本發(fā)明涉及由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的疾病、病癥和病況，具體但非唯一地講，涉及膿毒癥和膿毒癥相關(guān)病理的治療和預(yù)防。本發(fā)明延伸至新的肽及其編碼核酸和利用這些肽產(chǎn)生通過(guò)免疫或通過(guò)被動(dòng)抗體轉(zhuǎn)移用于預(yù)防膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌所致感染的疫苗。本發(fā)明特別有益于免疫受損宿主，例如新生兒、嬰兒、兒童、育齡女性、妊娠女性、胎兒、年老者和糖尿病人。發(fā)明背景膿毒癥是新生兒發(fā)病率和死亡率的主要病因。按照世界衛(wèi)生組織(WHO)，每年大約100萬(wàn)例死亡由新生兒膿毒癥引起[1-3]。另外，30-50%生存的新生兒受累于長(zhǎng)期后遺癥，例如認(rèn)知減退、癲癇發(fā)作或耳聾[4]。新生兒感染可發(fā)生在出生前(子宮內(nèi))、分娩期間或出生后。子宮內(nèi)感染由來(lái)自母親生殖道的共棲細(xì)菌上行至羊水而引起[1]。發(fā)生在分娩期間感染由吸入定居在母親生殖道粘膜上的微生物引起。在兩種情況下，高達(dá)87%的感染由B群鏈球菌(GBS；亦稱為無(wú)乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae/S.agalactiae))、大腸桿菌(Escherichiacoli/E.coli)和克雷伯氏菌屬菌種(Klebsiellaspp.)引起[5-7]。雖然細(xì)菌的垂直傳遞也可以是發(fā)生在出生后感染的原因，但是這些感染的大多數(shù)由葡萄球菌屬菌種(Staphylococcusspp.)、肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae/S.pneumoniae)或假單胞菌屬菌種(Pseudomonasspp.)引起[2，3，7-12]。子宮內(nèi)感染也是早產(chǎn)的重要原因。實(shí)際上，50-80%在妊娠<32周的早產(chǎn)由上行性細(xì)菌感染引起[9，13-17]。用于新生兒膿毒癥的可獲得的現(xiàn)行治療只基于給予抗生素。然而，雖然由于實(shí)施分娩期抗生素預(yù)防GBS感染顯著下降，但是對(duì)所用抗生素的宿主抗性提高以及其在妊娠者中有疑問(wèn)的使用，突出顯示了對(duì)替代預(yù)防策略的需要。然而，用于新生兒膿毒癥的免疫療法迄今為止仍全然令人迷惑。新生兒免疫系統(tǒng)的獨(dú)特性基于不同的環(huán)境。重要的是，出生代表了從由母親子宮提供的幾乎無(wú)菌的環(huán)境進(jìn)入“不友好的”富抗原和病原體的外部世界的劇變性通行，嬰兒的免疫系統(tǒng)需要學(xué)習(xí)耐受這樣的外部世界。在此意義上，嬰兒生命頭幾個(gè)月的特征在于積極的免疫耐受狀態(tài)以控制對(duì)新抗原的過(guò)度應(yīng)答，這進(jìn)而可增加感染的風(fēng)險(xiǎn)。另一方面，由于子宮內(nèi)有限暴露于抗原和充分描述的新生兒適應(yīng)性免疫的缺陷，因此新生兒必須依靠其先天免疫系統(tǒng)以防止感染。實(shí)際上，中性粒細(xì)胞減少(一種特征在于異常低的嗜中性粒細(xì)胞數(shù)目的粒細(xì)胞病癥)與重度膿毒癥強(qiáng)相關(guān)[13，18-23]。雖然中性粒細(xì)胞減少通常用新生兒免疫系統(tǒng)不成熟來(lái)解釋，但本發(fā)明人之前描述了對(duì)GBS感染的新生兒易感性與在細(xì)菌攻擊后快速產(chǎn)生大量的白介素-10(IL-10)(一種免疫抑制分子)的新生兒易患病體質(zhì)有關(guān)[24]。他們的結(jié)果表明由IL-10產(chǎn)生而不是新生兒免疫系統(tǒng)不成熟引起的這種早期的免疫抑制，是在GBS感染中觀察到的中性粒細(xì)胞減少的主要原因[24]。然而，他們鑒定出胞外甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為造成這種早期IL-10產(chǎn)生的細(xì)菌因素[24，25]。他們?cè)谀阁w疫苗中使用重組GAPDH(rGAPDH)，并表明了這在保護(hù)后代免于致死GBS感染中非常有效[24]。他們已經(jīng)證明這種保護(hù)還可通過(guò)GBSGAPDH的抗體中和或通過(guò)阻斷IL-10與其受體結(jié)合而獲得[24]。腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriameningitides/N.meningitidis)，常稱為腦膜炎球菌，是危及生命的膿毒癥、腦膜炎及嬰兒和幼兒中的其它形式的腦膜炎球菌疾病的主要原因，但在新生兒期極少發(fā)現(xiàn)。它還是兒童和年輕成年人中細(xì)菌腦膜炎的主要原因。血清型分布在全世界顯著變化。例如，在美國(guó)，血清群B是疾病和死亡的主要原因，接著是血清群C；然而，血清群A在非洲和亞洲最流行。多種亞型妨礙了用于腦膜炎球菌疾病的通用疫苗的研發(fā)；然而，可獲得針對(duì)個(gè)體或在一個(gè)病例中2個(gè)血清群的少數(shù)疫苗。與新生兒、嬰兒、幼兒和兒童一樣，免疫受損成人例如年老者也非常易感染細(xì)菌感染和膿毒癥[26]。肺炎、菌血癥和膿毒癥在年老者中十分常見，并構(gòu)成死亡率和發(fā)病率的主要原因。這些感染一般是混合型的，通常由厭氧菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus/S.aureus)和流感嗜血菌(Haemophilusinfluenzae)所致，但是革蘭氏陰性腸細(xì)菌(肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae/K.pneumoniae)和其它腸桿菌科（Enterobacteriaceae）)、銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeroginosa/P.aeruginosa)(在臥床患者中)和GBS也可能是原因[26]。因此，重癥監(jiān)護(hù)室中觀察到的與重度膿毒癥和感染性休克有關(guān)的死亡率大約30%[27]。重要的是最近20年，免疫受損患者的發(fā)生率不斷提高[28]，且免疫缺陷是越來(lái)越常被鑒定為與歸因于重度膿毒癥和感染性休克的增加的死亡率有關(guān)的預(yù)后因子[29]。此外，糖尿病患者對(duì)由葡萄球菌屬菌種和GBS引起的侵入性感染的易感性提高[30，31]。在東亞，糖尿病是眾所周知的由肺炎克雷伯氏菌引起的肝膿腫的風(fēng)險(xiǎn)因素[32]。因此文獻(xiàn)中查到的數(shù)據(jù)表明，存在與在這些患者群中的膿毒癥一致相關(guān)的少數(shù)微生物病原體。發(fā)明概述本發(fā)明人將其努力集中于GAPDH，現(xiàn)已證實(shí)這種酶是所有相關(guān)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的胞外毒力因子。本發(fā)明人認(rèn)為他們現(xiàn)今首次（firstever）鑒定出能夠誘導(dǎo)對(duì)細(xì)菌而非人的GAPDH有特異性的抗體的新的一系列GAPDH衍生肽。如本文的充分描述和例示，這些新的肽對(duì)疫苗的生產(chǎn)非常有用，所述疫苗用于預(yù)防在特別是諸如新生兒、嬰兒、兒童、育齡女性、妊娠女性、胎兒、年老者和糖尿病人等免疫受損宿主中由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染性疾病。另外，誘導(dǎo)的抗體可用作治療特別是這些患者群的既有感染的治療劑。因此，按照本發(fā)明的第一方面，提供與存在于一種或多種膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH內(nèi)的肽有至少90%氨基酸序列同一性且與存在于人GAPDH內(nèi)的肽有小于10%氨基酸序列同一性的分離的肽或其功能片段或功能變體。本發(fā)明人從他們之前的研究了解到，對(duì)由GBS引起的膿毒癥的易感性與宿主在與細(xì)菌GAPDH接觸時(shí)產(chǎn)生高水平的IL-10的趨勢(shì)強(qiáng)相關(guān)[24]。然而，對(duì)于本發(fā)明人，沒有理由認(rèn)為或覺得對(duì)于其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌，所述相關(guān)性也適用。實(shí)際上，雖然已知其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌具有GAPDH(因?yàn)檫@種酶普遍存在)，但并不知道或預(yù)期來(lái)自其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH引起宿主細(xì)胞產(chǎn)生IL-10。因此，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)GAPDH是所有相關(guān)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的胞外毒力因子是完全出乎意料的。此外，目前沒有有效保護(hù)新生兒和胎兒免于分別由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌類的每一種引起的感染的疫苗。另外，用于對(duì)抗免疫受損成人(例如年老者和糖尿病人)的膿毒癥的預(yù)防或治療策略遠(yuǎn)非有效。如本文解釋的，抗生素只解決一部分問(wèn)題，因?yàn)樵谶t發(fā)性膿毒癥的情況下，抗生素常常給藥太遲，并且在預(yù)防膿毒癥相關(guān)發(fā)病中無(wú)效。然而，抗生素不能夠預(yù)防子宮內(nèi)感染。因此第一方面的肽、片段和變體在產(chǎn)生特別用于這些患者群的各種有用和必須需要的疫苗中具有重要用途。疫苗是用于感染性疾病的最有成本效益的治療法，當(dāng)同一疫苗可預(yù)防不同患者群中的由不同的人病原體引起的感染時(shí)甚至更是如此。本發(fā)明涉及預(yù)防、治療和改善由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌，特別是GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、腦膜炎奈瑟氏球菌和/或假單胞菌屬菌種(Pseudomonasspp)引起的感染性疾病。發(fā)明詳述本文描述的發(fā)明基于本發(fā)明人的出乎意料的發(fā)現(xiàn)，即對(duì)于所有的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌，對(duì)細(xì)菌膿毒癥的易感性與宿主與細(xì)菌GAPDH接觸時(shí)產(chǎn)生高水平的IL-10的趨勢(shì)強(qiáng)相關(guān)。在不同的風(fēng)險(xiǎn)組中，對(duì)膿毒癥的易感性是極常見的。然而，在不同的易感染宿主群中，與膿毒癥有關(guān)的微生物病原體是高度保守的。人類中與膿毒癥最相關(guān)的細(xì)菌是GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、假單胞菌屬菌種和腦膜炎奈瑟氏球菌，本發(fā)明人出乎意外地發(fā)現(xiàn)所有這些細(xì)菌均分泌GAPDH。因此，膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌可優(yōu)選選自以下細(xì)菌：GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌和假單胞菌屬菌種和腦膜炎奈瑟氏球菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，葡萄球菌屬菌種是金黃色葡萄球菌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，假單胞菌屬菌種是銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa/P.aeruginosa)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟氏球菌是腦膜炎奈瑟氏球菌血清型B(MenB)。在一個(gè)實(shí)施方案中，膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌不是GBS。來(lái)自GBS、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、銅綠假單胞菌和MenB(菌株MC58)的GAPDH的氨基酸序列在本文中分別以SEQIDNO:1-7識(shí)別。來(lái)自GBS的GAPDH的氨基酸序列(UniProt登記號(hào)Q8E3E8)在本文以如下的SEQIDNO:1識(shí)別：來(lái)自大腸桿菌的GAPDH的氨基酸序列(UniProt登記號(hào)D5D2F1)在本文中以如下的SEQIDNO:2識(shí)別：來(lái)自金黃色葡萄球菌的GAPDH的氨基酸序列(UniProt登記號(hào)A6QF81)在本文以如下的SEQIDNO:3識(shí)別：雖然此處只提供來(lái)自金黃色葡萄球菌的GAPDH的序列，但來(lái)自葡萄球菌屬菌種的所有可獲得的GAPDH序列具有超過(guò)98%序列相似性。來(lái)自肺炎鏈球菌的GAPDH的氨基酸序列(UniProt登記號(hào)Q97NL1)在本文以如下SEQIDNO:4識(shí)別：來(lái)自肺炎克雷伯氏菌的GAPDH的氨基酸序列(UniProt登記號(hào)B5XRG0)在本文以如下的SEQIDNO:5識(shí)別：來(lái)自銅綠假單胞菌的GAPDH的氨基酸序列(UniProt登記號(hào)P27726)在本文以如下的SEQIDNO:6識(shí)別：雖然此處只提供來(lái)自銅綠假單胞菌的GAPDH的序列，但來(lái)自假單胞菌屬菌種的所有可獲得的GAPDH序列具有超過(guò)98%序列相似性。來(lái)自MenB(菌株MC58)的GAPDH的氨基酸序列(UniProt登記號(hào)Q9JX95)在本文以如下的SEQIDNO:7識(shí)別：雖然此處只提供來(lái)自MenB(菌株MC58)的GAPDH的序列，但來(lái)自腦膜炎奈瑟氏球菌的不同血清型的所有可獲得的GAPDH序列具有97.668%序列相似性(http://www.uniprot.org/align/A20150610146R80D4XR)。描述了GBS的GAPDH蛋白的生化特征、酶促活性和表面定位[33]。還描述了來(lái)自大腸桿菌[34-36]、金黃色葡萄球菌[37-39]和肺炎鏈球菌[40]的GAPDH的胞外定位。本發(fā)明人認(rèn)為他們是表明胞外存在銅綠假單胞菌和腦膜炎奈瑟氏球菌GAPDH的最早的作者。GAPDH是與能量代謝有關(guān)的系統(tǒng)發(fā)生上保守的蛋白質(zhì)，其存在于每個(gè)細(xì)胞類型中。微生物GAPDH與人GAPDH有約30-40%序列同一性。人GAPDH的氨基酸序列(UniProt登記號(hào)P04406)在本文以如下SEQIDNO:8識(shí)別：出人意外地，細(xì)菌GAPDH共有高達(dá)60%的其氨基酸序列，甚至更出人意外地，本發(fā)明人現(xiàn)已證實(shí)來(lái)自本文所述的優(yōu)選膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌(即GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、假單胞菌屬菌種和腦膜炎奈瑟氏球菌)的GAPDH具有特別高程度的序列同一性(參見實(shí)施例7)。下表1提供在提交在本文以SEQIDNO:1-7識(shí)別的氨基酸序列(按照之前標(biāo)示的UniProt登記號(hào)的FASTA格式)后獲自ClustalW2服務(wù)器的多個(gè)比對(duì)和序列相似性百分比。圖1中也顯示了序列比對(duì)。表1：細(xì)菌GAPDH的序列比較(GBS與其它細(xì)菌)GAPDH序列比較序列相似性(%)GBS–大腸桿菌60.61GBS–葡萄球菌屬菌種69.05GBS–肺炎鏈球菌91.94GBS–肺炎克雷伯氏菌58.13GBS–假單胞菌屬菌種44.31GBS–腦膜炎奈瑟氏球菌(MenB)70.66因此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一方面的肽與存在于一種或多種膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH內(nèi)的肽具有至少95%、至少98%、至少99%或100%氨基酸序列同一性。因此，優(yōu)選肽與存在于以SEQIDNO:1-7識(shí)別的GAPDH序列的一個(gè)或多個(gè)的肽具有至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或甚至100%氨基酸序列同一性。例如，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一方面的肽可與存在于SEQIDNO:1的肽(即來(lái)自GBS的GAPDH)具有至少90%氨基酸序列同一性。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一方面的肽可與存在于SEQIDNO:2的肽(即來(lái)自大腸桿菌的GAPDH)具有至少95%氨基酸序列同一性。在又一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，肽可與存在于SEQIDNO:4的肽(即來(lái)自肺炎鏈球菌的GAPDH)具有至少98%氨基酸序列同一性。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，肽可與存在于SEQIDNO:1的肽(即來(lái)自GBS的GAPDH)具有至少95%氨基酸序列同一性、與存在于SEQIDNO:4的肽(即來(lái)自肺炎鏈球菌的GAPDH)有至少98%氨基酸序列同一性和與存在于SEQIDNO:6的肽(即來(lái)自假單胞菌屬菌種的GAPDH)有至少99%氨基酸序列同一性等等。應(yīng)了解，本文所述可能的序列同一性和可能的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的任何組合是預(yù)期的，且其構(gòu)成本發(fā)明的一部分。出人意外地發(fā)現(xiàn)，GAPDH在膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌中是高度保守的，本發(fā)明人鑒定出與細(xì)菌GAPDH共有的，但不存在于人GAPDH中的多個(gè)肽序列(表述“與……共有的”可包括由所比對(duì)的細(xì)菌序列證實(shí)（borneoutof）的共有氨基酸序列)。這些共有肽序列的4個(gè)優(yōu)選實(shí)例在本文以SEQIDNO:9-12識(shí)別。具有SEQIDNO:9-12的氨基酸序列的肽在本文分別稱為“肽1-4”，下文和表2中顯示了這些肽。衍生自GAPDH的肽1的氨基酸序列(即共同序列1)在本文以如下的SEQIDNO:9識(shí)別：衍生自GAPDH的肽2的氨基酸序列(即共同序列2)在本文以如下的SEQIDNO:10識(shí)別：衍生自GAPDH的肽3的氨基酸序列(即共同序列3)在本文以如下的SEQIDNO:11識(shí)別：衍生自GAPDH的肽4的氨基酸序列(即共同序列4)在本文以如下的SEQIDNO:12識(shí)別：表2：用作疫苗的衍生自細(xì)菌GAPDH的肽肽氨基酸序列SEQIDNO.1RIQEVEGLEVTR92DVTVEENAAM103EVKDGHLIVNGKV114EHDAESLRVMGDR12作為示例，圖2和3顯示肽1和肽2從存在于來(lái)自GBS、金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌的GADPH的天然序列的衍生和相同序列不存在于人的GAPDH中的事實(shí)。