本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體地說涉及一種氘代4-[(3-乙炔苯基)氨基]-6,7-苯-12冠-4-喹唑啉衍生物以及包含該衍生物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
?？颂婺幔址Q為4-[(3-乙炔苯基)氨基]-6,7-苯-12冠-4-喹唑啉，可以調(diào)節(jié)EGF型受體酪氨酸激酶(EGFR-TK)。目前，埃克替尼在中國進(jìn)行第3階段的臨床試驗，用于治療非小細(xì)胞肺癌。在臨床試驗中，埃克替尼可單獨用藥或與其他的藥物聯(lián)合用藥治療各種癌癥，包括卵巢癌、膀胱癌、直腸癌、頭頸部腫瘤、腦腫瘤、內(nèi)分泌癌、前列腺癌、肉瘤、髓細(xì)胞性白血病、固體腫瘤、小細(xì)胞肺癌、星形細(xì)胞瘤、乳腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、腎癌、胃癌、不明身體位置或系統(tǒng)的癌癥和肝癌。
但是，在臨床研究中，由于半衰期短導(dǎo)致埃克替尼被迅速淘汰。目前臨床研究中?？颂婺嵝枰^每日一次劑量。因此合成一種半衰期長，清除率低，藥物作用時間長，用藥次數(shù)少的?？颂婺崾欠浅Ｆ惹械?。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種氘代4-[(3-乙炔苯基)氨基]-6,7-苯-12冠-4-喹唑啉衍生物。該化合物及衍生物制得的藥物可以通過抑制細(xì)胞表面酪氨酸激酶受體治療過度增生和其他疾病。
實現(xiàn)本發(fā)明目的的具體方案是，提供一種式(I)所示的氘代4-[(3-乙炔苯基)氨基]-6,7-苯-12冠-4-喹唑啉衍生物、或其晶型、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物：
其中，R1～R13是氫、氘或鹵素，且R1～R13中至少有一個取代基是氘。
上述衍生物中，所述R1～R13中至少有一個取代基是氘、一次或多次的氘代甲基、或一次或多次的氘代乙基。
上述衍生物中，所述結(jié)構(gòu)式中的碳原子還包括其同位素13C或14C；氮原子還包括其同位素15N；氧原子還包括其同位素17O或18O。
上述衍生物中，是選自：
本發(fā)明還提供了上述化合物I-1的制備方法，包括以下步驟：
本發(fā)明還提供了上述化合物I-2、II-1以及III-1的制備方法，包括以下步驟：
本發(fā)明還提供了上述化合物I-3、II-2以及III-2的制備方法，包括以下步驟：
本發(fā)明還提供了上述化合物I-4的制備方法，包括以下步驟：取化合物4-[(3-乙炔基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-12-冠采用正丁基鋰去氫，然后經(jīng)重水置換，生成化合物I-4。
本發(fā)明還提供了上述化合物I-5的制備方法，包括以下步驟取化合物I-1采用正丁基鋰去氫，然后經(jīng)重水置換，生成化合物I-5。
本發(fā)明還提供了上述化合物I-6的制備方法，包括以下步驟：取化合物I-2采用正丁基鋰去氫，然后經(jīng)重水置換，生成化合物I-6。
本發(fā)明還提供了上述化合物I-7的制備方法，包括以下步驟：取化合物I-3采用正丁基鋰去氫，然后經(jīng)重水置換，生成化合物I-7。
本發(fā)明更提供了一種藥物組合物，其含有藥學(xué)上可接受的載體以及與上述衍生物、或其晶型、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物。
上述的藥物組合物中，還含有其它治療藥物，所述其它治療藥物是癌癥、心血管疾病、炎癥、免疫性疾病、腎病、血管發(fā)生病或前列腺疾病的治療藥物。
本發(fā)明也提供了一種制備藥物組合物的方法，是將藥學(xué)上可接受的載體與上述衍生物、或其晶型、藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑合物進(jìn)行混合，從而形成藥物組合物。
本發(fā)明還提供了氘代4-[(3-乙炔苯基)氨基]-6,7-苯-12冠-4-喹唑啉衍生物在制備治療腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了氘代4-[(3-乙炔苯基)氨基]-6,7-苯-12冠-4-喹唑啉衍生物在制備治療EGFR激酶介導(dǎo)混亂疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所提供的氘代4-[(3-乙炔苯基)氨基]-6,7-苯-12冠-4-喹唑啉衍生物及相關(guān)藥物組合物的有益效果在于，上述氘代?？颂婺峋哂蟹乐够驕p少某些位點的新 陳代謝和增加?？颂婺嵩诨颊咧械陌胨テ诘淖饔茫拗七@些代謝物的產(chǎn)生可以減少服用這類藥物所帶來的危險，甚至可能允許增加服用劑量或增加療效。同時，上述化合物及含有該化合物的藥物組合物具有較長的半衰期，可能會產(chǎn)生更大的功效和成本的節(jié)約，能夠增加患者的療效，減少用藥次數(shù)和改進(jìn)的安全性的潛力。
【具體實施方式】
本發(fā)明所提供的氘代4-[(3-乙炔苯基)氨基]-6,7-苯-12冠-4-喹唑啉衍生物(如下述結(jié)構(gòu)式I、II或III所示)、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑和前藥。還涉及使用分子式結(jié)構(gòu)式I、II或III的化合物作為單一治療或與其他化療藥物聯(lián)合治療，以減輕或治療EGFR激酶介導(dǎo)的混亂或疾病。
本發(fā)明提供的化合物不同于自然生成的化合物形式，由于本發(fā)明提供的“化合物”是指對于每個氘原子，物質(zhì)的組成成分的最低同位素富集系數(shù)至少3000倍(即45％的氘)，并且在分子式I中存在氘化位點。
在本發(fā)明提供的化合物中，任何沒有特別指定的同位素的原子都存在穩(wěn)定的 同位數(shù)，除非另有說明。除另有注明外，當(dāng)某位置被明確的指定為“H”或“氫”，其自然豐度同位素組成上該位置上含有氫。同樣，當(dāng)某位置明確的被指定為“D”或“氘”時，在至少3000倍氘的自然豐度的情況下，其自然豐度是0.015％(即至少有45％的氘納入)，該位置上含有氘。
此處所指的“同位素富集系數(shù)”是指某一特定同位素的同位素豐度與自然豐度之間的比率。
在某些實施例中，對于每一個氘，本發(fā)明提供的化合物具有一個同位素富集因子并存在某一個位點作為潛在氘化位點，包括化合物的同位數(shù)富集系數(shù)至少有3500(52.5％的氘納入)、4000(60％的氘納入)、4500(67.5％氘納入)、5000(75％的氘)、5500(82.5％的氘納入)、6000(90％的氘納入)、6333.3(95％的氘納入)、6466.7(97％的氘納入)、6600(99％的氘納入)、6633.3(99.5％的氘納入)。
此處所描述的結(jié)構(gòu)式可能會或不會表示是否在某一位置原子同位素增多。在一般的情況下，當(dāng)一個結(jié)構(gòu)式對于一個特定的位置是否同位素增多是無記錄的?？梢岳斫獬桑涸谔囟ǖ奈恢蒙?，穩(wěn)定的同位素存在自然豐度，或者在特定的位置上，一個或多個自然生成的穩(wěn)定同位素增多。更具體的是，穩(wěn)定同位素在沒有明確指定為同位素增多的化合物所有位置存在天然豐度。
所謂“同素異形體”是指一個物種與某一特定產(chǎn)品化合物僅在同位素組成上存在不同。同素異形體可以在一個或多個位點同位素富集程度或位置(S)有所不同。
