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海洋生物提取物抗腫瘤活性的測定方法與流程

文檔序號:12712763閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種海洋生物提取物抗腫瘤活性的測定方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)取對數(shù)生長期的貼壁的腫瘤細胞,倒掉殘留的舊培養(yǎng)液;加入胰酶消化3-5min;在消化后的細胞中加入含1% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)液反復吹打至形成單細胞懸液;用1000r/min的低速離心5min;棄去上清,再加入6mL RPMI 1640培養(yǎng)液再次吹打沉淀中的細胞,使之形成單細胞懸液;

(2)用血球計數(shù)板對細胞計數(shù),將細胞濃度稀釋至5×104ml-1左右;

(3)將細胞加入96孔培養(yǎng)板中,每個孔加入100μl;置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h;

(4)加入海洋生物提取物樣品,樣品溶液先經(jīng)過微孔濾膜過濾除菌,用RPMI 1640培養(yǎng)液將樣品稀釋成5個濃度梯度,每孔加入180μL,4個平行孔;

(5)在37℃,48h培養(yǎng)后,用移液槍將96孔板中液體洗凈后每孔加入1mg/ml MTT 100μl,置CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)4h;

(6)棄去MTT用RPMI 1640洗板一次后,每孔加入DMSO 200μl,置搖床搖勻30min;最后用酶標儀在570nm下檢測;

(7)實驗重復3次,數(shù)據(jù)以均值±SD表示,并用統(tǒng)計學上方差分析的方法對標準差進行計算。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海洋生物提取物抗腫瘤活性的測定方法,其特征在于,細胞毒百分率(%)=(OD值對照孔-OD值給藥孔)/OD值對照孔×100%;實驗重復3次,數(shù)據(jù)以均值±SD表示。

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