1.改善測(cè)序時(shí)的準(zhǔn)確性的擴(kuò)增方法，所述方法包括：
提供核酸模板；
通過線性擴(kuò)增直接從所述模板核酸產(chǎn)生包含彼此緊密接近保持或可鑒定為從相同模板核酸獲得的多個(gè)互補(bǔ)寡核苷酸鏈的群體；并且
對(duì)所述接近保持或可鑒定為從所述相同模板核酸獲得的寡核苷酸實(shí)施測(cè)序反應(yīng)。
2.如權(quán)利要求1中的方法，其中存在有至少三輪線性擴(kuò)增。
3.如權(quán)利要求1或2中的方法，其中所述方法還包括在所述線性擴(kuò)增輪次后實(shí)施所述互補(bǔ)鏈群體的進(jìn)一步指數(shù)擴(kuò)增的步驟。
4.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)中的方法，其中通過線性擴(kuò)增直接從所述模板核酸獲得的所述多個(gè)互補(bǔ)鏈(即，所述鏈群體)在它們與表面結(jié)合時(shí)保持彼此緊密接近。
5.如權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)中的方法，其中通過線性擴(kuò)增直接從所述模板核酸獲得的所述多個(gè)互補(bǔ)鏈(即，所述鏈群體)在它們保持在防止或限制擴(kuò)散的凝膠或乳液中時(shí)保持彼此緊密接近。
6.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)中的方法，其中提供多個(gè)核酸模板，并且產(chǎn)生多個(gè)互補(bǔ)鏈群體，其中每個(gè)群體直接從模板衍生，并且從每個(gè)模板衍生的群體的成員保持彼此緊密接近。
7.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)中所述的方法，其中所述線性擴(kuò)增包括以下步驟：
將所述核酸模板與第一引物雜交；
延伸所述第一引物以產(chǎn)生所述模板的互補(bǔ)鏈；
變性以釋放保持緊密接近的互補(bǔ)鏈；并且
重復(fù)雜交和擴(kuò)增步驟以產(chǎn)生直接從所述模板核酸獲得的互補(bǔ)鏈群體。
8.如權(quán)利要求3至7中的方法，其中所述互補(bǔ)鏈群體的進(jìn)一步指數(shù)擴(kuò)增是橋式擴(kuò)增。
9.如權(quán)利要求7或8任一項(xiàng)中的方法，其中將所述第一引物結(jié)合到所述表面。
10.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)中的方法，其中所述表面是固體支持物。
11.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)中的方法，其中所述表面是平面元件(planar element)。
12.如權(quán)利要求10或11任一項(xiàng)中的方法，其中所述固體支持物是流動(dòng)池或珠。
13.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)中的方法，其中在線性擴(kuò)增之前環(huán)化所述核酸模板。
14.如權(quán)利要求13中的方法，其中環(huán)化使用環(huán)連接酶(circligase)。
15.如權(quán)利要求13或14中的方法，其中所述環(huán)化的模板核酸的雜交和延伸產(chǎn)生多聯(lián)體。
16.如權(quán)利要求15中的方法，其中然后將所述多聯(lián)體結(jié)合到所述表面或固體支持物，任選地通過與反向第一引物雜交。
17.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)中的方法，其中所述表面或固體支持物包含多個(gè)第二/擴(kuò)增引物或其片段。
18.如權(quán)利要求17中的方法，其中所述方法包括將反向互補(bǔ)寡核苷酸與第二引物片段雜交的步驟，其中所述反向互補(bǔ)寡核苷酸在其5’端包含作為全長(zhǎng)第二引物序列的一部分的額外堿基。
19.如權(quán)利要求17或18任一項(xiàng)中的方法，其中將所述第二引物或其片段接枝到附著點(diǎn)上。
20.如權(quán)利要求19中的方法，其中通過鏈霉抗生物素蛋白/生物素連接進(jìn)行接枝。
21.如權(quán)利要求19中的方法，其中通過硫代磷酸酯或點(diǎn)擊化學(xué)接枝。
22.如權(quán)利要求19至21任一項(xiàng)中的方法，其中所述固體支持物上的約一半的附著點(diǎn)由第一引物占據(jù)。
23.如權(quán)利要求22中的方法，其中隨后將第二引物接枝到剩余的可用接枝附著點(diǎn)上。
24.如權(quán)利要求17至23任一項(xiàng)中的方法，其中在顯著高于所述第二引物或其片段的解鏈溫度(Tm)的溫度下實(shí)施初始線性擴(kuò)增步驟。
25.如權(quán)利要求7至24任一項(xiàng)中的方法，其中所述第一引物中的至少一些是封閉的。
26.對(duì)核酸測(cè)序的方法，其包括前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的步驟。
27.如權(quán)利要求26中的測(cè)序方法，其中所述過程是自動(dòng)化的。
28.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)中的測(cè)序方法，其中互補(bǔ)核酸群體由于給所述模板核酸提供了獨(dú)特的分子標(biāo)識(shí)符(UMI)而可鑒定為從相同模板核酸獲得。
29.如權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)中的測(cè)序方法，其包括以下步驟：
提供核酸模板；
通過線性擴(kuò)增直接從所述模板核酸產(chǎn)生局部化群體，所述局部化群體包含彼此保持緊密接近或可鑒定為從相同模板核酸獲得的多個(gè)互補(bǔ)寡核苷酸鏈；
實(shí)施局部化擴(kuò)散步驟，其中所述多個(gè)互補(bǔ)鏈遠(yuǎn)離產(chǎn)生并且再接種(reseed)它們的位點(diǎn)移動(dòng)，
對(duì)所述接近保持或可鑒定為從相同模板寡核苷酸獲得的寡核苷酸實(shí)施測(cè)序反應(yīng)。
30.如權(quán)利要求29中的測(cè)序方法，其中在所述局部化擴(kuò)散步驟之后實(shí)施進(jìn)一步的擴(kuò)增步驟，以從所述再接種的互補(bǔ)鏈產(chǎn)生簇。