1.一種穩(wěn)定表達(dá)H1N1流感病毒RNPs的Hela細(xì)胞株的構(gòu)建方法，包括以下步驟：
分別設(shè)計(jì)H1N1流感病毒核糖核蛋白R(shí)NPs的擴(kuò)增引物，PCR擴(kuò)增目的片段PB1、PB2、PA和NP，構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1/Zeo-PB1、pcDNA3.1/Hygro-PB2、pcDNA3.1/Neo-PA、pEF6/V5-HisA-NP；
提供Hela細(xì)胞，分別使用四種抗生素Zeocin、Hygromycin B、Geneticin、Blasticidin S HCl感染所述Hela細(xì)胞，獲取所述四種抗生素Zeocin、Hygromycin B、Geneticin、Blasticidin S HCl的最佳篩選濃度；
提供Hela細(xì)胞，將所述重組質(zhì)粒pcDNA3.1/Zeo-PB1、pcDNA3.1/Hygro-PB2、pcDNA3.1/Neo-PA、pEF6/V5-HisA-NP分次轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)H1N1流感病毒RNPs的Hela細(xì)胞株。
2.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定表達(dá)H1N1流感病毒RNPs的Hela細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于，所述H1N1流感病毒核糖核蛋白R(shí)NPs的擴(kuò)增引物分別為：
PB1上游引物：5’GCGAAGCTTATGGATGTCAATCCGACCT3’；
PB1下游引物：5’GCGGCGGCCGCCTATTTTTGCCGTCTGAGCTC3’；
PB2上游引物：5’GCGGGATCCATGGAAAGAATAAAAGAACTAA3’；
PB2下游引物：5’GCGGCGGCCGCCTAATTGATGGCCATCCGAAT3’；
PA上游引物：5’GCGGGATCCATGGAAGATTTTGTGCGA3’；
PA下游引物：5’GCGGCGGCCGCCTAACTCAATGCATGTGTAAG3’；
NP上游引物：5’ACAGAATTCATGGCGTCCCAAGGCACC3’；
NP下游引物：5’GCGGCGGCCGCTTAATTGTCGTACTCCTCTG3’。
3.如權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定表達(dá)H1N1流感病毒RNPs的Hela細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于，所述H1N1流感病毒核糖核蛋白R(shí)NPs的擴(kuò)增引物的酶切位點(diǎn)分別為：
PB1上游引物酶切位點(diǎn)：5’AAGCTT3’；
PB1下游引物酶切位點(diǎn)：5’GCGGCCGC3’；
PB2上游引物酶切位點(diǎn)：5’GGATCC3’；
PB2下游引物酶切位點(diǎn)：5’GCGGCCGC3’；
PA上游引物酶切位點(diǎn)：5’GGATCC3’；
PA下游引物酶切位點(diǎn)：5’GCGGCCGC3’；
NP上游引物酶切位點(diǎn)：5’GAATTC3’；
NP下游引物酶切位點(diǎn)：5’GCGGCCGC3’。
4.如權(quán)利要求1-3任一所述的穩(wěn)定表達(dá)H1N1流感病毒RNPs的Hela細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的方法為：
94℃,5min 1個(gè)循環(huán)；
94℃,0.5min；57℃，0.5min；72℃,2.5min 30個(gè)循環(huán)；
72℃,2min 1個(gè)循環(huán)。
5.如權(quán)利要求1-3任一所述的穩(wěn)定表達(dá)H1N1流感病毒RNPs的Hela細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于，使用四種抗生素Zeocin、Hygromycin B、Geneticin、Blasticidin S HCl感染所述Hela細(xì)胞的步驟中，感染順序依次為Zeocin、Hygromycin B、Geneticin和Blasticidin S HCl。
6.如權(quán)利要求5所述的穩(wěn)定表達(dá)H1N1流感病毒RNPs的Hela細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于，所述Zeocin、Hygromycin B、Geneticin(G418)、Blasticidin S HCl的最佳篩選濃度分別為：150ug/ml、300ug/ml、750ug/ml、2ug/ml。
7.如權(quán)利要求5所述的穩(wěn)定表達(dá)H1N1流感病毒RNPs的Hela細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于，將所述重組質(zhì)粒pcDNA3.1/Zeo-PB1、pcDNA3.1/Hygro-PB2、pcDNA3.1/Neo-PA、pEF6/V5-HisA-NP分次轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞的步驟中，轉(zhuǎn)染順序依次為pcDNA3.1/Zeo-PB1、pcDNA3.1/Hygro-PB2、pcDNA3.1/Neo-PA、pEF6/V5-HisA-NP。
8.如權(quán)利要求1-3任一所述的穩(wěn)定表達(dá)H1N1流感病毒RNPs的Hela細(xì)胞 株的構(gòu)建方法，其特征在于，還包括對(duì)獲得穩(wěn)定表達(dá)H1N1流感病毒RNPs的Hela細(xì)胞株的功能性表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證，所述驗(yàn)證采用含有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因的POL I系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)。