本發(fā)明涉及一種櫛孔扇貝的DNA提取方法。
背景技術(shù)：
櫛孔扇貝（Chlamys farreri）隸屬于軟體動物門（Mollusca）瓣鰓綱（Lamellibranchia）翼形亞綱（Pterimorphia）珍珠貝目（Pterioodae）扇貝科（Pectinidae），自然分布于遼寧旅大及山東半島一帶的沿海，大多生活在低潮線以下、鹽度高且水流較急的海區(qū)，棲息水深達(dá)10-30米，以足絲附著在礁石或者有貝殼沙礫的硬質(zhì)海底。櫛孔扇貝貝殼表面一般為褐色、杏黃色、灰白色等，有放射肋，并有小肋夾雜其中，殼長略小于殼高，兩殼大小基本相同，右殼較左殼平，且其前耳腹部有凹陷，與左殼閉合時形成一個下緣生有櫛狀小齒的孔，稱之為櫛孔，櫛孔扇貝由此得名。
分子生物學(xué)是生物學(xué)研究的一項重要分支，而DNA的提取則是分子生物學(xué)研究的重要基礎(chǔ)，DNA純度的純度及質(zhì)量對后續(xù)的研究工作具有極為重要的影響。每一物種由于其自身各成分的含量不同（比如有的物種蛋白含量高、有的物種糖分含量高），會對DNA的純度和質(zhì)量產(chǎn)生較大影響。因此，需要針對不同的物種開發(fā)出適宜的有針對性的提取方法。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對上述問題，本發(fā)明旨在提供一種適于櫛孔扇貝的高質(zhì)量、高純度的DNA提取方法。
一種櫛孔扇貝的DNA的提取方法，步驟如下：
（1）取扇貝肌肉組織3-8克，用液氮研磨后，將粉末平均加入到10-15管裝有500μL STE（100mM NaCl；10mM Tris-Cl，pH8.0；1mM EDTA，pH8.0）及50μL 10% SDS裂解緩沖液的1.5mL離心管中，隨即每管加入5μL 濃度為20mg/mL的蛋白酶K，55-57℃水浴10-60 min，至溶液澄清；
（2）每管加入250μL飽和酚、250μL氯仿/異戊醇（24:1），輕柔晃動5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（3）離心后有機(jī)相位于下層，中間層為蛋白層，上層為溶有DNA的水相，吸取上清液至新離心管中，重復(fù)步驟（2），至水相和有機(jī)相之間無蛋白層殘留；
（4）吸取上清液至新離心管中，加入500μL氯仿/異戊醇，輕柔晃動5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（5）吸取上清液，加入50μL 3M NaAc，緩慢輕柔搖勻，添加1mL在-20℃預(yù)冷的無水乙醇，放置于-20℃冰箱 20-50min，10000-15000rpm 離心8-15min，得到DNA沉淀；
（6）用預(yù)冷的 70%乙醇洗滌沉淀1-3次；
（7）沉淀干燥，根據(jù)沉淀量多少加入不同量的無菌超純水及終濃度為0.05mg/mL的RNase A，37℃水浴15-40min，直至RNA全部溶解；
（8）用分光光度計測定DNA的濃度，同時進(jìn)行瓊脂糖電泳檢測。
本發(fā)明的方法針對性強(qiáng)，特別適于櫛孔扇貝DNA的提取，提取的DNA濃度、純度非常高，非常適于文庫構(gòu)建、PCR等后續(xù)研究。
附圖說明
圖1 本發(fā)明方法提取的櫛孔扇貝DNA的電泳圖。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
從市場購買的櫛孔扇貝在實驗室用無菌海水暫養(yǎng)3-5天后，開始DNA的提取工作，步驟如下：
（1）取扇貝肌肉組織3-8克，用液氮研磨后，將粉末平均加入到10-15管裝有500μL STE（100mM NaCl；10mM Tris-Cl，pH8.0；1mM EDTA，pH8.0）及50μL 10% SDS裂解緩沖液的1.5mL離心管中，隨即每管加入5μL 濃度為20mg/mL的蛋白酶K，55-57℃水浴10-60 min，至溶液澄清；
（2）每管加入250μL飽和酚、250μL氯仿/異戊醇（24:1），輕柔晃動5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（3）離心后有機(jī)相位于下層，中間層為蛋白層，上層為溶有DNA的水相，吸取上清液至新離心管中，重復(fù)步驟（2），至水相和有機(jī)相之間無蛋白層殘留；
（4）吸取上清液至新離心管中，加入500μL氯仿/異戊醇，輕柔晃動5-15min，室溫10000-12000 rpm離心8-15min；
（5）吸取上清液，加入50μL 3M NaAc，緩慢輕柔搖勻，添加1mL在-20℃預(yù)冷的無水乙醇，放置于-20℃冰箱 20-50min，10000-15000rpm 離心8-15min，得到DNA沉淀；
（6）用預(yù)冷的 70%乙醇洗滌沉淀1-3次；
（7）沉淀干燥，根據(jù)沉淀量多少加入不同量的無菌超純水及終濃度為0.05mg/mL的RNase A，37℃水浴15-40min，直至RNA全部溶解；
（8）用分光光度計測定DNA的濃度，同時進(jìn)行瓊脂糖電泳檢測。
經(jīng)檢測，DNA的濃度為896 ng/uL，A260/A280=1.8。電泳結(jié)果如圖1所示，可見DNA的濃度及純度都非常高。