本發(fā)明涉及13種β-咔啉-3-甲酰-Orn-AA-NHCH₂C₆H₅，涉及它們的制備方法，涉及它們對腫瘤生長的抑制作用，因而本發(fā)明涉及它們在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

β-咔啉是重要的天然產(chǎn)物，具有廣泛的藥理作用，例如抗血栓作用和抗腫瘤作用。發(fā)明人曾經(jīng)公開了一系列具有抗血栓作用和抗腫瘤活性的β-咔啉-3-甲酰-氨基酸、β-咔啉-3-甲酰-氨基酸芐酯、β-咔啉-3-甲酰-寡肽。它們的腹腔給藥劑量為8.9-10μmol/kg。發(fā)明人對這種水平的活性不滿意。于是，發(fā)明人開始了低劑量口服目標(biāo)的實驗探索。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在咔啉的1-位引入水楊酸樣取代基，確實可使劑量實質(zhì)性下降。在下式(左，R為氨基酸芐酯基或多肽基)代表的1-(水楊酸衍生基)-β-咔啉-3-甲酰氨基酸、1-(水楊酸衍生基)-β-咔啉-3-甲酰氨基酸芐酯和1-(水楊酸衍生基)-β-咔啉-3-甲酰寡肽中，有些化合物的口服有效劑量為10μmol/kg。可是1-水楊酸甲酯基的甲酯基對胃酸的不穩(wěn)定性可產(chǎn)生不期望的胃刺激性，1-水楊酸甲酯基的酚羥基對氧化的不穩(wěn)定性可產(chǎn)生不期望的藥物代謝結(jié)果。發(fā)明人對它們的這些性質(zhì)不滿意。在下式(右)代表的1-(異丙苯基)-β-咔啉-3-甲酰WWWLDV的口服有效劑量也是10μmol/kg?？墒?，它的1-異丙苯基和3-甲酰WWWLDV肽基使得水溶性非常差。發(fā)明人對它的這個性質(zhì)同樣不滿意。

于是，發(fā)明人又回到1位無取代基的β-咔啉-3-甲酰衍生物的實驗摸索，經(jīng)過3年實驗研究，申請人發(fā)現(xiàn)用Orn-AA-NHCH₂C₆H₅替代AA-OBzl得到的β-咔啉-3-甲酰-Orn-AA-NHCH₂-C₆H₅不僅在0.1μmol/kg劑量下就具有明確的抗腫瘤作用，而且沒有胃刺激性/不期望的藥物代謝結(jié)果/水溶性差等問題。根據(jù)這個發(fā)現(xiàn)，發(fā)明人提出了本發(fā)明。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一個內(nèi)容是提供β-咔啉-3-甲酰-Orn-AA-NHCH₂C₆H₅(式中AA選自L-Arg， L-Asn，L-Asp，L-Glu，L-Gly，L-Ile，L-Leu，L-Met，L-Phe，L-Pro，L-Thr，L-Trp，L-Val殘基)。

本發(fā)明的第二個內(nèi)容是提供β-咔啉-3-甲酰-Orn-AA-NHCH₂C₆H₅(式中AA選自L-Arg，L-Asn，L-Asp，L-Glu，L-Gly，L-Ile，L-Leu，L-Met，L-Phe，L-Pro，L-Thr，L-Trp，L-Val殘基)的合成方法，該方法包括：

(1)L-色氨酸在稀硫酸催化下與甲醛進(jìn)行Pictet-Spengler縮合生成(3s)-四氫-β-咔啉-3-羧酸；

(2)(3s)-四氫-β-咔啉-3-羧酸轉(zhuǎn)化為(3s)-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯；

(3)(3s)-四氫-β-咔啉-3-羧酸甲酯用高錳酸鉀氧化為β-咔啉-3-羧酸甲酯；

(4)(3s)-β-咔啉-3-羧酸甲酯在2N NaOH水溶液中水解為β-咔啉-3-羧酸；

(5)β-咔啉-3-羧酸與L-Orn(Boc)-OBzl偶聯(lián)得到β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-OBzl；

(6)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-OBzl在2N NaOH溶液中水解為β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)；

(7)Boc-AA(式中AA選自L-Arg，L-Asn，L-Asp，L-Glu，L-Gly，L-Ile，L-Leu，L-Met，L-Phe，L-Pro，L-Thr，L-Trp和L-Val殘基)與芐胺偶聯(lián)得到Boc-AA-NHCH₂C₆H₅；

