和22A10缺失下溫育來(lái)平行測(cè)定每一種生物素化抗體最大程度的可能結(jié)合。結(jié)果顯示于圖14。9種生物素化抗間皮素抗體任一的信號(hào)（*）指示缺乏對(duì)第一種抗體的競(jìng)爭(zhēng)（右邊的組也顯示了每一種生物素化抗體在第一種抗體存在下的最大結(jié)合，進(jìn)行比較）。7D9（在圖14中稱作7D9.5.2）是當(dāng)存在7D9時(shí)不能結(jié)合的唯一抗體（即，它與自身競(jìng)爭(zhēng)，左起第2條柱），而22A10（在圖14中稱作22A10.1.2）正常結(jié)合（左邊的組中的黑色柱）。相反，當(dāng)22A10預(yù)結(jié)合時(shí)，22A10不能結(jié)合（中間的組的最后一條柱），而7D9和其它抗體能結(jié)合。如此，不僅7D9和22A10彼此不競(jìng)爭(zhēng)，而且各自結(jié)合遠(yuǎn)離其它7種抗體的表位。7D9被自身競(jìng)爭(zhēng)，但不被任何其它抗體競(jìng)爭(zhēng)（比較每一條柱與每一種抗體在ELISA包被抗體7D9或22A10缺失下結(jié)合板上的間皮素的最大信號(hào)）。類似地，22A10只競(jìng)爭(zhēng)自身，不競(jìng)爭(zhēng)其它抗體，包括7D9。如此，7D9和22A10相對(duì)于彼此及其它分離的單克隆抗體具有截然不同的表位。G.使用人:小鼠和獼猴:人間皮素嵌合物的表位作圖和突變分析實(shí)施胰蛋白酶消化肽作圖實(shí)驗(yàn)，其中使h7D9.v3結(jié)合至固定化的人間皮素，然后與胰蛋白酶一起溫育，洗脫并通過(guò)質(zhì)譜術(shù)來(lái)鑒定剩余抗體保護(hù)肽。那些實(shí)驗(yàn)指示SEQIDNO：43的氨基酸133-183是h7D9.v3結(jié)合位點(diǎn)。為了確認(rèn)這個(gè)區(qū)域，我們利用與人（圖15中所示構(gòu)建物#387）間皮素反應(yīng)但與小鼠（構(gòu)建物#385）或獼猴（構(gòu)建物#383）間皮素不反應(yīng)的7D9來(lái)生成嵌合物，我們預(yù)測(cè)它應(yīng)當(dāng)比截短突變體更好地折疊。我們構(gòu)建了人:小鼠間皮素嵌合物（#398和#399），使用氨基酸131處的沉默MfeI位點(diǎn)（編碼QL）和氨基酸213處的沉默BglII位點(diǎn)（編碼DL）將人序列導(dǎo)入小鼠構(gòu)建物。或者，構(gòu)建獼猴構(gòu)建物（#400），其中氨基酸131-178經(jīng)MfeI位點(diǎn)用人間皮素的替換。每一種構(gòu)建物均具有N端gD標(biāo)簽（未顯示）來(lái)驗(yàn)證表達(dá)。在293細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)圖15中所示帶gD標(biāo)簽的、GPI錨定的間皮素構(gòu)建物，并用0.02μg/ml小小鼠7D9，1μg/ml小鼠22A10，或1μg/ml抗gD標(biāo)簽（用于將不同表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化）染色。用Alexa488抗小鼠抗體檢測(cè)之后，清洗樣品并通過(guò)FACS來(lái)分析，減去野生型293陰性對(duì)照細(xì)胞上的任何背景染色之后，熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)針對(duì)抗gD信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)化。