本發(fā)明屬于食品學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域。具體涉及抗氧化肽制備的方法。

背景技術(shù)：

二氧化鈦（化學(xué)式：TiO），白色固體或粉末狀的兩性氧化物，分子量：79.87，是一種白色無(wú)機(jī)顏料，具有無(wú)毒、最佳的不透明性、最佳白度和光亮度，被認(rèn)為是目前世界上性能最好的一種白色顏料。鈦白的粘附力強(qiáng)，不易起化學(xué)變化，永遠(yuǎn)是雪白的。廣泛應(yīng)用于涂料、塑料、造紙、印刷油墨、化纖、橡膠、化妝品等工業(yè)。它的熔點(diǎn)很高，也被用來(lái)制造耐火玻璃，釉料，琺瑯、陶土、耐高溫的實(shí)驗(yàn)器皿等。同時(shí)，二氧化鈦有較好的紫外線掩蔽作用，常作為防曬劑摻入紡織纖維中，超細(xì)的二氧化鈦粉末也被加入進(jìn)防曬霜膏中制成防曬化妝品。二氧化鈦可由金紅石用酸分解提取，或由四氯化鈦分解得到。二氧化鈦性質(zhì)穩(wěn)定，大量用作油漆中的白色顏料，它具有良好的遮蓋能力，和鉛白相似，但不像鉛白會(huì)變黑；它又具有鋅白一樣的持久性。二氧化鈦還用作搪瓷的消光劑，可以產(chǎn)生一種很光亮的、硬而耐酸的搪瓷釉罩面。

食品應(yīng)用 ：美國(guó)食品藥品管理局規(guī)定二氧化鈦可以作為所有的食品白色素，最大的使用量為1g/kg Sec. 73.575二氧化鈦。色素添加劑二氧化鈦可以安全用于一般著色食品中，服從下列規(guī)定：

（1） 二氧化鈦的數(shù)量不超過(guò)食物重量的1%；

（2） 按照法令的401條所公布的特殊標(biāo)準(zhǔn)，不得使用的著色食品，除非有類似的標(biāo)準(zhǔn)允許添加色素；

（3） 對(duì)于著色食品，食用的色素添加劑二氧化鈦可以含有適當(dāng)?shù)南♂寗?，作為安全的色素添加劑，如下：二氧化硅，作為分散助劑，含量不超過(guò)2%。

產(chǎn)品適應(yīng)：涼果類、果凍、油炸食品、可可制品、巧克力、巧克力制品、硬制糖果、拋光糖果、膠基糖果、膨化食品、糖果巧克力制品包衣、蛋黃醬、沙拉醬、果醬、固體飲料、魔芋凝膠食品等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種靈敏度高，速度快，結(jié)果準(zhǔn)確。

為實(shí)現(xiàn)上述步驟目的，本發(fā)明提供了一種酶解玉米蛋白粉制備抗氧化肽的方法

，其特征在于，步驟為，

制備玉米抗氧化肽的工藝流程

玉米蛋白粉→粉碎→80目過(guò)篩→3%(w/v)懸浮液→熱變性處理(90℃,10min) →調(diào)PH→加酶水解→滅酶（沸水溶5min）→離心（12000r/min）→取上清→分析測(cè)定。

測(cè)定方法

水解度的測(cè)定 pH-stat法；清除O^2-·能力測(cè)定 NBT法；清除·OH能力測(cè)定 脫氧核糖法。

附圖說(shuō)明

圖1為時(shí)間與玉米肽消除自由基活性的關(guān)系。

圖2為溫度與玉米肽消除自由基活性的關(guān)系。

具體實(shí)施方式

下面將詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的具體實(shí)施方式：

1.儀器與試劑：

玉米蛋白粉 由禾豐牧業(yè)飼料公司提供，蛋白含量為65.84%；2709堿性蛋白酶 北京房山酶制劑總廠，經(jīng)測(cè)定酶活為88433U/g；其它試劑 均為國(guó)產(chǎn)分析純。

pHS-25 數(shù)顯pH儀 上海精密儀器廠；

高速冷凍離心機(jī) 日本立牌SCR20BC型；

721型分光光度計(jì) 上海第三分析儀器廠；

光照箱（光照度達(dá),4500LUX） 自制hh-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋。

2.方法與結(jié)果

時(shí)間對(duì)酶解反應(yīng)的影響

時(shí)間影響酶的催化反應(yīng)。隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，水解度逐漸增大，玉米肽對(duì)自由基清除率也隨之增大，當(dāng)?shù)孜锏乃舛瘸^(guò)了玉米肽清除自由基能力的最適水解度時(shí)，玉米肽對(duì)自由基的清除率下降，如圖1。從圖1可以看出，在[E]/[S]=9%，pH10.0溫度50℃的條件下，以水解4h效果最佳。

溫度對(duì)酶解反應(yīng)的影響

各種催化反應(yīng)都有最適的溫度。在E]/[S]=9%，pH10.0，選擇不同的溫度水解4h，見圖2。由圖2可知，溫度為45℃時(shí)清除率

開始上升，50℃達(dá)到較高水平，55℃以后開始下降，故50℃為該酶解反應(yīng)最適作用溫度

制備玉米抗氧化肽最佳酶解工藝條件的確定

在上述單因素實(shí)驗(yàn)中，每組實(shí)驗(yàn)只考察一個(gè)因素，而酶解反應(yīng)的最佳條件并不是簡(jiǎn)單的將所有這些單因素實(shí)驗(yàn)的最佳結(jié)果疊加在一起，還必須通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)考察多因素的疊加效果，故借助以上的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表1。

從表1可以看出，對(duì)水解度而言，極差值反映出影響水解度的各因素排列順序?yàn)椋篈>B>D>C，最佳酶解條件為A₁B₃C₃D₃，即pH9.5，[E]/[S]=12%時(shí)間5h，

溫度60℃，在此條件下水解度可達(dá)35.31%；對(duì)清除自由基能力而言，極差值反映出影響對(duì)自由基清除能力的各因素的排列順序?yàn)椋篈>B>C>D，最佳酶解條件為A₁B₂C₂D₂，即 pH9.5，[E]/[S]=10%時(shí)間4h，溫度55℃，在此條件下玉米肽對(duì) O^2-·和·OH的清除率分別為52.17%和80.26%。本實(shí)驗(yàn)的目的是制備抗氧化肽，故最佳的酶解條件應(yīng)為：A₁B₂C₂D₂。

對(duì)表1的數(shù)據(jù)作進(jìn)一步分析可以看出，底物的水解度與玉米肽對(duì)自由基的清除能力間并不存在線性關(guān)系，只有在特定的水解度（DH=34.92%）時(shí)，清除能力最強(qiáng)，超過(guò)或者低于這個(gè)水解度，清除能力下降。此外，玉米肽清除O^2-·能力與清除·OH能力間存在著顯著的相關(guān)性關(guān)系（r=0.9531,p<0.01），說(shuō)明在本實(shí)驗(yàn)中水解度對(duì)二者的影響是一致的。

表1