肽3和肽4衍生自存在于來(lái)自大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和/或銅綠假單胞菌的GADPH中的天然序列，也如圖2和/或3中所識(shí)別的一樣。因此，本發(fā)明的各個(gè)肽的氨基酸序列可與存在于膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌中的肽相同，或它可改變。然而，如果它改變，則優(yōu)選肽具有有效地為膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌GAPDH的共有序列，而非人GADPH的共有序列的氨基酸序列。因此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一方面的肽具有基本如SEQIDNO:9-12的任一個(gè)所列出的氨基酸序列。預(yù)期除了以SEQIDNO:9-12識(shí)別的共有序列以外，來(lái)自不同膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH帶有另外的共有序列，其可用來(lái)產(chǎn)生本發(fā)明的肽用作疫苗。肽可具有任何序列，但所述序列必須實(shí)質(zhì)上不被人的GAPDH所共有。或者，來(lái)自膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH的天然氨基酸序列可用來(lái)產(chǎn)生本發(fā)明的肽。表3顯示獲自指定細(xì)菌的GAPDH的推定的肽序列，其可用于本發(fā)明的疫苗中以靶向至少指定的細(xì)菌。在分別將各細(xì)菌GAPDH氨基酸序列與人GAPDH比對(duì)后(ClustalW2服務(wù)器，接著目檢和選擇)，肽被鑒定為不與人GAPDH同種型共有共同序列相似性的細(xì)菌GAPDH肽。這些肽表明可存在于細(xì)菌的表面肽中并且用來(lái)產(chǎn)生本發(fā)明疫苗的更多得多的（manymore）GAPDH肽。可使用天然序列內(nèi)的任何肽序列，但所述序列必須實(shí)質(zhì)上不被人的GAPDH所共有。表3：衍生自膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的用于疫苗的推定的GAPDH肽序列因此，在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一方面的肽具有基本上如SEQIDNO:13-69的任一個(gè)所列出的氨基酸序列。適宜地，第一方面的肽包含150個(gè)氨基酸或更少。例如，肽優(yōu)選包含小于100個(gè)氨基酸，更優(yōu)選小于50個(gè)氨基酸。甚至更優(yōu)選肽包含小于30個(gè)氨基酸，最優(yōu)選小于20個(gè)氨基酸。適宜地，本發(fā)明的肽包含至少3個(gè)氨基酸。優(yōu)選本發(fā)明的肽包含至少5個(gè)氨基酸、更優(yōu)選至少8個(gè)氨基酸，甚至更優(yōu)選至少10個(gè)氨基酸。本發(fā)明的肽可為上述范圍內(nèi)的任何長(zhǎng)度，但它們的長(zhǎng)度通常會(huì)為5-100個(gè)氨基酸，優(yōu)選長(zhǎng)度會(huì)為5-50個(gè)氨基酸，最優(yōu)選長(zhǎng)度會(huì)為10-20個(gè)氨基酸。適宜地，本發(fā)明的肽應(yīng)位于各細(xì)菌GAPDH的表面，并且呈類似于完整蛋白質(zhì)內(nèi)它們具有的結(jié)構(gòu)的3D結(jié)構(gòu)(構(gòu)象)?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法，包括通過(guò)重組方法，獲得本發(fā)明的肽。例如，先前描述了來(lái)自GBS的rGAPDH(完整蛋白質(zhì))的產(chǎn)生[41]。所需肽可以類似方式產(chǎn)生。還考慮將GBS以外的細(xì)菌的GAPDH(完整蛋白質(zhì)或肽)的重組產(chǎn)生作為本發(fā)明的一部分?；蛘?，肽可采用本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)(例如固相或液相合成)，通過(guò)蛋白質(zhì)截短或從頭合成獲得。本發(fā)明因此延伸到編碼本發(fā)明的肽的核酸分子。因此，按照本發(fā)明的第二方面，提供編碼第一方面的肽或其功能片段或功能變體的分離的核酸。本領(lǐng)域經(jīng)驗(yàn)豐富的研究者將能夠容易地鑒定編碼第一方面的肽或其功能片段或功能變體的合適的核酸序列。因此，技術(shù)人員根據(jù)本領(lǐng)域的現(xiàn)有知識(shí)和/或已發(fā)表文獻(xiàn)提供的有關(guān)技術(shù)細(xì)節(jié)，將能夠容易地實(shí)施本發(fā)明的這個(gè)方面(參見例如[25]，其描述了用于構(gòu)建和純化重組GAPH的有用方法)。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離的核酸是重組的或合成的。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離的核酸是編碼第一方面的肽或其功能片段或功能變體的cDNA分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離的核酸經(jīng)化學(xué)修飾，例如通過(guò)加入已知的修飾核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離的核酸與異源啟動(dòng)子可操作性連接。在一個(gè)實(shí)施方案中，分離的核酸與基質(zhì)或標(biāo)記等結(jié)合。這類修飾是本領(lǐng)域常見的，并會(huì)為技術(shù)人員已知的。在第三方面，提供包含第二方面的核酸的遺傳構(gòu)建體。本發(fā)明的遺傳構(gòu)建體可為表達(dá)盒的形式，其可適于編碼的肽在宿主細(xì)胞中表達(dá)。在不摻入載體的情況下，可將遺傳構(gòu)建體導(dǎo)入宿主細(xì)胞中。例如，可以將可為核酸分子的遺傳構(gòu)建體摻入脂質(zhì)體或病毒粒中?；蛘撸赏ㄟ^(guò)合適的方法，例如直接的胞吞攝取，將純化的核酸分子(例如無(wú)組蛋白的DNA或裸DNA)直接插入宿主細(xì)胞中?？赏ㄟ^(guò)轉(zhuǎn)染、感染、電穿孔、顯微注射、細(xì)胞融合、原生質(zhì)體融合或彈道轟擊(ballisticbombardment)，將遺傳構(gòu)建體直接導(dǎo)入宿主受試者的細(xì)胞(例如細(xì)菌細(xì)胞)中?；蛘撸墒褂昧Ｗ訕?particlegun)，將本發(fā)明的遺傳構(gòu)建體直接導(dǎo)入宿主細(xì)胞中?；蛘?，遺傳構(gòu)建體可含在重組載體內(nèi)，以在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)。因此，在本發(fā)明的第四方面，提供包含第三方面的遺傳構(gòu)建體的重組載體。重組載體可以是質(zhì)粒、黏?；蚴删w。所述重組載體可用于用第五方面的遺傳構(gòu)建體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，并用于在其中復(fù)制表達(dá)盒。技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的遺傳構(gòu)建體可與許多類型的骨架載體組合用于表達(dá)目的。重組載體可包括多種其它功能元件，其包括啟動(dòng)基因表達(dá)的合適的啟動(dòng)子。例如，可設(shè)計(jì)重組載體，使得它在宿主細(xì)胞的細(xì)胞溶膠中自主復(fù)制。在這種情況下，重組載體中可能需要誘導(dǎo)或調(diào)節(jié)DNA復(fù)制的元件?；蛘撸稍O(shè)計(jì)重組載體，使得它整合至宿主細(xì)胞的基因組中?？墒褂糜欣诎卸ㄕ?例如通過(guò)同源重組)的DNA序列。重組載體還可包含編碼在克隆過(guò)程中可用作選擇標(biāo)記的基因的DNA，所述選擇標(biāo)記，即，能夠選擇經(jīng)轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞并能夠選擇帶有摻入異源DNA的載體的細(xì)胞。例如，氯霉素抗性是預(yù)期的?；蛘?，選擇標(biāo)記基因可在不同載體中與含有目標(biāo)基因的載體同時(shí)使用。載體還可包含參與調(diào)節(jié)編碼序列表達(dá)或用于將表達(dá)的肽靶向至宿主細(xì)胞的某個(gè)部分的DNA。因此，在第五方面，提供包含第三方面的遺傳構(gòu)建體或第四方面的重組載體的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是細(xì)菌細(xì)胞，例如大腸桿菌?；蛘?，宿主細(xì)胞可以是動(dòng)物細(xì)胞，例如小鼠或大鼠細(xì)胞。優(yōu)選宿主細(xì)胞不是人細(xì)胞。可采用已知技術(shù)，用本發(fā)明的遺傳構(gòu)建體或載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。用于將遺傳構(gòu)建體導(dǎo)入宿主細(xì)胞中的合適方法將取決于細(xì)胞的類型。在第六方面，提供包含至少一種第五方面的宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因宿主生物。本發(fā)明的宿主細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因宿主生物的基因組可包含編碼第一方面的肽、變體或片段的核酸序列。宿主生物可以是多細(xì)胞生物，其優(yōu)選為非人的。例如，宿主生物可以是小鼠或大鼠。宿主可以是細(xì)菌。宿主可用于研發(fā)疫苗，所述疫苗用于使受試者免疫以免被例如GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、腦膜炎奈瑟氏球菌和/或假單胞菌屬菌種等膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌感染。實(shí)際上，對(duì)來(lái)自本文所述不同膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH的氨基酸序列的知識(shí)可有助于疫苗研發(fā)。如本文所述，本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，GAPDH是與新生兒膿毒癥以及年老者和糖尿病人的膿毒癥有關(guān)的大多數(shù)有害細(xì)菌的胞外毒力因子。本發(fā)明人出人意外地發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌GAPDH在感染的極早期在宿主中誘導(dǎo)IL-10產(chǎn)生，并且這些病原體利用GAPDH分泌作為逃避宿主免疫系統(tǒng)的形式(參見實(shí)施例5和6)。本發(fā)明人還出人意外地發(fā)現(xiàn)，GAPDH通過(guò)與Toll樣受體2(TLR2)相互作用而作用于免疫細(xì)胞。有趣的是（interestingly），本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌GAPDH能夠接合（engage）B1淋巴細(xì)胞表面上的TLR2，并通過(guò)這些細(xì)胞誘導(dǎo)IL-10產(chǎn)生(參見實(shí)施例1和2)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，B1細(xì)胞是在GAPDH刺激時(shí)IL-10的主要生產(chǎn)者。雖然本發(fā)明人從他們之前的研究了解到，TLR2介導(dǎo)的IL-10產(chǎn)生在由GBS引起的新生兒膿毒癥的病理生理中起關(guān)鍵作用[42]，但出人意料的是，這種活性被GAPDH觸發(fā)。按照文獻(xiàn)[43，44]，預(yù)期TLR2識(shí)別細(xì)菌相關(guān)脂蛋白。本發(fā)明人因此總是假定TLR2介導(dǎo)的IL-10產(chǎn)生與GBS脂蛋白有關(guān)。因此，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌GAPDH還可與TLR2結(jié)合并負(fù)責(zé)誘導(dǎo)IL-10產(chǎn)生的信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)是出乎意料的?？紤]到前述GAPDH是共有的毒力因子的出人意料的發(fā)現(xiàn)，同樣完全出人意料的是，這種活性是除GBS以外的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌所共有的(參見實(shí)施例3)。發(fā)現(xiàn)其它白細(xì)胞，像巨噬細(xì)胞一樣，在細(xì)菌GAPDH識(shí)別時(shí)也產(chǎn)生IL-10，雖然程度比B1細(xì)胞的低。另外，本發(fā)明人出人意外地發(fā)現(xiàn)，在由樹突細(xì)胞或巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的I型干擾素存在下，B1細(xì)胞的GAPDH誘導(dǎo)的(即TLR2介導(dǎo)的)IL-10產(chǎn)生顯著增加，這在這些細(xì)胞識(shí)別細(xì)菌抗原后發(fā)生(參見實(shí)施例4)。這代表了完全新的毒力機(jī)制，其中細(xì)菌結(jié)構(gòu)抗原和分泌的產(chǎn)物起協(xié)同作用以誘導(dǎo)宿主免疫抑制。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，在細(xì)菌GAPDH存在下新生兒產(chǎn)生升高量的IL-10的趨勢(shì)是其對(duì)這些感染的易感性提高的原因；雖然這對(duì)GBS是已知的[24]，但對(duì)于其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌是未知的或未預(yù)期的(參見實(shí)施例5)。通過(guò)中和細(xì)菌GAPDH還保護(hù)免疫受損成人(例如年老者和糖尿病人)免于膿毒癥，這意味著在新生兒中觀察到的相同機(jī)制對(duì)于這些人群也適用(參見實(shí)施例12和13)。然而，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌GAPDH還是人臍帶血和成人白細(xì)胞中的IL-10的有效誘導(dǎo)劑，證實(shí)了在小鼠中觀察到的相同機(jī)制也解釋成人個(gè)體的機(jī)制（thesamemechanismobservedinmiceistranslatedintohumanindividuals）(參見實(shí)施例6)。由于本發(fā)明人在其研究中研究了主要的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌，他們假設(shè)會(huì)在任何其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌中觀察到相同結(jié)果?？紤]到這一點(diǎn)，本發(fā)明人研發(fā)了基于GAPDH的疫苗以預(yù)防特別是在諸如新生兒、嬰兒、兒童、育齡女性、妊娠女性、胎兒、年老者和糖尿病人等免疫受損宿主中由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染性疾病。因此，按照本發(fā)明第七方面，提供第一方面的肽、片段或變體在開發(fā)用于預(yù)防被膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌感染的疫苗中的用途。膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌可優(yōu)選選自以下細(xì)菌：GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、假單胞菌屬菌種和腦膜炎奈瑟氏球菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，葡萄球菌屬菌種是金黃色葡萄球菌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，假單胞菌屬菌種是銅綠假單胞菌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟氏球菌是MenB。在一個(gè)實(shí)施方案中，膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌不是GBS。第八方面，提供包含第一方面的肽、片段或變體的疫苗。因?yàn)镚APDH是也存在于人中的蛋白質(zhì)，所以用完整細(xì)菌GAPDH蛋白構(gòu)成的疫苗可能引起自身免疫病理。有利的是，以實(shí)施例8-10為例，當(dāng)?shù)谝环矫娴碾挠米饕呙鐣r(shí)，它導(dǎo)致對(duì)來(lái)自本文所述膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的任一種的GAPDH的強(qiáng)抗體應(yīng)答，同時(shí)避免了自身免疫病理。實(shí)際上，這類肽的使用被認(rèn)為提高疫苗針對(duì)細(xì)菌GAPDH每個(gè)的特異性，這進(jìn)而提高針對(duì)各細(xì)菌所提供的保護(hù)。如上所述(參見表1的序列比較)，在某些情況下，來(lái)自不同細(xì)菌的GAPDH間的序列相似性程度不那么高。通過(guò)使用不同的肽，因此可確保對(duì)細(xì)菌GAPDH的任一種的特異性免疫應(yīng)答。使用單一GAPDH(完整蛋白質(zhì))作為疫苗，這將是不可能的。因此，本發(fā)明人出人意外地發(fā)現(xiàn)其中可將GAPDH衍生的疫苗給予有需要的受試者而不引起自身免疫病理的方法。特別就新生兒而言，新生兒B1細(xì)胞代表新生兒中總脾細(xì)胞的約30%。另一方面，成人B1細(xì)胞相當(dāng)于總脾細(xì)胞的1-5%[45]。本發(fā)明人認(rèn)為這增強(qiáng)了細(xì)菌GAPDH在新生兒對(duì)膿毒癥的易感性中的作用。第八方面(或如第七方面開發(fā))的疫苗可包含以任何組合和以任何數(shù)目的本文所述或設(shè)想的不同肽的任一種或其片段或變體。因此在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，疫苗可只包含本文所述肽的一個(gè)類型(例如SEQIDNO:9)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，疫苗可包含本文所述或設(shè)想的肽的任何2(例如SEQIDNO:9和10)、3(例如SEQIDNO:9、10和11)、4、5、6、7、8、9、10種或更多種或其片段或變體。設(shè)想不同的肽或其片段或變體的任何組合，且其構(gòu)成本發(fā)明的一部分。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，疫苗包含表2所示肽(即具有SEQIDNO:9-12)的一種或更多種或其片段或變體。疫苗可包含任1種肽、任2種肽、任3種肽或甚至所有4種肽或其片段或變體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，疫苗包含表3所示肽的一種或多種(即具有SEQIDNO:13-69)或其片段或變體。