如圖16所示，7D9結(jié)合人:小鼠嵌合物#399（具有人氨基酸1-213），但不結(jié)合全長(zhǎng)小鼠間皮素#385或#398（只有人氨基酸1-131）任一，指示7D9結(jié)合aa131和213之間的表位。它結(jié)合獼猴:人嵌合物#400（具有人氨基酸131-178），但不結(jié)合全長(zhǎng)獼猴（#383）的能力將表位縮窄至氨基酸131和178之間。（注意：用7D9看到的比22A10相對(duì)較低的%結(jié)合歸于7D9使用低50倍的抗體濃度）。使用相同嵌合物來(lái)定位大鼠，獼猴和人（但沒(méi)有小鼠）反應(yīng)性22A10表位。在表達(dá)嵌合物#399的細(xì)胞上觀察到結(jié)合，但#398沒(méi)有。如此，22A10結(jié)合具有氨基酸131-213之間的至關(guān)重要?dú)埢谋砦唬▓D16）。因?yàn)?D9和22A10彼此不競(jìng)爭(zhēng)（圖13），所以推測(cè)它們結(jié)合氨基酸131-213內(nèi)的不同表位。為了鑒定那些不同表位，在#399嵌合物背景中將人間皮素的2-4段氨基酸突變成相應(yīng)小鼠氨基酸。四種物種間氨基酸132-212的比對(duì)顯示于圖17，帶編號(hào)的框指示15種突變體的位置。對(duì)于圖17底部的表格中所列15種突變體中的每一種，顯示了突變成小鼠序列（下部）的人序列（上部）。（注意：沒(méi)有成功生成突變體#11。）在293細(xì)胞中表達(dá)來(lái)自圖17除突變體#11外的所有突變體，并如圖16中所示進(jìn)行FACS分析，只是使用5μg/ml人源化形式的每一種抗體（即，h7D9.v3，h22A10.v83和h5B6抗gD標(biāo)簽（陽(yáng)性對(duì)照）），其中使用Alexa488抗人抗體進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示于圖18A，其中作為抗gD信號(hào)的百分比顯示熒光數(shù)據(jù)以標(biāo)準(zhǔn)化表達(dá)水平。（注意：突變體#13在293細(xì)胞中不表達(dá)，因此自數(shù)據(jù)集省略。）h7D9.v3結(jié)合除#6和#9外的所有突變體，而h22A10.v83結(jié)合除突變體#15外的所有突變體（箭頭所指）。通過(guò)比對(duì)不同間皮素種類，將h7D9.v3表位中的關(guān)鍵殘基精準(zhǔn)至在人和非交叉反應(yīng)性獼猴序列之間不同的兩個(gè)單個(gè)氨基酸殘基：突變體#6中的E153和突變體#9中的D174。通過(guò)突變獼猴間皮素中與相應(yīng)人殘基等同的殘基（即R153變成E和G174變成D），那些殘基對(duì)抗體結(jié)合的重要性得到了確認(rèn)。其它情況下不結(jié)合獼猴間皮素的h7D9.v3能夠結(jié)合獼猴間皮素突變體（圖18B）。將人間皮素序列中的殘基E152突變成Q的進(jìn)一步研究導(dǎo)致對(duì)h7D9.v3結(jié)合的抑制，提示殘基E152也在抗體結(jié)合中發(fā)揮作用?；谧罱A(yù)測(cè)的間皮素犰狳樣重復(fù)結(jié)構(gòu)（Sathyanarayana等，BMCStructuralBiology9：1（2009）），7D9抗體有可能橋接間皮素的內(nèi)部螺旋4和外部螺旋5。