所謂本發(fā)明提供的“化合物”，是指具有相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)分子的集合，除了組成分子的原子之間存在同位素變化。因此，這將是那些熟練的藝術(shù)，一個化合物可以由包含指示氘原子在內(nèi)的特定化學(xué)結(jié)構(gòu)表示，也包括在這個結(jié)構(gòu)中一個或多個指定的氘位置上含有氫原子的少量同素異形體。本發(fā)明提供的化合物的同素異形體相對量取決于許多因素，包括用于制備該化合物氘代試劑的同位數(shù)純度和用來制備化合物的各種合成步驟中納入氘的效率。然而，如前所述，總體上同素異形體的相對量將低于化合物的55％。在其它實施例中，總體上，化合物同素異形體的相對量將少于50％、47.5％、40％、32.5％、25％、17.5％、10％、5％、3％、1％、0.5％。
上述化合物的鹽，也是本發(fā)明提供的化合物。
本發(fā)明提供的化合物形成的鹽是一種酸性和堿性之間的化合物，如氨基酸的官能團(tuán)或化合物的堿性和酸性基團(tuán)，如羧基官能團(tuán)組。根據(jù)另一個實施例，該化合物是一種藥學(xué)上可接受的酸性加成鹽。
在此使用的“藥學(xué)上可接受”，是指在健全的醫(yī)療判斷的范圍內(nèi)，它的成分適合用途接觸人類和其他哺乳動物的組織，沒有異常毒性、刺激性、過敏性反應(yīng)等類似的反應(yīng)，并有一個合理的利益/風(fēng)險比。所謂“藥學(xué)上可接受的鹽”是指，在對受試者給藥時，無論是直接或間接地都是能夠提供的本發(fā)明提供的化合物都是無任 何毒性的鹽。所謂“藥學(xué)上可接受的平衡離子”是指受試者給藥時，從鹽中釋放出來的無毒性的離子部分。
所謂的“酸”一般指可形成藥學(xué)上可接受的鹽包括無機(jī)酸，例如，二硫化氫、鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸和磷酸等；有機(jī)酸，例如甲苯磺酸、水楊酸、酒石酸、抗壞血酸、馬來酸、苯磺酸、延胡索酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、甲酸、谷氨酸、甲磺酸、甲磺酸、苯磺酸、乳酸、草酸、對-溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸酸、檸檬酸、苯甲酸、醋酸，以及相關(guān)的無機(jī)和有機(jī)酸。因此，藥學(xué)上可接受的鹽包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、丁酸鹽、癸酸鹽、庚酸鹽、丙炔草酸鹽、丙二酸鹽，琥珀酸鹽，辛二酸鹽，癸二酸鹽，延胡索酸鹽，馬來酸鹽，丁炔-1,4-二酸鹽，己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯代苯甲酸鹽、苯甲酸甲酯鹽、二硝基苯鹽、羥基安息香酸鹽、茴香酸乙酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對苯二酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、羥丁酸鹽、乙醇酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、扁桃體鹽和其他鹽類。具體來說，藥學(xué)上可接受的酸性加成鹽，包括那些礦物酸，如鹽酸和氫溴酸，特別是那些形成的有機(jī)酸，如馬來酸。
由于氘的取代或以其他原因，本發(fā)明提供的化合物(如分子式I的化合物)含有一個不對稱碳原子。同樣的，本發(fā)明提供的化合物可以存在單一的對映體異構(gòu)體或?qū)τ丑w的混合物。因此，本發(fā)明提供的化合物將包括兩個外消旋的混合物和可能從其他立體異構(gòu)體釋放的單一對映異構(gòu)體。此處所使用的“從其他立體異構(gòu)體釋放”是指低于25％的其他立體異構(gòu)體或小于10％的其他立體異構(gòu)體，更優(yōu)選的是少于5％的其他立體異構(gòu)體，最好的是小于2％的其他立體異構(gòu)體，或低于其他立體異構(gòu)體的“X”％(其中X是一個數(shù)字0和100之間)。獲得或合成某一特定化合物單一對映異構(gòu)體的方法是眾所周知，可采用切實可行的終產(chǎn)物，起始原料或中間體。
本發(fā)明所指的“穩(wěn)定的化合物，”是指擁有足以讓他們加工加工的穩(wěn)定性和在足夠長的時間內(nèi)保持該化合物的完整性。例如，制備醫(yī)療產(chǎn)品，中間體以供治療化合物的生產(chǎn)，分離或儲存的中間化合物，治療藥物治療某一疾病的效應(yīng)。
“D”是指氘。
“立體異構(gòu)體”是指對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體。
所謂“聯(lián)合療法”是指給予公式I的化合物和一種或多種其他的治療藥物一起治療某種疾病。這種給藥方法包括在幾乎同時給予這些治療藥物的方式，如在一個單一的膠囊含有多種有效成分的固定比例或同時服用多個膠囊，每個單獨膠囊含有某種活性成分。此外，給藥方式也包括每種治療藥物特定的使用的順序。在任何情況下，治療方案將對所述疾病提供有益的藥物組合治療效應(yīng)。
“治療上可接受”一詞是指那些化合物(鹽、前藥、異構(gòu)體和兩性離子形式等)，適合對病人沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應(yīng)、免疫原性的組織上使用，有一個合理的利益/風(fēng)險比并且對預(yù)期用途有效。
“藥學(xué)上可接受的載體、”藥學(xué)上可接受的輔料、“生理上可接受的載體”或“生理上可接受的輔料”是指藥學(xué)上可接受的原料、成分和載體，如液體或固體填料、稀釋劑、輔料、溶劑和封裝材料。在與其他成分的藥劑配方配合使用時，每個成分都必須是“藥學(xué)上可接受的”。它也必須是適用于人類和動物的器官和組織接觸使用并且沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應(yīng)、免疫原性、其他不良反應(yīng)和并發(fā)癥，具有合理的利益/風(fēng)險比。。
“活性成分”、“活性化合物”和“活性物質(zhì)”是指一種化合物單獨給予或與一個或多個藥學(xué)上可接受的輔料或載體聯(lián)合給予治療、防止和減輕疾病的一個或多個癥狀。
“藥物”、“治療劑”和“化療藥物”是指一種化合物或制藥成分用于治療、預(yù)防或改善疾病一個或多個癥狀。
“釋放控制輔料”是指一種輔料，相較于傳統(tǒng)立即釋放劑型，其主要職能是提高持續(xù)時間和調(diào)節(jié)劑型釋放活性物質(zhì)的位點。
“非釋放控股輔料”是指一種輔料，相較于傳統(tǒng)立即釋放劑型，其主要職能不是提高持續(xù)時間和改善劑型釋放活性物質(zhì)的位點。
“前藥”是指在此所說的化合物的功能化合物，在體內(nèi)，它能穩(wěn)定的轉(zhuǎn)換為母體化合物。前藥往往是有用的，因為在某些情況下，他們可能比母體化合物更容易給藥。例如，他們可以采用口服給藥，而母體化合物不能。在藥物組成成分上，前藥的溶解度也可能超過母體化合物。一個前藥可通過各種機(jī)制轉(zhuǎn)換成母體藥物，包括酶處理法和水解代謝。
化合物及藥物組合物的描述：
