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重組類禽型H1N1流感病毒滅活疫苗株(JS40/PR8)及其制備方法和應(yīng)用與流程

文檔序號(hào):12201063閱讀:來(lái)源:國(guó)知局
重組類禽型H1N1流感病毒滅活疫苗株(JS40/PR8)及其制備方法和應(yīng)用與流程

技術(shù)特征:
1.一種重組的類禽型H1N1流感病毒滅活疫苗株,其特征在于以H1N1亞型豬流感病毒A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)為表面抗原血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)基因供體,以流感病毒A/PR/8/34(H1N1)為聚合酶PB2亞基,聚合酶PB1亞基,聚合酶PA亞基,核蛋白(NP),基質(zhì)蛋白(M)和非結(jié)構(gòu)蛋白(NS)6個(gè)內(nèi)部基因的供體,通過自然重組得到,所得到的重組的類禽型H1N1流感病毒滅活疫苗株命名為A型流感病毒A/swine/Jiangsu/40/PR8(H1N1),保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,地址在武漢大學(xué),其保藏號(hào)為CCTCCNO:V201419。2.權(quán)利要求1所述的重組的類禽型H1N1流感病毒滅活疫苗株在制備預(yù)防類禽型H1N1流感病毒所導(dǎo)致疾病的藥物中的應(yīng)用。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其中所述藥物用于預(yù)防動(dòng)物或人的類禽型H1N1流感病毒感染。4.一種構(gòu)建權(quán)利要求1所述的重組的類禽型H1N1流感病毒滅活疫苗株的方法,該方法包括:(1)用類禽型H1N1流感病毒株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)和雞胚適應(yīng)疫苗株A/PR/8/34(H1N1)共同接種雞胚尿囊腔或細(xì)胞進(jìn)行自然重組;(2)用抗所述雞胚適應(yīng)疫苗株A/PR/8/34(H1N1)的抗體篩選,除去表面基因來(lái)源于所述雞胚適應(yīng)疫苗株A/PR/8/34(H1N1)的毒株;(3)將篩選得到的毒株在雞胚上進(jìn)行3代有限克隆純化,利用Trizol強(qiáng)裂變劑法,提取病毒RNA,進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,然后用設(shè)計(jì)的流感病毒A/PR/8/34(H1N1)和類禽型H1N1流感病毒國(guó)內(nèi)分離株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)病毒的各8對(duì)特異性鑒別引物進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,然后,對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行核酸凝膠電泳,鑒定得到的重組病毒為HA和NA來(lái)自于類禽型H1N1流感病毒國(guó)內(nèi)分離株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)、6個(gè)內(nèi)部基因PB2、PB1、PA、NP、M及NS來(lái)自流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的重組病毒,即得。5.如權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述的引物包括:只能擴(kuò)增出類禽型H1N1流感分離株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)基因的8個(gè)特異性片段而不能擴(kuò)增出流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的任何片段的類禽型H1N1流感分離株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)的8對(duì)特異性鑒別引物,引物序列如下:以及只能擴(kuò)增出流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的8個(gè)特異性片段而不能擴(kuò)增出類禽型H1N1流感分離株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)的任何片段的流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的8對(duì)特異性鑒別引物,引物序列如下所示:
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