類似地，由于h22A10.v83與大鼠（但不與小鼠）交叉反應(yīng)，因此突變體#15中的殘基E211（在Sathyanarayana等，見(jiàn)上文的外部螺旋6中）有可能是其表位的至關(guān)重要決定子。圖19描繪受h7D9.v3和h22A10.v83結(jié)合的殘基。H.h7D9.v3的結(jié)合不受糖基化抑制為了確定h7D9.v3是否結(jié)合糖基化間皮素，在CHO細(xì)胞中表達(dá)C端帶his標(biāo)簽的人間皮素，純化并在MonoS柱上依照電荷進(jìn)一步分開(kāi)成具有高度（級(jí)分A11），中等（A12），低等（B1）和低-至-無(wú)（B5）間皮素糖基化的級(jí)分，如通過(guò)SDS-PAGE凝膠上的考馬斯藍(lán)染色顯示的。（圖20，左邊頂部）。使每一種級(jí)分流過(guò)預(yù)結(jié)合有h7D9.v3的芯片，并測(cè)量結(jié)合和解離速率以揭示每一份級(jí)分相同的親和力（1.5nM）（圖20，左邊底部），指示h7D9.v3的結(jié)合不受糖基化抑制。這些數(shù)據(jù)得到了確認(rèn)，即顯示了h7D9.v3能自穩(wěn)定表達(dá)gD-人間皮素（其gD表位標(biāo)簽缺少糖基化位點(diǎn)）的HT1080細(xì)胞免疫沉淀所有與人源化抗gDh5B6抗體相同的條帶，指示h7D9.v3能免疫沉淀人間皮素，不管糖基化狀態(tài)。相反，人源化22A10優(yōu)先免疫沉淀較低分子量（糖基化最少的）種類，指示22A10結(jié)合可能受糖基化影響。（圖20，右邊）。為了與h7D9.v3相比評(píng)估測(cè)試抗體結(jié)合糖基化間皮素的能力，實(shí)施FACS測(cè)定法，其中將測(cè)試抗體對(duì)OVCAR3細(xì)胞的結(jié)合與h7D9.v3對(duì)OVCAR3細(xì)胞的結(jié)合比較。使用合適的二抗來(lái)檢測(cè)h7D9.v3和測(cè)試抗體對(duì)OVCAR3細(xì)胞的結(jié)合（例如，使用Alexa647抗人抗體來(lái)檢測(cè)h7D9.v3的結(jié)合）。I.單克隆抗體19C3阻斷MUC16對(duì)間皮素的相互作用測(cè)試單克隆抗體以確定它們是否能夠阻斷MUC16對(duì)間皮素的結(jié)合。經(jīng)過(guò)純化的生物素化MUC16片段（Muc16-Bt，具有三個(gè)粘蛋白重復(fù)）對(duì)A431細(xì)胞（其在正常情況下不表達(dá)間皮素）上穩(wěn)定表達(dá)的間皮素的結(jié)合顯示于圖21（“無(wú)Ab”），左邊小圖。將細(xì)胞與5倍摩爾比的9C3（但7D9不）一起預(yù)溫育抑制MUC16-Bt對(duì)間皮素的結(jié)合，如通過(guò)使用鏈霉親合素-PE進(jìn)行的FACS檢測(cè)的，如圖21左邊小圖所示。相反，在5倍摩爾過(guò)量的所示抗間皮素抗體缺失或存在下評(píng)估重組C端帶his8標(biāo)簽的間皮素（自293細(xì)胞純化）對(duì)穩(wěn)定表達(dá)MUC16的PC3細(xì)胞的結(jié)合（圖21右邊小圖），通過(guò)使用Alexa647-抗his6抗體進(jìn)行的FACS來(lái)檢測(cè)。將間皮素與19C3（但不與7D9或22A10）一起預(yù)溫育抑制間皮素對(duì)表達(dá)MUC16的細(xì)胞的結(jié)合（圖21，右邊小圖）。事實(shí)上，7D9和22A10在此測(cè)定法中表現(xiàn)出增強(qiáng)間皮素對(duì)MUC16的結(jié)合。J.人間皮素在各種癌癥類型中的流行性使用免疫組織化學(xué)分析人間皮素在各種癌癥中的表達(dá)。