本發(fā)明涉及一種新型抗腫瘤活性的藤黃酸類衍生物及其制備方法和應用，屬于藥物化學領域。
背景技術：
藤黃，為藤黃科植物藤黃所分泌的干燥樹脂，中醫(yī)傳統(tǒng)將其用于消腫、化毒、止血。近年來研究表明，藤黃還具有抗腫瘤作用，在臨床上用于治療乳腺癌、淋巴肉瘤、皮膚癌均取得一定療效，因此受到高度關注。
藤黃酸(gambogic acid，GA)為從中藥藤黃中分離得到的具有抗腫瘤活性的化合物，其具有抗瘤譜較廣、毒性較低的特點，能夠選擇性地殺死癌細胞，且對正常的造血系統(tǒng)和白細胞影響較小。該化合物與作為高效低毒的抗腫瘤藥物，可通過不同機制發(fā)揮抗腫瘤作用，包括誘導細胞周期阻滯和細胞凋亡，抑制端粒酶和拓撲異構酶活性，抗腫瘤血管生成和腫瘤轉移，逆轉多藥耐藥等。然而，藤黃酸還存在水溶性較差、易降解、且生物利用度較低等亟待改善的不足。為此，科學家們對藤黃酸類衍生物的開發(fā)表現(xiàn)出濃厚的興趣，對此類化合物的探索也不斷深入。
本發(fā)明在充分認識已有化合物活性的基礎上，設計合成了多種藤黃酸類衍生物，并對其進行抗腫瘤生物活性研究，獲得改善的抗腫瘤化合物。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供通式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽：
其中，R1為H或選自任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基-、C2-6烯基-、C3-10環(huán)烷基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基、C6-14芳基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基-、-C(＝O)Rb、-S(＝O)2Rb；
R2選自O、S、OH、SH或任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基氧基-、C2-6烯基氧基-、C3-10環(huán)烷基氧基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基氧基-、C6-14芳基氧基-、 包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基氧基-、C1-6烷基硫基-、C2-6烯基硫基-、C3-10環(huán)烷基硫基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基硫基-、C6-14芳基硫基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基硫基-、-OC(＝O)Rb、-OS(＝O)2Rb，R2與C-12間的表示單鍵或雙鍵，其中當R2為O或S時，其與C-12形成雙鍵，當R2為以上定義中的其它基團時，其與C-12形成單鍵；
R3選自F、Cl、Br、I、OH、SH、CN或任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基-、C2-6烯基-、C3-C10環(huán)烷基-、NRcRd、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基-、C6-14芳基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基-、-C(＝O)Rb、-S(＝O)2Rb、-OC(＝O)Rb、-OS(＝O)2Rb；
R4選自-CHO、-CH＝N-OR5、-CH＝N-OC(＝O)-R6、-CH＝N-OC(＝O)O-R7、-CH＝N-OC(＝O)-NH-R8、-C(＝O)O-N＝CH-R9；
R5選自H、OH或任選被一個或多個Ra取代的C1-6烷基氧基-；連接R5的C-4與C-3間的表示單鍵或雙鍵，其中當R5為H時，C-4與C-3形成雙鍵，當R5不為H時，C-4與C-3形成單鍵；
Ra獨立地選自F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、＝O、NRcRd、C1-6烷基-、C2-6烯基-、C3-C10環(huán)烷基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基-、C6-14芳基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基-、C1-6烷基氧基-、C2-6烯基氧基-、C3-C10環(huán)烷基氧基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基氧基-、C6-14芳基氧基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基氧基-、-C(＝O)Rb、-S(＝O)2Rb；
Rb選自任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基-、C2-6烯基-、C3-10環(huán)烷基-、NRcRd、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基-、C6-14芳基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基-；
Rc和Rd相互獨立地選自H或任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基-、C2-6烯基-、C3-10環(huán)烷基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基-、C6-14芳基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基-。
根據(jù)本發(fā)明，R1優(yōu)選為H或任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基-、C2-6烯基-、C3-10環(huán)烷基-、-C(＝O)Rb、-S(＝O)2Rb；
R2優(yōu)選選自O、S、OH、SH或任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基氧基-、C2-6烯基氧基-、C3-C10環(huán)烷基氧基-、C1-6烷基硫基-、C2-6烯基硫基-、C3-C10環(huán)烷基硫基-、-OC(＝O)Rb、-OS(＝O)2Rb，R2與C-12間的表示單鍵或雙鍵，其中當R2為O或S時，其與C-12形成雙鍵，當R2為其它基團時，其與C-12形成單鍵；
R3優(yōu)選選自F、Cl、Br、I、OH、SH、CN或任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基-、C2-6烯基-、C3-10環(huán)烷基-、NRcRd、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基-、C6-14芳基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基-、-C(＝O)Rb、-S(＝O)2Rb、-OC(＝O)Rb、-OS(＝O)2Rb。
根據(jù)本發(fā)明，R1更優(yōu)選為H或任選被一個或多個Ra取代的C1-6烷基-、-C(＝O)Rb、-S(＝O)2Rb；
R2更優(yōu)選選自O、S、OH、SH或任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基氧基-、C1-6烷基硫基-、-OC(＝O)Rb、-OS(＝O)2Rb，R2與C-12間的表示單鍵或雙鍵，其中當R2為O或S時，其與C-12形成雙鍵，當R2為其它基團時，其與C-12形成單鍵；
R3更優(yōu)選選自F、Cl、Br、OH、SH或任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基-、C3-10環(huán)烷基-、NRcRd、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基-、C6-14芳基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基-、-OC(＝O)Rb、-OS(＝O)2Rb；
可選地，R1選自H、C1-6烷基-或者被一個或多個Ra取代的C1-6烷基-；
R2選自O、-OH或者C1-6烷基-；
R3選自任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基-、C3-10環(huán)烷基-、NRcRd、包含1-3個選自N、 O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基-、C6-14芳基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基-或者-OC(＝O)Rb、-OS(＝O)2Rb。
根據(jù)本發(fā)明，通式(I)化合物可以選自下式(I’)和(I”)所示的化合物：
其中，基團R1至R5各自獨立地選自通式(I)中的定義。
根據(jù)本發(fā)明，通式(I)化合物還可以示例性地選自下式(II’)～(VII’)及式(II”)～(VII”)所示的化合物：
其中，R1～R2和R5分別獨立地選自上述通式(I)中的定義，R3選自F、Cl、Br、I、OH、SH、CN或任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基-、C2-6烯基-、C3-C10環(huán)烷基-、NRcRd、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基-、C6-14芳基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基-、-C(＝O)Rb、-S(＝O)2Rb、-OC(＝O)Rb、-OS(＝O)2Rb；
R6、R7、R8、R9、R10彼此獨立地選自H、-C(＝O)Rb、-S(＝O)2Rb、任選被一個或多個Ra取代的C1-6烷基-、C2-6烯基-、C3-10環(huán)烷基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基-、C6-14芳基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基-；
Ra、Rb、Rc、Rd分別獨立地具有上述通式(I)中的定義。
優(yōu)選地，本發(fā)明通式(I)、(I’)、(I”)、(II’)～(VII’)及(II”)～(VII”)所示的化合物包括其光學純化合物、立體異構體混合物或其藥學上可接受的鹽。
術語定義和解釋
術語“C1-6烷基”應理解為優(yōu)選表示具有1、2、3、4、5或6個碳原子的線性的或支化的飽和一價烴基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基、異戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基或它們的異構體。特別地，所述基團具有1、2、3或4個 碳原子(“C1-4烷基”)，例如甲基、乙基、丙基、丁基、異丙基、異丁基、仲丁基、叔丁基，更特別地，所述基團具有1、2或3個碳原子(“C1-3烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或異丙基。
術語“C2-6烯基”應理解為優(yōu)選表示線性的或支化的一價烴基，其包含一個或多個雙鍵并且具有2、3、4、5或6個碳原子，特別是2或3個碳原子(“C2-3烯基”)，應理解，在所述烯基包含多于一個雙鍵的情況下，所述雙鍵可相互分離或者共軛。所述烯基是例如乙烯基、烯丙基、(E)-2-甲基乙烯基、(Z)-2-甲基乙烯基、(E)-丁-2-烯基、(Z)-丁-2-烯基、(E)-丁-1-烯基、(Z)-丁-1-烯基、戊-4-烯基、(E)-戊-3-烯基、(Z)-戊-3-烯基、(E)-戊-2-烯基、(Z)-戊-2-烯基、(E)-戊-1-烯基、(Z)-戊-1-烯基、己-5-烯基、(E)-己-4-烯基、(Z)-己-4-烯基、(E)-己-3-烯基、(Z)-己-3-烯基、(E)-己-2-烯基、(Z)-己-2-烯基、(E)-己-1-烯基、(Z)-己-1-烯基、異丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(E)-1-甲基丙-1-烯基、(Z)-1-甲基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、(E)-2-甲基丁-2-烯基、(Z)-2-甲基丁-2-烯基、(E)-1-甲基丁-2-烯基、(Z)-1-甲基丁-2-烯基、(E)-3-甲基丁-1-烯基、(Z)-3-甲基丁-1-烯基、(E)-2-甲基丁-1-烯基、(Z)-2-甲基丁-1-烯基、(E)-1-甲基丁-1-烯基、(Z)-1-甲基丁-1-烯基、1,1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基、1-異丙基乙烯基。
術語“C3-10環(huán)烷基”應理解為表示飽和的一價單環(huán)或雙環(huán)烴環(huán)，其具有3、4、5、6、7、8、9或10個碳原子。所述C3-10環(huán)烷基可以是單環(huán)烴基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基或環(huán)癸基，或者是雙環(huán)烴基如十氫化萘環(huán)。