(8)Boc-AA-NHCH₂C₆H₅在氯化氫-乙酸乙酯溶液(4N)中脫Boc得到AA-NHCH₂C₆H₅；

(9)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)與AA-NHCH₂C₆H₅(式中AA選自L-Arg，L-Asn，L-Asp，L-Glu，L-Gly，L-Ile，L-Leu，L-Met，L-Phe，L-Pro，L-Thr，L-Trp和L-Val殘基)偶聯(lián)得到β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-AA-NHCH₂C₆H₅；

(10)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-AA-NHCH₂C₆H₅在氯化氫-乙酸乙酯溶液(4N)中脫Boc得到β-咔啉-3-甲酰-Orn-AA-NHCH₂C₆H₅。

本發(fā)明的第三個內(nèi)容是評價β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-AA-NHCH₂C₆H₅(式中AA選自L-Arg，L-Asn，L-Asp，L-Glu，L-Gly，L-Ile，L-Leu，L-Met，L-Phe，L-Pro，L-Thr，L-Trp，L-Val殘基)對荷S180小鼠腫瘤增長的抑制作用。

附圖說明

圖1.β-咔啉-3-甲酰-Orn-AA-NHCH₂C₆H₅的合成路線.i)HCHO，H₂O，H₂SO₄，65℃；ii)MeOH，SOCl₂，0℃；iii)丙酮，KMnO₄；iv)NaOH，H₂O，0℃；v)H-Orn(Boc)-OBzl，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)，1-羥基苯并三唑(HOBt)，N-甲基嗎啉(NMM)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；vi)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)，1-羥基苯并三唑(HOBt)，N-甲基嗎啉(NMM)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)；vii)氯化氫-乙酸乙酯溶液(4N)，0℃；7a-9a中AA＝L-Arg(NO₂)，7b-9b中AA＝L-Asn，7c-9c中AA＝L-Asp(OBzl)，7d-9d中AA＝L-Glu(OBzl)，7e-9e中AA＝L-Gly，7f-9f中AA＝L-Ile，7g-9g中AA＝L-Leu，7h-9h中AA＝L-Met，7i-9i中AA＝L-Phe，7j-9j中AA＝L-Pro，7k-9k中AA＝L-Thr，7l-9l中AA＝L-Trp，7m-9m中AA＝L-Val殘基)。

具體實施方式

為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。

實施例1制備(3s)-β-四氫咔啉-3-羧酸(1)

向200mL水緩慢加入0.1mL濃硫酸，攪拌10分鐘，往得到的稀硫酸中加入2.5g(12.2mmol)色氨酸，超聲震蕩將色氨酸完全溶解。再加往里加40％的甲醛溶液0.3mL，室溫反應(yīng)6h，冰浴下往反應(yīng)液中緩慢加入濃氨水，調(diào)pH至6。反應(yīng)液變渾濁，過濾，得2.2g(85％)標(biāo)題化合物，為無色粉末，ESI-MS(m/z)：205[M+H]⁺。

實施例2制備(3s)-β-四氫咔啉-3-羧酸甲酯(2)

將18mL甲醇和1.2mL二氯亞砜的溶液于冰浴下攪拌30min，之后，往里加750mg(3.2mmol)(3s)-β-四氫咔啉-3-羧酸，逐漸恢復(fù)到室溫并繼續(xù)反應(yīng)24h。TLC(二氯甲烷∶甲醇，20∶1)檢測反應(yīng)原料消失。反應(yīng)混合物減壓濃縮至干，殘留物再加甲醇，減壓濃縮至干，該操作重復(fù)3次。殘留物加入乙醚，減壓濃縮得到250mg(35％)標(biāo)題化合物，為黃色粉末。ESI-MS(m/e)：231[M+H]⁺。

實施例3制備β-咔啉-3-羧酸甲酯(3)

用50mL丙酮將230mg(1mmol)四氫咔啉-3-羧酸甲酯溶解，冰浴下往溶液中緩慢加100mg(1mmol)高錳酸鉀，室溫反應(yīng)4h。TLC(二氯甲烷∶甲醇，20：1)檢測反應(yīng)結(jié)束。反應(yīng)液過濾，濾液減壓濃縮旋干，濾餅再加丙酮溶解，減壓過濾，濾液濃縮至干，該操作重復(fù)3次，合并濾液，得到黃色油狀物柱層析分離純化(二氯甲烷∶甲醇，40∶1)，得到60mg(20％)標(biāo)題產(chǎn)物，為微黃色固體，ESI-MS(m/e)：227[M+H]⁺。