因此，疫苗可包含肽的任1種，或肽的任2、3、4、5、6、7、8、9、10種或更多種或其片段或變體。在又一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，疫苗包含表2所示肽(即具有SEQIDNO:9-12)的一種或多種和表3所示肽(即具有SEQIDNO:13-69)的一種或多種或其片段或變體。疫苗可包含肽的任1種，或肽的任2、3、4、5、6、7、8、9、10種或其片段或變體。在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，疫苗含有表2所示所有4種肽(即具有SEQIDNO:9-12)或其片段或變體。純粹出于方便起見，且不得解釋為以任何方式予以限制，含有這4種肽的組合的疫苗在下文將稱為新生兒疫苗(NeonatalVaccine)。雖然其名稱特別提及新生兒，但是新生兒疫苗意圖用于本文所述的任何患者群并針對(duì)本文所述的任何疾病、病癥或病況。在這一方面，早產(chǎn)和死產(chǎn)可能由被細(xì)菌感染誘導(dǎo)的加重的炎性反應(yīng)引起。在細(xì)菌誘導(dǎo)的早產(chǎn)和死產(chǎn)的情況下，最常見的物質(zhì)為GBS、大腸桿菌和肺炎克雷伯氏菌，即本文所述膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌。在本文所述的疫苗中，肽、其片段或變體可連接在一起形成較大肽(或小的蛋白質(zhì))。在一個(gè)實(shí)施方案中，兩種或更多種不同的肽(或片段或變體)連接在一起。在另一個(gè)實(shí)施方案中，相同肽(或片段或變體)的兩個(gè)或更多個(gè)拷貝連接在一起。連接可以是直接的(即被連接的肽、片段或變體之間沒有氨基酸)或間接的(即被連接的肽、片段或變體之間具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸，因此所述氨基酸用作“間隔區(qū)（spacer）”)?？芍貜?fù)所述肽(或片段或變體)的一個(gè)或多個(gè)的某一形式以形成較大的肽/小的蛋白質(zhì)。重復(fù)可以所謂串聯(lián)重復(fù)彼此直接相鄰，或它們可在各種情況下被一個(gè)或多個(gè)氨基酸間隔開來(lái)?；蛘哌B接的肽、片段或變體可以隨機(jī)順序出現(xiàn)。還預(yù)期上述排列的任何和全部組合，且其構(gòu)成本發(fā)明的一部分。例如，可通過(guò)使相同肽、片段或變體的兩個(gè)或更多個(gè)拷貝和兩種或更多種不同的肽、片段或變體以某一形式,隨機(jī)順序或兩種的組合連接在一起，來(lái)形成較大的肽。因此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，疫苗可包含僅一種類型的本文所述的肽、片段或變體(例如SEQIDNO:9)，但為該類型的兩個(gè)或更多個(gè)連接的拷貝。在另一個(gè)實(shí)施方案中，疫苗可包含以剛剛在上文描述的任何排列的所述肽、片段或變體的任何2種(例如SEQIDNO:9和10)、3種(例如SEQIDNO:9、10和11)、4、5、6、7、8、9、10種或更多種連接的拷貝。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，疫苗包含表2所示肽(即具有SEQIDNO:9-12)或其片段或變體的一個(gè)或多個(gè)連接的拷貝。疫苗可包含以本文所述任何連接排列的任一種肽、任2種肽、任3種肽或甚至所有4種肽或其片段或變體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，疫苗包含表3所示肽(即具有SEQIDNO:13-69)或其片段或變體的一個(gè)或多個(gè)連接的拷貝。因此，疫苗可包含以本文所述的任何連接排列的肽的任1種，或肽的任何2、3、4、5、6、7、8、9、10種或更多種或其片段或變體。在又一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，疫苗包含以本文所述的任何連接排列的表2所示肽的一種或多種(即具有SEQIDNO:9-12)和表3所示肽的一種或多種(即具有SEQIDNO:13-69)或其片段或變體。疫苗可包含以本文所述的任何連接排列的肽的任1種，或肽的任何2、3、4、5、6、7、8、9、10種或更多種或其片段或變體。在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，疫苗是新生兒疫苗，即含有以本文所述的任何連接排列的表2所示的所有4種肽(即具有SEQIDNO:9-12)或其片段或變體。因此，第八方面(或如第七方面開發(fā))的疫苗可包含任2、3、4、5、6、7、8、9、10種或更多種第一方面的肽、片段或變體，其中肽、片段和/或變體的至少兩種連接在一起。在這一方面，肽、片段或變體的任2、3、4、5、6、7、8、9、10種或更多種可連接在一起。本發(fā)明人出乎意料地觀察到，衍生自膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH的肽和包含這些肽的疫苗能夠引起保護(hù)性抗體應(yīng)答。具體地講，針對(duì)肽產(chǎn)生的抗體能夠特異性識(shí)別并中和膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH。因此，在第九方面，提供第一方面的肽、片段或變體或第八方面的疫苗用于刺激免疫應(yīng)答的用途。優(yōu)選免疫應(yīng)答包括對(duì)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的一個(gè)或多個(gè)菌種的GAPDH有特異性的抗體的產(chǎn)生。膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌可以是GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、腦膜炎奈瑟氏球菌和/或假單胞菌屬菌種。在一個(gè)實(shí)施方案中，葡萄球菌屬菌種是金黃色葡萄球菌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，假單胞菌屬菌種是銅綠假單胞菌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟氏球菌是MenB。因此，抗體對(duì)其具有特異性的GAPDH可以是具有SEQIDNO:1-7提供的氨基酸序列的那些。在一個(gè)實(shí)施方案中，膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌不是GBS。由于GAPDH是普遍存在的蛋白質(zhì)，且如本文證實(shí)的在膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌中是保守的，所以本發(fā)明的肽、片段和變體能夠誘導(dǎo)針對(duì)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的所有不同的血清型的保護(hù)，這是有利的。先前，已表明針對(duì)9個(gè)GBS血清型的復(fù)合糖疫苗在動(dòng)物中是免疫原性的，但不同表位特異性莢膜血清型的存在阻止了通用GBS疫苗的開發(fā)[46，47]。相比之下，GAPDH在所有已公開的GBS基因組中是結(jié)構(gòu)保守的(同一性>99.8%)。如本發(fā)明人之前描述的，從GAPDH免疫的小鼠或兔的血清中純化的抗GAPDH免疫球蛋白G(IgG)抗體因此用來(lái)證實(shí)屬于不同血清型和/或MLSTypes的10個(gè)無(wú)關(guān)GBS臨床分離株的培養(yǎng)上清液中存在GAPDH[24]。雖然GBSGAPDH顯示分別與兔、小鼠和人GAPDH僅44.7、45.8和44.0%氨基酸同一性，但是，之前描述的“GBS疫苗”在給予哺乳動(dòng)物時(shí)不誘導(dǎo)任何自身免疫[24]。鑒于本發(fā)明人目前發(fā)現(xiàn)GAPDH在所有膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌間是保守的，相同情況同樣適用于本文所述肽、片段和變體。肽、片段或變體的應(yīng)用可以是體外、體內(nèi)或離體應(yīng)用。優(yōu)選肽、其片段或變體的應(yīng)用是用于產(chǎn)生抗體的體外或離體應(yīng)用。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，體外或離體應(yīng)用是用于產(chǎn)生單克隆或多克隆抗體。所述應(yīng)用可包括第一方面的肽、片段或變體體外或離體與產(chǎn)抗體細(xì)胞相互作用，使得可產(chǎn)生對(duì)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的一個(gè)或多個(gè)菌種的GAPDH有特異性的抗體。本領(lǐng)域描述了合適的產(chǎn)抗體細(xì)胞和用于使所述細(xì)胞與本發(fā)明的肽、片段或變體接觸以產(chǎn)生抗體的技術(shù)，且所述細(xì)胞和技術(shù)會(huì)為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。例如，免疫的人和/或免疫的非人動(dòng)物的血液制品可用來(lái)產(chǎn)生抗體?；蛘?，第一方面的肽、片段或變體可用來(lái)產(chǎn)生對(duì)細(xì)菌GAPDH的不同表位有特異性的雜交瘤?？刹捎帽绢I(lǐng)域可獲得的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)產(chǎn)生雜交瘤。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，肽、其片段或變體的應(yīng)用是體內(nèi)應(yīng)用，即用于刺激受試者的免疫應(yīng)答。可將肽、片段或變體直接給予待單獨(dú)用它接種疫苗的受試者（asubjecttobevaccinatedonitsown），即僅與存在于一種或多種膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH內(nèi)的肽具有至少90%氨基酸序列同一性且與存在于人GAPDH內(nèi)的肽具有小于10%氨基酸序列同一性的一種或多種分離的肽或其功能片段或功能變體?？赏ㄟ^(guò)任何方法，包括通過(guò)注射或經(jīng)粘膜，給予肽、片段或變體。優(yōu)選經(jīng)肌內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)或真皮內(nèi)給予肽、片段或變體。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，將本發(fā)明的肽、片段或變體給予待接種的受試者會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生顯示對(duì)肽、片段或變體有免疫特異性的相應(yīng)抗體，且這些抗體有助于改善或治療既有感染，并預(yù)防被膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的后繼感染。因此在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，肽、其片段或變體用于刺激對(duì)諸如GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、腦膜炎奈瑟氏球菌和/或假單胞菌屬菌種等膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH有特異性的抗體的產(chǎn)生。技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到，存在多種其中可根據(jù)本文所述抗原肽、片段和變體，例如SEQIDNO:9-69所列出的肽及其片段和變體制備疫苗的方法。例如，可構(gòu)建基因工程疫苗，其中異源抗原(即肽、其片段或變體)與啟動(dòng)子或有利于在宿主載體(例如細(xì)菌如大腸桿菌，或病毒如腺病毒)中表達(dá)的基因融合。疫苗可包含可用作佐劑的賦形劑。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，疫苗中的抗原肽、片段或變體可與微顆粒佐劑(例如脂質(zhì)體或免疫刺激復(fù)合物(ISCOM))混合。肽、片段或變體可與佐劑(例如霍亂毒素或角鯊烯樣分子)混合?？梢允褂萌魏巫魟?，例如氫氧化鋁(明礬)、破傷風(fēng)類毒素或白喉毒素。溶媒可適宜地用于佐劑，這可包括但不限于水、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、多元醇或葡萄糖溶液。肽、其片段或變體還可適宜地與載體蛋白聯(lián)用，以增加肽、片段或變體的有效大小。以這種方式，免疫系統(tǒng)將不僅僅識(shí)別肽或其片段或變體，而且還將具有對(duì)其的記憶。肽、其片段或變體可與任何載體蛋白有關(guān)，例如鑰孔戚血藍(lán)蛋白(KLH)。因此本發(fā)明的疫苗適宜地包含本文所述的肽的一種或多種或其一種或多種片段或變體以及佐劑和/或載體蛋白?？墒褂盟鲭牡娜我环N，不論單獨(dú)還是與其它所述肽的任一種組合。如本文所述，新生兒疫苗含有表2所示的所有4種肽(即具有SEQIDNO:9-12)或其片段或變體。然而，可代替地使用所述肽的任何組合。佐劑可以是經(jīng)許可用于人的任一種，例如明礬、破傷風(fēng)類毒素(TT)或白喉毒素(DT)。載體蛋白可以是KLH、牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、TT和/或DT。適用于人的任何其它載體蛋白也可用于或備選用于疫苗中。實(shí)施例7描述了其中可制備疫苗的一種方法。首先，可選擇第一方面的肽、其片段或變體的一種或多種作為抗原，隨后經(jīng)接種的受試者會(huì)針對(duì)所述抗原產(chǎn)生相應(yīng)抗體。然后可采用本領(lǐng)域已知技術(shù)，將編碼指定肽、片段或變體的核酸分子或指定基因的序列克隆至合適的載體中以形成本發(fā)明第三方面的遺傳構(gòu)建體?？蓪⒕幋a指定抗原的DNA序列插入編碼已知蛋白質(zhì)的宿主細(xì)菌細(xì)胞的任何已知靶基因中?？蓪⒕幋a抗原的DNA序列插入多個(gè)克隆位點(diǎn)。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，可允許插入任何基因，只要宿主生物的生長(zhǎng)和功能不受損，即插入是功能冗余的。由此產(chǎn)生的遺傳構(gòu)建體可用于通過(guò)雙交換重組轉(zhuǎn)化營(yíng)養(yǎng)期母細(xì)胞?；蛘撸z傳構(gòu)建體可以是整合載體，其可用于通過(guò)單交換重組轉(zhuǎn)化營(yíng)養(yǎng)期母細(xì)胞。構(gòu)建體可包含在宿主細(xì)胞中可選擇的抗藥基因，例如氯霉素抗性。在證實(shí)質(zhì)?？寺『?，接著可通過(guò)合適的方法將質(zhì)粒導(dǎo)入宿主細(xì)胞中。轉(zhuǎn)化可以是DNA介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化或通過(guò)電穿孔?？赏ㄟ^(guò)測(cè)試質(zhì)粒攜帶的現(xiàn)已導(dǎo)入基因組的抗藥性來(lái)實(shí)現(xiàn)選擇?？刹捎玫鞍踪|(zhì)印跡法和探測(cè)大小分級(jí)分離的蛋白質(zhì)(十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳；SDS-PAGE)，利用識(shí)別所引入的抗原(即衍生自細(xì)菌GAPDH的肽、片段或變體)的抗體，來(lái)證實(shí)雜合或嵌合基因的表達(dá)。如果與宿主基因融合的抗原基因或核酸正確地表達(dá)，則出現(xiàn)新的條帶，所述條帶只被所述抗體識(shí)別，并且通常不存在于宿主中?？刹捎玫钠渌夹g(shù)為免疫熒光顯微術(shù)和熒光激活細(xì)胞分選(FACS)分析，其可顯示抗原在宿主表面上的表面表達(dá)?？赏ㄟ^(guò)任何途徑，包括肌內(nèi)、皮下、真皮內(nèi)、口服、可吸入、鼻內(nèi)、直腸和靜脈內(nèi)途徑，將所得疫苗給予受試者?？诜o藥可適宜地通過(guò)片劑、膠囊劑或混懸劑或乳劑?；蛘咭约?xì)微粉劑或通過(guò)Dischaler?或Turbohaler?的氣霧劑（aerosolviaaDischaler?orTurbohaler?）的形式給予疫苗。鼻內(nèi)給藥可適宜地為細(xì)微粉劑或氣霧鼻腔噴霧劑或改良的Dischaler?或Turbohaler?的形式。直腸給藥可適宜地通過(guò)栓劑。配制本發(fā)明的疫苗以給予有需要的任何受試者，特別是免疫受損宿主例如新生兒、嬰兒、兒童、育齡女性、妊娠女性、胎兒、老年受試者或糖尿病人。疫苗不必只給予已顯示感染病征的人或被認(rèn)為是由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的免疫受損或有較大感染風(fēng)險(xiǎn)的人。相反地，疫苗可給予表面上健康的受試者作為針對(duì)所述未來(lái)感染的可能性的純粹預(yù)防性措施。例如，它可作為常規(guī)接種程序的一部分給予諸如新生兒、嬰兒、兒童、育齡女性、妊娠女性、胎兒、年老者和糖尿病人等免疫受損宿主。本文所用“免疫受損”意指具有受損的免疫系統(tǒng)，如以新生兒、嬰兒、兒童、育齡女性、妊娠女性、胎兒、年老者和糖尿病人為例說(shuō)明?？膳渲票景l(fā)明的疫苗用于給予任何年齡的指定受試者。這意指會(huì)將疫苗給予任何年齡的兒童，包括新生兒、嬰兒、學(xué)步小童和學(xué)齡兒童。這意指會(huì)將疫苗給予妊娠女性和育齡女性，以保護(hù)母親和胎兒免受感染。還意指在老年受試者晚年的任何時(shí)間會(huì)將疫苗給予老年受試者和在糖尿病人一生的任何時(shí)間點(diǎn)給予糖尿病人。本文所用術(shù)語(yǔ)“新生兒”和“初生兒”可指從出生到約一個(gè)月齡的兒童。該術(shù)語(yǔ)適用于早產(chǎn)幼兒、過(guò)期產(chǎn)兒和足月幼兒。在出生前，使用術(shù)語(yǔ)“胎兒”。本文所用術(shù)語(yǔ)“嬰兒”和“幼兒”可指介于大約1月齡和大約1或2歲之間的幼小兒童(即當(dāng)兒童學(xué)習(xí)走路和說(shuō)話的年齡，此時(shí)可代之以使用術(shù)語(yǔ)“學(xué)步小童”)。本文所用術(shù)語(yǔ)“兒童”是指年幼兒童，包括從學(xué)步小童到12歲左右(即青春期前)兒童。本文所用術(shù)語(yǔ)“年老者”是指高齡受試者。例如，它可指年齡60或以上、65或以上、70或以上、75或以上或80或以上的男性和女性。該術(shù)語(yǔ)還包括處于相應(yīng)的生命后期的非人類受試者。本文所用術(shù)語(yǔ)“糖尿病人”是指患有1型糖尿病(亦稱為幼年型糖尿病或胰島素依賴性糖尿病)，處于該疾病的任何階段的人。這是唯一與免疫系統(tǒng)病理有關(guān)的糖尿病類型，其使患者免疫受損?？膳c其它既有疫苗，例如推薦用于免疫受損宿主例如嬰兒、兒童、育齡女性、妊娠女性、年老者和糖尿病人的疫苗(例如破傷風(fēng)和白喉疫苗)同時(shí)給予本發(fā)明的疫苗?？商貏e通過(guò)肌內(nèi)、皮下、真皮內(nèi)、口服、鼻內(nèi)或靜脈內(nèi)途徑將本發(fā)明的疫苗給予育齡女性。該疫苗的加強(qiáng)免疫欲在妊娠末三月。疫苗欲保護(hù)育齡女性免于包括GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、假單胞菌屬菌種和腦膜炎奈瑟氏球菌在內(nèi)的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的圍產(chǎn)期感染。