本發(fā)明提供的某些化合物可能具備表皮生長因子受體激酶的調(diào)節(jié)活性，可用于治療或預(yù)防的疾病，其中EGFR激酶發(fā)揮了積極作用。因此，某些實施方案還提供在此所說的一個或多個化合物的藥學(xué)成分組成、藥學(xué)上可接受的載體以及化合物和成分的制作和使用方法。某些方案還提供調(diào)節(jié)表皮生長因子受體激酶的方法。其他方案為需要這種治療的病人提供治療EGFR激酶介導(dǎo)的疾病的方法，并確定本發(fā)明提供的化合物或成分治療病人有效量。此外，本發(fā)明提供的某些化合物可用來生產(chǎn)預(yù)防或治療通過調(diào)節(jié)RGFR激酶改善的疾病的藥物。
本發(fā)明所提供的化合物還包含不那么常見的同位素元素，如，碳的13C和14C，氮的15N，氧的17O和18O等。
在某些方案中，本發(fā)明所提供的氘代化合物保持相應(yīng)的非同位素富集分子的有利的方面，包括大幅增加最大耐受劑量、降低毒性、增加半衰期和降低有效劑 量，從而減少非機(jī)制相關(guān)毒性和藥物相互作用的可能性。
雖然本發(fā)明所提供的化合物可以作為化工原料，同時它也可以作為醫(yī)藥成分。于是，本發(fā)明提供的藥物成分是由一個或多個的化合物組成，或一個或多個藥學(xué)上可接受的鹽、前藥和溶劑組成，或同一個或多個藥學(xué)上可接受的載體組成，或由一個或多個其他的治療成分組成。
雖然最合適的給藥途徑可能取決于受試者的狀態(tài)和疾病，但是這些組成成分適合包括適合口服，注射(包括皮下，皮內(nèi)，肌肉注射，靜脈注射，關(guān)節(jié)，髓內(nèi))，腹腔，轉(zhuǎn)化粘液質(zhì)，透皮，直腸和外用(包括皮膚，口腔，舌下和人工)給藥。這些組成成分可以方便地制成單位劑型和用藥學(xué)上任何知名的方法進(jìn)行制備。通常情況下，這些方法包括主要產(chǎn)品化合物、藥用鹽、藥物和溶劑(“活性成分”)與載體的聯(lián)合的步驟，從而形成一個或多個助劑。在一般情況下，組成成分制備是通過一致地將有效成分與液體攜帶者或精細(xì)分割的固體載體或兩者都有進(jìn)行聯(lián)合，然后，如有必要，將產(chǎn)品塑造成所需劑型。
本發(fā)明所提供的化合物配方適合于口服給藥，也可形成獨立的單元，如膠囊、扁囊劑和片劑，每個單元含有預(yù)定量的活性成分；或形成粉末或顆粒；或形成溶液、懸浮液和非水液體；或為油中水乳狀液體、油包水型乳狀液體。活性成分也可作成大藥丸，藥糖劑或膏。
藥物制劑常使用口服藥物制劑包括片劑、壓接式明膠膠囊、明膠制成的柔軟或密封的膠囊和增塑劑，如甘油或山梨醇。片劑通過壓縮或塑模成型，可選擇性的增加一個或多個配合劑。壓縮片通過合適的機(jī)器壓縮而成，其有效成分為自由流動的形式，如粉末、顆粒、粘合劑可選擇性混合、惰性稀釋劑、潤滑油、表面活性和分散劑。模制片可以由一種惰性液體稀釋劑蘸粉狀化合物混合在一個合適的機(jī)器中成型。片劑可隨意涂抹或折疊，以便緩慢或可控制的釋放其中的活性成分。所有口服制劑都有合適的給量劑量。壓接式膠囊可以包含活性成分混合填料，如乳糖、粘合劑、淀粉，潤滑劑，如滑石粉或硬脂酸鎂以及選擇性的添加穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，活性化合物可能被溶解或懸浮在合適的液體中，如脂肪油、液體石蠟和液體聚乙二醇。此外，一般會添加穩(wěn)定劑。糖衣藥丸內(nèi)核提供合適的涂料。為此，濃縮糖溶液可用來選擇性的包含阿拉伯樹膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝膠、聚乙二醇、鈦白粉、漆溶劑以及合適的有機(jī)溶劑或混合溶劑。染料或顏料可能被添加到藥片或球糖中用來鑒定或表示活性化合物的不同劑量組合。
發(fā)明所提供的藥物組合物可采用腸胃外注射給藥，如注射給藥和連續(xù)輸注。注射制劑可制作成單位劑型并添加防腐劑，例如，在安瓿或多劑量的容器。組成成分可以以懸浮液、溶劑、乳狀液、油性或水性載體形式存在，并可能包含配方試劑諸如懸浮劑、穩(wěn)定劑或分散劑。配方可存于單位劑量或多劑量容器，例如，密封安瓿和小瓶；也可存儲粉末狀或凍干(凍干)的條件下，只需要添加無菌液體載體，例如，鹽水或滅菌無熱原水，配好后立即使用。臨時的注射溶液及懸浮 液可用先前所說的無菌粉末、顆粒和片劑準(zhǔn)備。
腸外給藥制劑包括活性化合物的含水和非水(油性)的無菌注射溶劑，其中可能含有抗氧化劑、緩沖液、抑菌劑、提供預(yù)期的接受者血液的等滲劑型的溶質(zhì)以及含水和非水的無菌懸浮劑，其中可能包括懸劑和增稠劑。合適的脂溶性溶劑和載體包括脂肪油，如香油；合成脂肪酸酯，如油酸乙酯、甘油三酯和脂質(zhì)體。水溶液注射懸浮液可能含有增加懸浮液粘度的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉、山梨醇和右旋糖酐。懸浮液也可能包含合適的增加化合物溶解度的穩(wěn)定劑以形成高濃度的溶液。
除了前面所述的劑型，發(fā)明所提供的藥物組合物也可能形成長效制劑。這種長效制劑可通過植入(例如，皮下或肌肉下)或肌肉注射給藥。因此，化合物可制成合適的聚合物、疏水材料(例如作為一個可接受的油乳劑)、離子交換樹脂和難溶化合物，如，難溶鹽。
依據(jù)傳統(tǒng)的方式，口腔或舌下給藥的活性成分可采取片劑、含片、粒狀或凝膠的形式。這些組成成分由包蔗糖、阿拉伯樹膠和黃蓍膠等的活性成分組成。
直腸藥物組成成分劑型包括直腸栓劑和保留灌腸等，也包含傳統(tǒng)栓劑，如可可脂、聚乙二醇和其他甘油酯。
某些化合物可局部給藥即非系統(tǒng)性給藥。采用這種給藥方法，該化合物沒有進(jìn)入血流，包括一個化合物在外部表皮或頰腔的應(yīng)用或?qū)⑦@些化合物滴注到耳朵，眼睛和鼻子。相比之下，全身用藥是指口服，靜脈注射，腹腔和肌肉注射。
適合局部給藥的劑型包括能滲透皮膚到達(dá)炎癥位點液體或半液體制劑，如凝膠、搽劑、洗劑、霜劑，軟膏、糊劑以及適合眼睛、耳朵和鼻子滴劑。
吸入給藥是指化合物可通過吹入器、霧化器加壓包或其他方便的途徑傳遞噴霧劑。加壓包可能包括一個合適的推進(jìn)劑，如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷，二氯四氟乙烷、二氧化碳和其他合適的氣體。至于加壓氣霧劑的劑量單位可通過閥門傳遞測量值進(jìn)行確定。另外，通過吸入或吹入給藥方式，本發(fā)明提供的化合物可能會以干粉組分的形式，如化合物的粉末混合物和合適的粉基料，如乳糖或淀粉。粉末的成分形成單位劑型，如膠囊劑、墨盒、明膠和罩板包裝并在吸入器或吹入器的幫助下給藥。
首選的單位劑量劑型包含有效劑量、適當(dāng)比列和有效成分?；衔锿ㄟ^口服或注射給藥的每天劑量為0.1至500毫克/千克。成人劑量范圍一般是從5毫克至2克/天。片劑或其他形式以獨立單位存在的劑型可能包含一個或多個化合物的劑量，一個劑量或多倍劑量都是有效的，例如，一個單位含有5毫克至500毫克，通常劑量在10毫克至200毫克。
活性成分的量可能與載體材料相結(jié)合產(chǎn)生單一劑型的形式將取決于不同的治療主體和特定的給藥模式。
發(fā)明所提供的藥物組合物可以以各種方式給藥，如口服、外用和注射。給與 某一病人該藥物確切的量是巡診醫(yī)生的責(zé)任。任何特定病人的具體劑量水平將取決于多種因素，包括使用的具體化合物的活性、年齡、體重、健康狀況、性別、飲食、用藥時間、給藥途徑、排泄率、藥物結(jié)合，正在接受治療的具體疾病情況以及治療疾病的嚴(yán)重性。此外，給藥途徑依據(jù)疾病和疾病的嚴(yán)重程度而有所不同。