實施例4制備β-咔啉-3-羧酸(4)

將1g(4.7mmol)咔啉-3-羧酸甲酯用甲醇和水溶解，冰浴下往溶液加2N NaOH調(diào)pH 值為12。室溫反應(yīng)4h后，用鹽酸調(diào)pH值為7。反應(yīng)減壓回收甲醇，水相用飽和KHSO₄調(diào)pH值為4，有大量固體析出，過濾，得到222mg(23.4％)標(biāo)題產(chǎn)物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/e)：213[M+H]⁺。

實施例5制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-OBzl(5)

將500mg(2.36mmol)咔啉-3-羧酸用10mL DMF溶解，冰浴下依次加入250mg(1.85mmol)HOBt和500mg(2.56mmol)EDC攪拌30分鐘。之后，往里加800mg(2.48mmol)Orn(Boc)-OBzl，用NMM調(diào)反應(yīng)液pH值至8。室溫反應(yīng)過12h，TLC(二氯甲烷∶甲醇，15∶1)顯示反應(yīng)完畢后，反應(yīng)液減壓濃縮至干，殘留物加60mL乙酸乙酯溶解，依次用飽和NaHCO₃溶液洗3次和飽和NaCl溶液洗3次，乙酸乙酯層用無水Na₂SO₄干燥12h，過濾、濾液減壓濃縮至干，得到的黃色油狀物經(jīng)硅膠柱層析純化(二氯甲烷∶甲醇，30∶1)得到270mg(22％)標(biāo)題化合物，為淡黃色油狀物，ESI-MS(m/z)：367[M+H]⁺。

實施例6制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)(6)

將500mg(0.97mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-OBzl用甲醇和水溶解，冰浴下加4mL NaOH溶液(2N)，反應(yīng)4小時后TLC(二氯甲烷∶甲醇，10∶1)顯示反應(yīng)完畢，冰浴下向反應(yīng)液中滴加2N HCl溶液調(diào)pH到7，析出大量無色固體。該固體經(jīng)磚膠柱層析純化(二氯甲烷∶甲醇，8∶1)，得215mg(52％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：427[M+H]⁺。

實施例7制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-NHCH₂C₆H₅(9)

將426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)用10mL無水DMF溶解，冰浴下加入200mg(1.3mmol)的HOBt和450mg(2.2mmol)的EDC攪拌30分鐘后，之后，往里加入250mg(2.2mmol)的芐胺，用NMM調(diào)至pH為8。常溫反應(yīng)6h，TLC(二氯甲烷∶甲醇，30∶1)顯示反應(yīng)完畢，反應(yīng)液減壓濃縮至干，殘留物加60mL乙酸乙酯溶解，依次用飽和NaHCO₃溶液洗3次和飽和NaCl溶液洗3次，乙酸乙酯層用無水Na₂SO₄干燥12h，過濾、濾液減壓濃縮至干，得到的黃色油狀物經(jīng)硅膠柱層析純化(二氯甲烷∶甲醇，40∶1)得到310mg(60％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：517[M+H]⁺。

實施例8制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-NHCH₂C₆H₅(10)

將550mg(1.06mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-NHCH₂C₆H₅用5mL無水乙酸乙酯溶解，冰浴下攪拌往里加入15mL氯化氫-乙酸乙酯溶液(4N)，立即蓋上干燥管，冰浴下攪拌反應(yīng)1.5h，有黃色固體析出。TLC(二氯甲烷∶甲醇，20∶1)顯示反應(yīng)完畢后，將反應(yīng)液于37℃溫水浴下減壓濃縮至干，將殘留物用10mL無水乙醚減壓濃縮至干三次，得到 400mg(87％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：427[M+H]⁺.Mp：168-171℃；[α]_D²⁵＝-12.3(c＝0.18，甲醇)；IR：3236，3104，2977，1636，1625，1574，1489，1427，1244，1242，1152，872，765，719，602；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.07(s，1H)，8.95(s，1H)，8.83(s，1H)，8.73(d，J＝6Hz，1H)，8.39(d，J＝9Hz，1H)，7.78(m，2H)，7.30(m，2H)，6.79(s，1H)，4.49(s，1H)，4.41(d，J＝6Hz，1H)，2.93(q，J＝6Hz，2H)，1.81(m，2H)，1.47(m，2H)。