未出生幼兒(胎兒)獲益于當(dāng)其母體抗體穿過(guò)胎盤到達(dá)發(fā)育中的兒童、尤其在末三月時(shí)獲得的被動(dòng)免疫。如以實(shí)施例說(shuō)明的一樣，本發(fā)明的疫苗還可預(yù)防由因細(xì)菌(例如GBS、大腸桿菌和克雷伯氏菌屬菌種)從生殖道上行至羊水所致子宮內(nèi)感染引起的早產(chǎn)和死產(chǎn)?？筛鶕?jù)待接種疫苗的生物，使用合適的定量給藥方案。例如，對(duì)于待接種疫苗的人類受試者，通?？刹捎?劑的10mg/kg以片劑或膠囊劑的方式，以2個(gè)月為間隔?？沙檠苑治鲅?IgG)應(yīng)答?？商崛⊥僖?、陰道液或糞便用于分析粘膜(分泌性IgA)應(yīng)答?？刹捎瞄g接酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)分析血清和粘膜樣品中的抗體應(yīng)答，以計(jì)量疫苗接種的功效。如實(shí)施例中所述，本發(fā)明人表明本發(fā)明的肽能夠誘導(dǎo)針對(duì)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的保護(hù)性抗體應(yīng)答。本發(fā)明人在實(shí)施例中證實(shí)了本發(fā)明的疫苗能夠預(yù)防由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染。優(yōu)選疫苗用于預(yù)防GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、腦膜炎奈瑟氏球菌和/或假單胞菌屬菌種感染。在疫苗的研發(fā)中，且如上文所述，優(yōu)選可將SEQIDNO:9-69的任一種或全部或其片段或變體用作抗原以引發(fā)待接種疫苗的受試者的免疫應(yīng)答。疫苗是一種預(yù)防劑；這就是說(shuō)，本文所述肽、片段或變體可用來(lái)預(yù)防感染，這包括之前感染的復(fù)發(fā)/再度定殖（relapse/recolonisation）。因此，在第十方面中，提供用于療法中的第一方面的肽、片段或變體。在第十一方面中，本發(fā)明提供第一方面的肽、片段或變體或第八方面的疫苗，其用于預(yù)防由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染。此外，按照本發(fā)明的第十二方面，提供預(yù)防由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染的方法，所述方法包括給予需要所述治療的受試者第一方面的肽、片段或變體或第八方面的疫苗。本發(fā)明的肽、片段、變體或疫苗可預(yù)防最常引起膿毒癥的至少7種不同的病原體的一種或多種引起的全身感染，所述病原體優(yōu)選：GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、假單胞菌屬菌種和腦膜炎奈瑟氏球菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，葡萄球菌屬菌種是金黃色葡萄球菌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，假單胞菌屬菌種是銅綠假單胞菌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟氏球菌是MenB。在一個(gè)實(shí)施方案中，膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌不是GBS。本發(fā)明的肽、片段、變體或疫苗因此可預(yù)防膿毒癥或由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的感染引起的任何其它疾病、病癥或病況。這些其它疾病、病癥或病況包括肺炎、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、小腸結(jié)腸炎、尿路感染、軟組織感染、胃腸感染、血流感染和腦炎。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽、片段、變體或疫苗用來(lái)預(yù)防早產(chǎn)和/或死產(chǎn)。如本文解釋的，早產(chǎn)和死產(chǎn)由因細(xì)菌(例如GBS、大腸桿菌和克雷伯氏菌屬菌種)從生殖道上行至羊水所致的子宮內(nèi)感染引起。通過(guò)給孕婦接種本發(fā)明的肽、片段、變體或疫苗，在未出生后代中提供具有針對(duì)這類抗原產(chǎn)生的抗體的被動(dòng)免疫。因此可通過(guò)母體接種保護(hù)胎兒和新生兒免受感染。本發(fā)明人認(rèn)識(shí)到，由所有膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌分泌的GAPDH、特別是這些分泌的GAPDH的序列相似性的知識(shí)也可被利用（harness）來(lái)制備用于治療、預(yù)防或改善由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染的有用治療藥。例如，阻斷分泌的GADPH與目標(biāo)人或動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合的任何作用劑均可用作預(yù)防、治療或改善該靶細(xì)胞中的感染的藥物。能夠阻斷分泌的GADPH與人或動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合的作用劑可以是抗體。例如，顯示與本文所述的肽、片段或變體的任一種（包括SEQIDNO:9-69所列出的氨基酸序列的那些）有特異性的抗體將能夠阻斷分泌的GAPDH與人或動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合。例如，如果將疫苗經(jīng)粘膜給予，它將在粘膜表面上產(chǎn)生分泌的IgA，且抗體(sIgA)會(huì)阻斷GAPDH與宿主細(xì)胞上皮結(jié)合。如果全身給予疫苗，它將誘導(dǎo)IgG的產(chǎn)生，其將阻斷細(xì)菌GAPDH與B1細(xì)胞表面上的TLR2結(jié)合，并防止由這些細(xì)胞引起的早期IL-10產(chǎn)生。因此，按照本發(fā)明的第十三方面，提供對(duì)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的一個(gè)或多個(gè)菌種的GAPDH有特異性的抗體，所述抗體針對(duì)第一方面的肽、片段或變體產(chǎn)生。術(shù)語(yǔ)“對(duì)……有特異性”，在本文結(jié)合抗體使用時(shí)，可指抗體的可變區(qū)專有地識(shí)別和結(jié)合其靶標(biāo)，例如肽或多肽(即盡管存在于肽或多肽家族中的序列同一性、同源性或相似性，也能夠?qū)袠?biāo)肽或多肽與其它類似的肽或多肽區(qū)分開來(lái))。同上，本發(fā)明第一方面的肽、片段或變體的氨基酸序列可以是存在于天然細(xì)菌GAPDH序列中的序列。所述序列因此可代表細(xì)菌GAPDH中的靶表位，其可用于阻斷分泌的GAPDH與人或動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合。因此，在第十四方面，提供對(duì)存在于膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的一個(gè)或多個(gè)菌種的GAPDH中的表位有特異性的抗體，其中該表位具有基本如SEQIDNO:9-69所列出的任一個(gè)的氨基酸序列。第十三方面和第十四方面的抗體能夠阻斷由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的一個(gè)或多個(gè)菌種分泌的GAPDH與人或動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合。同上，細(xì)胞可以是上皮細(xì)胞或B1細(xì)胞。還預(yù)期其它白細(xì)胞，例如巨噬細(xì)胞。例如，抗體可以是sIgA，且能夠阻斷GAPDH與人或動(dòng)物上皮細(xì)胞結(jié)合。或者抗體可以是IgG，且能夠阻斷GAPDH與人或動(dòng)物白細(xì)胞(例如B1細(xì)胞或巨噬細(xì)胞)表面上的TLR2結(jié)合。所述抗體因此適于阻斷或中和人或動(dòng)物細(xì)胞中的GAPDH誘導(dǎo)的IL-10產(chǎn)生。本發(fā)明包括單克隆和多克隆抗體兩者。按照本發(fā)明的第十五方面，提供產(chǎn)生對(duì)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的一個(gè)或多個(gè)菌種的GAPDH有特異性的抗體的方法，所述方法包括使產(chǎn)抗體細(xì)胞與第一方面的肽、片段或變體或第八方面的疫苗接觸的步驟。優(yōu)選本發(fā)明上述方面提及的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌為GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、腦膜炎奈瑟氏球菌和/或假單胞菌屬菌種。在一個(gè)實(shí)施方案中，葡萄球菌屬菌種是金黃色葡萄球菌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，假單胞菌屬菌種是銅綠假單胞菌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟氏球菌是MenB。因此，抗體對(duì)其具有特異性或抗體與之結(jié)合的GAPDH可以是具有以SEQIDNO:1-7識(shí)別的氨基酸序列的那些。在一個(gè)實(shí)施方案中，膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌不是GBS。本發(fā)明的方法可以是體外、體內(nèi)或離體方法。合適的體外和離體方法是本發(fā)明的第九方面描述的方法，即用于產(chǎn)生對(duì)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的一個(gè)或多個(gè)菌種的GAPDH有特異性的(單克隆或多克隆)抗體的方法。合適的體內(nèi)方法是本發(fā)明的第九方面描述的方法，即疫苗接種的方法。在第十六方面，提供治療、改善或預(yù)防由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染的方法，所述方法包括給予需要所述治療的受試者第十三方面或第十四方面的抗體或第八方面的疫苗。優(yōu)選抗體能夠治療、改善或預(yù)防GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、腦膜炎奈瑟氏球菌和/或假單胞菌屬菌種的感染。在一個(gè)實(shí)施方案中，葡萄球菌屬菌種是金黃色葡萄球菌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，假單胞菌屬菌種是銅綠假單胞菌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟氏球菌是MenB。因此，抗體對(duì)其具有特異性的GAPDH優(yōu)選為具有以SEQIDNO:1-7提供的氨基酸序列的那些。在一個(gè)實(shí)施方案中，膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌不是GBS。本發(fā)明的抗體因此可預(yù)防、治療或改善膿毒癥或由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的感染引起的任何其它疾病、病癥或病況。這些其它疾病、病癥或病況包括肺炎、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、小腸結(jié)腸炎、尿路感染、軟組織感染、胃腸感染、血流感染和腦炎。因此還提供用于療法、特別是用于預(yù)防、治療或改善由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染，包括預(yù)防、治療或改善前述疾病、病癥和病況的本發(fā)明第十三方面和第十四方面的抗體。優(yōu)選抗體針對(duì)本發(fā)明第一方面定義的肽、片段或變體，或本發(fā)明第八方面定義的疫苗產(chǎn)生。如上文結(jié)合本發(fā)明第十二方面的論述，針對(duì)本發(fā)明的肽、片段、變體或疫苗產(chǎn)生的抗體通過(guò)母體胎盤至未出生嬰兒或在哺乳期的母乳中。在未出生后代中提供的這類被動(dòng)免疫可防止膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染，并預(yù)防早產(chǎn)和/或死產(chǎn)。因此在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第十六方面的方法是預(yù)防未出生嬰兒感染的方法，并因此是預(yù)防早產(chǎn)和/或死產(chǎn)的方法。在這個(gè)實(shí)施方案中，會(huì)將抗體給予孕婦，作為替代分娩期抗生素預(yù)防的合適策略。因此還提供用于預(yù)防早產(chǎn)和/或死產(chǎn)的本發(fā)明第十三方面和第十四方面的抗體。本文所用術(shù)語(yǔ)“抗體”不只包括完整IgG，還包括其一部分，包括Fab和F(ab’)2片段。它還包括sIgA。因此，除使用本發(fā)明的疫苗接種外，用本文所述的肽、片段、變體或疫苗誘導(dǎo)的抗體，不論完整sIgA或IgG抗體還是其一部分，包括Fab或F(ab’)2片段，都可用作特別如下的受感染個(gè)體和/或未接受疫苗的母親的治療：a)待給予已證實(shí)或疑似膿毒癥或膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染的新生兒的治療方法—完整IgG或Fab/F(ab’)2片段；b)待給予自未接受疫苗的母親出生的新生兒的針對(duì)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染的預(yù)防方法—完整IgG或Fab/F(ab’)2片段；c)待給予未接受疫苗、處于接種末三月（inthethirdtrimesterofvaccination）的母親或育齡女性的針對(duì)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染的預(yù)防方法—完整IgG；和d)用于患有經(jīng)證實(shí)由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的膿毒癥或侵入性感染的孕婦或育齡女性的治療方法。被動(dòng)給予抗GAPDH抗體構(gòu)成相對(duì)于基于給予抗生素的現(xiàn)有治療方的重大改進(jìn)，所述給予抗生素引起抗性菌株的選擇。當(dāng)將另一受試者的抗體給予個(gè)人時(shí)，導(dǎo)致被動(dòng)免疫。當(dāng)將這些抗體引入所述人的體時(shí)，“借來(lái)的”抗體有助于預(yù)防或?qū)鼓承└腥拘约膊　１粍?dòng)免疫提供的保護(hù)是短暫的，通常只持續(xù)幾周或幾月，但它提供即時(shí)保護(hù)。如本文所證實(shí)的，當(dāng)將抗體作為藥物給予未免疫個(gè)體時(shí)，可人為誘導(dǎo)被動(dòng)免疫。同上，這些抗體可來(lái)自有免疫的人的合并和純化的血液制品或來(lái)自非人免疫動(dòng)物，例如馬、綿羊和兔。如實(shí)施例所示，將抗體被動(dòng)給予新生小鼠提供保護(hù)免于被GBS、大腸桿菌、肺炎鏈球菌和金黃色葡萄球菌的致死感染。將這些抗體給予未接受本發(fā)明的疫苗接種的母親和/或未接種疫苗母親的新生兒。如本文的論述，還可通過(guò)將本發(fā)明的肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物給予孕婦，在胎兒中誘導(dǎo)被動(dòng)免疫。未出生幼兒(胎兒)獲益于當(dāng)其母親的抗體通過(guò)胎盤達(dá)到發(fā)育中的兒童(尤其在末三月)時(shí)獲得的被動(dòng)免疫。因此這是替代分娩期抗生素預(yù)防的合適策略。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物可用于治療、改善或預(yù)防被膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌感染的單一療法(即只使用該肽、作用劑、疫苗、抗體或藥物)?；蛘?，本發(fā)明的肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物可作為治療、改善或預(yù)防被膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌感染的已知療法的輔助劑使用或與已知療法組合使用。例如，肽、作用劑、疫苗、抗體或藥物可與治療膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌感染的已知作用劑組合使用。例如，肽、作用劑、疫苗、抗體或藥物可與治療由真菌或病毒引起的新生兒膿毒癥的已知作用劑組合使用。它可與已知的抗反轉(zhuǎn)錄病毒劑組合使用。沒有限制將哪些本文所述的肽、作用劑、疫苗、抗體或藥物給予哪些患者。相反地，預(yù)期可將本文所述肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物的任一種給予本文所述的任何患者。實(shí)際上，本發(fā)明人明確計(jì)劃本發(fā)明包括每種肽、作用劑、疫苗、抗體或藥物的組合和規(guī)定的患者組。本發(fā)明因此包括治療劑和規(guī)定的患者組的每種可能的組合。在諸如新生兒、嬰兒、兒童、育齡女性、妊娠女性、胎兒、年老者和糖尿病人等免疫受損宿主中使用新生兒疫苗是優(yōu)選的?？蓪⒈景l(fā)明的肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物在具有多種不同形式的組合物中組合，所述形式特別取決于其中使用組合物的方式。因此，例如，組合物可為散劑、片劑、膠囊劑、液體、軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、水凝膠、氣霧劑、噴霧劑、膠束溶液、經(jīng)皮貼劑、脂質(zhì)體混懸劑的形式或可給予需要治療的人或動(dòng)物的任何其它合適的形式。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明藥物的溶媒應(yīng)是它所給予的受試者對(duì)其耐受良好且優(yōu)選能夠使得作用劑穿越血腦屏障遞送的溶媒。包含本發(fā)明的肽、作用劑、疫苗和抗體的藥物可以多種方式使用。例如，可能需要口服給藥，在此情況下，作用劑可包含在組合物內(nèi)，所述組合物可為例如以片劑、膠囊劑或液體的形式口服攝入。包含本發(fā)明的肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物的組合物可通過(guò)吸入(例如鼻內(nèi))給予。還可配制組合物用于局部使用。例如，可將乳膏劑或軟膏劑施用于皮膚。還可將本發(fā)明的肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物摻入慢釋或緩釋裝置中。例如可將所述裝置插在皮膚上或插入皮膚之下，且藥物可在幾周或甚至幾月內(nèi)釋放。裝置可位于至少治療部位的附近。在需要用按照本發(fā)明使用的作用劑長(zhǎng)期治療且所述治療通常會(huì)需要頻繁給藥(例如至少每日注射)時(shí)，所述裝置可以特別有利。