在此所說的治療表皮生長因子受體激酶介導(dǎo)的疾病的方法包括給予患有或懷疑有這種疾病的患者治療上有效量或藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
在某些方案中，治療表皮生長因子受體激酶介導(dǎo)的疾病的方法包括給予病人一種治療上有效的藥物量、藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物，從而影響：(1)降低化合物或代謝物血漿水平的個體間差異；(2)增加化合物的平均血漿水平或降低每單位劑量化合物至少一種代謝物的平均血漿水平；(3)降低至少一種CYP450的抑制和/或代謝；(4)降低至少一種多態(tài)表達(dá)的CYP450異構(gòu)體的代謝；(5)至少有一個提高疾病控制或疾病消除的有統(tǒng)計學(xué)意義點；(6)改進(jìn)在臨床上疾病的治療效果。
在哺乳動物中，以CYP450亞型為例包括CYP1A1，CYP1A2，CYP1B1，CYP2A6，CYP2A13，CYP2B6，CYP2C8，CYP2C9，CYP2C18，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1，CYP2G1，CYP2J2，CYP2R1，CYP2S1，CYP3A4，CYP3A5，CYP3A5P1，CYP3A5P2，CYP3A7，CYP4A11，CYP4B1，CYP4F2，CYP4F3，CYP4F8，CYP4F11，CYP4F12，CYP4X1，CYP4Z1，CYP5A1，CYP7A1，CYP7B1，CYP8A1，CYP8B1，CYP11A1，CYP11B1，CYP11B2，CYP17，CYP19，CYP21，CYP24，CYP26A1，CYP26B1，CYP27A1，CYP27B1，CYP39，CYP46和CYP51，但也不僅限于這些。
在哺乳動物中，多態(tài)性表達(dá)以CYP450亞型為例包括CYP2C8，CYP2C9，CYP2C19和CYP2D6，但也不僅限于這些。
除了用于人類治療，在此所說的某些化合物和制劑也可用于寵物，珍稀動物和農(nóng)場動物的治療，包括哺乳動物，嚙齒動物等等。更有效的動物包括馬，狗和貓。
在其他方面，本發(fā)明提供的化合物、藥學(xué)上可接受的鹽、前藥、代謝物、類似物和派生物可以與化療藥物或其他抗癌藥物聯(lián)合給藥。二次化療藥物包括任何用于治療癌癥的知名藥劑。以防癌劑(S)為例包括，抗血管生成劑，如羅奎美克、整合蛋白αvβ3功能抑制劑、血管抑素、雷佐生；抗雌激素，如，他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬；芳香酶抑制劑，如，阿那曲唑、睪內(nèi)酯、來曲唑、硼嗪、依西美坦；孕激素，如，甲地孕酮、羥孕酮、安宮黃體酮；抗激素藥物，如，氨魯米特；合成雌激素，如，三對甲氧苯氯乙烯、己烯雌酚、17α-炔雌醇；合成的雄激素，如，曲他雄酮、氯甲睪酮，甲睪酮；抗暈激素藥物；抗雄激素，如，氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、醋酸環(huán)丙孕酮；雄激素，如，睪酮；合成糖皮質(zhì)激素，如，甲基強(qiáng)的松龍、曲安奈德、強(qiáng)的松龍、強(qiáng)的松；LHRH激動劑和拮抗劑，如，醋酸亮丙瑞林；5α-二氫還原酶睪酮抑制劑，如，非那雄胺；酰轉(zhuǎn)移酶抑 制劑；抗入侵劑，如，金屬蛋白酶抑制劑，如，馬馬司他，纖溶酶原激活功能抑制劑；血管內(nèi)皮生長因子抑制劑，如，抗血管內(nèi)皮生長因子抗體(商品名阿瓦斯丁)和小分子，如，ZD6474，SU6668，SU11248，瓦他拉尼堿，BAY-43-9006，CP-547632，CEP-7055；Her1和Her2抑制劑，如，抗-Her2抗體(赫賽汀)；Eg5抑制劑，如，SB-715992，SB-743921，MKI-833；Her抑制劑，如，卡奈替尼，EKB-569，CI-1033，AEE-788，XL-647，mAb2C4，GW-572016；SrC抑制劑，如，達(dá)沙替尼；MEK-1抑制劑；MAPK抑制劑；PI3激酶抑制劑；MET抑制劑；其他極光激酶抑制劑；生長因子抑制劑，如，伊馬替尼；IGF1R的抑制劑，如，美國專利申請?zhí)枺?004/0044203A1；其他受體和非受體酪氨酸激酶抑制劑；其他絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑；CDK抑制劑；抗代謝藥物，如，甲氨蝶呤、曲美沙特、5-氟脲嘧啶、替加氟、阿糖胞苷、吉西他濱、氟達(dá)拉濱、6-硫鳥嘌呤、DON(D-羰基-亮氨酸或AT-125)和6-鳥嘌呤；抗腫瘤抗生素，如，阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素、去甲氧柔紅霉素、絲裂霉素-C、更生霉素、米托蒽醌、光輝霉素；鉑類化合物，如順鉑、奧沙利鉑，卡鉑；烷化劑，如，馬法蘭、氮芥、苯丁酸氮芥、白消安、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺亞硝基脲、達(dá)卡巴嗪、六甲基三聚氰胺、雌氮芥、塞替派；抗有絲分裂劑，如，培美曲塞、長春新堿、(紫杉醇)、長春氟寧、(多西紫杉醇)、7-O-甲基甲硫紫杉醇、4-乙?；?4-碳酸甲酯紫杉醇、3-叔丁基-3-N-叔丁氧羥基-4-乙酰基-3-苯基-3-N-苯甲?；?4-O-甲氧羥基-紫杉醇、C-4甲基碳酸紫杉醇、埃博霉素A、埃博霉素B、埃博霉素C、埃博霉素埃博霉素類似物等，依沙比酮及其化合物；整合蛋白信號抑制劑；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，如，依托泊苷、替尼泊苷、安吖啶，阿霉素、柔紅霉素、伊立替康、拓?fù)涮婵担患?xì)胞周期抑制劑；生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，如，α-干擾素；單克隆抗體，如美羅華、吉妥單抗；蛋白酶抑制劑，如，(硼替佐米)、SN-8；甲芐肼；L-門冬酰胺；核糖核酸還原酶抑制劑；mTOR抑制劑；亞葉酸鈣；VM-26；白細(xì)胞介素；造血生長因子；組蛋白去乙酰酶抑制劑如伏立諾他，MG0103和MS-275，或ACS的指南網(wǎng)站列出的抗癌藥物，但也不僅限于這些藥物。
此外，二次化療藥物可以是細(xì)胞因子如G-CSF(粒細(xì)胞集落刺激因子)。另外，本發(fā)明提供的化合物、藥學(xué)上可接受的鹽、前藥、代謝物、類似物及其化合物可與放射治療結(jié)合用藥。
化合物(衍生物)的合成：
通過合成技術(shù)將氘化試劑中的氘可以引入本發(fā)明提供的化合物，摻入率是預(yù)先確定的；或通過交換技術(shù)，摻入率由平衡條件確定，對不同的反應(yīng)條件有很大的變異。合成技術(shù)中，氘是通過已知同位素含量的氘代試劑直接和特定的插入，可能會產(chǎn)生較高的氘豐度，但受化學(xué)要求的限制。另一方面，交換技術(shù)可能會產(chǎn)生較低的氘摻入，同位素往往分布在分子上的許多位點。
下面通過具體的實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明所提供化合物及衍生物的制備過程。氫中的任何位置可隨意被氘取代。
具體實施例：
實施例一：N-(3-甲基苯基)(9,9,10,10-2H4)-6,7,9,10,12,13-六氫[1,4,7,10]–三氧雜環(huán)十二烷-[2,3-d]嘧啶-4-氨基(即化合物I-1)的制備
步驟1：合成1,12-二苯基(6,6,7,7-2H4)-2,5,8,11-四氧雜十二烷
