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一種以甲醇為能源和碳源生產(chǎn)聚羥基丁酸酯的方法與流程

文檔序號(hào):12697409閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種以甲醇為能源和碳源生產(chǎn)聚羥基丁酸酯的方法,其特征在于:以甲醇為原料,利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)聚羥基丁酸酯。

2.按照權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:具體過程為:

(1)土壤樣品用水稀釋,取上清加入液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng),將培養(yǎng)液用滅菌水5-20倍進(jìn)行梯度稀釋,再取稀釋液涂布于固態(tài)富集培養(yǎng)基平板上,25-40℃培養(yǎng);所用液體培養(yǎng)基組分為:蛋白胨5-20g/L,牛肉浸膏2-5g/L,NaCl3-10g/L;所用固體培養(yǎng)基組分為:蛋白胨5-20g/L,牛肉浸膏2-5g/L,NaCl3-10g/L,15-25g/L瓊脂;培養(yǎng)基pH值6.6-7.5,滅菌后加入體積分?jǐn)?shù)0.3-0.7%的甲醇;

(2)用接種環(huán)挑不同顏色、形態(tài)的單菌落到新的固體培養(yǎng)基上面劃線、培養(yǎng);重復(fù)本步驟上述操作3-5次;

(3)將分離得到的菌株分別接種至選性擇培養(yǎng)液中,于120-240rpm的搖床中培養(yǎng),將能夠生長(zhǎng)的菌接到新的選擇性培養(yǎng)液里面,每天測(cè)菌液在600nm下的吸光度值并加入培養(yǎng)液體積0.5%-1%的體積分?jǐn)?shù)為40-80%的甲醇水溶液,以補(bǔ)充甲醇;所用選擇性培養(yǎng)液的組分為:MgSO4·7H2O 0.1-0.3g/L,(NH4)2HPO4 1.5-4.5g/L,NaCl 0.8-2.0g/L,K2HPO4 1.0-3.0g/L,F(xiàn)eSO4·7H2O 5.0-20.0mg/L,MnSO4·H2O 2.0-5.0mg/L,CaCl2·2H2O 2.0-5.0mg/L,ZnSO4·7H2O 80.0-200.0ug/L,Na2MoO4·2H2O 20.0-60.0ug/L,CuSO4·5H2O 20.0-60.0ug/L,CoCl2·6H2O 20.0-60.0ug/L,H3BO3 20.0-60.0ug/L,硫胺素5.0-20.0ug/L,核黃素10.0-30.0ug/L,鹽酸吡哆醇10.0-30.0ug/L,生物素0.5-2.0ug/L,對(duì)氨基苯甲酸5.0-20.0ug/L,煙酸10.0-30.0ug/L,調(diào)pH值為6.0-8.0,滅菌后加入體積分?jǐn)?shù)0.3-1.0%的甲醇作為碳源;

(4)當(dāng)菌液的吸光度值達(dá)到最大值后再培養(yǎng)48小時(shí),離心菌液,取沉淀真空冷凍干燥18-30小時(shí)得到干菌體。

3.按照權(quán)利要求1或2所述的方法,其特征在于:檢測(cè)方法為:取干菌體到玻璃反應(yīng)管中,每個(gè)菌取3個(gè)做平行,加入以干菌體計(jì)0.1mL/mg的氯仿,加入以干菌體計(jì)0.1mL/mg的含體積分?jǐn)?shù)1-20%的硫酸的甲醇溶液,在100℃下反應(yīng)1-4小時(shí),冷卻,加入去離子水,搖勻,靜置使其分層,取層重相注入氣相色譜柱,檢測(cè)PHB。

4.按照權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述甲醇為唯一碳源和能源。

5.按照權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述的微生物為嗜胺甲基桿菌,序列為SEQ ID NO.1中的序列。

6.按照權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于:所述取上清加入液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng),培養(yǎng)溫度是28—32℃,培養(yǎng)液pH值為6.8—7.2。

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