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，可通過(guò)注射入血流或直接注射入需要治療的部位，將本發(fā)明的肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物給予受試者。注射可以是靜脈內(nèi)(推注或輸注)或皮下(推注或輸注)，或真皮內(nèi)(推注或輸注)。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，需要的肽、作用劑、疫苗、抗體或藥物的量通過(guò)其生物活性和生物利用度確定，其進(jìn)而取決于給藥方式；肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物的物理化學(xué)性質(zhì)；以及是用作單一療法還是用作聯(lián)合療法。給藥頻率還將受作用劑在待治療的受試者內(nèi)的半壽期影響。待給予的最適劑量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定，并且將隨使用中的具體作用劑、藥物組合物的強(qiáng)度、給藥方式和細(xì)菌感染的進(jìn)展而變化。取決于待治療的具體受試者的其它因素會(huì)導(dǎo)致需要調(diào)整劑量，所述因素包括受試者年齡、體重、性別、飲食和給藥時(shí)間。一般而言，介于0.001μg/kg體重和10mg/kg體重之間的本發(fā)明的肽、作用劑、疫苗、抗體或藥物的每日劑量可用于治療、改善或預(yù)防細(xì)菌感染，這取決于使用哪一種肽、作用劑、疫苗、抗體或藥物。更優(yōu)選每日劑量介于0.01μg/kg體重和1mg/kg體重之間，更優(yōu)選介于0.1μg/kg和100μg/kg體重之間，最優(yōu)選介于約0.1μg/kg和10μg/kg體重之間?？稍诩?xì)菌感染之前、期間或在發(fā)作后給予肽、作用劑、疫苗、抗體或藥物。每日劑量可作為單次給藥(例如單次每日注射)給予?；蛘撸赡苄枰惶靸?nèi)兩次或更多次給予肽、作用劑、疫苗、抗體或藥物。例如，可作為介于0.07μg和700mg(即假設(shè)體重為70kg)的兩劑(或更多劑，這取決于待治療細(xì)菌感染的嚴(yán)重程度)每日劑量給予肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物。接受治療的患者可在醒時(shí)服用第一劑，然后晚上第二劑(如果以兩劑方案)或之后以3或4小時(shí)間隔。或者，可使用慢釋裝置以向患者提供最適劑量的本發(fā)明的肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物，而不需要給予重復(fù)劑量?？刹捎靡阎椒?，例如由制藥工業(yè)(例如體內(nèi)實(shí)驗(yàn)、臨床試驗(yàn)等)常規(guī)采用的方法，以形成本發(fā)明的肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物的具體制劑和精確的治療方案(例如作用劑的每日劑量和給藥頻率)。在本發(fā)明的第十七方面，提供包含本發(fā)明第十三方面和第十四方面的抗體和任選藥學(xué)上可接受的載體的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌治療組合物。術(shù)語(yǔ)“膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌治療組合物”或“抗膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌組合物”可意指用于治療性改善、預(yù)防或治療受試者的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌感染的藥物制劑。本發(fā)明在第十八方面還提供用于制備本發(fā)明第十七方面的組合物的方法，所述方法包括將治療有效量的本發(fā)明第十三方面和第十四方面的抗體與藥學(xué)上可接受的載體混合。作用劑(例如本發(fā)明的抗體)的“治療有效量”是任何量，其是當(dāng)給予受試者時(shí)所需要的治療感染或產(chǎn)生所需作用的作用劑的量。例如，所用作用劑(例如抗體)的治療有效量可為約0.001mg-約1000mg，優(yōu)選約0.01mg-約500mg。優(yōu)選作用劑的量是約0.1mg-約100mg、最優(yōu)選約0.5mg-約50mg的量。作為指導(dǎo)，用于本文所述實(shí)施例中的新生小鼠的抗體的劑量為40mg/kg。本文提及的“藥學(xué)上可接受的載體”是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知可用于配制藥物組合物的任何已知的化合物或已知化合物的組合。本文所用“受試者”可以是脊椎動(dòng)物、哺乳動(dòng)物或馴養(yǎng)動(dòng)物。因此，本發(fā)明的肽、作用劑、疫苗、抗體和藥物可用于治療任何哺乳動(dòng)物，例如家畜(例如馬)、寵物，或可用于其它獸醫(yī)應(yīng)用。最優(yōu)選受試者是人類。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥學(xué)上可接受的載體可以是固體，且組合物可為散劑或片劑的形式。固體藥學(xué)上可接受的載體可包括一種或多種物質(zhì)，其還可用作調(diào)味劑、潤(rùn)滑劑、增溶劑、助懸劑、染料、填充劑、助流劑、壓緊助劑、惰性基料（inertbinders）、甜味劑、防腐劑、染料、包衣劑或片劑崩解劑。載體還可以是包封材料。在散劑中，載體是與本發(fā)明的細(xì)碎活性劑混合的細(xì)碎固體。在片劑中，活性劑可以合適比例與具有必需的壓緊性質(zhì)的載體混合，并按所需形狀和大小壓實(shí)。散劑和片劑優(yōu)選含有高達(dá)99%的活性劑。合適的固體載體包括例如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、糖、乳糖、糊精、淀粉、明膠、纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、低熔點(diǎn)蠟和離子交換樹脂。在另一個(gè)實(shí)施方案中，藥用載體可以是凝膠，且組合物可為乳膏劑等的形式。然而，藥用載體可以是液體，且藥物組合物為溶液的形式。液體載體用于制備溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑、酏劑和加壓組合物。可將本發(fā)明的活性劑溶于或懸浮于藥學(xué)上可接受的液體載體例如水、有機(jī)溶劑、兩者的混合物或藥學(xué)上可接受的油或脂肪中。液體載體可含有其它合適的藥用添加劑例如增溶劑、乳化劑、緩沖劑、防腐劑、甜味劑、調(diào)味劑、助懸劑、增稠劑、著色劑、粘度調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑或滲透壓調(diào)節(jié)劑。對(duì)于口服和胃腸外給藥，液體載體的合適實(shí)例包括水(部分含有上述添加劑，例如纖維素衍生物，優(yōu)選羧甲基纖維素鈉溶液)、醇(包括一元醇和多元醇，例如二醇)及其衍生物和油(例如分餾椰子油和花生油)。對(duì)于胃腸外給藥，載體還可為油性酯例如油酸乙酯和肉豆蔻酸異丙酯。無(wú)菌液體載體可用于胃腸外給藥的無(wú)菌液體形式的組合物。用于加壓組合物的液體載體可以是鹵化烴或其它藥學(xué)上可接受的拋射劑?？赏ㄟ^(guò)例如肌內(nèi)、鞘內(nèi)、硬膜外、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)和特別是皮下注射，使用作為無(wú)菌溶液劑或混懸劑的液體藥物組合物。作用劑可制備成無(wú)菌固體組合物，在給藥時(shí)可使用無(wú)菌水、鹽水或其它合適的無(wú)菌注射介質(zhì)將其溶解或懸浮。本發(fā)明的作用劑和組合物可以無(wú)菌溶液劑或混懸劑的形式口服給予，所述溶液劑或混懸劑含有其它溶質(zhì)或助懸劑(例如充足的鹽水或葡萄糖以使溶液等滲)、膽汁鹽、阿拉伯樹膠、明膠、去水山梨醇單油酸酯、聚山梨醇酯80(山梨糖醇的油酸酯及其與環(huán)氧乙烷共聚合的酐)等。按照本發(fā)明使用的作用劑也可以液體或固體組合物形式口服給予。適于口服給藥的組合物包括固體形式(例如丸劑、膠囊劑、顆粒劑、片劑和散劑)和液體形式(例如溶液劑、糖漿劑、酏劑和混懸劑)。可用于胃腸外給藥的形式包括無(wú)菌溶液劑、乳劑和混懸劑。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明延伸到任何核酸或肽或其變體、衍生物或類似物，其基本上包含本文提及的序列的任一個(gè)的氨基酸或核酸序列，包括其功能變體或功能片段。術(shù)語(yǔ)“基本上的氨基酸/核苷酸/肽序列”、“功能變體”和“功能片段”可以是與本文提及的序列的任一個(gè)的氨基酸/核苷酸/肽序列具有至少40%序列同一性(例如與以SEQIDNO:9-69識(shí)別的序列有40%同一性)的序列。還預(yù)期與本文提及的序列的任一個(gè)具有大于50%、更優(yōu)選大于65%、70%、75%序列同一性，甚至更優(yōu)選大于80%序列同一性的氨基酸/核苷酸/肽序列。優(yōu)選氨基酸/核苷酸/肽序列與本文提及的序列的任一個(gè)具有至少85%同一性，更優(yōu)選與本文提及的序列的任一個(gè)具有至少90%、92%、95%、97%、98%同一性，最優(yōu)選具有至少99%同一性。技術(shù)人員應(yīng)了解如何計(jì)算2個(gè)氨基酸/核苷酸/肽序列之間的百分比同一性。為了計(jì)算2個(gè)氨基酸/核苷酸/肽序列的百分比同一性，必須先準(zhǔn)備2個(gè)序列之間的比對(duì)，接著計(jì)算序列同一性值。2個(gè)序列的百分比同一性可取不同的值，這取決于：(i)用來(lái)比對(duì)序列的方法，例如ClustalW、BLAST、FASTA、Smith-Waterman(在不同的程序中執(zhí)行)，或3D比較的結(jié)構(gòu)比對(duì)；和(ii)比對(duì)方法所用的參數(shù)，例如局部與全局比對(duì)，所用配對(duì)評(píng)分矩陣(例如BLOSUM62、PAM250、Gonnet等)和空位罰分，例如函數(shù)形式和常數(shù)。完成比對(duì)后，有許多不同的計(jì)算2個(gè)序列之間的百分比同一性的方法。例如，可將同一性的數(shù)值除以：(i)最短序列的長(zhǎng)度；(ii)比對(duì)的長(zhǎng)度；(iii)序列的平均長(zhǎng)度；(iv)無(wú)空位位置的數(shù)目；或(iv)不包括突出端的同等位置的數(shù)目。此外，應(yīng)認(rèn)識(shí)到，百分比同一性也是有很強(qiáng)的長(zhǎng)度依賴性。因此，一對(duì)序列越短可預(yù)期偶然發(fā)生的序列同一性越高。因此，應(yīng)認(rèn)識(shí)到，氨基酸或核酸序列的精確比對(duì)是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。流行的多個(gè)比對(duì)程序ClustalW[48、49]是用于產(chǎn)生本發(fā)明的蛋白質(zhì)或DNA的多種比對(duì)的優(yōu)選方法。ClustalW的合適參數(shù)可如下：對(duì)于DNA比對(duì)：空位開放罰分=15.0，空位延伸罰分=6.66，陣列=Identity。對(duì)于蛋白質(zhì)比對(duì)：空位開放罰分=10.0，空位延伸罰分=0.2，陣列=Gonnet。對(duì)于DNA和蛋白質(zhì)比對(duì)：ENDGAP=-1，GAPDIST=4。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，對(duì)于最適序列比對(duì)，改變這些參數(shù)和其它參數(shù)可以是必需的。優(yōu)選，然后可從所述比對(duì)將2個(gè)氨基酸/核苷酸/肽序列之間的百分比同一性計(jì)算為(N/T)*100，其中N是序列共有相同殘基的位置的數(shù)目，T為所比較位置的總數(shù)，包括空位位不包括突出端。因此，計(jì)算2個(gè)序列之間的百分比同一性的最優(yōu)選的方法包括(i)應(yīng)用使用一組合適的參數(shù)(例如上文列出的參數(shù))的ClustalW程序準(zhǔn)備序列比對(duì)；和(ii)將N和T值代入下式：序列同一性=(N/T)*100。用于鑒定類似序列的備選方法會(huì)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。例如，基本相似的核苷酸序列將是在嚴(yán)格條件下與編碼第一方面的肽或其功能片段或功能變體的核苷酸序列或其互補(bǔ)序列雜交的序列。所謂嚴(yán)格條件意指核苷酸在3x氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中在約45℃同與濾膜結(jié)合的DNA或RNA雜交，接著在0.2xSSC/0.1%SDS中在約20-65℃下的至少一次洗滌?；蛘撸鞠嗨频碾目膳cSEQIDNO:9-69所列出的序列相比至少1個(gè)，但小于3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸不同。由于遺傳密碼簡(jiǎn)并所致，顯然可變動(dòng)或改變本文所述任何核酸序列而不實(shí)質(zhì)性地影響由其編碼的肽、多肽或蛋白質(zhì)的序列以提供其功能變體。合適的核苷酸變體是具有通過(guò)替換編碼序列內(nèi)相同氨基酸的不同密碼子而改變的序列丙因此產(chǎn)生同義變化（silentchange）的那些。其它合適的變體是具有同源核苷酸序列并包含通過(guò)替換編碼與其替換的氨基酸具有相似生物生理性質(zhì)的側(cè)鏈的氨基酸的不同密碼子以產(chǎn)生保守變化而改變的全部或部分序列的那些。例如，小的非極性疏水氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、脯氨酸和甲硫氨酸。大的非極性疏水氨基酸包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。極性的中性氨基酸包括絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。帶正電荷的(堿性)氨基酸包括賴氨酸、精氨酸和組氨酸。帶負(fù)電荷的(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。因此應(yīng)認(rèn)識(shí)到，氨基酸可用具有相似生物生理性質(zhì)的氨基酸替換，并且技術(shù)人員會(huì)了解編碼這些氨基酸的核苷酸序列。本文(包括任何隨附權(quán)利要求、摘要和附圖)所述所有特征和/或所公開的任何方法或過(guò)程的所有步驟可以任何組合與上述方面的任何結(jié)合，只是其中所述特征和/或步驟的至少一些相互排斥的組合除外。為了更好地理解本發(fā)明并顯示如何可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的實(shí)施方案，現(xiàn)將舉例參照隨附的簡(jiǎn)圖（diagrammaticdrawings），其中：圖1顯示主要膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌GBS、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、銅綠假單胞菌和腦膜炎奈瑟氏球菌的GAPDH的氨基酸序列比對(duì)。在提交本文以SEQIDNO:1-7(按照之前標(biāo)示的UniProt登記號(hào)的FASTA格式)識(shí)別的氨基酸序列后，從ClustalW2服務(wù)器獲得多個(gè)比對(duì)。表1顯示所得%序列相似性。圖2提供可用于本發(fā)明的疫苗的4種表面肽的實(shí)例。該表顯示了4種示例性肽的氨基酸序列和具有各氨基酸序列的相應(yīng)細(xì)菌。在表之下標(biāo)示了相同的4種肽在不同細(xì)菌GAPDH中的表面定位。肽在本文以肽1-4(SEQIDNO:9-12)識(shí)別，且它們組合使用以形成本文標(biāo)識(shí)為新生兒疫苗的疫苗。圖3顯示來(lái)自無(wú)乳鏈球菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌和人的GAPDH的氨基酸序列的比對(duì)。兩個(gè)加框的區(qū)域顯示肽1和肽2衍生自其中的序列。圖4-6顯示在被細(xì)菌GAPDH刺激時(shí)新生兒B1細(xì)胞是IL-10的主要生產(chǎn)者。圖4中的圖A和B顯示在脾單核細(xì)胞(MNC)、外周血嗜中性粒細(xì)胞(PMNC)、衍生自肝的巨噬細(xì)胞(FLM)或樹突細(xì)胞(FLDC)和從新生小鼠脾純化的B細(xì)胞(全部)、B1細(xì)胞和B2細(xì)胞用脂多糖(LPS)、rGAPDH或僅RoswellParkMemorialInstitute(RPMI)培養(yǎng)基刺激后的IL-10濃度。圖5顯示在所示TLR2抑制劑(OxPAC)或Toll樣受體4(TLR4)抑制劑(CLI095)存在下在自新生小鼠的脾純化的B1細(xì)胞用rGAPDH刺激后的IL-10濃度。圖6的圖A和B顯示在自新生小鼠的脾純化的全部細(xì)胞和B1細(xì)胞分別被rGAPDH、固定的GBS(GBSf)或僅RPMI培養(yǎng)基刺激后的IL-10濃度。圖6的圖C顯示在衍生自胎肝的樹突細(xì)胞和自新生兒脾純化的B1細(xì)胞的共培養(yǎng)用rGAPDH、GBSf、一種對(duì)I型干擾素受體(αIFNAR)有特異性的單克隆抗體，或僅RPMI培養(yǎng)基的刺激后的IL-10濃度。圖4-6中所有圖描述的數(shù)據(jù)為至少2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的均值+SEM。圖7顯示TLR2缺乏提高新生兒存活率并賦予對(duì)細(xì)菌膿毒癥的保護(hù)。顯示了被金黃色葡萄球菌菌株NEWMAN(圖A)或大腸桿菌菌株IHE3034(圖B)攻擊的新生小鼠的存活率。研究中包括野生型和TLR2-/-小鼠兩者。結(jié)果表示從至少2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)合并的數(shù)據(jù)。圓括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示經(jīng)歷不同的感染性攻擊后仍存活的動(dòng)物數(shù)相對(duì)于受感染動(dòng)物的總數(shù)。標(biāo)明了TLR2缺陷型幼鼠與對(duì)照間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值)。圖8顯示阻斷IL-10信號(hào)傳導(dǎo)保護(hù)新生兒免于細(xì)菌膿毒癥。顯示了在注射對(duì)小鼠IL-10受體有特異性的單克隆抗體(抗IL10R)或同種型匹配的對(duì)照抗體(同種型IgG/對(duì)照)后被大腸桿菌菌株IHE3034(圖A)或金黃色葡萄球菌菌株NEWMAN(圖B)攻擊的新生小鼠的存活率。結(jié)果表示從3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)合并的數(shù)據(jù)。圓括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示經(jīng)歷不同的感染性攻擊后仍存活的動(dòng)物數(shù)相對(duì)于受感染動(dòng)物的總數(shù)。標(biāo)明了抗IL-10R治療幼仔與對(duì)照間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值)。圖9顯示GAPDH分泌是共有的毒力機(jī)制。泳道1顯示rGAPDH，其用作陽(yáng)性對(duì)照。泳道2-6顯示指定病原體(NEM316是GBS的菌株)的等價(jià)條帶。