將1.0g(2H4)乙烷-1,2-二醇加入25mL DMF配成溶液，其中DMF已加1g的NaH(60％在礦物油中)，所形成的懸液在60℃攪拌10分鐘。后冷卻至室溫，加入0.1g18-冠-6。在一個單獨的燒杯中，將5.2g(2-溴-乙氧甲基)-苯和3.6g nBu4NI混合加入15mL的DMF，并在50℃加熱5分鐘。溶液冷卻至室溫后，加入到其他反應(yīng)劑的懸浮液中。在室溫下攪拌24小時后，加1gNaH(60％在礦物油中)和5.2g(2-溴-乙氧甲基)-苯處理。室溫下持續(xù)攪拌反應(yīng)混合物24小時，并在真空條件下用5mL水淬火并去除DMF。殘留物在300mL乙酸乙酯與正己烷(2:1)和100mL水之間進(jìn)行分配。有機(jī)層用50毫升鹽水洗凈，然后用硫酸鈉干燥，殘留物用乙酸乙酯/正己烷濃度梯度(高達(dá)80％乙酸乙酯)硅膠色譜洗脫純化，產(chǎn)生3.1g化合物1為無色油狀液體。
1H核磁共振(400兆赫，丙酮-d6)，4.53(4H,s)，3.1-3.18(8H,m)MS(ES-API,pos.scan)357.25(M+鈉)+。
步驟2：合成2,2'-[(2H4)乙烷-1,2-雙(氧)]二乙醇胺
將3g的化合物1和10％的Pd/C 1.2g混合在100mL的甲醇溶液，存放于標(biāo)準(zhǔn)容器中的混合物在40磅/平方英寸氫氣的條件下?lián)u晃36小時。然后，用50mL的 二氯甲烷稀釋反應(yīng)混合物，并通過硅藻土墊過濾，然后用100毫升的甲醇洗凈。濾液濃縮形成的目標(biāo)化合物2為無色油狀液體(1.1g)。
1HNMR(400MHz,acetone-d6)2H,bs),3.64(4H,t),3.52(4H,t)。
步驟3：合成(2H4)乙烷-1,2-雙(氧乙烷2,1-二基)二(4–苯磺酸甲酯)
將1.0g，6.5mmol的化合物2在0℃溶解在二氯甲烷中，并向溶液中加入1.3g，19.5mmol的嘧啶，接著在二氯甲烷中加入3.1g，13mmol的對甲苯磺?；然铩Ｔ诘獨獗Ｗo(hù)下，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。有機(jī)溶劑蒸發(fā)，殘留物在醚和2N鹽酸水溶液之間的分割，有機(jī)物在硅膠上濃縮純化得到淡黃色固體即為目標(biāo)化合物3(1.68g，56.1％)。
1H核磁共振(400兆赫CDCl3)，7.82(d,4H),7.35(d,4H),4.15(t,4H).3.65(t,4H).2.45(s,6H).MS(ES-API,pos.scan)480.5(M+NH4)+。
步驟4：合成乙基-(5,5,6,6-2H4)-2,3,5,6,8,9-六氫-1,4,7,10-苯甲酰四氧環(huán)十二烷-12-羧酸
乙基3,4-二羥基苯(610mg，3.33mmol)和碳酸鉀(920mg，6.66mmol)懸浮在DMF(100mL)溶液中，在氮氣保護(hù)下，攪拌加熱到85℃。然后在DMF(20mL)溶液中非常緩慢加入化合物3(1.54g，3.33mmol)，等待1小時。懸浮液在85℃攪拌并用薄層色譜法(20％乙酸乙酯/正己烷)監(jiān)測，并在3.5小時完成反應(yīng)監(jiān)測。該混合物冷卻至室溫，醚和水分層。有機(jī)物在硅膠上的聚集和純化產(chǎn)生白色固體即為目標(biāo)化合物4，產(chǎn)量為278mg(28％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)，7.72(s,1H),7.68(s,1H),6.96(d,1H),4.36(q.2H),4.35(d.4H),3.85(d,4H).1.49(t,3H).MS(GC-Scan)300(M exact)。
步驟5：合成乙基-13-硝基(5,5,6,6-2H4)-2,3,5,6,8,9-六氫-1,4,7,10-苯甲酰四氧環(huán)十二烷-12-羧酸
將220mg、0.73mmol的化合物4溶解在2mL的醋酸溶液并冷卻至0℃。向溶液中加入2mL硝酸，然后滴入2mL硫酸。在0℃至15℃之間攪拌暗黃色的溶液25分鐘。然后倒入冰水用乙酸乙酯提取。有機(jī)物濃縮產(chǎn)生淺黃色的油狀物并凝固靜置產(chǎn)生淺黃色固體即為目標(biāo)化合物5，產(chǎn)量為220mg(87.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)，7.57(s,1H),7.20(s,1H),4.35(q,2H),4.28(m,2H),3.87(m,4H),1.37(t,3H).MS(GC-Scan)345(M exact)。
步驟6：合成乙基-13-氨基-(5,5,6,6-2H4)-2,3,5,6,8,9-六氫-1,4,7,10-苯甲酰四氧環(huán)十二烷-12-羧酸
將210mg、0.61mmol的化合物5溶解在50mL的乙醇溶液和加入10％，50mg的Pd-C。在氫氣(氣球)的保護(hù)下，黑色懸浮在室溫下攪拌1.5小時。將混合物過濾，濾液濃縮成黃色固體的目標(biāo)化合物6，產(chǎn)量為155mg(80.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)，7.57(s,1H),7.26(s,1H),4.29(q,2H),4.10–3.73(m,8H),1.36(t,3H)。MS(GC-Scan)315(M exact)。
步驟7：合成(10,10,11,11-2H4)-7,8,10,11,13,14-六氫[1,4,7,10]苯甲酰四氧環(huán)十二烷[2,3-g]喹唑啉-4(3H)-酮
將130mg、0.41mmol的化合物6和95mg，1.5mmo的甲酸銨的懸浮在2mL的甲酰胺溶液中。在氮氣保護(hù)下，褐色的混合物在155℃攪拌3小時。，混合物冷卻并在乙酸乙酯和水之間分層，有機(jī)層濃縮產(chǎn)生白色固體即為目標(biāo)化合物7，產(chǎn)量為98mg(80.3％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)，12.1(s,1H),7.94(s,1H)，7.55(s,1H),7.16(s,1H).4.18(tt,4H),3.55(tt,4H)。MS(ES-API,pos.scan)319.4(M+Na)+。
步驟8：合成4-氯(10,10,11,11-2H4)-7,8,10,11,13,14-六氫[1,4,7,10]苯甲酰四氧環(huán)十二烷[2,3-g]喹唑啉
在室溫下，將50mg、0.17mmol的化合物7，520mg，3.4mmol的三氯氧磷和3滴二甲基甲酰胺在2mL二氯甲烷溶液中混合。在氮氣回流保護(hù)下，懸浮液攪拌2小時。然后冷卻至0℃并用NaHCO3的水溶液淬火。用5mL的二氯甲烷溶液提取。有機(jī)層濃縮干燥，并用50％乙醚/正己烷沖洗產(chǎn)生的稱號黃褐色固體即為目標(biāo)化合物8，產(chǎn)量為40mg(75.2％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)，8.96(s,1H),7.72(s,1H),7.57(s,1H),4.98(tt,4H),3.9(tt,4H)。MS(ES-API,pos.san)315.3(M+H)+。
步驟9：合成N-(3-乙炔苯基)(9,9,10,10-2H4)-6,7,9,10,12,13-六氫[1,4,7,10]苯甲酰四氧環(huán)十二烷[2,3-d]嘧啶-4-氨基(即化合物I-1)