術語“3-10元雜環(huán)烷基”意指飽和的一價單環(huán)或雙環(huán)烴環(huán)，其包含1-3個選自N、O和S雜原子。所述雜環(huán)烷基可以通過所述碳原子中的任一個或氮原子(如果存在的話)與分子的其余部分連接。特別地，所述雜環(huán)烷基可以包括但不限于：4元環(huán)，如氮雜環(huán)丁烷基、氧雜環(huán)丁烷基；5元環(huán)，如四氫呋喃基、二氧雜環(huán)戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元環(huán)，如四氫吡喃基、哌啶基、嗎啉基、二噻烷基、硫嗎啉基、哌嗪基或三噻烷基；或7元環(huán)，如二氮雜環(huán)庚烷基環(huán)。任選地，所述雜環(huán)烷基可以是苯并稠合的。所述雜環(huán)基可以是雙環(huán)的，例如但不限于5,5元環(huán)，如六氫環(huán)戊并[c]吡咯-2(1H)-基環(huán)，或者5,6元雙環(huán)，如六氫吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基環(huán)。所述含氮原子環(huán)可以是部分不飽和的，即它可以包含一個或多個雙鍵，例如但不限于2,5-二氫-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氫噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基環(huán)，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氫異喹啉基環(huán)。
術語“C6-14芳基”應理解為優(yōu)選表示具有6、7、8、9、10、11、12、13或14個碳原子的一價芳香性或部分芳香性的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)烴環(huán)(“C6-14芳基”)，特別是具有6個碳原子的環(huán)(“C6芳基”)，例如苯基；或聯(lián)苯基，或者是具有9個碳原子的環(huán)(“C9芳基”)，例如茚滿基或茚基，或者是具有10個碳原子的環(huán)(“C10芳基”)，例如四氫化萘基、二氫萘基或萘基，或者是具有13個碳原子的環(huán)(“C13芳基”)，例如芴基，或者是具有14個碳原子的環(huán)(“C14芳基”)，例如蒽基。
術語“5-14元雜芳基”應理解為包括這樣的一價單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)芳族環(huán)系，其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個環(huán)原子，特別是5或6或9或10個碳原子，且其包含至少一個可以相同或不同的雜原子(所述雜原子是例如氧、氮或硫)，并且，另外在每一種情況下可為苯并稠合的。特別地，雜芳基選自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、異噁唑基、異噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻-4H-吡唑基等以及它們的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、異吲哚基等；或吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它們的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、異喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它們的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、 喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。
除非另有說明，所述雜芳基或亞雜芳基包括其所有可能的異構形式，例如其位置異構體。因此，對于一些說明性的非限制性實例，術語吡啶基或亞吡啶基包括吡啶-2-基、亞吡啶-2-基、吡啶-3-基、亞吡啶-3-基、吡啶-4-基和亞吡啶-4-基；或者，術語噻吩基或亞噻吩基包括噻吩-2-基、亞噻吩-2-基、噻吩-3-基和亞噻吩-3-基。
術語“取代的”意指所指定的原子上的一個或多個氫被所列出基團取代，條件是未超過所指定的原子在當前情況下的正常原子價并且所述取代形成穩(wěn)定的化合物。取代基和/或變量的組合僅僅當這種組合形成穩(wěn)定的化合物時才是允許的。
術語“任選被……取代”指可以無取代或被所列出的基團取代。
環(huán)系的取代基指與芳族或非芳族環(huán)系連接的取代基，例如所述取代基代替所述環(huán)系上可用的氫。
本發(fā)明各通式化合物的取代基定義中使用的術語“一次或多次”應理解為包括一次、兩次、三次、四次或五次，特別是一次、兩次、三次或四次，更特別是一次、兩次或三次，例如一次或兩次。
本發(fā)明還提供式(I)所示藤黃酸類衍生物或其藥學上可接受的鹽的制備方法，包括選自下列的一個或多個步驟的組合：
步驟1)：
可通過本領域已知的方法，例如經過酯化、還原、氧化反應，由化合物(a)制備化合物(b)。其中：
在酯化反應中，優(yōu)選在催化劑如1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)的存在下，將化合物(a)與醇(例如C1-12的醇)反應以制備化合物(a)的酯；
在還原反應中，將化合物(a)的酯在還原劑的存在下反應，得到相應的還原產物，所受還原劑優(yōu)選二異丁基氫化鋁；
在氧化反應中，將還原產物在氧化劑的存在下反應，得到化合物(b)。
作為示例，可通過例如申請?zhí)?01310682918.4、公開號CN103613602A的中國發(fā)明專利說明書第[0004]至[0019]段記載的方法進行，該申請全文記載的內容并入本申請發(fā)明內容。
根據(jù)本發(fā)明具體的實施方案，步驟1)包括以下步驟a)～c)：
a)：在催化劑的作用下，化合物(a)(如藤黃酸)與醇類(如甲醇)縮合得到化合物(a)的酯(如藤黃酸酯)；
反應溫度可以為例如-30℃～30℃，反應優(yōu)選在有機溶劑中和氮氣保護下進行，有機溶劑優(yōu)選二氯甲烷，催化劑優(yōu)選1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)和/或4-二甲氨基吡啶(DMAP)；
b)：在有機溶劑中化合物(a)的酯在還原劑的存在下反應，得到相應的還原產物；
反應溫度可以為例如-78℃～-40℃，反應優(yōu)選在有機溶劑中進行，有機溶劑優(yōu)選為二氯甲烷，還原劑為二異丁基氫化鋁；
c)：步驟b)的還原產物在氧化劑的存在下反應，得到化合物(b)；
反應溫度可以為例如-30℃～30℃，反應優(yōu)選在有機溶劑中進行，有機溶劑優(yōu)選為二氯甲烷，氧化劑優(yōu)選四甲基哌啶氧化物(TEMPO)和/或二乙酸碘苯(BAIB)。
如果需要，進行步驟2)：
其中，所述氧化通過本領域已知的任何合適反應進行。作為實例，所述氧化可以選自例如奧本奧爾氧化(Oppenauer Oxidation，氧化劑為Al(O-i-Pr)3/丙酮)、戴斯-馬丁氧化反應(Dess-Martin Oxidation，氧化劑為戴斯-馬丁過碘烷或DMP)或斯文氧化反應(Swern Oxidation，氧化劑為DMSO)；
或
其中，所述醚化通過本領域已知的任何合適方法進行。作為實例，所述醚化可以通過脫水反應或威廉遜合成法(Williamson Synthesis)進行。例如將化合物(b)與醇或硫醇在酸存在下脫水，或將化合物(b)轉化為醇鈉或硫醇鈉化合物后與鹵代化合物(如鹵代烷烴)反應。
步驟3)：
其中，所述反應優(yōu)選在堿性條件下進行；更優(yōu)選地，所述反應在堿的存在下進行；
步驟4)：
其中，各反應優(yōu)選在堿性條件下進行；更優(yōu)選地，所述反應在堿的存在下進行；
或
所述反應優(yōu)選在催化劑1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)和/或堿的存在下進行；
或者使用相同的方法，由下列化合物(e”)和(f”)制備相應的化合物(III”)～(VII”)：
以及，步驟5)：
任選地，將步驟1)～4)所得的化合物與適當?shù)乃峄驂A反應制備其藥學上可接受的鹽；
其中，R1～R3、R5至R10分別具有獨立選自通式(I)中的定義；
R2a選自OH或SH；
R2b選自O或S；
R2c選自任選被一個或多個Ra取代的下列基團：C1-6烷基氧基-、C2-6烯基氧基-、C3-C10環(huán)烷基氧基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基氧基-、C6-14芳基氧基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基氧基-、C1-6烷基硫基-、C2-6烯基硫基-、C3-C10環(huán)烷基硫基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基硫基-、C6-14芳基硫基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基硫基-、-OC(＝O)Rb、-OS(＝O)2Rb，其中Ra和Rb獨立選自式(I)定義的基團；
X選自氯、溴或者碘；
Z選自氫、氯或者溴。
在本發(fā)明的制備方法中，如果需要，可以使用本領域的任何合適的方法將具有反應活性的基團保護后再進行反應。作為實例，可用作醇羥基保護基的可以為例如乙酰基、2-甲氧基乙氧甲基醚基、甲氧甲基醚基、對甲氧基芐基醚、特戊酰基、四氫吡喃等；可用作氨基保護基的可以為例如芐氧羰基、叔丁氧羰基、芐基、對甲氧苯基等；可用作羰基保護基的可以為例如縮醛與縮酮、偕二酸酯、二噻烷等；可用作羧基保護基的可以為甲基酯基、芐基酯基、叔丁基酯基、硅基酯基等。
例如，可將步驟1)化合物(a)的R2b基團保護，再經過酯化、還原、脫保護反應，得到化合物(c)。
上述各步驟可以在合適的溶劑存在下進行。所述溶劑是在反應條件下呈惰性的任何有機溶劑，包括選自例如下列的一種或多種的混合物：酮，例如丙酮和甲基乙基酮；無環(huán)醚和環(huán)醚，例如乙醚和四氫呋喃；酯，例如乙酸乙酯或者乙酸丁酯；碳氫化合物，例如苯、甲苯、二甲苯、己烷和環(huán)己烷；氯化烴，例如一氯甲烷、二氯甲烷、三氯甲烷、1,2-二氯乙烷和氯苯；醇，例如甲醇、乙醇、正-丙醇、異丙醇，正-丁醇或者叔-丁醇；或者其它的溶劑，例如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙腈或者吡啶；
所述堿可以為有機堿、無機堿或其混合物，例如選自堿金屬或者堿土金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽，例如碳酸鋰、碳酸鈉，碳酸鉀、碳酸鈣、碳酸銫、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈣；堿金屬醇鹽，例如叔-丁醇鈉或者叔丁醇鉀；堿金屬氫化物，例如氫化鈉或者氫化鉀；氨化物，例如雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰、雙(三甲基甲硅烷基)氨基鉀或者二異丙基氨基鋰(LDA)；有機胺，例如三乙胺、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶、N,N-二異丙基乙胺、1,5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]癸-7-烯(DBU)、吡啶或者4-N,N-二甲基氨基吡啶；或者磷腈堿三乙胺、吡啶、哌啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)；
所述堿具體可以選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸銫、碳酸氫鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉中的一種或多種的混合物；
其中，所述酸可以為有機酸、無機酸或其混合物，例如選自下列的一種或多種：羧酸，如乙酸或者三氟乙酸；磺酸，例如甲磺酸、三氟甲磺或者對-甲苯磺酸；鹽酸、硫酸、磷酸、膦酸或者磷酸。
上述各步驟可獨立地在合適的溫度，例如-30℃～30℃(如室溫)下進行。
作為實例，本發(fā)明化合物可通過選自下列一個或多個步驟的組合制備：
其中，R1～R3和R5各自獨立選自通式(I)中的定義；
R6、R7、R8、R9、R10彼此獨立地選自H、-C(＝O)Rb、-S(＝O)2Rb、任選被一個或多個Ra取代的C1-6烷基-、C2-6烯基-、C3-10環(huán)烷基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的3-10元雜環(huán)烷基-、C6-14芳基-、包含1-3個選自N、O和S雜原子的5-14元雜芳基-。
作為實例，本發(fā)明化合物的制備方法包括選自下列的一個或多個步驟組合：
步驟a)：在有機溶劑中，氮氣保護下，在氧化劑的作用下，化合物8氧化得到化合物2；有機溶劑 優(yōu)選二氯甲烷，氧化劑優(yōu)選為(1,1,1-三乙酰氧基)-1,1-二氫-1,2-苯碘酰-3(1H)-酮(Dess-Martin氧化劑，DMP)；
步驟b)：在有機溶劑中，氮氣保護下，在堿的作用下，化合物9與鹽酸羥胺反應得到化合物10；有機溶劑優(yōu)選為乙醇，堿優(yōu)選為吡啶、三乙胺；
步驟c)：在有機溶劑中，在堿的作用下，化合物10與鹵代烴反應，得到肟醚類化合物3；有機溶劑優(yōu)選為四氫呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF)；堿優(yōu)選為氫氧化鈉(NaOH)、氫化鈉(NaH)等；