將胰管腺癌（圖22），卵巢漿液性腺癌（圖23）和非小細(xì)胞肺腺癌（圖24）的福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）腫瘤微陣列（一個(gè)1mm核/腫瘤）切片到顯微鏡載玻片上，脫石蠟并經(jīng)由一系列稀釋醇再水合。在Dako自動(dòng)染色儀上使用靶物修復(fù)溶液（Dako，Glostrup，Denmark）預(yù)處理載玻片進(jìn)行抗原修復(fù)，淬滅，封閉并用10μg/ml小鼠抗人間皮素單克隆抗體19C3染色60分鐘。清洗后，用生物素化抗小鼠抗體檢測(cè)19C3，接著是ABC復(fù)合物（VECTASTAINABCEliteKit，VectorLaboratories，Burlingame，CA）并使用DAB（PierceLaboratories）作為色原體來(lái)顯現(xiàn)。然后，將載玻片用Meyers蘇木精復(fù)染色并用一系列醇和二甲苯脫水，接著使用有機(jī)封固介質(zhì)（PermaMount，F(xiàn)isherScientific，Pittsburgh，PA）蓋上蓋玻片。由經(jīng)過(guò)訓(xùn)練的病理學(xué)家依照下述方案對(duì)間皮素染色（褐色）進(jìn)行評(píng)分，其中要考慮到強(qiáng)度（褐色染色的暗度）以及染色的寬度。每一種腫瘤類型的每一種間皮素得分的一個(gè)代表性例子顯示于圖22-24。0（陰性）：>90%的腫瘤細(xì)胞染色很弱或無(wú)染色1+（輕度）：主要染色樣式是弱的2+（中等）：大多數(shù)（>50%）贅生性細(xì)胞中的主要染色樣式是中等強(qiáng)的3+（強(qiáng)）：大多數(shù)（>50%）贅生性細(xì)胞中的主要染色樣式是強(qiáng)的圖22顯示70%的胰管腺癌為間皮素陽(yáng)性，顯示1+，2+，或3+水平的染色，33%顯示2+或3+染色。圖23顯示98%的卵巢漿液性腺癌為間皮素陽(yáng)性，其中74%顯示2+或3+水平的染色。另外，測(cè)試的八份來(lái)自卵巢漿液性腺癌的轉(zhuǎn)移均為間皮素陽(yáng)性，提示原代卵巢腫瘤在轉(zhuǎn)移后沒(méi)有喪失間皮素表達(dá)。圖24顯示44%的非小細(xì)胞肺癌（NSCLC，腺癌亞型）為間皮素陽(yáng)性，其中26%顯示2+或3+水平的染色。另外，測(cè)試的八份來(lái)自間皮素陽(yáng)性原代NSCLC患者腫瘤的匹配轉(zhuǎn)移中的三份（38%）保持間皮素陽(yáng)性染色。間皮素在間皮瘤中及在子宮內(nèi)膜癌中也表達(dá)，如通過(guò)使用19C3抗體的IHC測(cè)定的。還檢查了間皮素在獼猴中的表達(dá)。對(duì)來(lái)自人（福爾馬林固定、石蠟包埋的切片）和獼猴（冷凍切片）的肺胸膜和心包間皮切片進(jìn)行切片并分別用19C3單克隆抗體或22A10單克隆抗體進(jìn)行染色。人間皮被19C3特異性染色（圖25，左邊），而獼猴間皮被22A10特異性染色（圖25，右邊）。這些結(jié)果證明了22A10能識(shí)別內(nèi)源獼猴間皮素，其具有與人中的分布類似的分布。K.抗間皮素抗體藥物偶聯(lián)物的生成抗間皮素抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）通過(guò)將h7D9.v3和h22A10.v83偶聯(lián)至藥物-接頭模塊MC-vc-PAB-MMAE來(lái)生成，這在上文II.D節(jié)中有描述。