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櫛孔扇貝的DNA提取方法與流程

文檔序號:12712464閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種櫛孔扇貝的DNA的提取方法,其特征在于,步驟如下:

(1)取扇貝肌肉組織3-8克,用液氮研磨后,將粉末平均加入到10-15管裝有500μL STE及50μL 10% SDS裂解緩沖液的1.5mL離心管中,隨即每管加入5μL 濃度為20mg/mL的蛋白酶K,55-57℃水浴10-60 min,至溶液澄清;

(2)每管加入250μL飽和酚、250μL氯仿/異戊醇(體積比24:1),輕柔晃動5-15min,室溫10000-12000 rpm離心8-15min;

(3)離心后有機相位于下層,中間層為蛋白層,上層為溶有DNA的水相,吸取上清液至新離心管中,重復步驟(2),至水相和有機相之間無蛋白層殘留;

(4)吸取上清液至新離心管中,加入500μL氯仿/異戊醇,輕柔晃動5-15min,室溫10000-12000 rpm離心8-15min;

(5)吸取上清液,加入50μL 3M NaAc,緩慢輕柔搖勻,添加1mL在-20℃預冷的無水乙醇,放置于-20℃冰箱 20-50min,10000-15000rpm 離心8-15min,得到DNA沉淀;

(6)用預冷的 70%乙醇洗滌沉淀1-3次;

(7)沉淀干燥,根據(jù)沉淀量多少加入不同量的無菌超純水及終濃度為0.05mg/mL的RNase A,37℃水浴15-40min,直至RNA全部溶解;

(8)用分光光度計測定DNA的濃度,同時進行瓊脂糖電泳檢測。

2.根據(jù)權利要求1所述的櫛孔扇貝的DNA的提取方法,其特征在于,所述STE成分為:100mM NaCl;10mM Tris-Cl,pH8.0;1mM EDTA,pH8.0。

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