實施例9制備Boc-Arg(NO₂)-NHCH₂C₆H₅

將4.00g(12.54mmol)Boc-Arg用50mL THF溶解。冰浴下依次加入1.50g(11.11mmol)HOBt和2.50g(12.82mmol)DCC攪拌30min，之后，往里加1.50g(14.02mmol)芐胺，后用NMM調(diào)反應(yīng)液pH值至8。室溫反應(yīng)12h，TLC(二氯甲烷∶甲醇，5∶1)顯示反應(yīng)完畢后，反應(yīng)混合物減壓濃縮至干，殘留物加60mL乙酸乙酯溶解，過濾除去二環(huán)己基脲(DCU)，依次用飽和NaHCO₃溶液洗3次和飽和NaCl溶液洗3次，乙酸乙酯層用無水Na₂SO₄干燥12h，過濾、濾液減壓濃縮至干，得到的黃色油狀物經(jīng)硅膠柱層析純化(二氯甲烷∶甲醇，80∶1)，得到4.24g(產(chǎn)率83％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：409[M+H]⁺。

實施例10制備Arg(NO₂)-NHCH₂C₆H₅

將500mg(1.22mmol)Boc-Arg(NO₂)-NHCH₂C₆H₅用2mL無水乙酸乙酯溶解，冰浴下加入10mL氯化氫-乙酸乙酯溶液(4N)，立即蓋上干燥管，攪拌反應(yīng)1.5h，有黃色固體析出，TLC(二氯甲烷∶甲醇，20∶1)顯示反應(yīng)完畢后，將反應(yīng)液于37℃溫水浴下減壓濃縮至干，將殘留物用10mL無水乙醚減壓濃縮至干三次，得到210mg(56％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：309[M+H]⁺。

實施例11制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Arg(NO₂)-NHCH₂C₆H₅(7a)

將426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)用10mL無水DMF溶解，冰浴下依次加入100mg(0.74mmol)HOBt和400mg(2.05mmol)EDC攪拌30分鐘，之后，往里加350mg(1.14mmol)的Arg-NHCH₂C₆H₅，用NMM調(diào)至pH為8。室溫反應(yīng)12h，TLC(二氯甲烷∶甲醇，15∶1)顯示反應(yīng)完畢后，將反應(yīng)液濃縮至干，殘留物加60mL乙酸乙酯溶解，過濾除去不溶物，依次用飽和NaHCO₃溶液洗3次和飽和NaCl溶液洗3次，乙酸乙酯層用無水Na₂SO₄干燥12h，過濾、濾液減壓濃縮至干，得到的黃色油狀物經(jīng)硅膠柱層析純化(二氯甲烷∶甲醇，30∶1)，得到240mg(33％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：718[M+H]⁺。

實施例12制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Arg(NO₂)-NHCH₂C₆H₅(8a)

按照實施例8從200mg(0.28mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Arg(NO₂)-NHCH₂C₆H₅進(jìn) 行脫保護(hù)得到140mg(82％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體。ESI-MS(m/z)：618[M+H]⁺；Mp：136-138℃；[α]_D²⁵＝-27.7(c＝0.16，甲醇)；IR：3148，3031，2943，1650，1622，1524，1497，1458，1399，1337，1249，1115，1017，902，865，730，696，631，589；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.93(s，1H)，8.84(s，1H)，8.71(d，J＝8.1Hz，1H)，8.38(d，J＝7.8Hz，1H)，7.63(m，2H)，7.21(m，6H)，4.66(m，1H)，4.36(m，1H)，4.29(d，J＝5.7Hz，2H)，3.15(m，2H)，2.64(m，2H)，1.68(m，8H)，1.48(m，2H)。

實施例13制備Boc-Asn-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6的方法，由2.50g(10.07mol)的Boc-Asn和1.20g(11.21mol)的Benzylaminel得到2.12g(6.60mol)的Asn-NHCH₂C₆H₅(66％)的無色固體，即為標(biāo)題化合物，ESI-MS(m/z)：322[M+H]⁺

實施例14制備Asn-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從1.030g(3.19mmol)Boc-Asn-NHCH₂C₆H₅得到0.65g(92％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：222[M+H]⁺。

實施例15制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Asn-NHCH₂C₆H₅(7b)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到120mg(19％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：630[M+H]⁺。

實施例16制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Asn-NHCH₂C₆H₅(8b)