方便起見(jiàn)，藥物-接頭模塊MC-vc-PAB-MMAE在這些實(shí)施例中及在附圖中也稱作“vcMMAE”或“VCE”。（例如，h7D9.v3-MC-vc-PAB-MMAE在這些實(shí)施例中及在附圖中稱作h7D9.v3-vcMMAE或h7D9.v3-VCE。）在偶聯(lián)之前，使用依照WO2004/010957A2中記載的方法學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)方法用TCEP部分還原抗體。使用依照Doronina等（2003）Nat.Biotechnol.21：778-784和US2005/0238649A1中記載的方法學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)方法將部分還原的抗體偶聯(lián)至藥物-接頭模塊。簡(jiǎn)言之，將部分還原的抗體與藥物-接頭模塊組合以容許該模塊偶聯(lián)至半胱氨酸殘基。淬滅偶聯(lián)反應(yīng)，并純化ADC。測(cè)定每一種ADC的藥物載荷（每個(gè)抗體的平均藥物模塊數(shù)），在所有情況中在3.33和4.0之間。L.h7D9.v3-vcMMAE在體內(nèi)HPAC模型中的功效使用胰腺癌異種移植物模型調(diào)查h7D9.v3-vcMMAE的功效。在HBSS中將5x106個(gè)HPAC細(xì)胞（間皮素陽(yáng)性（2+），根據(jù)使用19C3進(jìn)行的IHC）皮下注射入SCID米色小鼠并對(duì)腫瘤給藥1.1，2.7，5.5，11和16.4mg/kgh7D9.v3-vcMMAE（3.5個(gè)MMAE/每個(gè)抗體），或5，10和15mg/kgh5B6抗gD-vcMMAE（3.3個(gè)MMAE/每個(gè)抗體），或15mg/kg裸h7D9.v3（無(wú)MMAE）。如圖26所示，在5.5mg/kgh7D9.v3-vcMMAE實(shí)現(xiàn)了實(shí)質(zhì)性腫瘤生長(zhǎng)抑制，而且在11-16mg/kgh7D9.v3-vcMMAE實(shí)現(xiàn)了消退，但是用裸抗體或用gD-vcMMAE對(duì)照在15mg/kg沒(méi)有觀察到顯著效果。顯示了基于總體生長(zhǎng)速率的模擬曲線擬合。右下小圖圖26顯示了IHC和h7D9.v3在HPAC細(xì)胞中的內(nèi)在化和FACS分析。M.h7D9.v3-vcMMAE在原代胰腺癌模型中的功效在原代胰腺癌模型（Oncotest，GMBH，Germany）中調(diào)查h7D9.v3-vcMMAE的功效。將原代人間皮素陽(yáng)性胰腫瘤塊（根據(jù)IHC以1-2+表達(dá)間皮素）皮下植入雌性NMRI裸小鼠，給其服用5，10和20mg/kgh7D9.v3-vcMMAE（3.5個(gè)MMAE/每個(gè)抗體）。均值腫瘤體積±標(biāo)準(zhǔn)偏差在圖27中繪圖。在所有h7D9.v3-vcMMAE劑量發(fā)現(xiàn)顯著腫瘤生長(zhǎng)抑制。原代胰腫瘤的IHC顯示在右邊。N.h7D9.v3-vcMMAE在卵巢癌模型中的功效使用卵巢癌異種移植物模型調(diào)查h7D9.v3-vcMMAE的功效。將10x106個(gè)OvCar3x2.1細(xì)胞（間皮素陽(yáng)性（2-3+），通過(guò)使用19C3進(jìn)行的IHC）注射入CB17SCID米色小鼠的乳房脂肪墊，隨后給其服用1，2.5，5，10和15mg/kgh7D9.v3-vcMMAE（3.5個(gè)MMAE/每個(gè)抗體）或h5B6抗gD-vcMMAE（3.3個(gè)MMAE/每個(gè)抗體）。