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半乳糖激酶啟動子和終止子及其應用的制作方法

文檔序號:12577496閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種半乳糖激酶啟動子,其特征在于:核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一種含有權利要求1所述的半乳糖激酶啟動子的核苷酸序列的DNA表達盒。

3.按照權利要求2所述的DNA表達盒,其特征在于:還含有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列作為終止子,其中SEQ ID NO:1所示的序列位于SEQ ID NO:2所示的序列的上游,SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2間為編碼目的基因的開放閱讀框架。

4.按照權利要求3所述的DNA表達盒,其特征在于:所述編碼目的基因的開放閱讀框架的cDNA序列具有如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。

5.一種包含權利要求2-4中任一項所述的DNA表達盒的重組載體。

6.按照權利要求5所述的重組載體,其特征在于:所述載體為游離型或者整合型載體。

7.按照權利要求6所述的重組載體,其特征在于:中所述整合型載體為農(nóng)桿菌介導的雙元表達載體,或者為攜帶有靶基因翼側1500-4000堿基同源重組臂的同源重組載體;所述同源重組載體骨架或所述游離型載體選自大腸桿菌克隆載體或酵母穿梭載體,優(yōu)選PZPK、pZP2000、pMD18-T、pUC18、pYES2c/t或pYX212。

8.一種包含權利要求5-7任一項所述的重組載體的宿主細胞。

9.按照權利要求8所述的宿主細胞,其特征在于:所述宿主細胞為大腸桿菌細胞或酵母細胞。

10.一種用于產(chǎn)油酵母遺傳表達的表達系統(tǒng),其特征在于:所述表達系統(tǒng)包含:

(1)能夠在紅冬孢酵母屬、鎖擲酵母屬、擲孢酵母屬和紅酵母屬菌株中表達的改良載體,所述改良載體通過在能夠在上述酵母屬中整合表達或游離表達的質粒中插入SEQ ID NO:1所示的啟動子序列和SEQ ID NO:2所示的終止子序列構建獲得,其中SEQ ID NO:1所示的啟動子序列位于SEQ ID NO:2所示的終止子序列的上游,SEQ ID NO:1所示的序列與SEQ ID NO:2所示的序列之間為多克隆位點,并且所述載體還包含選擇性標記基因;和

(2)目的基因開放閱讀框序列,其能夠可操作性地插入到(1)所述的改良載體中,并使所述目的基因與(1)所述的改良載體中的啟動子和終止子符合閱讀框的連接,和

(3)紅冬孢酵母屬、鎖擲酵母屬、擲孢酵母屬和紅酵母屬菌株。

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