按照實施例8從400mg(0.63mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Asn-NHCH₂C₆H₅得到200mg(59％)標(biāo)題化合物，為淺黃色固體，ESI-MS(m/z)：530[M+H]⁺；Mp：168-169℃；[α]_D²⁵＝-10.3(c＝0.17，甲醇)；IR：3033，1632，1543，1512，1404，1357，1257，862，747，695，599；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：5/ppm＝12.08(s，1H)，8.93(s，1H)，8.93(s，1H)，8.80(d，J＝13.2Hz，1H)，8.76(d，J＝5.7Hz，1H)，8.64(m，2H)，7.60(m，2H)，7.29(m，7H)，4.59(m，2H)，4.30(m，2H)，2.93(m，2H)，2.55(m，2H)，1.47(m，4H)。

實施例17制備Boc-Asp(OBzl)-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6從3.20g(10.2mmol)Boc-Asp(OBzl)和1.12g(10.4mmol)芐胺得到2.50g(60％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：413[M+H]⁺。

實施例18制備Asp(OBzl)-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從2g(3.89mmol)Boc-Asp(OBzl)-NHCH₂C₆H₅得到1.35g(84％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：313[M+H]⁺。

實施例19制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH₂C₆H₅(7c)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到230mg(32％)標(biāo)題化 合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：721[M+H]⁺。

實施例20制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Asp(OBzl)-NHCH₂C₆H₅(8c)

按照實施例8從400mg(0.55mmol)β-咔啉-3-甲酰-Om(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH₂C₆H₅得到260mg(75％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：621[M+H]⁺；Mp：192-193℃；[α]_D²⁵＝-30.6(c＝0.18，甲醇)；IR：3283，3027，1649，1543，1496，1459，1382，1339，1300，1253，1128，1079，1016，961，894，730，697，631，599；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.01(s，1H)，8.94(s，1H)，8.85(s，1H)，8.81(m，2H)，8.55(m，2H)，8.44(m，1H)，7.60(m，2H)，7.14(m，10H)，4.69(m，2H)，4.29(d，J＝5.7Hz，2H)，4.22(d，J＝6Hz，2H)，2.65(m，4H)，1.72(m，5H)。

實施例21制備Boc-Glu(OBzl)-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6從3.50g(10.38mmol)Boc-Glu(OBzl)和1.12g(10.4mmol)芐胺得到1.50g(34％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：427[M+H]⁺。

實施例22制備Glu(OBzl)-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從1.030g(241mmol)Boc-Glu(OBzl)-NHCH₂C₆H₅得到0.752g(84％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：327[M+H]⁺。

實施例23制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Glu(OBzl)-NHCH₂C₆H₅(7d)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到100mg(15％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：735[M+H]⁺。

實施例24制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Glu(OBzl)-NHCH₂C₆H₅(8d)

按照實施例8從300mg(0.41mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Glu(OBzl)-NHCH₂C₆H₅得到230mg(88％)標(biāo)題化合物，為淺黃色固體，ESI-MS(m/z)：635[M+H]⁺；Mp：179-180℃；[α]_D²⁵＝-54.2(c＝0.14，甲醇)；IR：3272，2936，2360，2340，1723，1630，1525，1460，1340，1251，1011，899，695，631，602；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.05(s，1H)，8.93(s，1H)，8.84(s，1H)，8.79(m，1H)，8.70(d，J＝8.1Hz，1H)，8.52(m，1H)，8.37(m，2H)，7.62(m，2H)，7.24(m，10H)，5.06(s，2H)，4.62(m，1H)，4.39(m，1H)，4.28(d，J＝12Hz，2H)，3.52(m，2H)，2.93(m，2H)，2.50(m，2H)，2.39(m，2H)，1.91(m，4H)。

實施例25制備Boc-Gly-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6從1.75g(10.00mmol)Boc-Gly和1.12g(10.4mmol)芐胺得到1.80g(68％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：265[M+H]⁺。

實施例26制備Gly-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從1.80g(6.81mmol)Boc-Gly-NHCH₂C₆H₅得到1.00g(88％)標(biāo)題化合 物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：165[M+H]⁺。

實施例27制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Gly-NHCH₂C₆H₅(7e)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到188mg(43％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：573[M+H]⁺。

實施例28制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Gly-NHCH₂C₆H₅(8e)