數(shù)據(jù)表示5個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。圖10顯示用rGAPDH誘導(dǎo)的抗體保護(hù)新生小鼠免于除GBS以外的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染。顯示了在注射rGAPDH誘導(dǎo)的抗體(抗rGAPDHIgG)或?qū)φ湛贵w(對(duì)照IgG)后被肺炎鏈球菌菌株Tigr4(圖A)、大腸桿菌菌株IHE3034(圖B)和金黃色葡萄球菌菌株NEWMAN(圖C)攻擊的小鼠幼仔的存活率。結(jié)果表示從2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)合并的數(shù)據(jù)。圓括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示經(jīng)歷不同感染性攻擊后存活的動(dòng)物的數(shù)目相對(duì)于受感染動(dòng)物的總數(shù)。標(biāo)明了免疫組與對(duì)照組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值)。圖11顯示細(xì)菌GAPDH在人單核細(xì)胞中誘導(dǎo)IL-10產(chǎn)生。圖A和B顯示在從臍帶血(圖A)或外周血(圖B)分離的人單核細(xì)胞用rGAPDH、TLR2抑制劑(TLR2in)或僅RPMI培養(yǎng)基刺激后的IL-10濃度。圖中描述的數(shù)據(jù)為至少2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的均值+SEM。圖12顯示來(lái)自大腸桿菌和人的GAPDH的氨基酸序列的比對(duì)。加框的區(qū)域顯示來(lái)自圖2的肽3。圖13顯示來(lái)自銅綠假單胞菌和人的GAPDH的氨基酸序列的比對(duì)。氨基酸23處的加框的區(qū)域顯示用于本發(fā)明的肽(SEQIDNO:62)。氨基酸59處加框的區(qū)域顯示來(lái)自圖2的肽4。圖14、15和16顯示用本發(fā)明的疫苗誘導(dǎo)的抗體與細(xì)菌GAPDH反應(yīng)。各凝膠的泳道1顯示rGAPDH，其用作陽(yáng)性對(duì)照。圖14中的泳道2-6和圖15和16中的泳道2顯示指定病原體的等同條帶。數(shù)據(jù)表示2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。圖17顯示用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體保護(hù)新生小鼠免于GBS感染。顯示了在注射新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體(IgG)或?qū)φ誌gG后用GBSNEM316攻擊的小鼠幼仔的存活率。結(jié)果表示從2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)合并的數(shù)據(jù)。圓括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示經(jīng)歷感染性攻擊后仍存活的動(dòng)物數(shù)相對(duì)于受感染動(dòng)物的總數(shù)。標(biāo)明了免疫組與對(duì)照組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值)。圖18顯示用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體保護(hù)新生小鼠免于細(xì)菌膿毒癥。顯示了在注射新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體(IgG)或?qū)φ誌gG后被肺炎鏈球菌菌株Tigr4(圖A)、大腸桿菌菌株IHE3034(圖B)或金黃色葡萄球菌菌株NEWMAN(圖C)攻擊的新生小鼠的存活率。結(jié)果表示從至少2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)合并的數(shù)據(jù)。圓括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示經(jīng)歷不同的感染性攻擊后仍存活的動(dòng)物數(shù)相對(duì)于受感染動(dòng)物的總數(shù)。標(biāo)明了免疫組與對(duì)照之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值)。圖19顯示抗GAPDH抗體的治療應(yīng)用可有效地治療GBS誘導(dǎo)的膿毒癥。顯示了被GBSNEM316攻擊且隨后接受新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體(IgG)、對(duì)照IgG或鹽水的新生小鼠的存活率。結(jié)果表示從2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)合并的數(shù)據(jù)。圓括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示經(jīng)歷感染性攻擊后仍存活的動(dòng)物數(shù)相對(duì)于受感染動(dòng)物的總數(shù)。標(biāo)明了免疫組與對(duì)照之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值)。圖20顯示用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體保護(hù)年老小鼠免于致死性GBS感染。顯示在注射新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體(新生兒疫苗-IgG)或?qū)φ誌gG(“假免疫”)后用GBS攻擊的年老小鼠的存活率。結(jié)果表示從2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)合并的數(shù)據(jù)。圓括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示經(jīng)歷感染性攻擊后仍存活的動(dòng)物數(shù)相對(duì)于受感染動(dòng)物的總數(shù)。標(biāo)明了免疫組與對(duì)照組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值)。圖21顯示用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體保護(hù)非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠免于致死GBS感染。顯示了在注射新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體(新生兒疫苗-IgG)或?qū)φ誌gG(“假免疫”)后用GBS攻擊的NOD小鼠的存活率。結(jié)果表示從2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)合并的數(shù)據(jù)。圓括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示經(jīng)歷感染性攻擊后仍存活的動(dòng)物數(shù)相對(duì)于受感染動(dòng)物的總數(shù)。標(biāo)明了免疫組與對(duì)照組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值)。實(shí)施例應(yīng)用于實(shí)施例所述研究的材料與方法如下，除非另有說(shuō)明：小鼠6-8周齡雄性和雌性BALB/c、C57BL/6和TLR2缺陷型C57BL/B6.129-Tlr2tm1Kir/J(TLR2-/-)小鼠和C57Bl/6年老小鼠(超過(guò)16個(gè)月)購(gòu)自TheJacksonLaboratory。NewZealand白兔和8周齡非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠購(gòu)自CharlesRiverLaboratories。在實(shí)驗(yàn)期間將動(dòng)物保持在InstituteAbelSalazar的動(dòng)物設(shè)施中。所有程序按照用于實(shí)驗(yàn)和其它科學(xué)目的的脊椎動(dòng)物保護(hù)的歐洲公約(EuropeanConventionfortheProtectionofVertebrateAnimalsusedforExperimentalandOtherScientificPurposes)(ETS123)和86/609/EEC指導(dǎo)方針和葡萄牙條例(DL129/92)進(jìn)行。設(shè)計(jì)所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以使動(dòng)物痛苦減到最小。細(xì)菌用于研究的細(xì)菌列于下表4中。所有菌株是獲自被感染的新生兒的臨床分離株。大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、GBS和肺炎鏈球菌由法國(guó)巴黎PasteurInstitute的PatrickTrieuCuot教授友情提供；肺炎克雷伯氏菌和腦膜炎奈瑟氏球菌由MicrobiologyDepartmentofHospitalGeraldeSantoAntónio，Porto，Portugal提供。使GBS和肺炎鏈球菌在含有0.001mg/mL硫酸多黏菌素和0.5μg/mLoxalinicacid(StreptococcusSelectiveSupplement，Oxoid)的Todd-Hewitt液體培養(yǎng)基或瓊脂(DifcoLaboratories)中生長(zhǎng)。將大腸桿菌、銅綠假單胞菌、MenB和金黃色葡萄球菌在Todd-Hewitt液體培養(yǎng)基或瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)。使細(xì)菌在37℃下生長(zhǎng)。表4：用于實(shí)施例所述研究的細(xì)菌細(xì)菌菌株大腸桿菌IHE3034金黃色葡萄球菌NEWMAN銅綠假單胞菌PAO4無(wú)乳鏈球菌，GBSNEM316肺炎鏈球菌Tigr4腦膜炎奈瑟氏球菌血清群B(MenB)抗體治療抗體治療在GBS感染前12小時(shí)的新生BALB/c小鼠(最多48時(shí)齡)和在GBS感染前24小時(shí)的C57Bl/6年老小鼠(超過(guò)16個(gè)月)和NOD小鼠中進(jìn)行。對(duì)于被動(dòng)免疫，給幼仔腹膜內(nèi)注射100μg抗rGAPDHIgG抗體。對(duì)照動(dòng)物接受等量的對(duì)照IgG抗體。對(duì)于IL-10信號(hào)傳導(dǎo)阻斷，腹膜內(nèi)給予100μg抗IL10R抗體(1B1.3a，Schering-PloughCorporation)，而對(duì)照動(dòng)物接收等量的匹配的同種型對(duì)照抗體。至于抗GAPDH抗體的治療應(yīng)用，在感染后6小時(shí)，小鼠幼仔用100μg抗GAPDHIgG(或相應(yīng)的對(duì)照IgG)治療。細(xì)菌感染的新生小鼠模型用指定的細(xì)菌接種物以40μl的最大體積給新生兒(48時(shí)齡)、BALB/c、C57BL/6野生型或TLR2-/-小鼠皮下注射。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間使新生兒與其母親保持在一起。測(cè)定12天實(shí)驗(yàn)期內(nèi)的生存曲線。rGAPDH如之前所述產(chǎn)生并純化rGAPDH[41]?？笹APDHIgG的純化以劑量間3周間隔，用含25μgrGAPDH的PBS/明礬懸浮液使成年小鼠或兔免疫兩次。在第2次免疫后10天收集血清。將合并的血清樣品施加在G蛋白HP親和柱(HiTrap，GEHealthcareBio-SciencesAB)中，然后使純化的IgG抗體通過(guò)具有固定化rGAPDH(Hi-trapNHS-activatedHP，GEHealth-careBio-SciencesAB)的親和柱。從用PBS/明礬懸浮液假免疫的小鼠或兔的血清中獲得對(duì)照IgG，并在G蛋白HP親和柱上純化。使純化的IgG抗體流分進(jìn)一步在PBS中平衡，并以冷凍的等分樣品保存在-80℃下。脾總細(xì)胞培養(yǎng)物通過(guò)輕撥補(bǔ)充青霉素(100IU/ml)、鏈霉素(50μg/ml)、2-ME(0.05M)和10%胎牛血清(FBS)(Sigma-Aldrich)的RPMI1640—完全RPMI(cRPMI)中的器官，獲得來(lái)自新生小鼠(至多48時(shí)齡)脾的細(xì)胞。然后將細(xì)胞分布在96孔板(1×106個(gè)細(xì)胞/孔)上，在含有5%二氧化碳的潮濕環(huán)境中在37℃下用僅培養(yǎng)基、含有2.5μg/mlLPS的培養(yǎng)基、含有25μg/mlrGAPDH的培養(yǎng)基、含有1μg/mLTLR2激動(dòng)劑、PAM3CSK4(Invivogen)的培養(yǎng)基培養(yǎng)12小時(shí)。對(duì)于用TLR抑制劑的實(shí)驗(yàn)，以10μg/mL的濃度使用OxPAC(TLR2抑制劑)和CLI095(TLR4抑制劑)(兩者來(lái)自Invivogen)。B細(xì)胞純化按照生產(chǎn)商說(shuō)明書，使用小鼠B細(xì)胞純化試劑盒(MiltenyiBiotech)，通過(guò)磁性細(xì)胞分選將B細(xì)胞從新生小鼠的脾(按上述制備)中純化。CD5+B細(xì)胞純化按照生產(chǎn)商說(shuō)明書，使用小鼠B1細(xì)胞純化試劑盒(MiltenyiBiotech)，通過(guò)磁性細(xì)胞分選將B1細(xì)胞從新生小鼠的脾(按上述制備)中純化。新生兒肝衍生的巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞獲自1日齡小鼠的肝。在無(wú)菌條件下取出肝，在Hanks平衡鹽溶液(HBSS)中勻漿。將所得細(xì)胞懸液以500×g離心，并重新懸浮于補(bǔ)充10%L929細(xì)胞條件培養(yǎng)液的cRPMI中。為了除去成纖維細(xì)胞或分化的巨噬細(xì)胞，將細(xì)胞在37℃下在5%二氧化碳?xì)夥罩械募?xì)胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng)過(guò)夜。然后，用溫?zé)岬腸RPMI收集未貼壁細(xì)胞，以500×g離心，以1×105個(gè)細(xì)胞/孔的密度分布在96孔板中，并在5%二氧化碳?xì)夥罩性?7℃下孵育。在接種后4天，加入10%L929細(xì)胞條件培養(yǎng)液，在第七天更新培養(yǎng)基。在培養(yǎng)10天后，細(xì)胞完全分化成巨噬細(xì)胞。該方法允許保持這些吞噬細(xì)胞特有的形態(tài)、生理和表面標(biāo)志物的巨噬細(xì)胞的均質(zhì)原代培養(yǎng)物分化[50]。新生兒肝衍生的樹突細(xì)胞樹突細(xì)胞獲自1日齡小鼠的肝。在無(wú)菌條件下取出肝，在HBSS中勻漿。將所得細(xì)胞懸液以500xg離心，重新懸浮于補(bǔ)充30ng/ml粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)(Immunotools)的cRPMI(原代DC培養(yǎng)基)中。為了除去成纖維細(xì)胞或分化的巨噬細(xì)胞，將細(xì)胞在37℃下在5%二氧化碳?xì)夥罩械募?xì)胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng)過(guò)夜。在第3天，除去75%培養(yǎng)基(連同未貼壁細(xì)胞)，加入原代DC培養(yǎng)基。在第6天，通過(guò)對(duì)板底輕輕吹吸培養(yǎng)基以輕輕地逐出未貼壁細(xì)胞，來(lái)從平板取出細(xì)胞。在此數(shù)分鐘后，將細(xì)胞混合物轉(zhuǎn)移到50mL聚苯乙烯管中。然后將細(xì)胞以500xg離心5-7分鐘，并重新懸浮于原代DC培養(yǎng)基中。對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并以5×105個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種。對(duì)于共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，每孔接種5×104個(gè)樹突細(xì)胞。在共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，按規(guī)定，使用20μg/mL對(duì)I型干擾素受體有特異性的單克隆抗體(抗IFNAR)(Biolegend)。血液嗜中性粒細(xì)胞的純化對(duì)于嗜中性粒細(xì)胞分離，從新生小鼠(至多48時(shí)齡)眶后出血來(lái)收集血液，并在含有BSA(0.1%w/v)和葡萄糖(1%w/v)的HBSS中1:2稀釋。使細(xì)胞沉淀，紅細(xì)胞通過(guò)低滲裂解除去。將血液制備物懸浮于Dulbecco’sPBS(GIBCO)中，在三層Percoll(GE-Healthcare)梯度(80、65和55%，在Dulbecco’sPBS中)分層，并在10℃下以1200xg離心30分鐘?；厥赵?5%和80%流分界面處的成熟嗜中性粒細(xì)胞，純度為85%，如使用抗Ly6G抗體(Biolegend)通過(guò)FACS分析測(cè)定。將分離的嗜中性粒細(xì)胞接種在96孔板中，按規(guī)定刺激12小時(shí)。IL-10定量測(cè)定按照生產(chǎn)商說(shuō)明書，通過(guò)ELISA(R&DSystems)定量測(cè)定新生或成年細(xì)胞培養(yǎng)物的IL-10。人血樣品在知情同意后，在HospitalGeraldeSantoAntónio獲得人血樣品。對(duì)于單核細(xì)胞的分離，將在RPMI1640中1:2稀釋的總血液的5ml等分試樣在2.5mlHistopaque(Sigma-Aldrich)上分層，并在室溫下以1000g離心20分鐘。然后從培養(yǎng)基-Histopaque界面中輕輕取出細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到無(wú)菌容器中，并在10mlcRPMI中洗滌。將分離的單核細(xì)胞重新懸浮于cRPMI中，以5×105個(gè)細(xì)胞/孔的濃度接種，并用25μg/mLrGAPDH、10μg/mLOxPAC或僅培養(yǎng)基(RPMI)在37℃與5%二氧化碳下刺激12小時(shí)。新生兒疫苗使肽1-4(SEQIDNO:9-12)與作為載體蛋白的KLH或OVA綴合。對(duì)于免疫方案，給雌性BALB/c小鼠腹膜內(nèi)注射20μg與載體蛋白綴合的各個(gè)肽。明礬在1:20PBS懸浮液中用作佐劑。以劑量間3周間隔，使成年雌性BALB/c小鼠免疫3次。在最后一次免疫后10天，收集血液，并在4℃下凝血24小時(shí)后，獲得“新生兒疫苗”抗血清。在大鼠中使用相同的免疫方案用于腦膜炎奈瑟氏球菌研究(實(shí)施例8)。實(shí)施例1-在細(xì)菌GAPDH刺激時(shí)新生兒B細(xì)胞亞群引起IL-10產(chǎn)生之前公開的信息顯示，GAPDH在使新生兒免疫系統(tǒng)失去對(duì)抗GBS感染的能力的作用[24]。雖然揭示了IL-10在GAPDH誘導(dǎo)的免疫抑制機(jī)制中的作用，但細(xì)胞機(jī)制仍未知。為了揭開哪個(gè)細(xì)胞群引起在新生兒GBS感染中觀察到的早期IL-10產(chǎn)生，自新生小鼠純化不同的白細(xì)胞群，并在體外用來(lái)自GBS的rGAPDH處理。