本發(fā)明涉及一種文蛤基因組DNA的提取方法。
背景技術：
文蛤（拼音：wén-gé）又稱為蛤蜊，別名華哥，另有稱謂為麗文蛤、蚶仔（hān-zǎi）、粉蟯（fěn-náo），白仔，是屬于雙殼綱簾蛤目簾蛤科的貝類，是重要的食用貝類之一。殼呈圓形略呈三角形，內面為瓷白色。原產(chǎn)地為日本，朝鮮半島、中國大陸、臺灣沿岸也有分布。臺灣西南沿海的沙岸有養(yǎng)殖文蛤。多棲息于淺海的沙泥底，喜歡生活在有淡水注入的河水濕地與潮間帶等地區(qū)。購買文蛤宜選殼緊閉者，可將文蛤互敲，有清脆聲音的蛤蜊者較為新鮮。文蛤肉嫩味鮮，是貝類海鮮中的上品，含有蛋白質10%，脂肪1.2%，碳水化合物2.5%，還含有人體易吸收的各種氨基酸和維生素及鈣、鉀、鎂、磷、鐵等多種人體必需的礦物質，唐代時曾為皇宮海珍貢品。
分子生物學是生物學研究的一項重要分支，而DNA的提取則是分子生物學研究的重要基礎，DNA純度的純度及質量對后續(xù)的研究工作具有極為重要的影響。每一物種由于其自身各成分的含量不同（比如有的物種蛋白含量高、有的物種糖分含量高），會對DNA的純度和質量產(chǎn)生較大影響。因此，需要針對不同的物種開發(fā)出適宜的有針對性的提取方法。
技術實現(xiàn)要素：
針對上述問題，本發(fā)明旨在提供一種適于文蛤的高質量、高純度的DNA提取方法。
一種文蛤基因組DNA的提取方法，步驟如下：
（1）取文蛤肌肉組織3-8克，用液氮研磨后，將粉末平均加入到10-15管裝有500μL STE（100mM NaCl；10mM Tris-Cl，pH8.0；1mM EDTA，pH8.0）及50μL 10% SDS裂解緩沖液的1.5mL離心管中，隨即每管加入5μL 濃度為20mg/mL的蛋白酶K，55-57℃水浴10-60 min，至溶液澄清；
（2）每管加入250μL飽和酚、250μL氯仿/異戊醇（24:1），輕柔晃動5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（3）離心后有機相位于下層，中間層為蛋白層，上層為溶有DNA的水相，吸取上清液至新離心管中，重復步驟（2），至水相和有機相之間無蛋白層殘留；
（4）吸取上清液至新離心管中，加入500μL氯仿/異戊醇，輕柔晃動5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（5）吸取上清液，加入50μL 3M NaAc，緩慢輕柔搖勻，添加1mL在-20℃預冷的無水乙醇，放置于-20℃冰箱 20-50min，10000-15000rpm 離心8-15min，得到DNA沉淀；
（6）用預冷的 70%乙醇洗滌沉淀1-3次；
（7）沉淀干燥，根據(jù)沉淀量多少加入不同量的無菌超純水及終濃度為0.05mg/mL的RNase A，37℃水浴15-40min，直至RNA全部溶解；
（8）用分光光度計測定DNA的濃度，同時進行瓊脂糖電泳檢測。
本發(fā)明的方法針對性強，特別適于文蛤DNA的提取，提取的DNA濃度、純度非常高，非常適于文庫構建、PCR等后續(xù)研究。
附圖說明
圖1 本發(fā)明方法提取的文蛤DNA的電泳圖。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明。
從市場購買的文蛤在實驗室用無菌海水暫養(yǎng)3-5天后，開始DNA的提取工作，步驟如下：
（1）取文蛤肌肉組織3-8克，用液氮研磨后，將粉末平均加入到10-15管裝有500μL STE（100mM NaCl；10mM Tris-Cl，pH8.0；1mM EDTA，pH8.0）及50μL 10% SDS裂解緩沖液的1.5mL離心管中，隨即每管加入5μL 濃度為20mg/mL的蛋白酶K，55-57℃水浴10-60 min，至溶液澄清；
（2）每管加入250μL飽和酚、250μL氯仿/異戊醇（24:1），輕柔晃動5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（3）離心后有機相位于下層，中間層為蛋白層，上層為溶有DNA的水相，吸取上清液至新離心管中，重復步驟（2），至水相和有機相之間無蛋白層殘留；
（4）吸取上清液至新離心管中，加入500μL氯仿/異戊醇，輕柔晃動5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（5）吸取上清液，加入50μL 3M NaAc，緩慢輕柔搖勻，添加1mL在-20℃預冷的無水乙醇，放置于-20℃冰箱 20-50min，10000-15000rpm 離心8-15min，得到DNA沉淀；
（6）用預冷的 70%乙醇洗滌沉淀1-3次；
（7）沉淀干燥，根據(jù)沉淀量多少加入不同量的無菌超純水及終濃度為0.05mg/mL的RNase A，37℃水浴15-40min，直至RNA全部溶解；
（8）用分光光度計測定DNA的濃度，同時進行瓊脂糖電泳檢測。
經(jīng)檢測，DNA的濃度為931 ng/uL，A260/A280=1.8。電泳結果如圖1所示，可見DNA的濃度及純度都非常高。