步驟d)：在有機溶劑中，在堿和催化劑的作用下，化合物10與酰氯或者羧酸反應，得到相應的肟酯類化合物4；有機溶劑優(yōu)選為二氯甲烷(DCM)；所述的堿可以是有機堿和無機堿，優(yōu)選為吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、氫氧化鈉等，催化劑優(yōu)選1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)；
步驟e)：在有機溶劑中，在堿的作用下，化合物10與氯甲酸酯反應，得到相應的碳酸肟酯類化合物5；有機溶劑優(yōu)選為二氯甲烷(DCM)；所述的堿可以是有機堿和無機堿，優(yōu)選為吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、氫氧化鈉等；
步驟f)：在有機溶劑中，在堿的作用下，化合物10與取代異氰酸酯反應，得到相應的碳酰胺肟酯類化合物6；有機溶劑優(yōu)選為二氯甲烷(DCM)；所述的堿可以是有機堿和無機堿，優(yōu)選為吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、三乙胺等；
步驟g)：在-30℃～30℃(如室溫)條件下，在有機溶劑中，在堿和催化劑的作用下，藤黃酸與各種肟反應，得到相應的藤黃酸肟酯類化合物7；有機溶劑優(yōu)選為二氯甲烷(DCM)；所述的堿可以是有機堿和無機堿，優(yōu)選為吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、氫氧化鈉等，催化劑優(yōu)選1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)。
根據(jù)本發(fā)明，本領域技術人員還可將上述制備方法中各步驟1)～5)及各步驟a)～g)中任意的一個或多個步驟及其具體條件進行結合或組合，或與本領域技術人員公知的步驟及具體條件進行結合或組合，所得到的方法同樣應當包含在本發(fā)明的范圍內。
本發(fā)明還提供包含一種或多種本發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物?？衫眠@些組合物通過向有此需要的患者給藥來實現(xiàn)期望的藥理學作用。就本發(fā)明的目的而言，患者是需要治療具體病癥或疾病的包括人在內的哺乳動物。因此，本發(fā)明包括這樣的藥物組合物，其包含藥學上可接受的載體和藥學有效量的本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽。
藥學上可接受的載體優(yōu)選是這樣的載體，其在與活性成分的有效活性一致的濃度下對患者相對無毒且無害，以致于由所述載體引起的任何副作用不會破壞所述活性成分的有益作用?；衔锘蚱渌帉W上可接受的鹽的藥學有效量優(yōu)選是對正在治療的具體病況產生結果或者產生影響的量。可使用包括速釋、緩釋和定時釋放制劑在內的任意有效的常規(guī)劑量單位形式，將本發(fā)明的化合物與本領域公知的藥學上可接受的載體一起以如下方式給藥：口服、腸胃外、局部、鼻腔、眼部、舌下、直腸、陰道給藥等。
對于口服給藥，可將所述化合物或其藥學上可接受的鹽配制成固體或液體制劑，例如膠囊劑、丸劑、片劑、含錠劑(troche)、錠劑(lozenge)、熔膠劑(melt)、散劑、溶液劑、混懸劑或乳劑，并且可根據(jù)本領域已知的用于制備藥物組合物的方法來制備。固體單位劑型可為膠囊劑，其可為普通的硬膠囊型或軟膠囊型，包含例如表面活性劑、潤滑劑和惰性填充劑(例如乳糖、蔗糖、磷酸鈣和玉米淀粉)。
在另一實施方案中，可將本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽和常規(guī)片劑基質(例如乳糖、蔗糖和玉米淀粉)一起并與如下物質組合壓制成片劑：粘合劑(例如阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠)、用于輔助給藥后片劑的分解和溶出的崩解劑(例如土豆淀粉、藻酸、玉米淀粉和瓜爾膠、黃蓍樹膠、阿 拉伯膠)、用于提高片劑制粒的流動性并且防止片劑材料與片劑模具和沖頭的表面粘附的潤滑劑(例如滑石、硬脂酸或硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或硬脂酸鋅)、染料、著色劑，以及用于改善片劑的感官性質并使它們更容易被患者接受的調味劑(例如薄荷油、冬青油或櫻桃香精)。用于口服液體劑型的適合的賦形劑包括磷酸二鈣和稀釋劑，例如水和醇(例如乙醇、苯甲醇和聚乙烯醇)，添加或不添加藥學上可接受的表面活性劑、助懸劑或乳化劑?？梢源嬖诟鞣N其它物質作為包衣或者用于改變劑量單位的物理形式。例如可用蟲膠、糖或二者將片劑、丸劑或膠囊劑包衣。
還可將本發(fā)明的化合物以所述化合物的注射劑量進行腸胃外給藥，即皮下、靜脈內、眼內、滑膜內、肌內或腹膜內給藥，所述注射劑量優(yōu)選在含有藥物載體的生理學可接受的稀釋劑中，所述藥物載體可為無菌液體或液體的混合物，所述液體例如水，鹽水，葡萄糖水溶液和相關的糖溶液，醇例如乙醇、異丙醇或十六醇，二醇例如丙二醇或聚乙二醇，甘油縮酮例如2,2-二甲基-1,1-二氧戊環(huán)-4-甲醇，醚例如聚乙二醇400(PEG400)，油，脂肪酸，脂肪酸酯或脂肪酸甘油酯或乙酰化脂肪酸甘油酯，所述稀釋劑添加或不添加有藥學上可接受的表面活性劑，例如肥皂或洗滌劑，助懸劑例如果膠、卡波姆、甲基纖維素、羥丙甲纖維素或羧甲基纖維素，或乳化劑和其它藥學輔劑。
用于腸胃外制劑的示例性表面活性劑是聚乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯類，例如脫水山梨糖醇單油酸酯，以及環(huán)氧乙烷與疏水性基質的高分子量加合物，所述疏水性基質由環(huán)氧丙烷和丙二醇縮合形成。
還可將本發(fā)明的組合物以用于藥物的直腸給藥的栓劑的形式給藥?？赏ㄟ^將藥物與在常溫下為固體但是在直腸溫度下為液體并且因此可在直腸中溶化而釋放所述藥物的適合的無刺激性的賦形劑混合來制備這些組合物。此類物質是例如可可脂和聚乙二醇。
用于腸胃外給藥的控釋制劑包括本領域已知的脂質體微球、聚合物微球和聚合物凝膠制劑。
可能需要或必須通過機械遞送裝置將所述藥物組合物遞送至患者。用于遞送藥劑的機械遞送裝置的構造和用途是本領域公知的。例如將藥物直接給藥至腦的直接技術通常涉及將藥物遞送導管置入患者的腦室系統(tǒng)以繞過血腦屏障。
可將本發(fā)明的化合物作為單一藥劑給藥或者與一種或多種其它藥劑組合給藥，其中所述組合不會引起不可接受的不良反應。本發(fā)明還涉及此類組合。例如，可將本發(fā)明的化合物與已知的化療劑或抗癌劑(例如抗過度增殖性疾病或其它適應癥的藥劑等)以及與它們的混合物和組合進行組合。其它適應癥藥劑包括但不限于抗血管生成劑、有絲分裂抑制劑、烷化劑、抗代謝劑、DNA-嵌入抗生素、生長因子抑制劑、細胞周期抑制劑、酶抑制劑、拓撲異構酶抑制劑、生物應答調節(jié)劑或抗激素。
一般而言，將細胞毒性劑和/或細胞抑制劑與本發(fā)明的化合物或組合物組合使用會起到以下作用：
(1)與單獨給藥任一種藥劑相比在減少腫瘤生長或者甚至消除腫瘤方中產生更好的功效，
(2)允許給藥更少量的所給藥的化療藥劑，
(3)提供化療劑治療，其被患者良好地耐受并且具有的有害藥理學并發(fā)癥比在單一藥劑化療和某些其它組合療法中所觀察到的少，
(4)允許治療范圍更廣的哺乳動物(特別是人)的不同癌癥類型，
(5)提供受治療患者中更高的響應，
(6)與標準的化療治療相比提供受治療患者中更長的存活時間，
(7)提供更長的腫瘤發(fā)展時間，和/或
(8)與其它癌癥藥劑組合產生拮抗效應的已知情況相比，得到至少與單獨使用的藥劑一樣好的功效和耐受性。
本發(fā)明的另一方面提供如上文所述的化合物用于制備治療或預防疾病的藥物組合物的用途。
所述疾病是由不受控制的細胞生長、增殖和/或存活、不適當?shù)募毎庖邞鸹虿贿m當?shù)募毎装Y應答引起的疾病，或者伴有不受控制的細胞生長、增殖和/或存活、不適當?shù)募毎庖邞鸹虿贿m當?shù)募毎装Y 應答的疾病，特別地，所述疾病為例如血液腫瘤、實體瘤和/或它們的轉移，如白血病和骨髓增生異常綜合征、惡性淋巴瘤、包括腦瘤和腦轉移在內的頭部和頸部腫瘤、包括非小細胞肺腫瘤和小細胞肺腫瘤在內的胸部腫瘤、胃腸道腫瘤、內分泌腫瘤、乳腺腫瘤和其它婦科腫瘤、包括腎腫瘤、膀胱瘤和前列腺瘤在內的泌尿系統(tǒng)腫瘤、皮膚腫瘤和肉瘤、和/或它們的轉移。更特別地，所述疾病為癌癥如肺癌。
在本發(fā)明的語境中，特別是如本文所使用的在“不適當?shù)募毎庖邞鸹虿贿m當?shù)募毎装Y應答”的語境中，術語“不適當?shù)摹睉斫鉃閮?yōu)選表示比正常應答更弱或更強并且與所述疾病的病理相關、引起或導致所述疾病的病理的應答。
優(yōu)選地，所述用途是用于疾病的治療或預防，其中所述疾病是血液腫瘤、實體瘤和/或它們的轉移。
本發(fā)明還提供本發(fā)明的化合物及其組合物在制備治療哺乳動物的過度增殖性病癥的藥物中的用途。可利用化合物來抑制、阻斷、降低、減少等細胞增殖和/或細胞分裂和/或引起凋亡。過度增殖性病癥包括但不限于銀屑病、瘢痕疙瘩和其它影響皮膚的增生、良性前列腺增生(BPH)、實體瘤例如乳腺癌、呼吸道癌、肺癌、腦癌、生殖器官癌、消化道癌、泌尿道癌、眼癌、肝癌、皮膚癌、頭頸癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌以及它們的遠端轉移。所述病癥還包括淋巴瘤、肉瘤和白血病。
這些病癥已在人類中得到良好的表征，但是還以相似的病因學存在于其它哺乳動物中，并且可通過給藥本發(fā)明的藥物組合物進行治療。
本文件通篇提及的術語“治療”具有本領域技術人員公知的常規(guī)含義，例如為了抵抗、減輕、減少、緩解、改善諸如肉瘤的疾病或病癥的情況等的目的來管理或護理個體。
本發(fā)明通式(I)所示化合物對人白血病、肝癌和肺癌腫瘤細胞株具有良好的抑制活性，其對A-549人肺癌細胞的IC50值<0.05μg/mL。具體而言，本發(fā)明實施例化合物對A-549人肺癌細胞的IC50值≤0.02μg/mL。作為優(yōu)選，本發(fā)明實施例化合物12、13、14、18、20、25-30對A-549人肺癌細胞的IC50值≤0.01μg/mL。
并且，本發(fā)明化合物對正常細胞還具有較低的細胞毒性。具體而言，本發(fā)明化合物，例如實施例化合物12-19、21、27、37、38、40、41、42對HELF-6的IC50值<0.4μg/mL。
劑量和給藥
基于已知用來評價用于治療過度增殖性病癥和血管生成病癥的化合物的標準實驗室技術，通過標準毒性試驗以及通過用于確定對哺乳動物中上文所述病癥的治療的標準藥理學試驗，并且通過將這些結果與用于治療這些病癥的已知藥物的結果進行比較，可容易地確定用于治療每一種期望適應癥的本發(fā)明的化合物的有效劑量。在這些病癥之一的治療中所給藥的活性成分的量可根據(jù)如下考量而發(fā)生很大變化：所使用的具體化合物和劑量單位、給藥方式、療程、受治療患者的年齡和性別以及被治療病癥的性質和程度。例如，待給藥的活性成分的總量一般為約0.001mg/kg-約200mg/kg體重/天，并且優(yōu)選約0.01mg/kg-約20mg/kg體重/天。臨床上有用的給藥方案會是每日一次至三次的給藥至每四周一次的給藥。本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽或酯或組合物的期望的治療方式和給藥數(shù)量可由本領域技術人員利用常規(guī)的治療試驗來確定。
具體實施方式
以下通過示例性的具體實施例對本發(fā)明的技術方案進行詳細說明。但不應將這些實施例解釋為對本發(fā)明保護范圍的限制。凡基于本發(fā)明上述內容所實現(xiàn)的技術均涵蓋在本發(fā)明旨在保護的范圍內。
除非另有說明，實施例中使用的原料和試劑均為市售物質。
實施例1 化合物2的制備
稱取單甲醚8(2.08g,3.31mmol)溶于40mL的二氯甲烷，加入DMP(2.813g,6.62mmol)室溫反應5小時，飽和的Na2S2O3和飽和的NaHCO3溶液淬滅反應。無水乙醚萃取，合并有機相，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干，柱層析純化得到化合物2，1.83g，產率88.4％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.54(s,1H),7.44(d,J＝6.8Hz,1H),6.64(d,J＝10.2Hz,1H),6.13(t,J＝8.0Hz,1H),5.57(d,J＝10.2Hz,1H),5.20(t,J＝5.9Hz,1H),5.08(t,J＝6.5Hz,1H),3.78(s,3H),3.55–3.45(m,1H),3.44–3.26(m,2H),3.13(dd,J＝14.9,9.8Hz,1H),2.88(dd,J＝14.8,6.5Hz,1H),2.55(d,J＝9.3Hz,1H),2.33(dd,J＝13.4,4.3Hz,1H),2.12–1.97(m,2H),1.88–1.80(m,1H),1.78(s,3H),1.73(s,3H),1.66(s,6H),1.63–1.58(m,1H),1.56(s,3H),1.51(s,3H),1.48(s,3H),1.42–1.37(m,1H),1.31(s,3H).ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.4,189.4,174.1,159.3159.1,155.4,140.6,137.3,135.5,133.6,132.4,131.9,127.8,123.8,121.6,116.5,112.7,110.6,107.2,90.5,84.1,83.8,80.9,62.1,49.0,46.8,41.9,30.0,29.0,27.4,26.7,25.7,25.7,25.7,22.8,22.0,18.2,17.6,16.4.ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C39H47O7627.3322,found for[M+H]+627.3305.