材料與方法具體地說(shuō)且如上所述，樹突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞獲自新生兒肝前體，B細(xì)胞和單核細(xì)胞獲自新生兒脾，而嗜中性粒細(xì)胞純化自新生兒外周血。根據(jù)CD5的表面表達(dá)，獲自新生兒脾的B細(xì)胞的更精細(xì)分離允許B1(CD5+)細(xì)胞的分離。不同的白細(xì)胞群在體外用0.5μg/mLLPS(作為陽(yáng)性對(duì)照；LPS是已知誘導(dǎo)多克隆B細(xì)胞活化的結(jié)構(gòu)性微生物抗原)、25μg/mLrGAPDH或僅RPMI培養(yǎng)基(作為陰性對(duì)照)在37℃與5%二氧化碳下刺激12小時(shí)。在所有條件下，使用5×105個(gè)細(xì)胞/孔，分離的B細(xì)胞研究除外，其中使用2.5×105個(gè)細(xì)胞/孔。在細(xì)胞孵育后，在如上所述上清液中測(cè)量IL-10濃度。在每種情況下進(jìn)行至少2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如圖4A所述，當(dāng)比較單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞和總B細(xì)胞在GAPDH刺激時(shí)產(chǎn)生IL-10的能力時(shí)，僅B細(xì)胞保持產(chǎn)生大量IL-10的能力。在分離新生兒B細(xì)胞后，本發(fā)明人觀察到B1細(xì)胞保留產(chǎn)生IL-10的能力，而B2細(xì)胞只產(chǎn)生痕量的該細(xì)胞因子(圖4B)。討論該研究表明在細(xì)菌GAPDH刺激時(shí)新生兒B1細(xì)胞是IL-10的主要來(lái)源。實(shí)施例2—TLR2是細(xì)菌GAPDH的表面受體為了證實(shí)負(fù)責(zé)細(xì)菌GAPDH識(shí)別和誘導(dǎo)IL-10表達(dá)的細(xì)胞受體，本發(fā)明人比較了在不同模式識(shí)別受體的特異性抑制劑存在下GAPDH在純化的B1細(xì)胞培養(yǎng)物中誘導(dǎo)IL-10產(chǎn)生的能力。材料與方法如上所述從新生小鼠的脾中純化B1細(xì)胞。在10μg/mlTLR2或TLR4抑制劑存在下將2.5×105B1個(gè)細(xì)胞/孔體外用25μg/mLrGAPDH在37℃與5%二氧化碳下刺激12小時(shí)。所用的TLR2和TLR4抑制劑分別為OxPAC和CLI095。在細(xì)胞孵育后，在如上所述上清液中定量測(cè)定IL-10。進(jìn)行了至少2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。結(jié)果本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)GAPDH誘導(dǎo)的IL-10產(chǎn)生在TLR2抑制劑存在下被完全消除(圖5)。討論該結(jié)果表明，細(xì)菌GAPDH通過(guò)TLR2對(duì)B1細(xì)胞起作用以誘導(dǎo)IL-10產(chǎn)生。實(shí)施例3—TLR2缺乏提高新生兒生存率并賦予對(duì)細(xì)菌膿毒癥的保護(hù)該研究的目的在于證實(shí)TLR2作為GAPDH的受體的重要性和新生兒對(duì)膿毒癥的易感性的原因。材料與方法在出生后48小時(shí)，給新生野生型和TLR2-/-小鼠皮下注射5×105CFU金黃色葡萄球菌菌株NEWMAN或500CFU大腸桿菌菌株IHE3034。以每日為基礎(chǔ)監(jiān)測(cè)感染后小鼠的存活率。進(jìn)行了至少2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。結(jié)果在被指定細(xì)菌感染后，野生型小鼠不能夠經(jīng)歷感染仍存活超過(guò)48小時(shí)(圖7)。相比之下，大部分TLR2-/-小鼠在感染后12天仍存活。討論結(jié)果表明與野生型小鼠相比，TLR2缺陷型新生小鼠提高了針對(duì)被大腸桿菌和金黃色葡萄球菌攻擊性感染的存活率。TLR2因此在新生兒對(duì)膿毒癥的易感性中起重要作用；這就是說(shuō)，TLR2缺乏提高新生兒生存率并賦予對(duì)細(xì)菌膿毒癥的保護(hù)。除實(shí)施例2獲得的結(jié)果以外，這些數(shù)據(jù)因此證實(shí)在不同膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的菌株中TLR2作為GAPDH的受體的重要性。實(shí)施例4—通過(guò)由細(xì)菌誘導(dǎo)的樹突細(xì)胞的I型干擾素的產(chǎn)生與GAPDH協(xié)同提高B1細(xì)胞中的IL-10產(chǎn)生該研究的目的在于鑒定在GAPDH被其它白細(xì)胞群識(shí)別時(shí)B1細(xì)胞是否促進(jìn)IL-10的產(chǎn)生，且以何種能力（capacity）促進(jìn)IL-10的產(chǎn)生。材料與方法如上所述，總脾細(xì)胞獲自新生小鼠，B1細(xì)胞純化自總脾細(xì)胞群。不同的脾細(xì)胞群在體外用25μg/mLrGAPDH、異丙醇中固定的107個(gè)GBS細(xì)胞(GBSf)或僅RPMI培養(yǎng)基在37℃與5%二氧化碳下刺激12小時(shí)。在所有條件下，使用5×105個(gè)細(xì)胞/孔，純化的B1細(xì)胞研究除外，其中使用2.5×105個(gè)細(xì)胞/孔。如上所述，樹突細(xì)胞衍生自胎肝。將樹突細(xì)胞與2.5×105個(gè)自新生兒脾純化的B1細(xì)胞以1:10比率共培養(yǎng)，并用25μg/mLrGAPDH、107個(gè)GBSf細(xì)胞、20μg/mL抗IFNAR或僅RPMI培養(yǎng)基在37℃與5%二氧化碳下刺激12小時(shí)。在不同的細(xì)胞類型孵育后，在如上所述上清液中定量測(cè)定IL-10。在每種情況下進(jìn)行至少2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。結(jié)果與討論總脾細(xì)胞中GAPDH誘導(dǎo)IL-10產(chǎn)生的能力在固定的細(xì)菌存在下明顯提高(圖6A)。然而，這種作用在純化的B1細(xì)胞失去，其中加入固定的細(xì)菌不增加GAPDH誘導(dǎo)的IL-10產(chǎn)生(圖6B)。該結(jié)果表明，除B1細(xì)胞以外的不同的白細(xì)胞群被細(xì)菌抗原刺激，并有助于B1細(xì)胞在GAPDH識(shí)別時(shí)產(chǎn)生IL-10。共培養(yǎng)研究使得能夠理解其它白細(xì)胞亞群在影響B(tài)1細(xì)胞產(chǎn)生IL-10中的作用。本發(fā)明人觀察到在樹突細(xì)胞存在下，當(dāng)同時(shí)用GAPDH加GBSf刺激時(shí)，B1細(xì)胞產(chǎn)生的IL-10量升高(圖6C)。引人關(guān)注的是，當(dāng)I型干擾素信號(hào)傳導(dǎo)被阻斷時(shí)，這種作用消失(圖6C)。該結(jié)果表明，在細(xì)菌識(shí)別時(shí)，樹突細(xì)胞產(chǎn)生I型干擾素，其在用GAPDH刺激的B1細(xì)胞中增加IL-10產(chǎn)生。實(shí)施例5—早期IL-10產(chǎn)生是被膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌利用以定居新生兒宿主的普遍機(jī)制證實(shí)了產(chǎn)生大量IL-10的能力是新生兒對(duì)于GBS感染的易感性的主要原因[24]。本研究的目的在于研究GBS以外的細(xì)菌(尤其是大腸桿菌或金黃色葡萄球菌)引起的新生兒感染是否同樣如此發(fā)生。與GBS一起，大腸桿菌和葡萄球菌是造成高達(dá)87%人類新生兒膿毒癥病例的原因。該研究的目的還在于其它細(xì)菌是否也具有胞外GAPDH，作為膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌所用以定居新生兒宿主的普遍的IL-10依賴性機(jī)制的指征。材料與方法在用大腸桿菌或金黃色葡萄球菌攻擊前，如下將新生小鼠用對(duì)小鼠IL-10受體有特異性的阻斷性抗體(抗IL10R)治療。如上所述，給新生小鼠腹膜內(nèi)注射100μg抗IL10R單克隆抗體或100μg同種型對(duì)照IgG。12小時(shí)后，用500CFU大腸桿菌菌株IHE3034或5×105CFU金黃色葡萄球菌菌株皮下攻擊小鼠。以每日為基礎(chǔ)監(jiān)測(cè)感染后小鼠的存活率。進(jìn)行了3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。為了研究其它誘導(dǎo)膿毒癥的病原體是否也具有胞外GAPDH，如下獲得目標(biāo)病原體的培養(yǎng)上清液中胞外蛋白質(zhì)，通過(guò)SDS-PAGE分離，并使用抗rGAPDH抗體通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析。如上所述制備GBS菌株NEM316、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的培養(yǎng)物，并按照標(biāo)準(zhǔn)程序，從培養(yǎng)上清液中純化胞外蛋白質(zhì)。按照標(biāo)準(zhǔn)程序，使用如上所述獲自rGAPDH免疫的兔的抗rGAPDH抗體(IgG)，進(jìn)行SDS-PAGE和蛋白質(zhì)印跡分析。rGAPDH用作陽(yáng)性對(duì)照。進(jìn)行了5個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。如下研究了中和由這些細(xì)菌分泌的GAPDH的作用以評(píng)價(jià)這些病原體是否也利用GAPDH分泌作為毒力機(jī)制。如上所述給小鼠幼仔腹膜內(nèi)注射80μg抗rGAPDH抗體(IgG)或80μg對(duì)照IgG。12小時(shí)后，用5×106CFU肺炎鏈球菌菌株Tigr4、500CFU大腸桿菌菌株IHE3034或5×105CFU金黃色葡萄球菌菌株NEWMAN皮下攻擊小鼠。以每日為基礎(chǔ)監(jiān)測(cè)感染后小鼠的存活率。進(jìn)行了2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。結(jié)果引人關(guān)注的是，當(dāng)與接受同種型匹配的對(duì)照抗體的幼仔相比時(shí)，阻斷IL-10信號(hào)傳導(dǎo)顯著提高新生兒針對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌引起的感染的存活率(圖8)。還顯示了其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌具有胞外GAPDH(圖9)。顯示了使用抗rGAPDH抗體中和這種分泌的GAPDH保護(hù)新生小鼠免于肺炎鏈球菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌引起的感染(分別為圖10A-C)。討論結(jié)果表明，所觀察到的新生兒對(duì)于GBS誘導(dǎo)的膿毒癥的易感性的機(jī)制是與其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌通用的(transversal)。雖然本文提供由大腸桿菌和金黃色葡萄球菌引起的新生兒感染的IL-10數(shù)據(jù)，但是其它細(xì)菌也分泌GAPDH的事實(shí)是以下的強(qiáng)指示物，即新生兒在響應(yīng)細(xì)菌GAPDH時(shí)產(chǎn)生大量IL-10的傾向是不同細(xì)菌病原體所用的普遍機(jī)制，其導(dǎo)致膿毒癥的發(fā)生。該結(jié)果證實(shí)了針對(duì)GBS的基于GAPDH的疫苗對(duì)于其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌也將是可行的事實(shí)。實(shí)施例6—GAPDH誘導(dǎo)的IL-10產(chǎn)生是人細(xì)胞中保守的機(jī)制該研究的目的在于研究人細(xì)胞是否也在響應(yīng)GAPDH時(shí)產(chǎn)生IL-10。材料與方法如上所述，從人臍帶血或成人外周血分離單核細(xì)胞。將細(xì)胞用25μg/mLrGAPDH、10μg/mLOxPAC(一種TLR2抑制劑)或僅RPMI培養(yǎng)基在37℃與5%二氧化碳下體外刺激12小時(shí)。在細(xì)胞孵育后，在如上所述上清液中定量測(cè)定IL-10。進(jìn)行了至少2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。結(jié)果與在新生小鼠中觀察到的一致，用rGAPDH刺激自人臍帶血或成人外周血純化的單核細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生大量的IL-10(分別圖11A和圖11B)。引人關(guān)注的是，在TLR2抑制劑存在下人白細(xì)胞中GAPDH誘導(dǎo)的IL-10產(chǎn)生被完全消除。討論該結(jié)果表明小鼠細(xì)胞中GAPDH誘導(dǎo)的IL-10產(chǎn)生的機(jī)制對(duì)人也適用。然而，小鼠中研究的相同毒力機(jī)制可容易地轉(zhuǎn)化到人中的事實(shí)強(qiáng)有力地支持使用小鼠作為研究人的細(xì)菌膿毒癥的極好模型。實(shí)施例7—新生兒疫苗的產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明人的發(fā)現(xiàn)：新生兒在響應(yīng)細(xì)菌GAPDH時(shí)產(chǎn)生大量IL-10的傾向是不同細(xì)菌病原體所用的普遍機(jī)制，本發(fā)明人提出使用GAPDH衍生肽作為抗原生產(chǎn)針對(duì)所述病原體的疫苗。材料與方法如上所述制備新生兒疫苗。結(jié)果本發(fā)明的疫苗由來(lái)自不同膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH的表面肽組成，所述肽具有不存在于人GAPDH中的氨基酸序列。因此，本發(fā)明人開發(fā)出由屬于不被人GAPDH共有的微生物GAPDH的保守序列的肽組成的疫苗。圖2包括采用上述方法鑒定存在于本研究中的4種示例性肽的氨基酸序列和具有各氨基酸序列的各細(xì)菌的表格。表下是顯示不同細(xì)菌GAPDH中相同的4種肽的表面定位的圖像。圖3說(shuō)明兩種肽(在圖2和3中以肽1和肽2識(shí)別)具有在某些細(xì)菌菌種間保守，但非在人中不保守的氨基酸序列的情況。圖12和13說(shuō)明來(lái)自大腸桿菌和銅綠假單胞菌(在圖2中分別以肽3和肽4識(shí)別)的其它兩種肽具有不存在于人中的(細(xì)菌中保守的)氨基酸序列的情況。將肽1-4組合用于本發(fā)明的優(yōu)選疫苗(本文稱為新生兒疫苗)的制備中。因此，新生兒疫苗適于針對(duì)圖2的表中所列的全部細(xì)菌使用。然而，肽1-4僅僅是實(shí)例；這就是說(shuō)，可按上文闡述的相同方式，通過(guò)序列比對(duì)，鑒定適用于本發(fā)明疫苗的其它肽?？墒褂脕?lái)自所述病原體的GAPDH的任何其它氨基酸序列。然而如本文解釋的，優(yōu)選避免也存在于人中的任何序列，以避免任何自身免疫病理。如本文所述，可使用呈任何組合的任何數(shù)目的肽代替新生兒疫苗的肽1-4。這就是說(shuō)，構(gòu)成本發(fā)明的疫苗的肽的數(shù)目和性質(zhì)（identity）可改變。討論如本文解釋的，細(xì)菌GAPDH在引起新生兒和免疫受損宿主的免疫抑制和促進(jìn)細(xì)菌膿毒癥中起作用。因此，本文所述疫苗，包括本實(shí)施例描述的具體新生兒疫苗旨在保護(hù)易感染宿主(包括新生兒、年老者和其它這樣的免疫受損個(gè)體)免于由GBS、大腸桿菌、葡萄球菌屬菌種、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌和假單胞菌屬菌種引起的感染。本發(fā)明人所采用的方法使得有可能僅僅通過(guò)選擇其GAPDH上人GAPDH中不存在的表面暴露的肽來(lái)“定制”用于任何膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的本發(fā)明疫苗。實(shí)施例8—用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體與細(xì)菌GAPDH反應(yīng)該研究的目的在于顯示實(shí)施例7中生產(chǎn)的疫苗可用于產(chǎn)生識(shí)別細(xì)菌GAPDH的抗體。材料與方法如上所述用新生兒疫苗使小鼠和大鼠免疫。如上所述，制備GBS菌株NEM316、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和MenB的培養(yǎng)物，并按照標(biāo)準(zhǔn)程序從培養(yǎng)上清液中純化胞外蛋白質(zhì)。按照標(biāo)準(zhǔn)程序，使用如上所述獲自rGAPDH免疫的小鼠和大鼠的抗GAPDH抗體(IgG)，進(jìn)行SDS-PAGE和蛋白質(zhì)印跡分析。rGAPDH用作陽(yáng)性對(duì)照。進(jìn)行了2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如圖14-16所示，自用新生兒疫苗免疫的小鼠和大鼠中純化的抗體與來(lái)自不同細(xì)菌的胞外GAPDH反應(yīng)。圖15(顯示肺炎克雷伯氏菌的結(jié)果)顯示了被用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗GAPDH抗體識(shí)別的2條帶。引人關(guān)注的是，~45KDa的條帶精確對(duì)應(yīng)于GBSGAPDH的相同分子量。另一條帶(~35KDa)對(duì)應(yīng)于預(yù)測(cè)的肺炎克雷伯氏菌GAPDH的分子量(http://www.uniprot.org/uniprot/C4X7S6)。圖16(顯示MenB的結(jié)果)顯示了~37kDa的條帶，其對(duì)應(yīng)于預(yù)測(cè)的MenBGAPDH的分子量[51]。討論該研究表明用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體識(shí)別來(lái)自GBS菌株NEM316、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和MenB的GAPDH。這些數(shù)據(jù)因此提供共有的細(xì)菌肽序列可用于識(shí)別細(xì)菌GAPDH的疫苗中的概念驗(yàn)證。雖然此處僅測(cè)試了腦膜炎奈瑟氏球菌的血清型B，但對(duì)于該細(xì)菌的所有其它血清型將預(yù)期類似結(jié)果。在這一方面，來(lái)自腦膜炎奈瑟氏球菌的不同血清型的GAPDH共有高(97.668%)同源性(http://www.uniprot.org/align/A20150610146R80D4XR)，且因此會(huì)預(yù)期用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體識(shí)別來(lái)自其所有的GAPDH。因此認(rèn)為本文所述疫苗對(duì)于腦膜炎奈瑟氏球菌的所有血清型都是有利的。圖15所闡述的結(jié)果還顯示肺炎克雷伯氏菌引人關(guān)注地可具有GAPDH的2個(gè)同種型。實(shí)施例9—新生兒疫苗保護(hù)新生兒免于GBS感染該研究的目的在于顯示實(shí)施例8中生產(chǎn)的抗體可用來(lái)保護(hù)新生小鼠免于GBS感染。材料與方法如上所述給小鼠幼仔腹膜內(nèi)注射80μg新生兒疫苗誘導(dǎo)的IgG或80μg對(duì)照IgG。