1.一種提高丁醇發(fā)酵總?cè)軇┊a(chǎn)量的方法,其特征在于包括以下步驟:
(1)將丁醇發(fā)酵菌的孢子液接種到RCM培養(yǎng)基中,得到發(fā)酵菌種子液;
(2)制備P2發(fā)酵培養(yǎng)基,其中初始發(fā)酵培養(yǎng)基中的總糖濃度為30-60g/L,pH自然;補(bǔ)料發(fā)酵培養(yǎng)基中的總糖濃度為70-100g/L,pH為7.0-9.0;
(3)在發(fā)酵罐中,預(yù)先裝入1/4-1/2發(fā)酵罐有效體積的初始發(fā)酵培養(yǎng)基,按照體積比2%-5%的接種量接入發(fā)酵菌種子液,當(dāng)發(fā)酵菌生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期,按照流加時(shí)間為16-24h勻減速流加剩余3/4-1/2發(fā)酵罐有效體積(V)的補(bǔ)料發(fā)酵培養(yǎng)基,流加結(jié)束后繼續(xù)發(fā)酵60-72h。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述的丁醇發(fā)酵菌為丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)或拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于:所述的丁醇發(fā)酵菌為丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum) ATCC 824,購(gòu)于美國(guó)模式菌種收集中心。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于:所述的丁醇發(fā)酵菌采用CN201410731297.9所述的拜氏梭菌CM20,其分類命名為拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii),已于2014年06月17日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,保藏編號(hào)為CGMCC No.9354。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟(1)所述的RCM培養(yǎng)基配方以g/L計(jì)為:蛋白胨10,牛肉粉10,酵母粉 3.0,葡萄糖 5,可溶性淀粉 1.0,氯化鈉5.0,醋酸鈉 3.0,L-半胱氨酸鹽酸鹽 0.5,瓊脂 0.5,以純水配置,115℃滅菌20min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法,其特征在于:步驟(1)所述的發(fā)酵菌種子液是在RCM培養(yǎng)基中接入丁醇發(fā)酵菌的孢子液,厭氧環(huán)境下于36-38℃下培養(yǎng)16-24h獲得的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟(2)所述的P2培養(yǎng)基為的配方以g/L計(jì)為:總糖60-80,酵母1.0,CH3COONH4 2.2,KH2PO4 0.5,K2HPO4 0.5,MnSO4 0.01,NaCl 0.01,MgSO4?7H2O 0.2,F(xiàn)eSO4 0.01,對(duì)氨基苯甲酸 0.001,維生素B1 0.001,生物素0.001e-3。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的方法,其特征在于:步驟(2)所述的糖為葡萄糖、蔗糖、木糖中的一種或幾種,或者使用纖維素、半纖維素的水解糖液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟(2)所述的發(fā)酵培養(yǎng)基制備好后,初始發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.0,補(bǔ)料發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為7.0-8.0。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或9所述的方法,其特征在于:步驟(2)調(diào)節(jié)pH采用有機(jī)堿三羥甲基氨基甲烷。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟(3)所述的初始發(fā)酵液在攪拌條件下,36-38℃厭氧培養(yǎng)18-24h后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟(3)的發(fā)酵過(guò)程中,發(fā)酵培養(yǎng)基中總糖的投放量不因批次補(bǔ)料的工藝的不同而產(chǎn)生變化,即使初始發(fā)酵培養(yǎng)基和補(bǔ)料發(fā)酵培養(yǎng)基的體積及糖濃度不同,但是總糖量為固定量,為60V-80V(g)。