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用于基于蔗糖的改善精細(xì)化學(xué)品產(chǎn)生的修飾微生物的制作方法

文檔序號(hào):11849893閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種修飾的微生物,與其野生型相比具有fruA-基因編碼的酶的減少活性,其中修飾的微生物所來(lái)自的野生型屬于巴斯德菌科(Pasteurellaceae)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾的微生物,其中修飾的微生物不以蔗糖介導(dǎo)的甘油分解代謝阻遏為特征。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的修飾的微生物,其中修飾的微生物所來(lái)自的野生型具有SEQ ID NO:1的16S rDNA或顯示與SEQ ID NO:1的至少96%、97%、98%、99%或99.9%序列同源性的序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的修飾的微生物,其中修飾的微生物所來(lái)自的野生型屬于Basfia屬。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的修飾的微生物,其中修飾的微生物所來(lái)自的野生型屬于Basfia succiniciproducens物種。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的修飾的微生物,其中修飾的微生物所來(lái)自的野生型是如以DSM 18541保藏于德國(guó)DSMZ的Basfia succiniciproducens菌株DD1。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的修飾的微生物,其中fruA-基因包含選自以下的核酸:

a)具有SEQ ID NO:3的核苷酸序列的核酸;

b)編碼SEQ ID NO:4的氨基酸序列的核酸;

c)與a)或b)的核酸至少70%相同的核酸,同一性是在a)或b)的核酸總長(zhǎng)度范圍內(nèi)的同一性;

d)編碼氨基酸序列的核酸,所述氨基酸序列與a)或b)的核酸編碼的氨基酸序列至少70%相同,同一性是在a)或b)的核酸編碼的氨基酸序列的總長(zhǎng)度范圍內(nèi)的同一性。

e)能夠在嚴(yán)格條件下與根據(jù)a)或b)的任何核酸的互補(bǔ)序列雜交的核酸;和

f)編碼與a)或b)的任何核酸相同的蛋白質(zhì),但因遺傳密碼簡(jiǎn)并性而與上文a)或b)的核酸不同的核酸。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的修飾的微生物,其中修飾fruA-基因。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的修飾的微生物,其中通過(guò)缺失fruA-基因或至少其部分、缺失fruA-基因的調(diào)節(jié)元件或至少其部分或向fruA-基因中引入至少一個(gè)突變,實(shí)現(xiàn)對(duì)fruA-基因的修飾。

10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的修飾的微生物,其中微生物與其野生型相比還具有

i)減少的丙酮酸甲酸裂合酶活性,

ii)減少的乳酸脫氫酶活性,或

iii)減少的丙酮酸甲酸裂合酶活性和減少的乳酸脫氫酶活性。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的修飾的微生物,其中微生物包含:

A)ldhA-基因或至少其部分的缺失、ldhA-基因調(diào)節(jié)元件或至少其部分的缺失或向ldhA-基因引入至少一個(gè)突變;

B)pflD-基因或至少其部分的缺失、pflD-基因調(diào)節(jié)元件或至少其部分的缺失或向pflD-基因引入至少一個(gè)突變;

C)pflA-基因或至少其部分的缺失、pflA-基因調(diào)節(jié)元件或至少其部分的缺失或向pflA-基因引入至少一個(gè)突變;

D)ldhA-基因或至少其部分的缺失、ldhA-基因調(diào)節(jié)元件或至少其部分的缺失或向ldhA-基因引入至少一個(gè)突變

pflD-基因或至少其部分的缺失、pflD-基因調(diào)節(jié)元件或至少其部分的缺失或向pflD-基因引入至少一個(gè)突變;

E)ldhA-基因或至少其部分的缺失、ldhA-基因調(diào)節(jié)元件或至少其部分的缺失或向ldhA-基因引入至少一個(gè)突變

pflA-基因或至少其部分的缺失、pflA-基因調(diào)節(jié)元件或至少其部分的缺失或向pflA-基因引入至少一個(gè)突變。

12.產(chǎn)生有機(jī)化合物的方法,包括

I)在包含蔗糖作為可同化碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的修飾的微生物以允許修飾的微生物產(chǎn)生有機(jī)化合物,因而獲得包含有機(jī)化合物的發(fā)酵液;

II)從過(guò)程步驟I)中獲得的發(fā)酵液回收有機(jī)化合物。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法,其中有機(jī)化合物是琥珀酸。

14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的方法,其中可同化碳源不是甘油和蔗糖的混合物。

15.根據(jù)權(quán)利要求12至14中任一項(xiàng)所述的方法,其中方法還包括過(guò)程步驟:

III)通過(guò)至少一個(gè)化學(xué)反應(yīng),將過(guò)程步驟I)中獲得的發(fā)酵液內(nèi)所含的有機(jī)化合物轉(zhuǎn)化成或?qū)⑦^(guò)程步驟II)中獲得的已回收有機(jī)化合物轉(zhuǎn)化成與該有機(jī)化合物不同的次級(jí)有機(jī)產(chǎn)物。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法,其中有機(jī)化合物是琥珀酸并且其中次級(jí)有機(jī)產(chǎn)物選自琥珀酸酯或其聚合物、四氫呋喃(THF)、1,4-丁二醇(BDO)、γ-丁內(nèi)酯(GBL)和吡咯烷酮。

17.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的修飾的微生物的用途,用于發(fā)酵產(chǎn)生有機(jī)化合物。

18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的用途,其中有機(jī)化合物是琥珀酸并且其中可同化碳源不是甘油和蔗糖的混合物。

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