如圖28所示，在2.5mg/kgh7D9.v3-vcMMAE看到中等活性并在5mg/kg和更高劑量看到消退，而抗gD-vcMMAE在5mg/kg以下沒(méi)有展現(xiàn)活性（在10mg/kg只有中等活性而在15mg/kg有腫瘤停滯）。顯示了基于總體生長(zhǎng)速率的模擬曲線擬合。圖28右邊小圖顯示了IHC和h7D9.v3在OvCar3x2.1細(xì)胞中的內(nèi)在化和FACS分析。O.h7D9.v30-vcMMAE在肺癌模型中的功效使用肺癌（鱗狀細(xì)胞癌）異種移植物模型調(diào)查h7D9.v3-vcMMAE的功效。在Matrigel:HBSS的50:50混合物中將5x106個(gè)H226x2細(xì)胞（間皮素陽(yáng)性（3+），根據(jù)IHC）注射入CB17SCID小鼠的體側(cè)。均值腫瘤體積±標(biāo)準(zhǔn)偏差在圖29中繪圖。h7D9v3-vcMMAE（3.5個(gè)MMAE/每個(gè)抗體）在5mg/kg顯示出中等活性且在10mg/kg顯示出腫瘤停滯，而對(duì)照抗gD-vcMMAE偶聯(lián)物（3.97個(gè)MMAE/每個(gè)抗體）在任一劑量沒(méi)有顯著活性。圖29右邊小圖顯示了IHC和h7D9.v3在H226x2細(xì)胞中的內(nèi)在化和FACS分析。P.h7D9.v3-vcMMAE和h22A10.v83-vcMMAE具有相似的功效調(diào)查h7D9.v3-vcMMAE與h22A10.v83-vcMMAE相比的功效。20x106個(gè)穩(wěn)定表達(dá)gD-人間皮素（左）或gD-獼猴間皮素（右）任一的BJAB細(xì)胞在HBSS緩沖液中皮下接種入CB17SCID小鼠。給小鼠服用0.5或2mg/kgh7D9.v3-vcMMAE（在接種BJAB-gD-人間皮素的小鼠中）或h22A10.v83-vcMMAE（在接種BJAB-gD-獼猴間皮素的小鼠中），或作為陽(yáng)性對(duì)照及作為兩種細(xì)胞系之間的任何表達(dá)差異的標(biāo)準(zhǔn)化者使用的2mg/kg抗gD-vcMMAE。均值腫瘤體積±標(biāo)準(zhǔn)偏差在圖30中繪圖。h7D9.v3-vcMMAE和h22A10.v83-vcMMAE在2mg/kg都展現(xiàn)出比gD-vcMMAE對(duì)照更好的分別針對(duì)BJAB-gD-人間皮素和BJAB-gD-獼猴間皮素腫瘤的活性。這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中的陰性對(duì)照是綴合至vcMMAE的一種無(wú)關(guān)抗體，其沒(méi)有展示顯著活性。為了進(jìn)一步評(píng)估h22A10.v83-vcMMAE的活性，對(duì)圖29的H226x2腫瘤和如圖28所述培養(yǎng)的OvCar3x2.1腫瘤給藥所示濃度的h7D9.v3-vcMMAE和h22A10.v83-vcMMAE（3.53個(gè)MMAE/每個(gè)抗體），或作為陰性對(duì)照的抗gD-vcMMAE。均值腫瘤體積±標(biāo)準(zhǔn)偏差在圖31中繪圖。盡管根據(jù)FACS裸h22A10.v83對(duì)這兩種細(xì)胞系的結(jié)合與h7D9.v3相比顯著地弱，h22A10.v83-vcMMAE在H226x2模型中的效果與h7D9.v3-vcMMAE相似（左上小圖），而且在OvCar3x2.1模型中的活性只是略小（右上小圖），如給藥6mg/kg后更快的腫瘤消退指示的。Q.MUC16和間皮素在“雙重陽(yáng)性”細(xì)胞系上形成復(fù)合物調(diào)查細(xì)胞系上MUC16和間皮素的相互作用。