實施例2 化合物12的制備
將羥胺的鹽酸鹽(50.2mg,0.723mmol)溶于5mL無水乙醇，滴入吡啶(0.194mL,2.41mmol)待無固體時即羥胺的鹽酸鹽被釋放完全時，加入醛11(370mg,0.602mmol)的乙醇溶液，室溫反應過夜，水淬滅反應，無水乙醚萃取，合并有機相，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干，柱層析純化得到化合物12，0.321g，產率84.7％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.00(s,1H),7.90(s,1H),7.64(d,J＝7.2Hz,1H),6.67(d,J＝10.1Hz,1H),5.56(t,J＝7.7Hz,1H),5.43(d,J＝10.1Hz,1H),5.13–5.02(m,2H),3.41–3.29(m,2H),3.30–3.20(m,1H),3.08(dd,J＝5.3,2.2Hz,1H),2.96–2.86(m,1H),2.58(dd,J＝14.8,5.8Hz,1H),2.35(dd,J＝14.2,4.1Hz,1H),2.28–2.21(m,1H),2.18(d,J＝10.1Hz,1H),2.09–2.01(m,2H),1.81(s,3H),1.79–1.76(m,1H),1.75(s,3H),1.74(s,3H),1.65(s,6H),1.61–1.57(m,1H),1.56(s,3H),1.53(s,3H),1.43(s,3H),1.33–1.25(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.8,161.2,158.1,157.6,148.0,142.1,131.8,131.7,131.6,131.0,129.1,124.5,123.8,122.5,116.0,107.5,102.5,100.2,92.5,84.4,84.2,81.2,70.6,49.1,42.1,36.9,32.2,30.2,28.5,27.8,25.7,25.7,25.0,22.7,21.9,19.2,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C38H46NO7628.3275,found for[M-H]+628.3285.
實施例3 化合物13的制備
同實施例2，不同在于用化合物8代替化合物11反應，得到化合物13，產率93.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.88(s,1H),7.52(d,J＝7.1Hz,1H),6.67(d,J＝10.1Hz,1H),5.60(t,J＝7.4Hz,1H),5.53(d,J＝10.1Hz,1H),5.11(s,1H),5.06(t,J＝6.9Hz,1H),3.84(s,3H),3.45(dd,J＝14.6,7.6Hz,1H),3.39–3.31(m,1H),3.23(s,1H),2.87(br,1H),2.58(dd,J＝14.7,7.1Hz,1H),2.35–2.26(m,2H),2.24–2.12(m,3H),2.08–1.99(m,2H),1.83–1.72(m,10H),1.70–1.59(m,7H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.43(s,3H),1.37–1.29(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ175.7,160.1,158.8,155.3,147.9,140.6,133.5,132.0,131.9,131.3,129.2,127.3,123.8,122.1,116.7,112.6,109.9,107.4,92.5,84.5,84.0,80.5,70.8,62.2,49.0,42.0,36.7,32.2,30.2,28.5,27.6,25.7,25.6,25.2,22.7,22.4,19.3,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C39H50NO7644.3578,found for[M+H]+644.3578.
實施例4 化合物14的制備
同實施例2，不同在于用化合物2代替化合物11反應，得到化合物14，產率72.3％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64(s,1H),7.58(s,1H),7.38(d,J＝6.9Hz,1H),6.64(d,J＝10.2Hz,1H),5.51(d,J＝10.2Hz,1H),5.28(t,J＝6.7Hz,1H),5.24–5.15(m,1H),5.06(t,J＝7.1Hz,1H),3.79(s,3H),3.50–3.43(m,1H),3.42–3.33(m,2H),2.75(dd,J＝14.9,9.7Hz,1H),2.63(dd,J＝15.1,5.3Hz,1H),2.49(d,J＝9.3Hz,1H),2.31(dd,J＝13.4,4.5Hz,1H),2.09–1.98(m,2H),1.83–1.74(m,4H),1.71(s,3H),1.68(s,3H),1.65(s,3H),1.62–1.59(m,1H),1.57(s,3H),1.55(s,3H),1.42(s,3H),1.38–1.35(m,1H),1.29(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.8,174.3,159.5,159.0,155.4,147.2,135.7,133.0,132.3,131.9,130.5,129.2,127.2,123.8,122.0,116.7,112.7,110.2,107.2,90.4,84.2,83.5,80.6,62.1,49.1,46.8,42.1,30.0,29.1,27.7,27.7,25.8,25.7,25.7,22.7,22.1,19.0,18.3,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C39H48NO7642.3431,found for[M+H]+642.3430.
實施例5 化合物15的制備
將NaH(25.36mg,1.06mmol)溶于10mL DMF，在冰水浴條件下將溶有底物12(133mg,0.211 mmol)的DMF溶液滴加到前者混合物中，冰水浴反應30min后移至室溫，滴加入異丙基溴(0.1mL,1.06mmol)，再移至50℃的油浴反應11小時。水淬滅反應，無水乙醚萃取，合并有機相，飽和食鹽水溶液洗液洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干，柱層析純化得到化合物15，0.62mg，產率81.9％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.01(s,1H),7.82(s,1H),7.63(d,J＝7.2Hz,1H),6.68(d,J＝10.1Hz,1H),5.53(t,J＝7.6Hz,1H),5.43(d,J＝10.1Hz,1H),5.11–5.02(m,2H),4.28(dq,J＝12.5,6.4Hz,1H),3.38–3.26(m,2H),3.21(s,1H),3.01(s,1H),2.93–2.87(m,1H),2.56(dd,J＝14.3,5.9Hz,1H),2.33(dd,J＝14.2,4.2Hz,1H),2.17(dd,J＝12.3,9.2Hz,2H),2.10–2.01(m,2H),1.84–1.71(m,10H),1.65(s,3H),1.65(s,3H),1.60(dd,J＝6.9,2.5Hz,1H),1.56(s,3H),1.53(s,3H),1.44(s,3H),1.32–1.24(m,1H),1.21(d,J＝1.8Hz,3H),1.19(d,J＝1.8Hz,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.9,161.2,158.2,157.6,145.9,142.2,132.1,131.8,131.6,131.0,127.8,124.5,123.8,122.6,116.0,107.5,102.6,100.0,92.6,84.4,84.1,81.1,75.4,70.7,49.0,42.0,36.9,32.2,30.3,28.5,27.7,25.7,25.7,25.0,22.7,21.9,21.6,21.6,19.4,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C41H54NO8672.3900,found for[M+H]+672.3897.
實施例6 化合物16的制備
分別稱取底物12(615mg,0.98mmol)，NaOH(78.2mg,1.95mmol)和四丁基溴化銨(TBAB,50.4mg，0.156mmol)，然后加入20mL THF和4mL水，再加入芐溴(0.174mL,1.47mmol)在室溫反應8小時，水淬滅反應，無水乙醚萃取，合并有機相，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干，柱層析純化得到化合物16，0.447g，產率61.3％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.00(s,1H),7.90(s,1H),7.62(d,J＝7.2Hz,1H),7.34–7.27(m,5H),6.68(d,J＝10.1Hz,1H),5.56(t,J＝7.6Hz,1H),5.43(d,J＝10.1Hz,1H),5.10–5.05(m,2H),5.04(s,2H),3.34(dd,J＝14.6,7.7Hz,1H),3.27(dd,J＝14.8,5.6Hz,1H),3.22–3.17(m,1H),3.00(d,J＝5.4Hz,1H),2.92–2.86(m,1H),2.55(dd,J＝14.8,5.8Hz,1H),2.32(dd,J＝14.1,4.0Hz,1H),2.20–2.12(m,2H),2.04(dd,J＝15.8,7.8Hz,2H),1.78(s,3H),1.77(s,3H),1.77–1.73(m,1H),1.73(s,3H),1.64(s,3H),1.62(s,3H),1.60–1.57(m,1H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.42(s,3H),1.30–1.24(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.9,161.2,158.1,157.7,147.0,142.2,137.4,131.8,131.7,131.6,131.0,128.8,128.4,128.4,127.9,124.5,123.9,122.5,116.1,107.5,102.6,100.3,92.5,84.4,84.1,81.1,76.2,70.7,49.1,42.0,36.9,32.3,30.2,28.5,27.7,25.7,25.7,25.0,22.7,21.9,19.3,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C45H53NO7Na 742.3720,found for[M+Na]+742.3720.