將40mg、0.12mmol的化合物8懸浮在2mL乙醇和2滴二甲基甲酰胺混合溶液中，并加入18mg，0.15mmol的3-氨基苯乙炔。懸浮液在室溫下攪拌5分鐘。然后，加熱到85℃，在氮氣保護(hù)下攪拌過夜。橙色的溶液濃縮形成給橙色的固體殘渣，乙酸乙酯重結(jié)晶得到白色固體即為目標(biāo)化合物I-1，產(chǎn)量為30mg(63.8％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)，11.25(s,1H),8.92(s,1H),8.55(s,1H),7.91(s,1H),7.78(d,1H),7.52(t,1H),7.42(d,1H),7.37(d,1H),4.39(d,2H),4.32(s,1H),3.80(d,2H)。MS(ES-API,pos.san)396.4(M+H)+。
實施例二：4-[(3-乙炔基苯基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-(8,8,9,9,12,12,13,13-2H8)-12-冠(即化合物I-2)的制備
步驟1：合成化合物10
在500ml三口瓶中，加入二氯甲烷(180ml)和2,3-二氫吡喃(9.28g，110.4mmol),在冰浴下加入對甲苯磺酸吡啶鹽(1.85g，7.36mmol),攪拌10min后加入2-溴乙醇-1,1,2,2-D4-(9.5g,73.6mmol)，然后升溫至25℃反應(yīng)10h。反應(yīng)完畢后，減壓旋去溶劑，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，經(jīng)石油醚和乙醚混合液萃取，水洗，干燥，過柱得到無色液體產(chǎn)物10(14.2g，90％)。
1H-MHR(CDCl3)δ:4.66(1H,t)，3.88(1H,m)，3.53(1H,m)，1.72(1H,m)，1.63(1H,m)，1.54(4H,m)
步驟2：合成化合物11
在250ml的三口瓶中，加入DMF(75ml),THF(75ml)和乙二醇(1g，16.11mmol),室溫下慢慢加入60％的氫化鈉(3.22g，78.3mmol),攪拌10min后升溫至65℃反應(yīng)30min。然后降溫至25℃，慢慢加入化合物10(7.21g,33.8mmol)，再升溫至45℃反應(yīng)6h。反應(yīng)完畢后，在冰浴下滴加甲醇5ml,攪拌10min,再加入水400ml，經(jīng)石油醚、乙醚和乙酸乙酯的混合溶液萃取，水洗，干燥，過柱得到無色油狀物產(chǎn)物11(3.3g，63％)。
1H-MHR(CDCl3)δ:4.61(2H,t)，3.85(1H,m)，3.65(4H,t)，3.50(2H,m)，1.80(2H,m)，1.69(2H,m)，1.56(4H,m)，1.51(4H,m)
步驟3：合成化合物12
在250ml的三口瓶中，加入THF(50ml)和甲醇(50ml)，然后加入化合物11(3.3g,10.2mmol)和對甲苯磺酸吡啶鹽(0.254g,1.02mmol)，室溫下攪拌10min，然后升溫至45℃反應(yīng)2.5h。反應(yīng)完畢后，直接減壓旋去溶劑，得到半結(jié)晶油狀物12(1.6g，99％)。
步驟4：合成化合物15
在100ml的三口瓶中，加入30ml二氯甲烷，然后加入對甲苯磺酰氯(4.0g,21.24mmol)和三乙胺(3.07g,30.33mmol)，氮氣保護(hù)下攪拌10min后冷卻至0℃，緩慢滴加化合物12(1.6g,10.11mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。滴畢，自然升溫至室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液冷卻至0℃，滴加水(30ml)，分出有機(jī)相，經(jīng)水洗，干燥后，減壓旋去溶劑，再用少量EA溶解，滴加石油醚，使固體析出，過濾干燥的淺黃色固體產(chǎn)物15(3.5g，74.2％)。
步驟5：合成化合物17
在100ml的三口瓶中，加入20ml DMF.然后加入3,4-二羥基苯甲酸乙酯(1.37g,7.50mmol)和碳酸鉀(1.55g,11.25mmol)，攪拌并升溫至85℃，慢慢滴加化合物15(3.5g,7.50mmol)的DMF(20ml)溶液，滴完后繼續(xù)反應(yīng)3h.反應(yīng)完畢，經(jīng)過加水，EA萃取，過柱，得到淺黃色固體產(chǎn)物17(0.63g，27.6％)。
1H-MHR(CDCl3)δ:7.67(2H,m)，6.96(2H,d)，4.33(2H,m)，3.77(4H,s)，1.37(3H,t)
步驟6：合成化合物19
在50ml三口瓶中，將化合物17(520mg,1.71mmol)加入至冰乙酸(10ml)中，攪拌并控溫于15℃以先下滴加濃硝酸(2.5ml)，再滴加濃硫酸(2.5ml)。滴畢，攪拌10min后升溫至30℃至35℃反應(yīng)4h。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)液滴入到100ml的冰水中，冰浴下攪拌1h，經(jīng)過EA萃取，水洗，干燥，減壓旋干，得棕黃色油狀物產(chǎn)物19(527mg，88.2％)。
1H-MHR(CDCl3)δ:7.55(1H,s)，7.20(1H,s)，4.36(2H,m)，3.66(4H,s)，1.34(3H,t)
步驟7：合成化合物21
在50ml三口瓶中，將化合物19(627mg,1.79mmol)溶于甲醇(10ml)和四氫呋喃(10ml)的混合溶液中，加入10％的鈀碳(0.5g)，通入氫氣反應(yīng)8h。反應(yīng)完成后，經(jīng)過濾和減壓旋去溶劑,過柱得到白色固體產(chǎn)物21(350g，61.2％)。
MS m/z:324.2(M+)
步驟8：合成化合物23
在50ml三口瓶中，加入甲酰胺(10ml)，然后加入化合物21(350mg,1.09mmol)和乙酸銨(138.2mg,2.19mmol),反應(yīng)液升溫至160℃反應(yīng)5h。反應(yīng)完畢后，冷卻反應(yīng)液，加水30ml,經(jīng)過DCM萃取，水洗，干燥和過柱，得到白色固體產(chǎn)物23(281mg，85.8％)。
1H-MHR(DMSO-D6)δ:12.0(1H,br)，7.98(1H,s)，7.6(1H,s)，7.21(1H,s)，3.61(4H,s)
步驟9：合成化合物25
在50ml三口瓶中，將化合物23(248mg,0.83mmol)懸浮于三氯氧磷(20ml)中，攪拌并加熱至回流反應(yīng)6h。反應(yīng)完畢后，減壓旋去溶劑至1ml，滴入冰水中，調(diào)節(jié)Ph至中性，經(jīng)DCM萃取，水洗，干燥，減壓旋干和過柱得到白色固體產(chǎn)物25(186mg，70.3％)。
MS m/z:318.3(M+)
步驟10：合成化合物I-2
在50ml三口瓶中,將化合物25(50mg,0.15mmol)和間氨基苯乙炔(18.7mg,0.16mmol)加入到無水乙醇(12ml)中，升溫至55℃反應(yīng)3h。反應(yīng)完畢后，減壓旋去乙醇至2ml,冰浴下攪拌30min后過濾，濾渣用正己烷洗滌，干燥后得到白色固體產(chǎn)物I-2(57mg，90％)。
1H-MHR(DMSO-D6)δ:11.0(1H,br)，8.84(1H,s)，8.48(1H,s)，7.89(1H,s)，7.76(1H,d)，7.50(1H,t)，7.40(1H,d)，7.37(1H,s)，4.26(1H,s)，3.60(4H,s)；MS m/z:400.15(M+)
