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生產(chǎn)多肽的方法與流程

文檔序號:12480930閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.人CMV啟動子,其相對于轉(zhuǎn)錄起始位點在核苷酸位置-41和/或-179具有核苷酸G。

2.啟動子,其具有SEQ ID NO:02或SEQ ID NO:03的核酸序列。

3.一種核酸,其特征在于它是由SEQ ID NO:02或SEQ ID NO:03的核酸組成,并且當有效連接至SEQ ID NO:04的核酸時,具有SEQ ID NO:01的人CMV-主要立即-早期啟動子的至少80%的啟動子強度。

4.一種生產(chǎn)多肽的方法,其特征在于它包括以下步驟:

a)用包含表達盒的核酸轉(zhuǎn)染真核細胞,所述表達盒包含SEQ ID NO:02或SEQ ID NO:03的第一核酸,所述第一核酸有效連接到編碼所述多肽的第二核酸,

b)選擇在步驟a)中轉(zhuǎn)染的細胞,

c)培養(yǎng)步驟b)的被選擇的細胞,

d)從所述細胞或培養(yǎng)基中回收所述多肽,

由此生產(chǎn)所述多肽。

5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法,其中所述生產(chǎn)是大規(guī)模生產(chǎn)。

6.根據(jù)權(quán)利要求4至5中任一項的方法,其中所述多肽是免疫球蛋白輕鏈或免疫球蛋白重鏈或其變體或其片段或其融合物。

7.根據(jù)權(quán)利要求4至6中任一項的方法,其特征在于所述核酸包含編碼選擇標記的另一表達盒。

8.根據(jù)權(quán)利要求4至7中任一項的方法,其特征在于所述真核細胞是哺乳動物細胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法,其特征在于所述哺乳動物細胞是CHO細胞、BHK細胞、HEK細胞、Sp2/0細胞或細胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法,其特征在于所述哺乳動物細胞是CHO細胞或HEK細胞。

11.根據(jù)權(quán)利要求4至10中任一項的方法,其特征在于所述多肽是免疫球蛋白、或免疫球蛋白片段或免疫球蛋白綴合物。

12.根據(jù)權(quán)利要求8至11中任一項的方法,其特征在于所述選擇標記是二氫葉酸還原酶、氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶或潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶。

13.SEQ ID NO:02或SEQ ID NO:03的啟動子在生產(chǎn)多肽中的用途。

14.一種細胞,其包含根據(jù)權(quán)利要求1的啟動子或根據(jù)權(quán)利要求3的核酸。

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