實施例7 化合物17的制備
同實施例6，不同在于用化合物14代替化合物12反應，得到化合物17，產率21.2％。1H NMR(400MHz, CDCl3)δ7.64(s,1H),7.38(d,J＝6.9Hz,1H),7.33–7.25(m,5H),6.67(d,J＝10.2Hz,1H),5.53(d,J＝10.2Hz,1H),5.30–5.20(m,2H),5.05(t,J＝7.1Hz,1H),4.97–4.87(m,2H),3.77(s,3H),3.45(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),3.39–3.32(m,2H),2.70(dd,J＝15.0,9.1Hz,1H),2.59(dd,J＝15.2,6.4Hz,1H),2.49(d,J＝9.3Hz,1H),2.30(dd,J＝13.4,4.6Hz,1H),2.08–1.98(m,2H),1.78–1.73(m,4H),1.71(s,3H),1.69–1.63(m,7H),1.60(s,3H),1.54(s,3H),1.40(s,3H),1.37–1.32(m,1H),1.28(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.7,174.3,159.5,158.9,155.3,146.2,137.7,135.7,133.1,132.2,131.9,130.8,128.8,128.2,128.1,127.6,127.4,123.8,122.0,116.8,112.8,110.2,107.3,90.5,84.2,83.5,80.5,75.9,62.1,49.1,46.8,41.9,30.0,29.0,27.6,27.5,25.7,25.7,25.7,22.6,22.1,19.1,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C46H54NO7732.3900,found for[M+H]+732.3902.
實施例8 化合物18的制備
將底物12(108mg,0.172mmol)溶于5mL CH2Cl2，加入(13.8μL,0.172mmol)吡啶，后加入(12.1μL,0.172mmol)乙酰氯，室溫反應4小時，水淬滅反應，無水乙醚萃取，合并有機相，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干，柱層析純化得到化合物18，71mg，產率61.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.99(s,1H),8.12(s,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),6.67(d,J＝10.1Hz,1H),5.85(t,J＝7.9Hz,1H),5.44(d,J＝10.1Hz,1H),5.06(m,2H),3.35(dd,J＝14.6,7.5Hz,1H),3.28(d,J＝5.5Hz,1H),3.23(s,1H),2.96–2.90(m,1H),2.59(dd,J＝14.7,6.6Hz,1H),2.34(dd,J＝14.0,4.1Hz,1H),2.22–2.14(m,3H),2.15(s,3H),2.04(dd,J＝16.0,7.7Hz,2H),1.87(s,3H),1.83–1.72(m,7H),1.65(s,6H),1.62–1.58(m,1H),1.55(s,3H),1.53(s,3H),1.44(s,3H),1.31–1.23(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.8,168.8,161.3,157.9,157.6,153.1,142.4,134.2,131.9,131.7,130.9,130.8,124.7,123.8,122.4,115.8,107.4,102.7,100.2,92.5,84.3,84.2,81.3,70.9,49.1,42.0,36.9,32.5,30.2,28.5,27.7,25.7,25.6,24.9,22.7,21.9,19.7,19.0,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C40H50NO8672.3536,found for[M+H]+672.3528.
實施例9 化合物19的制備
同實施例8，不同在于用異丁酰氯代替乙酰氯反應，得到化合物19，產率78.0％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.99(s,1H),8.16(s,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),6.67(d,J＝10.1Hz,1H),5.87(t,J＝7.8Hz,1H),5.44(d,J＝10.1Hz,1H),5.06(t,J＝6.9Hz,2H),3.36(dd,J＝14.6,7.6Hz,1H),3.26(dd,J＝15.1,5.6Hz,1H),3.21(d,J＝5.4Hz,1H),2.98(d,J＝5.5Hz,1H),2.95–2.89(m,1H),2.69–2.59(m,2H),2.34(dd,J＝14.2,4.2Hz,1H),2.23–2.17(m,1H),2.14(dd,J＝14.8,8.2Hz,1H),2.09–2.00(m,2H),1.90(s,3H),1.81–1.72(m,7H),1.68–1.61(m,7H),1.55(s,3H),1.53(s,3H),1.43(s,3H),1.34– 1.26(m,1H),1.23(d,J＝6.8Hz,3H),1.23(d,J＝6.8Hz,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.8,174.3,161.2,158.0,157.6,153.5,142.5,134.0,131.8,131.6,131.0,130.8,124.6,123.8,122.4,115.8,107.4,102.6,100.2,92.5,84.2,84.2,81.3,71.0,49.1,42.0,36.9,32.8,32.5,30.1,28.5,27.7,25.7,25.6,24.9,22.7,21.9,21.9,19.0,19.0,18.9,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C42H54NO8700.3849,found for[M+H]+700.3837.
實施例10 化合物20的制備
同實施例8，不同在于用苯乙酰氯代替乙酰氯反應，得到化合物20，產率64.0％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.00(s,1H),8.13(s,1H),7.67(t,J＝9.4Hz,1H),7.34–7.26(m,5H),6.67(d,J＝9.8Hz,1H),5.86(s,1H),5.42(t,J＝10.7Hz,1H),5.06(s,2H),3.72(s,2H),3.36(dd,J＝14.6,7.6Hz,,1H),3.27(dd,J＝15.1,5.6Hz,1H),3.20(d,J＝5.2Hz,1H),2.99(d,J＝5.5Hz,1H),2.95–2.89(m,1H),2.60(dd,J＝14.3,7.2Hz,1H),2.33(d,J＝13.8Hz,1H),2.21–2.11(m,2H),2.09–1.99(m,2H),1.87(s,3H),1.82–1.72(m,7H),1.68–1.60(m,7H),1.56(s,3H),1.51(s,3H),1.43(s,3H),1.33–1.24(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.8,169.0,161.3,158.0,157.7,153.6,142.6,134.4,133.3,131.8,131.7,130.9,130.8,129.3,128.6,127.2,124.7,123.8,122.4,115.8,107.4,102.7,100.2,92.5,84.3,84.2,81.3,71.0,49.1,42.0,39.9,36.9,32.5,30.2,28.5,27.7,25.7,25.7,24.9,22.7,21.9,19.0,18.3,17.7ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C46H54NO8748.3849,found for[M+H]+748.3843.
實施例11 化合物21的制備
在室溫條件下，氮氣保護，將底物12(200mg,0.32mmol)溶于10mL二氯甲烷中，分別加入EDCI(73.12mg,0.38mmol)，DMAP(3.88mg,0.032mmol)，最后加入對溴苯甲酸(89.44mg,0.44mmol)，室溫反應5h，無水乙醚萃取，合并有機相，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干，柱層析得到化合物21，210mg，產率86.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.00(s,1H),8.30(s,1H),7.94(d,J＝8.6Hz,1H),7.69(d,J＝7.2Hz,1H),7.61(d,J＝8.6Hz,1H),6.61(d,J＝10.2Hz,1H),5.94(t,J＝7.9Hz,1H),5.38(d,J＝10.2Hz,1H),5.23–4.95(m,1H),3.37(dd,J＝14.7,7.8Hz,1H),3.30–3.21(m,2H),3.00(d,J＝5.5Hz,1H),2.97–2.91(m,1H),2.64(dd,J＝14.6,7.2Hz,1H),2.35(dd,J＝14.2,4.2Hz,1H),2.25–2.16(m,2H),2.06–1.97(m,2H),1.95(s,3H),1.81(s,3H),1.76–1.73(m,1H),1.71(s,3H),1.64(s,3H),1.62(s,3H),1.58–1.56(m,1H),1.54(s,6H),1.36(s,3H),1.33–1.26(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.8,163.1,161.3,157.9,157.6,154.3,142.6,134.8,131.8,131.8,131.7,131.2,130.8,128.4,127.6,124.6,123.8,122.3,115.7,107.3,102.7,100.2,92.6,84.3,84.2,81.3,71.2,49.1,42.0,36.9,32.6,30.1,28.5,27.7,25.7,25.7,24.8,22.7, 21.9,19.1,18.2,17.6.ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C45H51BrNO8812.2798,found for[M+H]+812.2783.
實施例12 化合物22的制備
同實施例11，不同在于用對氟苯甲酸代替對溴苯甲酸反應，得到化合物22，產率72.0％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.00(s,1H),8.30(s,1H),8.14–8.05(m,2H),7.68(d,J＝7.1Hz,1H),7.13(t,J＝8.5Hz,2H),6.61(d,J＝10.1Hz,1H),5.92(t,J＝7.7Hz,1H),5.38(d,J＝10.1Hz,1H),5.12–4.99(m,2H),3.42–3.33(m,1H),3.33–3.21(m,2H),3.01(br,1H),2.94(br,1H),2.64(dd,J＝14.6,7.4Hz,1H),2.34(d,J＝13.5Hz,1H),2.22–2.16(m,2H),2.08–1.98(m,2H),1.95(s,3H),1.81(s,3H),1.76–1.73(m,1H),1.72(s,3H),1.64(s,4H),1.62(s,3H),1.54(s,6H),1.36(s,3H),1.33–1.28(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.8,166.0,162.9,161.4,157.9,157.6,154.1,142.6,134.6,132.4,131.9,131.7,130.9,130.8,125.0,124.6,123.7,122.3,115.8,115.7,107.4,102.7,100.2,92.6,84.3,84.2,81.4,71.2,49.1,42.0,36.9,32.6,30.1,28.5,27.7,25.7,25.6,24.8,22.7,21.9,19.1,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C45H51FNO8752.3598,found for[M+H]+752.3589.
實施例13 化合物23的制備
同實施例11，不同在于用對硝基苯甲酸代替對溴苯甲酸反應，得到化合物23，產率83.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.01(s,1H),8.34–8.30(m,3H),8.26(d,J＝9.0Hz,2H),7.70(d,J＝7.2Hz,1H),6.59(d,J＝10.2Hz,1H),6.00(t,J＝8.0Hz,1H),5.38(d,J＝10.2Hz,1H),5.09–5.00(m,2H),3.37(dd,J＝14.7,7.8Hz,1H),3.30–3.20(m,2H),3.00(d,J＝5.6Hz,1H),2.97–2.91(m,1H),2.64(dd,J＝14.6,7.9Hz,1H),2.35(dd,J＝14.2,4.0Hz,1H),2.27–2.18(m,2H),2.05–1.97(m,2H),1.96(s,3H),1.82(s,3H),1.78–1.69(m,4H),1.64(s,3H),1.63(s,3H),1.60–1.56(m,1H),1.55(s,3H),1.54(s,3H),1.37(s,3H),1.34–1.29(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.8,162.0,161.4,157.9,157.6,154.8,150.7,142.7,135.7,134.3,131.9,131.8,130.9,130.8,130.5,124.7,123.7,123.6,122.3,115.7,107.3,102.7,100.2,92.6,84.4,84.2,81.4,71.4,49.1,42.0,36.9,32.7,30.1,28.5,27.8,25.7,25.6,24.8,22.7,21.9,19.0,18.2,17.6.ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C45H51N2O10779.3543,found for[M+H]+779.3526.