實施例三：4-[(3-乙炔基苯基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-(8,8,9,9,10,10,11,11，12,12,13,13-2H12)-12-冠(即化合物I-3)的制備
步驟1：合成化合物13
在250ml的三口瓶中，加入DMF(75ml),THF(75ml)和乙二醇-1,1,2,2-D4(1g,15.13mmol),室溫下慢慢加入60％的氫化鈉(3.03g,75.65mmol),攪拌10min后升溫至65℃反應(yīng)30min。然后降溫至25℃，慢慢加入化合物10(6.77g,31.77mmol)，再升溫至45℃反應(yīng)6h。反應(yīng)完畢后，在冰浴下滴加甲醇5ml,攪拌10min,再加入水400ml，經(jīng)石油醚、乙醚和乙酸乙酯的混合溶液萃取，水洗，干燥，過柱得到無色油狀物產(chǎn)物13(2.5g，50％)。
1H-MHR(CDCl3)δ:4.61(2H,t)，3.85(2H,m)，3.49(2H,m)，1.8(2H,m)，1.69(2H,m)，1.55(4H,m)，1.51(4H,m)
步驟2：合成化合物14
在250ml的三口瓶中，加入THF(50ml)和甲醇(50ml)，然后加入化合物13(2.5g,7.56mmol)和對甲苯磺酸吡啶鹽(190mg,0.756mmol)，室溫下攪拌10min，然后升溫至45℃反應(yīng)2.5h。反應(yīng)完畢后，直接減壓旋去溶劑，得到淡黃色油狀物產(chǎn)物14(1.1g，89.6％)。
步驟3：合成化合物16
在100ml的三口瓶中，加入20ml二氯甲烷，然后加入對甲苯磺酰氯(2.47g,12.94mmol)和三乙胺(1.87g,18.48mmol)，氮氣保護(hù)下攪拌10min后冷卻至0℃，緩慢滴加化合物14(1.0g,6.16mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液。滴畢，自然升溫至室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液冷卻至0℃，滴加水(20ml)，分出有機(jī)相，經(jīng)水洗，干燥后，減壓旋去溶劑，再用少量EA溶解，滴加石油醚，使固體析出，過濾干燥的淺黃色固體產(chǎn)物16(2.18g，75.2％)。
步驟4：合成化合物18
在100ml的三口瓶中，加入20ml DMF.然后加入3,4-二羥基苯甲酸乙酯(844mg，4.63mmol)和碳酸鉀(960mg,6.95mmol)，攪拌并升溫至85℃，慢慢滴加化合物16(2.18g,4.63mmol)的DMF(20ml)溶液，滴完后繼續(xù)反應(yīng)3h。反應(yīng)完畢，經(jīng)過加水，EA萃取，過柱，得到淺黃色固體產(chǎn)物18(0.52g，36.4％)。
1H-MHR(CDCl3)δ:7.67(2H,m)，6.95(1H,d)，4.32(2H,m)，1.37(3H,t)
步驟5：合成化合物20
在50ml三口瓶中，將化合物18(520mg,1.69mmol)加入至冰乙酸(10ml)中，攪拌并控溫于15℃以先下滴加濃硝酸(2.5ml),再滴加濃硫酸(2.5ml)。滴畢，攪拌10min后升溫至30℃至35℃反應(yīng)4h。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)液滴入到100ml的冰水中，冰浴下攪拌1h,經(jīng)過EA萃取，水洗，干燥，減壓旋干，得棕黃色油狀物產(chǎn)物20(478mg，80.0％)。
1H-MHR(CDCl3)δ:7.55(1H,s)，7.20(1H,s)，4.36(2H,m)，1.34(3H,t)
步驟6：合成化合物22
在50ml三口瓶中，將化合物20(478mg,1.35mmol)溶于甲醇(10ml)和四氫呋喃(10ml)的混合溶液中，加入10％的鈀碳(0.5g),通入氫氣反應(yīng)8h。反應(yīng)完成后，經(jīng)過濾和減壓旋去溶劑,過柱得到白色固體產(chǎn)物22(290g，66.4％)。
MS m/z:320.15(M+)
步驟7：合成化合物24
在50ml三口瓶中，加入甲酰胺(10ml)，然后加入化合物21(290mg,0.90mmol)和乙酸銨(113mg,1.79mmol),反應(yīng)液升溫至160℃反應(yīng)5h。反應(yīng)完畢后，冷卻反應(yīng)液，加水30ml,經(jīng)過DCM萃取，水洗，干燥和過柱，得到白色固體產(chǎn)物24(225mg，82.1％)。
1H-MHR(DMSO-D6)δ:12.0(1H,br)，7.98(1H,s)，7.6(1H,s)，7.21(1H,s)
步驟8：合成化合物26
在50ml三口瓶中，將化合物24(206mg,0.68mmol)懸浮于三氯氧磷(20ml) 中，攪拌并加熱至回流反應(yīng)6h。反應(yīng)完畢后，減壓旋去溶劑至1ml，滴入冰水中，調(diào)節(jié)Ph至中性，經(jīng)DCM萃取，水洗，干燥，減壓旋干和過柱得到白色固體產(chǎn)物26(170mg，77.4％)。
MS m/z:345(M++Na)
步驟9：合成化合物I-3
在50ml三口瓶中,將化合物26(50mg,0.155mmol)和間氨基苯乙炔(18.7mg,0.16mmol)加入到無水乙醇(12ml)中，升溫至55℃反應(yīng)3h。反應(yīng)完畢后，減壓旋去乙醇至2ml,冰浴下攪拌30min后過濾，濾渣用正己烷洗滌，干燥后得到白色固體產(chǎn)物I-3(60mg，95％)。
1H-MHR(DMSO-D6)δ:10.7(1H,br)，8.81(1H,s)，8.34(1H,s)，7.90(1H,s)，7.76(1H,d)，7.49(1H,t)，7.39(1H,d)，7.32(1H,s)，4.26(1H,s)；MS m/z:404.25(M+)
實施例四：4-[(3-氘代乙炔基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-12-冠(即化合物I-4)的制備
在50ml三口瓶中，將化合物4-[(3-乙炔基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-12-冠(50mg,0.128mmol)溶于四氫呋喃10ml中，控溫-78℃，緩慢滴加正丁基鋰(0.1ml，0.256mmol),反應(yīng)30分鐘，然后緩慢滴加重水即得化合物I-4。
實施例五：4-[(3-氘代乙炔基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-(10,10,11,11-2H4)-12-冠(即化合物I-5)的制備
在50ml三口瓶中，將化合物I-1(50mg,0.126mmol)溶于四氫呋喃10ml中， 控溫-78℃，緩慢滴加正丁基鋰(0.1ml，0.252mmol),反應(yīng)30分鐘，然后緩慢滴加重水即得化合物I-5。
實施例六：4-[(3-氘代乙炔基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-(8,8,9,9，12,12,13,13-2H8)-12-冠(即化合物I-6)的制備
在50ml三口瓶中，將化合物I-2(50mg,0.125mmol)溶于四氫呋喃10ml中，控溫-78℃，緩慢滴加正丁基鋰(0.1ml，0.25mmol),反應(yīng)30分鐘，然后緩慢滴加重水即得化合物I-6。
實施例七：4-[(3-氘代乙炔基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-(8,8,9,9，10,10,11,11，12,12,13,13-2H12)-12-冠(即化合物I-7)的制備