按照實施例8從400mg(0.69mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Gly-NHCH₂C₆H₅得到300mg(91％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：473[M+H]⁺；Mp：156-157℃；[α]_D²⁵＝6(c＝0.10，甲醇)；IR：3058，2932，2151，1980，1738，1659，1633，1597，1551，1470，1431，1325，1205，1114，1012，850，753，669，583；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.00(s，1H)，8.93(s，1H)，8.81(s，1H)，8.73(d，J＝9Hz，1H)，8.50(t，J＝6Hz，1H)，8.39(m，2H)，7.63(m，2H)，7.26(m，6H)，6.82(m，1H)，4.62(m，1H)，4.35(d，J＝6Hz，2H)，2.93(m，2H)，1.75(m，2H)，1.43(m，2H)。

實施例29制備Boc-Ile-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6從1.31g(10.00mmol)Boc-Ile和1.12g(10.40mmol)芐胺得到2.60g(82％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：321[M+H]⁺。

實施例30制備Ile-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從2.6g(8.09mmol)Boc-Ile-NHCH₂C₆H₅得到1.4g(78％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：221[M+H]⁺。

實施例31制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Ile-NHCH₂C₆H₅(7f)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到230mg(產(chǎn)率44％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：629[M+H]⁺。

實施例32制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Ile-NHCH₂C₆H₅(8f)

按照實施例8從200mg(0.32mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Ile-NHCH₂C₆H₅得到160mg(94％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：529[M+H]⁺；Mp：160-163℃；[α]_D²⁵＝-12.4(c＝0.19，甲醇)；IR：3276，2964，1634，1544，1511，1453，1347，1258，1239，1179，1151，1080，1028，862，749，723，695，597；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.94(s，1H)，8.86(s，1H)，8.726(d，J＝9Hz，1H)，8.63(t，1H)，8.37(m，3H)，7.60(m，2H)，7.23(m，2H)，4.72(m，1H)，4.28(m，4H)，2.76(m，2H)，1，55(m，6H)，1.07(m，1H)，0.80(m，6H)。

實施例33制備Boc-Leu-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6從1.31g(10.00mmol)Boc-Leu和1.12g(10.40mmol)芐胺得到1.80g(56％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：321[M+H]⁺。

實施例34制備Leu-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從1.80g(5.63mmol)Boc-Leu-NHCH₂C₆H₅得到1.10g(88％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：221[M+H]⁺。

實施例35制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Leu-NHCH₂C₆H₅(7g)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到150mg(23％)的化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：629[M+H]⁺。

實施例36制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Leu-NHCH₂C₆H₅(8g)

按照實施例8從100mg(0.15mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Leu-NHCH₂C₆H₅得到55mg(69％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：529[M+H]⁺；Mp：143-147℃；[α]_D²⁵＝-10.5(c＝0.13，甲醇)；IR：3236，3030，2955，2360，1641，1522，1460，1338，1153，1017，866，747，667，605；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.95(s，1H)，8.84(s，1H)，8.70(d，J＝9Hz，1H)，8.53(m，1H)，8.39(d，J＝6Hz，2H)，7.64(m，2H)，7.29(m，6H)，4.75(m，1H)，4.40(m，1H)，4.29(d，J＝6Hz，2H)，2.69(m，2H)，1.81(m，2H)，1.51(m，6H)，0.86(m，6H)。

實施例37制備Boe-Met-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6從2.50g(10.04mmol)Boc-Met和1.12g(10.4mmol)芐胺得到1.70g(50％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：339[M+H]⁺。

實施例38制備Met-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從1.70g(5.03mmol)Boc-Met-NHCH₂C₆H₅得到0-85g(71％)標(biāo)題化合物，為黃色油狀物，ESI-MS(m/z)：239[M+H]⁺。

實施例39制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Met-NHCH₂C₆H₅(7h)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到140mg(22％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：647[M+H]⁺。

實施例40制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Met-NHCH₂C₆H₅(8h)

按照實施例8從100mg(0.15mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Met-NHCH₂C₆H₅得到70mg(80％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：547[M+H]⁺；Mp：180-182℃；[α]_D²⁵＝-6.1(c＝0.13，甲醇)；IR：3028，2919，1650，1633，1543，1512，1453，1350，1256，1113，1080，1027，862，751，726，697，598；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.94(d，J＝O.6Hz，1H)，8.85(d，J＝0.6Hz，1H)，8.73(d，J＝8.4Hz，1H)，8.60(m，2H)，8.38(d，J＝7.8Hz，1H)，7.61(m，2H)，7.26(m，6H)，4.70(m，1H)，4.38(m，1H)，4.25(m，2H)，2.76(m，2H)，2.44(m，2H)，2.00(s，3H)，1.64(m，6H)。