實施例14 化合物24的制備
同實施例11，不同在于用間三氟甲基苯甲酸代替對溴苯甲酸反應，得到化合物24，產率82.5％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ13.00(s,1H),8.35(s,2H),8.27(d,J＝7.5Hz,1H),7.85(d,J＝7.7Hz,1H),7.69(d,J＝7.1Hz,1H),7.62(t,J＝7.7Hz,1H),6.60(d,J＝10.1Hz,1H),5.96(t,J＝7.8Hz,1H),5.37(d,J＝10.1Hz,1H),5.10–4.99(m,2H),3.37(dd,J＝14.7,7.8Hz,1H),3.26(d,J＝10.7Hz,2H),3.02(br,1H),2.94(br,1H),2.66(dd,J＝15.0,7.7Hz,1H),2.35(dd,J＝14.2,4.0Hz,1H),2.28–2.18(m,2H),2.06–1.96(m,2H),1.95(s,3H),1.82(s,3H),1.77–1.70(m,1H),1.68(s,3H),1.64(s,3H),1.62–1.50(m,10H),1.35(s,3H),1.31–1.26(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.8,162.6,161.3,157.9,157.6,154.6,142.6,135.0,133.0,131.9,131.8,130.8,130.7,129.8,129.8,129.7,129.2,126.6,126.6,124.7,123.7,122.3,115.7,107.4,102.7,100.2,92.6,84.4,84.2,81.4,71.3,49.1,42.0,36.9,32.6,30.1,28.5,27.7,25.7,25.6,24.8,22.7,21.8,19.1,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C46H51F3NO8802.3567,found for[M+H]+802.3556.
實施例14 化合物25的制備
同實施例8，不同在于用化合物13代替化合物12反應，得到化合物25，產率84.0％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(s,1H),7.54(d,J＝7.1Hz,1H),6.66(d,J＝10.2Hz,1H),5.87(t,J＝7.9Hz,1H),5.55(d,J＝10.2Hz,1H),5.09(t,J＝6.4Hz,1H),5.05(t,J＝7.1Hz,1H),3.85(s,3H),3.44(dd,J＝14.5,7.8Hz,1H),3.33(dd,J＝14.5,5.3Hz,1H),3.20(s,1H),2.90–2.85(m,1H),2.59(dd,J＝14.6,7.3Hz,1H),2.34–2.26(m,2H),2.22–2.16(m,2H),2.15(s,3H),2.09–1.99(m,2H),1.87(s,3H),1.79(m,3H),1.78–1.71(m,4H),1.65(s,6H),1.61–1.57(m,1H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.44(s,3H),1.36–1.27(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ175.6,168.7,160.0,158.9,155.3,153.3,140.8,134.6,133.3,132.0,131.9,130.7,127.5,123.7,122.0,116.5,112.6,110.1,107.5,92.5,84.2,84.2,80.6,71.1,62.3,49.0,41.9,36.7,32.5,30.1,28.5,27.6,25.7,25.6,25.2,22.6,22.4,19.6,19.0,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C41H52NO8686.3693,found for[M+H]+686.3688.
實施例15 化合物26的制備
同實施例14，不同在于用異丁酰氯代替乙酰氯反應，得到化合物26，產率86.7％。Rf＝0.3(PE:AE＝2:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.15(s,1H),7.54(d,J＝7.1Hz,1H),6.66(d,J＝10.1Hz,1H),5.88(t,J＝7.7Hz,1H),5.54(d,J＝10.2Hz,1H),5.10(t,J＝6.4Hz,1H),5.05(t,J＝6.8Hz,1H),3.85(s,3H),3.45(dd,J＝14.3,7.9Hz,1H),3.38–3.30(m,1H),3.20(s,1H),2.93–2.82(m,1H),2.68–2.60(m,1H),2.36–2.26(m,2H),2.24–2.16(m,2H),2.12(dd,J＝15.0,8.1Hz,1H),2.08–1.99(m,2H),1.90(s,3H),1.87–1.72(m,7H),1.65(s,6H),1.62–1.58(m,1H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.44(s,3H),1.37–1.31(m,1H),1.23(d,J＝6.8Hz,6H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ175.6,174.3,160.0,158.8,155.2,153.6,140.8,134.3,133.3,131.9,131.8,130.9,127.4,123.7,122.0,116.5,112.5,110.0,107.5,92.5,84.2,84.1,80.6,71.1,62.2,49.0,41.9,36.7,32.8,32.5,30.1,28.5,27.6,25.7,25.6,25.2,22.6,22.4,19.0,19.0,18.9,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C43H56NO8714.4006,found for[M+H]+714.4007.
實施例16 化合物27的制備
同實施例14，不同在于用苯乙酰氯代替乙酰氯反應，得到化合物27，產率58.2％。Rf＝0.20(PE:AE＝2:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.12(s,1H),7.55(d,J＝7.0Hz,1H),7.37–7.22(m,5H),6.64(d,J＝10.2Hz,1H),5.88(t,J＝7.6Hz,1H),5.53(d,J＝10.1Hz,1H),5.15–5.03(m,2H),3.83(s,3H),3.71(s,3H),3.45(dd,J＝14.3,7.7Hz,1H),3.34(d,J＝13.5Hz,1H),3.20(s,1H),2.87(br,1H),2.59(dd,J＝14.5,7.4Hz,1H),2.32(d,J＝11.9Hz,1H),2.19(d,J＝9.6Hz,1H),2.12(dd,J＝15.0,8.1Hz,1H),2.09–1.98(m,2H),1.87(s,3H),1.83–1.72(m,7H),1.70–1.60(m,7H),1.55(s,3H),1.51(s,3H),1.43(s,3H),1.37–1.26(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ175.6,169.0,160.0,158.9,155.2,153.7,140.9,134.7,133.3,133.2,132.0,131.9,130.7,129.3,128.6,127.5,127.2,123.7,122.0,116.5,112.6,110.1,107.5,92.5,84.2,84.1,80.6,71.1,62.3,49.0,42.0,39.9,36.7,32.5,30.1,28.5,27.6,25.7,25.7,25.1,22.6,22.4,19.0,18.3,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C47H56NO8762.4006,found for[M+H]+762.4003.
實施例17 化合物28的制備
同實施例8，不同在于用化合物14代替化合物12反應，得到化合物28，產率49.2％。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.87(s,1H),7.41(d,J＝6.9Hz,1H),6.63(d,J＝10.1Hz,1H),5.60–5.47(m,2H),5.28(t,J＝6.2Hz,1H),5.03(t,J＝6.2Hz,1H),3.82(s,3H),3.51–3.43(m,1H),3.38(d,J＝6.6Hz,2H),2.75(dd,J＝14.7,9.7Hz,1H),2.64(dd,J＝15.3,7.2Hz,1H),2.51(d,J＝9.3Hz,1H),2.33(dd,J＝13.2,4.3Hz,1H),2.14–1.97(m,5H),1.86–1.60(m,17H),1.53(s,3H),1.47(s,3H),1.44–1.37(m,1H),1.30(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.4,174.1,168.6,159.2,158.9,155.3,152.3,135.5,134.4,133.3,132.4,132.0,130.1,127.8,123.6,121.9,116.6,112.9,110.5,107.4,90.5,84.0,83.6,80.7,62.2,49.0,46.8,41.7,30.0,29.1,27.9,27.2,25.8,25.7,25.6,22.5,22.1,19.7,18.8,18.3,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C41H50NO8684.3536,found for[M+H]+684.3531.
實施例18 化合物29的制備
同實施例17，不同在于用異丁酰氯代替乙酰氯反應，得到化合物29，產率77.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.92(s,1H),7.41(d,J＝6.8Hz,1H),6.63(d,J＝10.1Hz,1H),5.64–5.51(m,2H),5.22(t,J＝6.6Hz,1H),5.04(t,J＝6.6Hz,1H),3.81(s,3H),3.52–3.43(m,1H),3.43–3.32(m,2H),2.76–2.55(m,3H),2.51(d,J＝9.3Hz,1H),2.32(dd,J＝13.2,4.1Hz,1H),2.09–1.96(m,2H),1.80–1.60(m,17H),1.54(s,3H),1.47(s,3H),1.42–1.37(m,1H),1.29(s,3H),1.21–1.15(m,6H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.5,174.2,159.3,159.0,155.3,152.7,135.5,134.0,133.5,132.3,131.9,130.1,127.7,123.7,121.8,116.6,112.9,110.5,107.4,90.5,83.9,83.6,80.6,62.2,49.0,46.8,41.8,32.6,30.0,29.0,27.7,27.2,25.7,25.7,25.6,25.2,22.6,22.1,19.0,18.9,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C43H54NO8712.3849,found for[M+H]+712.3844.
實施例19 化合物30的制備
同實施例17，不同在于用苯乙酰氯代替乙酰氯反應，得到化合物30，產率61.5％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.89(s,1H),7.41(d,J＝6.8Hz,1H),7.35–7.24(m,5H),6.61(d,J＝10.2Hz,1H),5.62–5.50(m, 2H),5.25(t,J＝6.5Hz,1H),5.03(t,J＝6.5Hz,1H),3.81(s,3H),3.66(s,2H),3.46(dd,J＝11.1,5.8Hz,1H),3.42–3.33(m,2H),2.71(dd,J＝14.9,9.2Hz,1H),2.62(dd,J＝14.9,7.2Hz,1H),2.52(d,J＝9.2Hz,1H),2.32(dd,J＝13.3,4.1Hz,1H),2.09–1.99(m,2H),1.80(s,3H),1.78–1.75(m,1H),1.72(s,6H),1.68(s,3H),1.64(s,3H),1.62–1.58(m,1H),1.54(s,3H),1.47(s,3H),1.42–1.32(m,1H),1.29(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.5,174.2,168.9,159.3,159.0,155.3,152.6,135.4,134.5,133.6,133.3,132.3,131.9,129.9,129.3,128.6,127.8,127.2,123.7,121.8,116.6,112.9,110.5,107.4,90.5,83.9,83.6,80.7,62.2,49.0,46.7,41.7,39.7,30.0,29.0,27.8,27.3,25.7,25.7,25.7,22.5,22.1,18.8,18.3,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C47H54NO8760.3849,found for[M+H]+760.3840.
實施例20 化合物31的制備
同實施例8，不同在于用氯甲酸-4-甲氧基苯酯代替乙酰氯反應，得到化合物31，產率85.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.99(s,1H),8.22(s,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.12(d,J＝9.0Hz,3H),6.89(d,J＝9.1Hz,2H),6.68(d,J＝10.1Hz,1H),5.87(t,J＝7.8Hz,1H),5.43(d,J＝10.1Hz,1H),5.09(d,J＝6.4Hz,1H),5.06(d,J＝6.4Hz,1H),3.80(s,3H),3.38(dd,J＝14.7,7.6Hz,1H),3.31(dd,J＝14.8,5.0Hz,1H),3.24(d,J＝5.3Hz,1H),3.01(d,J＝5.5Hz,1H),2.93(br,1H),2.63(dd,J＝14.5,6.9Hz,1H),2.34(dd,J＝14.2,4.0Hz,1H),2.21(dd,J＝12.4,7.9Hz,2H),2.04(dd,J＝14.5,8.8Hz,2H),1.89(s,3H),1.81(s,3H),1.78(s,3H),1.75–1.72(m,1H),1.66(s,3H),1.65(s,3H),1.64–1.61(m,1H),1.55(s,3H),1.53(s,3H),1.43(s,3H),1.35–1.25(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.7,161.3,157.9,157.6,157.4,153.9,152.4,144.5,142.5,134.8,131.9,131.8,130.9,130.5,124.6,123.8,122.4,121.7,115.9,114.5,107.4,102.7,100.2,92.5,84.3,84.2,81.3,70.8,55.6,49.1,42.0,36.9,32.5,30.2,28.5,27.7,25.7,25.7,24.9,22.7,21.9,18.9,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C46H53NO10780.3733,found for[M+H]+780.3726.