12小時(shí)后，用5×106CFUGBSNEM316皮下攻擊小鼠。以每日為基礎(chǔ)監(jiān)測(cè)感染后小鼠的存活率。進(jìn)行了2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。結(jié)果之前證實(shí)了用rGAPDH(完整蛋白質(zhì))的母體接種是預(yù)防由GBS引起的新生兒感染的有效策略[24]。然而，當(dāng)在GBS感染前將用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體用于幼仔被動(dòng)免疫時(shí)，保護(hù)甚至更有效。實(shí)際上，用新生兒疫苗提供的保護(hù)為100%(圖17)。討論該結(jié)果表明與之前描述的相比，用于開發(fā)本發(fā)明的疫苗，包括新生兒疫苗的新方法(即使用本文所述精選肽序列代替完整蛋白質(zhì))將新生兒的免疫系統(tǒng)引導(dǎo)向針對(duì)以GBS為例說(shuō)明的膿毒癥誘發(fā)物質(zhì)的更穩(wěn)健和特異性的反應(yīng)。該結(jié)果還表明由新生兒疫苗提供的免疫是可再現(xiàn)的(100%有效)，這顯然是有利的。雖然該研究只關(guān)注GBS感染，但是要了解，在由其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌所致感染時(shí)會(huì)觀察到相同結(jié)果(尤其是因?yàn)閷?shí)施例8顯示用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體識(shí)別來(lái)自GBS菌株NEM316、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和腦膜炎奈瑟氏球菌(以MenB為例說(shuō)明)的GAPDH)。此外，圖17所呈結(jié)果提供以下證據(jù)：母體接種新生兒疫苗(或因此用本發(fā)明的抗GAPDH抗體的母體治療)將顯著降低由陰道內(nèi)GBS感染引起的死產(chǎn)和早產(chǎn)。實(shí)際上，如上文結(jié)合本發(fā)明第十二方面的論述，針對(duì)本發(fā)明的肽、片段、變體或疫苗產(chǎn)生的抗體可通過(guò)母體胎盤傳給未出生嬰兒。另外，且如圖17所示，在用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體免疫后賦予幼仔針對(duì)GBS的保護(hù)為100%。由于GBS和本文所述其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH間的高序列相似性和功能同源性，所提供的數(shù)據(jù)還表明新生兒疫苗還將有效地防止由其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的死產(chǎn)和早產(chǎn)。這是一個(gè)重要發(fā)現(xiàn)，因?yàn)榧?xì)菌感染是造成全球每年約650,000例死產(chǎn)的原因[52，53]。另外，少于32周妊娠的約50%早產(chǎn)也是由細(xì)菌感染引起的[9，14，53-56]。絕大部分由從陰道上行到羊水的母體共棲細(xì)菌引起。GBS、大腸桿菌和肺炎克雷伯氏菌是存在于由上行性細(xì)菌感染引起的死產(chǎn)嬰兒尸體解剖的最常見的病原體。實(shí)施例10—中和細(xì)菌GAPDH是保護(hù)新生兒免于細(xì)菌膿毒癥的通用方法該研究的目的在于通過(guò)研究抗體介導(dǎo)的細(xì)菌GAPDH的中和是否可預(yù)防由其它相關(guān)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的新生兒感染，來(lái)延伸實(shí)施例9中所述的研究。材料與方法如上所述給小鼠幼仔腹膜內(nèi)注射80μg新生兒疫苗誘導(dǎo)的IgG或80μg對(duì)照IgG。12小時(shí)后，用107CFU肺炎鏈球菌菌株Tigr4、500CFU大腸桿菌菌株IHE3034或5x105CFU金黃色葡萄球菌菌株NEWMAN皮下攻擊小鼠。以每日為基礎(chǔ)監(jiān)測(cè)感染后小鼠的存活率。結(jié)果如圖18所示，將用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體用于新生兒被動(dòng)免疫中顯著提高在細(xì)菌攻擊時(shí)的存活率。此處顯示肺炎鏈球菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的結(jié)果(分別參見圖18A-C)。討論如本文的論述，目前沒有針對(duì)最相關(guān)的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的任一種的可獲得的疫苗。此處提供表明細(xì)菌GAPDH的抗體介導(dǎo)的中和預(yù)防由最相關(guān)的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的新生兒感染的數(shù)據(jù)。實(shí)施例11—治療性給予新生兒疫苗IgG抗體保護(hù)新生小鼠免于GBS感染該研究的目的在于研究用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體是否可治療由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的既有新生兒感染。材料與方法在5×106GBSNEM316CFU皮下感染后6小時(shí)，給小鼠幼仔(至多48時(shí)齡)腹膜內(nèi)注射新生兒疫苗IgG、對(duì)照IgG(80μg)或鹽水溶液(0.9%NaCl)。在治療期間，所有小鼠呈現(xiàn)明顯的感染病征，通過(guò)感染部位的嚴(yán)重皮疹評(píng)價(jià)。以12小時(shí)為基礎(chǔ)監(jiān)測(cè)感染后小鼠的存活率。結(jié)果如圖19所示，僅接受新生兒疫苗誘導(dǎo)的IgG抗體的小鼠能夠經(jīng)歷GBS感染后仍存活。實(shí)際上，在GBS感染后，小鼠幼仔用抗GAPDHIgG抗體治療導(dǎo)致動(dòng)物全部存活。相比之下，對(duì)照無(wú)一在感染后存活。討論如本文的論述，新生兒膿毒癥可獲得的現(xiàn)行治療僅基于給予抗生素。此處提供的數(shù)據(jù)表明，由新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體可用于治療由GBS(最相關(guān)的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌之一)引起的既有新生兒感染。雖然該研究只關(guān)注GBS感染，但要了解，在被其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌感染時(shí)會(huì)觀察到相同結(jié)果(尤其是因?yàn)閷?shí)施例8顯示用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體識(shí)別來(lái)自GBS菌株NEM316、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和腦膜炎奈瑟氏球菌(以MenB為例說(shuō)明)的GAPDH)。本發(fā)明的第一方面的肽、片段和變體因此在產(chǎn)生用于指定患者群的多種有用和急需的基于抗體的療法中具有重大作用。實(shí)施例12—新生兒疫苗保護(hù)年老小鼠免于GBS感染該研究的目的在于顯示實(shí)施例8中生產(chǎn)的抗體可用于保護(hù)年老小鼠免于GBS感染。材料與方法持續(xù)3天每天給C57Bl/6年老小鼠(年齡超過(guò)16個(gè)月)腹膜內(nèi)注射1mg/kg新生兒疫苗誘導(dǎo)的IgG或相同量的同種型匹配的IgG作為對(duì)照。在最后劑量后24小時(shí)，用2×107CFUGBSNEM316皮下攻擊小鼠。以每日為基礎(chǔ)持續(xù)12天監(jiān)測(cè)感染后小鼠的存活率。進(jìn)行了2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示了接種新生兒疫苗保護(hù)年老小鼠免于致死GBS感染。實(shí)際上，與10只對(duì)照中僅1只(10%)存活相比，注射新生兒疫苗的9只小鼠中有8只(~90%)在細(xì)菌攻擊后仍存活(圖20)。討論該結(jié)果表明本發(fā)明的疫苗，包括新生兒疫苗，可與在新生兒中證明的平行方式(參見實(shí)施例9)，將年老小鼠的免疫系統(tǒng)引導(dǎo)向針對(duì)以GBS為例說(shuō)明的膿毒癥誘發(fā)物質(zhì)的穩(wěn)健的和特異性的反應(yīng)。因此本發(fā)明人堅(jiān)定地認(rèn)為，年老者中對(duì)由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染的易感性受與他們?cè)谛律鷥褐邪l(fā)現(xiàn)的同一機(jī)制支持（underpin）(即由GBS細(xì)菌分泌的GAPDH通過(guò)TLR2作用于B1細(xì)胞以誘導(dǎo)IL-10產(chǎn)生)。實(shí)際上，本文提供的數(shù)據(jù)顯示新生兒疫苗可用于產(chǎn)生識(shí)別由GBS產(chǎn)生的細(xì)菌GAPDH的抗體，這顯然在年老小鼠中具有保護(hù)作用，正像在新生兒中觀察到的一樣。本發(fā)明人因此還堅(jiān)定地認(rèn)為所述保護(hù)作用對(duì)其它這類免疫受損宿主也將適用。雖然該研究只關(guān)注GBS感染，但要了解，在被其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌感染時(shí)可觀察到相同結(jié)果(尤其是因?yàn)閷?shí)施例8顯示用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體識(shí)別來(lái)自GBS菌株NEM316、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和腦膜炎奈瑟氏球菌(以MenB為例說(shuō)明)的GAPDH)。因此在其它免疫受損宿主(例如年老小鼠)中可合理地預(yù)期在不同細(xì)菌菌株攻擊的新生小鼠中用新生兒疫苗觀察到的結(jié)果(參見實(shí)施例10)。如本文所述，目前沒有有效保護(hù)年老者免于由最相關(guān)的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的任一種引起的感染的可獲得的疫苗。在這一組中對(duì)抗膿毒癥的治療策略也遠(yuǎn)非有效。本文提供表明細(xì)菌GAPDH的抗體介導(dǎo)的中和預(yù)防年老者中由最相關(guān)的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染的數(shù)據(jù)。疫苗接種是用于感染性疾病的最有成本效益的治療法，當(dāng)同一疫苗可預(yù)防不同年齡組的由不同人類病原體引起的感染時(shí)甚至更是如此，正如本文已證實(shí)的。年老小鼠中獲得的數(shù)據(jù)是新生小鼠中獲得的其它結(jié)果在年老者和其它這類免疫受損宿主中也可獲得的概念驗(yàn)證。因此預(yù)期將新生兒疫苗IgG抗體給予患有由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的既有感染的年老小鼠導(dǎo)致對(duì)其產(chǎn)生治療，正如在新生兒中觀察到的(參見實(shí)施例11)。由于針對(duì)膿毒癥可獲得的現(xiàn)行治療只是基于給予抗生素，由新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體可用于治療年老者以及新生兒和本文指定的其它患者群的由最相關(guān)的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的既有感染的事實(shí)，顯然是有利的。實(shí)施例13—新生兒疫苗保護(hù)NOD小鼠免于GBS感染該研究的目的在于表明實(shí)施例8中生產(chǎn)的抗體可用于保護(hù)糖尿病轉(zhuǎn)基因小鼠模型(NOD小鼠)免于GBS感染。材料與方法持續(xù)3天每日給NOD小鼠(8周齡)腹膜內(nèi)注射1mg/kg新生兒疫苗誘導(dǎo)的IgG或同量的同種型匹配的IgG作為對(duì)照。在最后一劑后24小時(shí)，小鼠用5×107CFUGBSNEM316皮下攻擊。以每日為基礎(chǔ)連續(xù)12天監(jiān)測(cè)感染后小鼠的存活率。進(jìn)行了2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示了使用新生兒疫苗誘導(dǎo)的IgG的被動(dòng)免疫保護(hù)NOD小鼠免于致死GBS感染。實(shí)際上，與8只中的僅2只(25%)假免疫對(duì)照相比，注射新生兒疫苗誘導(dǎo)的IgG的8只小鼠中有7只(~90%)在經(jīng)歷細(xì)菌攻擊后仍存活(圖21)。討論該結(jié)果表明本發(fā)明的疫苗，包括新生兒疫苗，可與在新生兒(參見實(shí)施例9)和年老者(參見實(shí)施例12)中所證明的平行方式，將糖尿病轉(zhuǎn)基因小鼠模型的免疫系統(tǒng)引導(dǎo)向針對(duì)以GBS為例說(shuō)明的膿毒癥誘發(fā)物質(zhì)的穩(wěn)健的和特異性的反應(yīng)。因此本發(fā)明人堅(jiān)定地認(rèn)為，與年老者中一樣，糖尿病患者中對(duì)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染的易感性受與他們?cè)谛律鷥褐邪l(fā)現(xiàn)的相同機(jī)制支持(即由GBS細(xì)菌分泌的GAPDH通過(guò)TLR2作用于B1細(xì)胞以誘導(dǎo)IL-10產(chǎn)生)。實(shí)際上，本文提供的數(shù)據(jù)顯示新生兒疫苗可用來(lái)產(chǎn)生識(shí)別由GBS產(chǎn)生的細(xì)菌GAPDH的抗體，且這在糖尿病小鼠中明顯具有保護(hù)作用，正如在新生兒(和年老者)中觀察到的一樣。本發(fā)明人因此也堅(jiān)定地認(rèn)為，所述保護(hù)作用對(duì)其它這類免疫受損宿主也將適用。再次，雖然該研究只關(guān)注GBS感染，但要了解，在被其它膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌感染時(shí)可觀察到相同結(jié)果(尤其是因?yàn)閷?shí)施例8顯示用新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體識(shí)別來(lái)自GBS菌株NEM316、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和腦膜炎奈瑟氏球菌(以MenB為例說(shuō)明)的GAPDH)。因此在其它免疫受損宿主(例如糖尿病人)中也可合理地預(yù)期在不同細(xì)菌菌株攻擊的新生小鼠中用新生兒疫苗觀察到的結(jié)果(參見實(shí)施例10)。如本文所述，糖尿病患者對(duì)膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染的易感性提高。本文提供表明細(xì)菌GAPDH的抗體介導(dǎo)的中和在該患者組中預(yù)防由最相關(guān)的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的感染的數(shù)據(jù)。如所解釋的，疫苗接種是用于感染性疾病的最有成本效益的治療，當(dāng)同一疫苗可在不同的年齡組中和在不同的疾病、病況和病癥中預(yù)防由不同人類病原體引起的感染時(shí)甚至更是如此，正如此處已證實(shí)的。糖尿病小鼠中獲得的數(shù)據(jù)也是新生兒中獲得的其它結(jié)果也將在糖尿病患者和其它這類免疫受損宿主中獲得的概念驗(yàn)證。因此預(yù)期將新生兒疫苗IgG抗體給予患有由膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的既有感染的糖尿病小鼠導(dǎo)致對(duì)其產(chǎn)生治療，正如在新生兒中觀察到的一樣(參見實(shí)施例11)。由于對(duì)于膿毒癥目前可獲得的治療只基于給予抗生素，由新生兒疫苗誘導(dǎo)的抗體可用來(lái)治療糖尿病患者以及新生兒、年老者和本文指定的其它患者群的由最相關(guān)的膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌引起的既有感染的事實(shí)，顯然是有利的?？偨Y(jié)評(píng)論實(shí)施例提供的數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的疫苗和治療(包括新生兒疫苗)保護(hù)免疫受損宿主例如新生兒、嬰兒、兒童、育齡女性、妊娠女性、胎兒和年老者尤其免于細(xì)菌膿毒癥的實(shí)用性（relevance）。然而，本文所述的新生兒疫苗和其它疫苗和治療的基本原理表明關(guān)于之前已公開的結(jié)果[24，25]的重要的新的創(chuàng)造性步驟，即：a)新生兒宿主中細(xì)菌GAPDH籍以誘導(dǎo)IL-10的機(jī)制；b)GAPDH誘導(dǎo)的IL-10產(chǎn)生與對(duì)由不同病原體引起的細(xì)菌膿毒癥的易感性有關(guān)；c)GAPDH誘導(dǎo)的IL-10產(chǎn)生是在人臍帶血細(xì)胞中保守的機(jī)制；d)GAPDH誘導(dǎo)的IL-10產(chǎn)生是在自成年人外周血分離的白細(xì)胞中保守的機(jī)制；e)抗GAPDH抗體在預(yù)防由GBS引起的死產(chǎn)中的功效；f)由新生兒疫苗(和本文所述其它疫苗)誘導(dǎo)的抗體識(shí)別來(lái)自GBS、銅綠假單胞菌、大腸桿菌、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌、金黃色葡萄球菌和腦膜炎奈瑟氏球菌的胞外GAPDH。g)通過(guò)用新生兒疫苗(和本文所述其它疫苗)誘導(dǎo)的抗體的被動(dòng)免疫中和細(xì)菌GAPDH保護(hù)新生兒免于由GBS、大腸桿菌、肺炎鏈球菌和金黃色葡萄球菌引起的膿毒癥；h)衍生自膿毒癥誘發(fā)細(xì)菌的GAPDH的肽和抗GAPDHIgG抗體作為針對(duì)新生兒膿毒癥和本文指定的其它患者群的膿毒癥的預(yù)防策略或治療的用途。參考文獻(xiàn)1.EdmondK,ZaidiA(2010)PLoSMed7:e1000213。2.LukacsSL,SchragSJ(2012)JPediatr160:960-965e961。3.vandenHoogenA,GerardsLJ,Verboon-MaciolekMA等(2010)Neonatology97:22-28。4.StollBJ,HansenNI,Adams-ChapmanI等(2004)JAMA292:2357-2365。5.EdmondKM,KortsalioudakiC,ScottS等(2012)Lancet379:547-556。6.SmithA,SaimanL,ZhouJ等(2010)PediatrInfectDisJ29:831-835。7.StollBJ,HansenNI,SanchezPJ等(2011)Pediatrics127:817-826。8.TaziA,DissonO,BellaisS等(2010)JExpMed207:313-2322。9.HornikCP,FortP,ClarkRH等(2012)EarlyHumDev88Suppl2:S6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