在1%NP40緩沖液中裂解表達(dá)間皮素和MUC16二者的OvCar3細(xì)胞。如圖32左邊小圖所示，用m7D9或同種型對(duì)照IgG免疫沉淀裂解物并分別用抗MUC16抗體（上部印跡）或h7D9（下部印跡）進(jìn)行Western印跡以檢測(cè)間皮素:MUC16復(fù)合物或總間皮素。（20%未免疫沉淀輸入顯示于左邊的道。）m7D9能夠自O(shè)vCar3細(xì)胞裂解物與間皮素一起共免疫沉淀MUC16。該結(jié)果證明了MUC16與間皮素在表達(dá)間皮素和MUC16二者的細(xì)胞系（即“雙重陽(yáng)性”細(xì)胞系）中形成復(fù)合物。如圖32右邊小圖所示，使用針對(duì)間皮素或MUC16任一的抗體自所示細(xì)胞系在其中生長(zhǎng)的條件化培養(yǎng)基免疫沉淀（IP）那些蛋白質(zhì)。所述細(xì)胞系只表達(dá)間皮素（HPAC），只表達(dá)MUC16（A431），都不表達(dá)（H520），或都表達(dá)（OvCar3，CAPAN-2，EKVX和OvCar429細(xì)胞）。使用抗間皮素嵌合抗體ch7D9（頂部和底部小圖）或抗MUC16抗體（中部小圖）任一進(jìn)行免疫沉淀。用小鼠抗間皮素抗體2E5（頂部）或小鼠抗MUC16B結(jié)構(gòu)域（M11樣）抗體1.B.823（USBiological，Swampscott，MA；中部和底部小圖）對(duì)經(jīng)過(guò)清洗的免疫沉淀物進(jìn)行Western印跡（WB）。因而，上部小圖顯示自表達(dá)間皮素的細(xì)胞系免疫沉淀的間皮素，中部小圖顯示自表達(dá)MUC16的細(xì)胞系免疫沉淀的MUC16，而底部小圖顯示免疫共沉淀的間皮素:MUC16復(fù)合物，這是表達(dá)這兩種蛋白質(zhì)的細(xì)胞系（雙重陽(yáng)性細(xì)胞系）特異性的。這些結(jié)果指示間皮素能在結(jié)合至MUC16的同時(shí)脫落入培養(yǎng)基中。因而，本發(fā)明的抗體和免疫偶聯(lián)物可用于治療間皮素陽(yáng)性癌癥，包括雙重陽(yáng)性癌癥。R.19C3（但7D9不）自間皮素置換預(yù)結(jié)合的MUC16在MUC16存在下調(diào)查19C3對(duì)間皮素的結(jié)合。將MUC16-生物素（1ug/ml，或9.2nM）預(yù)結(jié)合至表達(dá)間皮素的HT1080細(xì)胞。添加19C3（5ug/ml）以確定它是否能置換預(yù)結(jié)合的MUC16。用SAPE檢測(cè)試劑檢測(cè)MUC16-生物素，并用Alexa488抗小鼠抗體檢測(cè)結(jié)合的抗體。圖33顯示了19C3確實(shí)能夠置換MUC16并結(jié)合至間皮素。使用結(jié)合間皮素中MUC16結(jié)合位點(diǎn)以外的一個(gè)區(qū)域的抗體7D9（33nM）作為陰性對(duì)照，預(yù)期它不能夠置換預(yù)結(jié)合的MUC16。別的實(shí)驗(yàn)展現(xiàn)了19C3在0.1ug/ml也置換MUC16，而抗體2E5只在≥5ug/m能置換MUC16l（數(shù)據(jù)未顯示）。雖然出于清楚理解的目的，前述發(fā)明已經(jīng)作為例示和例子相當(dāng)詳細(xì)地進(jìn)行了描述，但是說(shuō)明書和實(shí)施例不應(yīng)解釋為限制本發(fā)明的范圍。通過(guò)提及而明確將本文中引用的所有專利和科學(xué)文獻(xiàn)的公開(kāi)內(nèi)容完整收錄。