實施例21 化合物32的制備
同實施例8，不同在于用氯甲酸氯甲酯代替化乙酰氯反應，得到化合物32，產率69.0％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.97(s,1H),8.16(s,1H),7.66(d,J＝7.1Hz,1H),6.66(d,J＝10.1Hz,1H),5.88(t,J＝7.4Hz,1H),5.80(s,2H),5.43(d,J＝10.2Hz,1H),5.10–5.02(m,2H),3.33(dd,J＝14.8,6.8Hz,1H),3.30–3.20m,2H),2.99(d,J＝5.6Hz,1H),2.93(br,1H),2.60(dd,J＝14.9,7.0Hz,1H),2.33(dd,J＝13.8,3.8Hz,1H),2.23–2.16(m,2H),2.04(dd,J＝15.1,8.3Hz,2H),1.87(s,3H),1.84–1.80(m,1H),1.79(s,3H),1.76(s,3H),1.64(s,6H),1.63–1.60(m,1H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.42(s,3H),1.33–1.26(m,1H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.7,161.2,157.9,157.6,154.4,151.9,142.4,135.3,132.0,131.8,130.8,130.3,124.7,123.8,122.3,115.8,107.4,102.7,100.1,92.4,84.4,84.2,81.3,72.3,70.8,49.0,42.0,36.9,32.5,30.1,28.5,27.7,25.7,25.7,24.9,22.7,21.9,18.8,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C40H49ClNO9722.3083,found for[M+H]+322.3103.
實施例22 化合物33的制備
同實施例8，不同在于用氯甲酸異丁酯代替化酰氯反應，得到化合物33，產率92.2％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.98(s,1H),8.14(s,1H),7.65(d,J＝7.1Hz,1H),6.66(d,J＝10.1Hz,1H),5.82(t,J＝7.7Hz,1H),5.42(d,J＝10.1Hz,1H),5.11–5.02(m,2H),4.00(d,J＝5.7Hz,2H),3.35(dd,J＝14.8,7.6Hz,1H),3.27(dd,J＝14.5,5.6Hz,1H),3.21(d,J＝5.1Hz,1H),2.99(d,J＝5.5Hz,1H),2.95–2.88(m,1H),2.60(dd,J＝14.8,6.9Hz,1H),2.33(dd,J＝14.2,3.9Hz,1H),2.18(d,J＝10.3Hz,2H),2.07–2.02(m,2H),1.98(dd,J＝13.5,6.9Hz,1H),1.87(s,3H),1.79(s,3H),1.77–1.72(m,4H),1.66–1.61(m,7H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.42(s,3H),1.33–1.22(m,1H),0.96(d,J＝6.4Hz,6H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.7,161.2,157.9,157.6,153.8,153.1,142.4,134.2,131.8,131.8,130.9,130.7,124.6,123.8,122.4,115.9,107.4,102.6,100.2,92.5,84.3,84.2,81.2,74.5,70.8,49.0,42.0,36.9,32.5,30.2,28.5,27.8,27.7,25.7,25.7,24.9,22.7,21.9,18.9,18.9,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C43H56NO9730.3940,found for[M+H]+730.3954.
實施例23 化合物34的制備
將底物12(100mg,0.159mmol)溶于5mL CH2Cl2，加入(44.6μL,0.318mmol)三乙胺，后加入(50μL,0.794mmol)乙基異氰酸酯，室溫反應4小時，水淬滅反應，無水乙醚萃取，合并有機相，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干，柱層析純化得到化合物34，110.0mg，產率98.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.99(s,1H),8.10(s,1H),7.65(d,J＝7.2Hz,1H),6.65(d,J＝10.1Hz,1H),6.07(t,J＝5.5Hz,1H),5.77(t,J＝7.8Hz,1H),5.42(d,J＝10.1Hz,1H),5.11–4.99(m,2H),3.36(dd,J＝15.5,8.2Hz,2H),3.32–3.27(m,2H),3.25(s,1H),3.02(d,J＝5.6Hz,1H),2.95–2.89(m,1H),2.58(dd,J＝14.7,6.5Hz,1H),2.33(dd,J＝14.1,4.0Hz,1H),2.25(dd,J＝14.6,9.2Hz,1H),2.17(d,J＝10.0Hz,1H),2.07–1.98(m,2H),1.79(s,3H),1.78(s,3H),1.77(s,3H),1.76–1.70(m,1H),1.64(s,6H),1.58(dd,J＝7.1,3.0Hz,1H),1.54(s,3H),1.52(s,3H),1.43(s,3H),1.33–1.25(m,1H),1.18(t,J＝7.2Hz,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ179.7,161.3,157.9,157.6,155.0,150.3,142.2,134.1,132.0,131.8,130.9,130.5,124.7,123.8,122.2,115.8,107.5,102.6,100.1,92.4,84.3,84.3,81.2,70.5,49.0,42.0,36.9,36.0,32.4,30.2,28.5,27.6,25.7,25.7,24.9,22.6,21.9,19.0,18.3,17.6,15.1ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C41H53N2O8701.3802,found for[M+H]+701.3799.
實施例24 化合物35的制備
在室溫條件下，氮氣保護，將底物GA(300mg,0.48mmol)溶于10mL二氯甲烷中，分別加入EDCI(109.91mg,0.57mmol)，DMAP(5.83mg,0.048mmol)，最后加入對溴苯甲醛肟(133.06mg,0.67mmol)，室溫反應5h，無水乙醚萃取，合并有機相，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干，柱層析純化得到化合物35，312mg，產率80.7％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.82(s,1H),8.07(s,1H),7.60–7.49(m,5H),6.58(d,J＝10.1Hz,1H),6.17(t,J＝6.7Hz,1H),5.34(d,J＝10.1Hz,1H),5.09–4.98(m,2H),3.47(s,1H),3.31(dd,J＝14.3,8.1Hz,1H),3.17(d,J＝12.8Hz,1H),3.05–2.89(m,2H),2.52(d,J＝9.2Hz,1H),2.31(d,J＝13.1Hz,1H),2.06–1.95(m,2H),1.81(s,3H),1.77–1.67(m,7H),1.63(s,3H),1.63–1.56(m,4H),1.54(s,3H),1.39(d,J＝12.5Hz,1H),1.32(s,3H),1.29(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.4,178.9,164.0,161.4,157.5,157.7,155.1,138.2,135.5,133.3,132.0,131.8,131.6,129.8,129.3,126.0,126.0,124.6,123.7,122.2,116.0,107.7,102.5,100.4,90.9,83.8,83.3,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.7,28.8,27.6,25.7,25.7,25.2,22.7,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C45H49BrNO8810.2641,found for[M+H]+810.2606.
實施例25 化合物36的制備
同實施例24，不同在于用間溴苯甲醛肟代替對溴苯甲醛肟反應，得到化合物36，產率77.3％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.83(s,1H),8.07(s,1H),7.89(s,1H),7.64–7.52(m,3H),7.30(t,J＝7.8Hz,1H),6.60(d,J＝10.1Hz,1H),6.15(t,J＝6.7Hz,1H),5.35(d,J＝10.1Hz,1H),5.09–4.98(m,2H),3.48(t,J＝4.8Hz,1H),3.32(dd,J＝14.4,8.0Hz,1H),3.18(d,J＝12.4Hz,1H),3.04(dd,J＝16.4,7.2Hz,1H),2.94(dd,J＝16.6,6.6Hz,1H),2.53(d,J＝9.2Hz,1H),2.37–2.28(m,1H),2.06–1.95(m,2H),1.82(s,3H),1.77–1.67(m,7H),1.67–1.59(m,7H),1.54(s,3H),1.44–1.33(m,1H),1.32(s,3H),1.29(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.4,178.9,164.0,161.4,157.5,154.7,138.2,135.4,134.3,133.3,132.4,131.8,131.6,130.8,130.3,127.3,126.0,124.6,123.7,122.9,122.2,116.0,107.8,102.6,100.4,90.9,83.8,83.4,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.7,28.8,27.5,25.7,25.7,25.2,22.7,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C45H49BrNO8810.2641,found for[M+H]+810.2616.
實施例26 化合物37的制備
同實施例24，不同在于用對氟苯甲肟代替對溴苯甲醛肟反應，得到化合物37，產率76.5％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.83(s,1H),8.09(s,1H),7.71(dd,J＝8.6,5.4Hz,2H),7.54(d,J＝6.9Hz,1H),7.10(t,J＝8.6Hz,2H),6.59(d,J＝10.1Hz,1H),6.17(t,J＝6.6Hz,1H),5.35(d,J＝10.4Hz,1H),,5.08–4.99(m,2H),3.48(dd,J＝6.5,4.7Hz,1H),3.31(dd,J＝14.6,8.0Hz,1H),3.22–3.14(m,1H),2.98(qd,J＝16.6,6.5Hz,2H),2.53(d,J＝9.3Hz,1H),2.32(dd,J＝13.5,4.7Hz,1H),2.05–1.95(m,2H),1.82(s,3H),1.77–1.72(m,1H),1.71(s,6H),1.64(s,3H),1.62(s,3H),1.59–1.54(m,1H),1.53(s,3H),1.40–1.35(m,1H),1.32(s,3H),1.29(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.4,178.9,164.7,164.2,161.4,157.5,155.0,138.0,135.4,133.3,131.8,131.6,130.6,126.7,126.6,126.1,124.6,123.7,122.2,116.1,116.0,107.8,102.6,100.4,91.0,83.8,83.3,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.6,28.8,27.6,25.7,25.6,25.2,22.7,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C45H49FNO8750.3442,found for[M+H]+750.3432.
實施例27 化合物38的制備
同實施例24，不同在于用間氟苯甲肟代替對溴苯甲醛肟反應，得到化合物38，產率73.5％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.83(s,1H),8.10(s,1H),7.54(d,J＝6.9Hz,1H),7.49–7.43(m,2H),7.38(td,J＝8.1,5.8Hz,1H),7.19–7.12(m,1H),6.59(d,J＝10.1Hz,1H),6.15(dd,J＝7.2,6.0Hz,1H),5.34(d,J＝10.1Hz,1H),5.09–4.99(m,2H),3.48(dd,J＝6.6,4.7Hz,1H),3.31(dd,J＝14.6,8.1Hz,1H),3.18(dd,J＝14.5,4.9Hz,1H),3.03(dd,J＝16.2,6.7Hz,1H),2.94(dd,J＝17.3,6.5Hz,1H),2.53(d,J＝9.3Hz,1H),2.32(dd,J＝13.5,4.6Hz,1H),2.05–1.95(m,2H),1.82(d,J＝0.9Hz,3H),1.77–1.72(m,1H),1.70(s,6H),1.63(s,3H),1.63(s,3H),1.59–1.54(m,1H),1.53(s,3H),1.40–1.34(m,1H),1.32(s,3H),1.29(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.4,178.9,162.8,161.5,157.6,157.5,155.1,155.0,138.2,135.4,133.4,132.6,131.8,131.6,130.4,126.0,124.6,124.6,123.7,122.2,118.5,116.0,114.7,107.8,102.6,100.4,90.9,83.8,83.4,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.7,28.8,27.5,25.7,25.6,25.2,22.6,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C45H49FNO8750.3442,found for[M+H]+750.3422.