實施例41制備Boc-Phe-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6從2.65g(10.002mol)Boc-Phe和112g(10.40mmol)芐胺得到2.75g(78％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：355[M+H]⁺。

實施例42制備Phe-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從2.75g(7.76mmol)Boc-Phe-NHCH₂C₆H₅5得到1.75g(88％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：255[M+H]⁺。

實施例43制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Phe-NHCH₂C₆H₅(7i)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到240mg(36％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：663[M+H]⁺。

實施例44制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Phe-NHCH₂C₆H₅(8i)

按照實施例8從200mg(0.30mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Phe-NHCH₂C₆H₅得到155mg(90％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：563[M+H]⁺；Mp：189-192℃；[α]_D²⁵＝-8.2(c＝0.14，甲醇)；IR：3267，3028，2360，1632，1526，1495，1460，1341，1249，1080，1017，886，743，729，696，631；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝11.99(s，1H)，8.93(s，1H)，8.83(s，1H)，8.64(d，J＝6Hz，1H)，8.51(t，J＝6Hz，1H)，8.41(m，1H)，7.63(m，2H)，7.24(m，12H)，4.60(m，1H)，4.28(d，J＝6Hz，2H)，3.00(m，2H)，2.90(m，2H)，1.65(m，2H)，1.35(m，2H)。

實施例45制備Boc-Pro-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6從2.15g(10.00mmol)Boc-Pro和1.12g(10.40mmol)芐胺得到2.3g(76％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：305[M+H]⁺。

實施例46制備Pro-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從2.3g(7.57mmol)Boc-Pro-NHCH₂C₆H₅得到1.36g(88％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：205[M+H]⁺。

實施例47制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Pro-NHCH₂C₆H₅(7j)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到170mg(28％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：613[M+H]⁺。

實施例48制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Pro-NHCH₂C₆H₅(8j)

按照實施例8從150mg(0.24mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Pro-NHCH₂C₆H₅得到100mg(79％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：513[M+H]⁺；Mp：178-180℃；[α]_D²⁵＝-30(c＝0.14，甲醇)；IR：3261，1623，1523，1496，1435，1337，1251，1149，1091，1017，935，900，788，730，697，655，631，599；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝12.39(s，1H)，8.96(m，2H)，8.81(m，1I)，8.44(m，2H)，7.66(m，1H)，7.25(m，6H)，4.90(m，1H)，4.37(m，4H)， 3.74(m，2H)，2.81(m，2H)，1.86(m，9H)。

實施例49制備Boc-Thr-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6從2.19g(10.00mmol)Boc-Thr和1.12g(10.40mmol)芐胺得到1.90g(32％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：309[M+H]⁺。

實施例50制備Thr-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從1.90g(3.24mmol)Boc-Thr-NHCH₂C₆H₅得到0.55g(81％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：209[M+H]⁺。

實施例51制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Thr-NHCH₂C₆H₅(7k)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到100mg(16％)標(biāo)題化合物，為目標(biāo)化合物，ESI-MS(m/z)：617[M+H]⁺。

實施例52制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Thr-NHCH₂C₆H₅(8k)

按照實施例8從100mg(0.16mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Thr-NHCH₂C₆H₅得到40mg(44％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：517[M+H]⁺；Mp：170-172℃；[α]_D²⁵＝-5(c＝0.12，甲醇)；IR：3030，1651，1634，1539，1512，1453，1352，1257，1112，1027，864，752，725，698，597；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：6/ppm＝12.03(s，1H)，8.94(s，1H)，8.85(s，1H)，8.77(m，2H)，8.38(m，2H)，7.57(m，2H)，7.23(m，7H)，4.95(d，J＝4.8Hz，1H)，4.71(m，1H)，4.22(m，5H)，2.93(m，2H)，1.76(m，2H)，1.48(m，2H)，1.05(m，3H)。

實施例53制備Boc-Trp-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6從3.04g(10.00mmol)Boc-Trp和1.12g(10.40mmol)芐胺得到2.67g(68％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：394[M+H]⁺。

實施例54制備Trp-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從2.67g(6.79mmol)的Boc-Trp-NHCH₂C₆H₅得到1.30g(65％)標(biāo)題化合物，為灰色固體，ESI-MS(m/z)：294[M+H]⁺。