在50ml三口瓶中，將化合物I-3(50mg,0.124mmol)溶于四氫呋喃10ml中，控溫-78℃，緩慢滴加正丁基鋰(0.1ml，0.248mmol),反應(yīng)30分鐘，然后緩慢滴加重水即得化合物I-7。
實施例八：4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-(8,8,9,9,12,12,13,13-2H8)-12-冠(即化合物II-1)的制備
在50ml三口瓶中，將化合物25(50mg,0.16mmol)和4-氟-3-氯苯胺(22.8mg,0.16mmol)加入到無水乙醇(12ml)中，升溫至55℃反應(yīng)3h。反應(yīng)完畢后，減壓旋去乙醇至2ml,冰浴下攪拌30min后過濾，濾渣用正己烷洗滌，干燥后 得到白色固體產(chǎn)物II-1(63mg，92％)。
1H-MHR(DMSO-D6)δ:11.2(1H,br)，8.86(1H,s)，8.52(1H,s)，8.04(1H,d)，7.73(1H,d)，7.54(1H,t)，7.38(1H,s)，3.60(4H,s)；MS m/z:428.15(M+)
實施例九：4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-喹唑啉并[6,7-b]-(8,8,9,9,10,10,11,11，12,12,13,13-2H12)-12-冠(即化合物II-2)的制備
在50ml三口瓶中，將化合物26(50mg,0.155mmol)和4-氟-3-氯苯胺(22.5mg,0.155mmol)加入到無水乙醇(12ml)中，升溫至55℃反應(yīng)3h。反應(yīng)完畢后，減壓旋去乙醇至2ml,冰浴下攪拌30min后過濾，濾渣用正己烷洗滌，干燥后得到白色固體產(chǎn)物II-2(60mg，89.6％)。
1H-MHR(DMSO-D6)δ:11.1(1H,br)，8.85(1H,s)，8.45(1H,s)，8.05(1H,d)，7.72(1H,s)，7.54(1H,t)，7.36(1H,s)；MS m/z:432.15(M+)
實施例十：4-[(2-氯-5-氨基吡啶基)]-喹唑啉并[6,7-b]-(8,8,9,9,12,12,13,13-2H8)-12-冠(即化合物III-1)的制備
在50ml三口瓶中,將化合物25(35mg,0.11mmol)和2-氯-4-氨基吡啶(14mg,0.11mmol)加入到無水乙醇(10ml)中，升溫至60℃反應(yīng)5h。反應(yīng)完畢后，減壓旋去乙醇至3ml,冰浴下攪拌30min后過濾，濾渣用正己烷洗滌，干燥后得到白色固體產(chǎn)物III-1(33mg，73.2％)。
1H-MHR(DMSO-D6)δ:8.81(2H,m)，8.41(1H,s)，8.27(1H,d)，7.66(1H,d)，7.37(1H,s)，3.61(1H,s)；MS m/z:411.20(M+)
實施例十一：4-[(2-氯-5-氨基吡啶基)]-喹唑啉并[6,7-b]-(8,8,9,9,10,10,11,11，12,12,13,13-2H12)-12-冠(即化合物III-2)的制備
在50ml三口瓶中,將化合物26(35mg,0.10.8mmol)和2-氯-4-氨基吡啶(14mg,0.11mmol)加入到無水乙醇(10ml)中，升溫至60℃反應(yīng)5h。反應(yīng)完畢后，減壓旋去乙醇至3ml,冰浴下攪拌30min后過濾，濾渣用正己烷洗滌，干燥后得到白色固體產(chǎn)物III-2(33mg，73.3％)。
1H-MHR(DMSO-D6)δ:8.81(2H,m)，8.40(1H,s)，8.27(1H,d)，7.66(1H,d)，7.37(1H,s)；MS m/z:415.20(M+)
不同化合物體外抗肺癌細(xì)胞活性試驗
取上述實施例所制得的部分化合物進(jìn)行體外抗肺癌細(xì)胞活性試驗，同時取對比化合物(未氘代)進(jìn)行同樣的試驗，試驗方式和過程如下：
1.試驗材料
1.1細(xì)胞株
人肺腺癌細(xì)胞NCI-H1975、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549、人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H460購自于中科院上海細(xì)胞庫。
1.2供試品
HZ3101-HZ3110號，由長沙霍滋生物科技有限公司提供。保存條件：密封，置陰涼處保存。
1.3陽性對照品
注射用順鉑(DDP)，由齊魯制藥有限公司生產(chǎn)，批號：1100331DB；10mg/瓶。
1.4主要試劑：高糖DMEM培養(yǎng)基，HyClone公司，批號NXJ0709，500ml/瓶；胎牛血清，HyClone公司，批號NXC0582，500ml/瓶；噻唑藍(lán)，sigma公司，批號MKBH7489V，1g/瓶；二甲亞砜，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號20120705，500ml/瓶；胰蛋白酶，北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司，批號04D10151，25g/瓶。
1.5主要儀器：CJ-1F型醫(yī)用凈化工作臺(中心編號058，蘇州馮氏實驗動物設(shè)備有限公司)；臺式低速離心機(jī)(中心編號101，湖南省凱達(dá)實業(yè)發(fā)展有限公司)；DMIL型倒置顯微鏡(中心編號027，Leica)；3111型CO2培養(yǎng)箱(中心編號147，Thermo)；MR-96A酶標(biāo)儀(中心編號007，深圳邁瑞)；無菌針式過濾器(millipore)。
2.試驗方法
2.1細(xì)胞培養(yǎng)與接種
NCI-H1975、A549、NCI-H460腫瘤細(xì)胞株在37℃、5％CO2的飽和濕度環(huán)境 下，含10％胎牛血清的高糖DMEM完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)、傳代。接種時用0.25％胰蛋白酶消化液消化，加細(xì)胞培養(yǎng)基吹打成均勻細(xì)胞懸液，將細(xì)胞制成5×104/ml的細(xì)胞懸液，每孔100μl接種于96孔板中。
2.2供試品配制與細(xì)胞生長抑制測定
稱取一定量供試品，用DMSO配制成100mmol/L的母液，用0.22μm無菌針式過濾器過濾除菌，然后依次配制成200、60、20、6、2、0.6μmol/L的工作液。DDP用DMEM完全培養(yǎng)基配制成濃度為50、15、5、1.5、0.75、0.15μmol/L的工作液。待細(xì)胞貼壁后換用含不同濃度供試品和DDP的工作液，每個濃度設(shè)3個復(fù)孔。分別于加藥后48小時后，每孔加MTT溶液(培養(yǎng)基配成5mg/ml,過濾后避光保存)20μl，4小時后將上清液吸出，每孔加MTT溶解液DMSO 150μl，震蕩待Formazan完全溶解，酶標(biāo)儀492nm測定OD值。按照下式計算抑制率，并根據(jù)Bliss法計算IC50值。
抑制率＝(OD空白-OD樣品)/OD空白×100％
其中對比例所采用的化合物為：
3、試驗結(jié)果
上述體外抗肺癌細(xì)胞活性試驗的結(jié)果數(shù)據(jù)如下表1所示：
化合物抗肺癌活性試驗結(jié)果
由上述實驗結(jié)果可以看出，本發(fā)明所提供的化合物對肺癌細(xì)胞的抑制性優(yōu)于對比化合物。