實施例28 化合物39的制備
同實施例24，不同在于用間氯苯甲肟代替對溴苯甲醛肟反應，得到化合物39，產率45.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.83(s,1H),8.08(s,1H),7.74(s,1H),7.57(d,J＝13.2,1H),7.55(d,J＝12.4,1H),7.43(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(t,J＝7.8Hz,1H),6.60(d,J＝10.1Hz,1H),6.15(dd,J＝7.2,6.0Hz,1H),5.35(d,J＝10.1Hz,1H),5.08–4.99(m,2H),3.48(dd,J＝6.6,4.6Hz,1H),3.32(dd,J＝14.6,8.0Hz,1H),3.18(dd,J＝14.4,4.9Hz,1H),3.04(dd,J＝16.6,6.3Hz,1H),2.94(dd,J＝16.7,6.0Hz,1H),2.53(d,J＝9.3Hz,1H),2.32(dd,J＝13.5,4.7Hz,1H),2.05–1.96(m,2H),1.82(d,J＝0.8Hz,3H),1.78–1.72(m,1H),1.71(s,3H),1.71(s,3H),1.64(s,6H),1.59–1.55(m,1H),1.54(s,3H),1.39(dd,J＝13.4,9.5Hz,1H),1.32(s,3H),1.30(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.4,178.9,164.0,161.4,157.5,157.5,154.8,138.2,135.4,134.9,133.4,132.2,131.8,131.6,131.4,130.0,128.0,126.8,126.0,124.6,123.7,122.2,116.0,107.8,102.6100.4,90.9,83.8,83.4,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.7,28.8,27.5,25.7,25.7,25.2,22.7,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C45H49ClNO8766.3146,found for[M+H]+766.3131.
實施例29 化合物40的制備
同實施例24，不同在于用鄰氯苯甲醛肟代替對溴苯甲醛肟反應，得到化合物40，產率45.7％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.81(s,1H),8.62(s,1H),8.08(d,J＝7.4Hz,1H),7.55(d,J＝6.9Hz,1H),7.42–7.35(m,2H),7.33–7.27(m,1H),6.57(d,J＝10.1Hz,1H),6.16(t,J＝6.7Hz,1H),5.31(d,J＝10.1Hz,1H),5.09–4.98(m,2H),3.51–3.45(m,1H),3.33(dd,J＝14.7,8.1Hz,1H),3.22–3.12(m,1H),3.10–2.95(m,2H),2.52(d,J＝9.3Hz,1H),2.32(dd,J＝13.4,4.7Hz,1H),1.99(dd,J＝15.7,7.9Hz,2H),1.83(s,3H),1.76–1.69(m,7H),1.64(s,6H),1.58–1.54(m,1H),1.53(s,3H),1.38(dd,J＝13.4,9.6Hz,1H),1.33(s,3H),1.30(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.5,178.9,163.9,161.4,157.7,157.4,152.8,138.8,135.2,134.9,133.4,132.4,131.8,131.5,129.8,128.6,128.4,127.1,125.9,124.4,123.8,122.3,116.0,107.6,102.6,100.4,90.9,83.8,83.5,81.1,49.0,46.9,42.0,29.9,29.5,28.8,27.6,25.7,25.7,25.2,22.6,21.7,20.5,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C45H49ClNO8766.3146,found for[M+H]+766.3133.
實施例30 化合物41的制備
同實施例24，不同在于用對硝基苯甲肟代替對溴苯甲醛肟反應，得到化合物41，產率40.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.83(s,1H),8.28(d,J＝8.8Hz,2H),8.19(s,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,2H),7.55(d,J＝6.9Hz,1H),6.57(d,J＝10.1Hz,1H),6.23(dd,J＝7.2,5.9Hz,1H),5.35(d,J＝10.0Hz,1H),5.08–4.98(m,2H),3.49(dd,J＝6.7,4.6Hz,1H),3.31(dd,J＝14.5,8.1Hz,1H),3.21–3.14(m,1H),3.05–2.91(m,2H),2.54(d,J＝9.3Hz,1H),2.33(dd,J＝13.5,4.7Hz,1H),2.05–1.95(m,2H),1.83(d,J＝1.0Hz,3H),1.75(dd,J＝12.1,4.6Hz,1H),1.71(s,6H),1.63(s,6H),1.57–1.54(m,1H),1.53(s,3H),1.40–1.35(dd,J＝13.4,9.6Hz,1H),1.32(s,3H),1.30(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.4,179.0,163.8,161.5,157.6,153.9,149.4,138.8,136.4,135.5,133.3,131.9,131.7,129.2,125.7,124.7,124.0,123.6,122.1,115.9,107.8,102.6,100.4,91.0,83.9,83.3,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.7,28.8,27.6,25.7,25.6,25.2,22.6,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C45H49N2O10777.3387,found for[M+H]+777.3360.
實施例31 化合物42的制備
同實施例24，不同在于用丙酮肟代替對溴苯甲醛肟反應，得到化合物42，產率38.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.82(s,1H),7.53(d,J＝6.9Hz,1H),6.64(d,J＝10.1Hz,1H),6.16(t,J＝6.3Hz,1H),5.42(d,J＝10.1Hz,1H),5.09-5.01(m,2H),3.46(dd,J＝6.6,4.6Hz,1H),3.32(dd,J＝14.7,8.0Hz,1H),3.21(dd,J＝14.6,5.1Hz,1H),3.04(dd,J＝16.6,7.1Hz,1H),2.88(ddd,J＝17.0,6.1,1.4Hz,1H),2.52(d,J＝9.3Hz,1H),2.31(dd,J＝13.4,4.6Hz,1H),2.07–1.98(m,5H),1.83(s,3H),1.81(d,J＝0.9Hz,3H),1.79–1.75(m,1H),1.73(s,3H),1.70(s,3H),1.65(s,3H),1.63(s,3H),1.61-1.56(m,1H),1.55(s,3H),1.44(s,3H),1.38(dd,J＝13.3,9.5Hz,1H),1.29(s,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.6,178.9,164.2,163.6,161.5,157.6,157.5,137.8,135.3,133.3,131.8,131.5,126.6,124.5,123.8,122.3,116.0,107.7,102.6,100.4,90.9,83.7,83.2,81.2,49.0,47.0,42.0,30.0,29.7,28.8,27.8,25.7,25.7,25.3,22.7,22.1,21.7,20.5,18.1,17.6,17.1；HRMS(EI)m/z calcd for C41H50NO8684.3536,found for[M+H]+684.3527.
實施例32 化合物43的制備
同實施例24，不同在于用異丁醛肟代替對溴苯甲醛肟反應，得到化合物43，產率36.5％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.83(s,1H),7.54(d,J＝6.9Hz,1H),7.34(d,J＝6.9Hz,1H),6.65(d,J＝10.1Hz,1H),6.24(t,J＝6.4Hz,1H),5.43(d,J＝10.1Hz,1H),5.09-5.00(m,2H),3.46(dd,J＝6.6,4.6Hz,1H),3.32(dd,J＝14.5,8.1Hz,1H),3.17(dd,J＝14.5,4.7Hz,1H),2.99–2.82(m,2H),2.65(dq,J＝13.7,6.9Hz,1H),2.53(d,J＝9.3Hz,1H),2.30(dd,J＝13.5,4.6Hz,1H),2.04(dd,J＝15.9,7.7Hz,2H),1.84–1.76(m,4H),1.73(s,3H),1.71(s,3H),1.65(s,3H),1.63(s,3H),1.60(dd,J＝7.0,3.0Hz,1H),1.55(s,3H),1.44(s,3H),1.38(dd,J＝13.3,9.6Hz,1H),1.29(s,3H),1.13(d,J＝6.8Hz,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H)ppm；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ203.5,178.9,164.7,164.1,161.4,157.6,157.5,137.3,135.5,133.3,131.9,131.6,126.0,124.5,123.8,122.2,116.0,107.6,102.5,100.4,91.1,83.8,83.2,81.2,49.0,46.9,42.0,29.4,29.6,29.5,28.8,27.9,25.7,25.7,25.2,22.8,21.7,20.6,19.7,19.7,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C42H52NO8698.3693,found for[M+H]+698.3685.
生物活性實施例 藤黃酸類似物抗腫瘤生物活性體外篩選試驗
1.材料
1.1.樣品及試劑：
試驗樣品用二甲基亞砜(DMSO，終濃度0.8％)溶解，用含15％小牛血清RPMI1640培養(yǎng)基配成2mg/ml備用，用時稀釋至所需濃度。
注射用順鉑(CDDP CISPLATIN FOR INJECTION)，10mg/瓶，齊魯制藥有限公司生產。
RPMI1640培養(yǎng)基：美國GIBGO公司生產。
二甲基亞砜(DMSO)：天津富宇精細化工有限公司，批號：2013年10月23B。
MTT：Sigma公司生產。
1.2.細胞：A549(人肺腺癌)，購于中國科學院細胞庫。HELF-6(人胚肺細胞)細胞，山東省醫(yī)學科學院基礎所贈送。均使用含15％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基、置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。
1.3.儀器：
Forma3111水套式二氧化碳培養(yǎng)箱，美國Forma公司生產。
Victor1420多功能標記分析儀，美國。
96孔板，美國制造。
2.方法
2.1 細胞培養(yǎng)及藥物作用：分別取A549(人肺腺癌)和HELF-6(人胚肺細胞)指數(shù)生長期的細胞經洗滌后，用0.25％胰酶消化后計數(shù)，調整細胞濃度為1×105/ml，分別接種于96孔板內，每孔0.1ml，置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。培養(yǎng)24小時后加樣品。作用于A549(人肺腺癌)和HELF-6(人胚肺細胞)細胞12個樣品最高劑量組藥物濃度均為100μg/ml，按5倍依次稀釋至0.01μg/ml，共5個劑量組。每個濃度設3個復孔，并設溶媒對照孔(DMSO，0.8％)，培養(yǎng)48小時后，用MTT方法測定OD值，計算細胞抑制率。本實驗重復兩次。
2.2 細胞抑制率的計算：細胞終止培養(yǎng)后，每孔加入10μl 0.5％MTT置CO2培養(yǎng)箱內，4小時后取出傾去孔內液體加入DMSO(0.2ml/孔)，充分振蕩，使藍紫色甲臜溶解，于多功能標記分析儀570nm波長處檢測OD值，采用不同濃度受試藥物3復孔OD值的均值計算細胞的抑制率及IC50。
2.3.結果判斷：
根據(jù)新藥臨床前研究指導原則(中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局1993.7：139)
植物提取物IC50≤30μg/ml認為有一定抑制作用；
合成藥IC50≤10μg/ml認為有一定抑制作用。
表1：對腫瘤細胞生長的抑制率％