實施例55制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Trp-NHCH₂C₆H₅(71)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到180mg(29％)標(biāo)題化合物，為灰色固體，ESI-MS(m/z)：702[M+H]⁺。

實施例56制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Trp-NHCH₂C₆H₅(81)

按照實施例8從150mg(0.21mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Trp-NHCH₂C₆H₅得到110mg(85％)標(biāo)題化合物，為淡灰色固體，ESI-MS(m/z)：602[M+H]⁺；Mp：185-186℃；[α]_D²⁵＝-16.2(c＝0.12，甲醇)；IR：3225，3030，2923，1633，1539，1512，1454，1431，1350，1256，1231，1149，1099，1009，853，741，697，599；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝8.93(s，1H)， 8.83(s，1H)，8.67(d，J＝6Hz，1H)，8.45(m，3H)，7.63(m，3H)，7.20(m，9H)，4.65(m，2H)，4.26(d，J＝6Hz，2H)，3.18(m，1H)，3.18(m，1H)，3.0(m，1H)，2.91(m，2H)，1.69(m，2H)，1.40(m，2H)。

實施例57制備Boc-Val-NHCH₂C₆H₅

按照實施例6從2.17g(10.00mmol)Boc-Val和1.12g(10.40mmol)芐胺得到2.20g(72％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：307[M+H]⁺。

實施例58制備Val-NHCH₂C₆H₅

按照實施例10從2.20g(7.19mmol)Boc-Val-NHCH₂C₆H₅得到1.10g(74％)標(biāo)題化合物，為無色固體，ESI-MS(m/z)：207[M+H]⁺。

實施例59制備β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Val-NHCH₂C₆H₅(7m)

按照實施例12從426mg(1mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)得到245mg(40％)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/z)：614[M+H]⁺。

實施例60制備β-咔啉-3-甲酰-Orn-Val-NHCH₂C₆H₅(8m)

按照實施例8從200mg(0.32mmol)β-咔啉-3-甲酰-Orn(Boc)-Val-NHCH₂C₆H₅得到130mg(78％)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體，ESI-MS(m/z)：514[M+H]⁺；Mp：146-148℃；[α]_D²⁵＝-5(c＝0.16，甲醇)；IR：3251，2960，1629，1525，1496，1460，1339，1251，1017，900，729，696，631，590；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：8/ppm＝8.94(s，1H)，8.84(s，1H)，8.67(d，J＝6Hz，1H)，8.44(m，3H)，7.64(m，2H)，7.28(m，6H)，4.67(m，1H)，4.37(m，1H)，4.30(d，J＝6Hz，2H)，2.64(m，2H)，1.83(s，6H)，1.50(m，3H)，1.22(m，6H)。

實驗例1評價化合物8a-m的抗腫瘤活性

測定前將化合物10，8a-m和阿霉素溶于生理鹽水。無菌條件下取接種于ICR小鼠10天的S180肉瘤，加入適量生理鹽水配制成瘤細(xì)胞懸液，細(xì)胞數(shù)為2×10⁷/mL，接種于健康雄性ICR小鼠前肢腋皮下，每只小鼠注射0.2mL。腫瘤接種24h后，治療組10；8a-m小鼠每日口服灌胃0.2ml，連續(xù)給藥10天，劑量均為100nmol/kg?？瞻捉M小鼠每日腹腔注射0.2mL生理鹽水。以阿霉素(劑量為2μmol/kg)作陽性對照。實驗進(jìn)行至第11天，稱小鼠體重，并剖取各組小鼠的腫瘤稱重，最后統(tǒng)計各組動物的抑瘤率。實體瘤的療效以瘤重抑制百分率表示，計算如下：瘤重抑制率％＝(1-給藥組瘤重/空白組瘤重)×100％。以瘤重或百分抑瘤率表示化合物的活性，數(shù)據(jù)列入表1。

實驗觀察到8a，b，d，f，i，j，l在0.1μmol/kg劑量下顯示優(yōu)秀的抗腫瘤作用，其中0.1μmol/kg8b，l的抗腫瘤作用與2μmol/kg阿霉素的抗腫瘤作用相當(dāng)?？梢姡景l(fā)明具有意想不到的技術(shù)效果。

表18a-n對S180荷瘤小鼠的瘤重的影響

n＝12；a)與生理鹽水比p＜0.01；b)與生理鹽水比p＜0.01，與阿霉素比p＞0.05。