技術領域：
本文提供了用于治療或預防癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤和血液癌癥的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的吡咯并嘧啶化合物。本文還提供了可以在所述方法中使用的吡咯并嘧啶化合物。
背景技術：
：癌癥的特征主要為來自給定正常組織的異常細胞數量增加，鄰近組織被這些異常細胞侵襲，或通過淋巴或血液傳播將惡性細胞擴散至局部淋巴結和更遠的部位(轉移)。臨床數據和分子生物學研究表明癌癥為多步驟過程，始于較小的腫瘤發(fā)生前變化，在特定條件下進展為瘤形成。腫瘤病變可能以無性繁殖方式發(fā)展并且侵襲、生長、轉移和異質性能力提高，尤其是在腫瘤細胞逃逸宿主免疫監(jiān)視的條件下(Roitt,I.,Brostoff,J和Kale,D.,Immunology,17.1-17.12(第3版,Mosby,St.Louis,Mo.,1993))。癌癥是全世界死亡的主要原因，在2012年導致820萬例死亡。預計在未來二十年內，年度癌癥病例將從2012年的1400萬增加到2200萬(參見2014年6月10日檢索的癌癥事實表N°297，世界衛(wèi)生組織，2014年2月(CancerFactsheetN°297,WorldHealthOrganization,2014年2月,2014年6月10日檢索，和Globocan2012,IARC)。用于癌癥治療的當前的藥物是高毒性的，并且通常是非特異性的。當前的抗癌治療策略通常集中在快速增殖的細胞，其可以縮小原發(fā)性和轉移性腫瘤，但是這種作用通常是短暫的，并且大多數轉移性癌癥的腫瘤復發(fā)頻繁發(fā)生。失敗的一個可能的原因是癌癥干細胞的存在。與腫瘤內的大多數細胞不同，癌癥干細胞對明確定義的化學療法有抗性，并且在治療后，它們可通過其基本靜止性質的干細胞樣行為及其藥物轉運蛋白的豐富表達使腫瘤中的所有細胞類型再生。有很多種類的腫瘤，在醫(yī)學文獻中進行了詳細描述。由于總人口老齡化、新癌癥形成和易感人群(例如感染了AIDS或過度暴露于陽光下的人群)增多，癌癥的發(fā)病率持續(xù)攀升。然而，對于癌癥治療的選擇是有限的。因此對可用于治療患有癌癥的患者的方法和組合物存在著巨大需求。發(fā)明概述本文提供了可以用于本文提供的方法中的吡咯并嘧啶化合物。本文提供了治療癌癥，尤其是實體瘤或血液癌癥的方法。本文提供的吡咯并嘧啶化合物可以在用于治療或預防癌癥，尤其是實體瘤或血液癌癥的方法中使用。所述方法包括向有需要的受試者給予有效量的吡咯并嘧啶化合物。本文提供了用于預防癌癥轉移的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的如本文所提供的吡咯并嘧啶化合物。本文提供的吡咯并嘧啶化合物可以在用于預防癌癥轉移的方法中使用。此外，本文提供了消除受試者中的癌癥干細胞的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的如本文所提供的吡咯并嘧啶化合物。本文提供的吡咯并嘧啶化合物可以在消除受試者中的癌癥干細胞的方法中使用。還提供了在受試者中誘導癌癥干細胞分化的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的如本文所提供的吡咯并嘧啶化合物。本文提供的吡咯并嘧啶化合物可以用于在受試者中誘導癌癥干細胞分化的方法中。在另一個方面中，提供了在受試者中誘導癌癥干細胞死亡的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的如本文所提供的吡咯并嘧啶化合物。本文提供的吡咯并嘧啶化合物可以用于在受試者中誘導癌癥干細胞死亡的方法中。在又一個方面中，本文提供了用于治療或預防癌癥，尤其是實體瘤或血液癌癥的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性，以及任選地抑制CAMKK2激酶活性的化合物。抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性，以及任選地抑制CAMKK2激酶活性的化合物可以在用于治療或預防癌癥，尤其是實體瘤或血液癌癥的方法中使用。還提供了用于治療或預防與涉及TTK、CLK1和CLK2及其突變體或同種型的途徑相關的癌癥的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性，以及任選地抑制CAMKK2激酶活性的化合物。抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性，和任選地抑制CAMKK2激酶活性的化合物可以在用于治療或預防與涉及TTK、CLK1和CLK2及其突變體或同種型的途徑相關的癌癥的方法中使用。抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性，以及任選地抑制CAMKK2激酶活性的化合物是如本文所提供的吡咯并嘧啶化合物。用于本文公開的方法中的化合物是如本文所述，例如在表A中描述的吡咯并嘧啶化合物，或其可藥用鹽、互變異構體、立體異構體、對映異構體或同位素體(isotopologue)?？梢酝ㄟ^參考詳細描述和實施例更充分的理解本發(fā)明的實施方式，該詳細描述和實施例旨在例示非限制性的實施方式。附圖說明圖1：吡咯并嘧啶化合物在多種實體瘤中顯示抗增殖活性，所述實體瘤即膀胱癌、乳腺癌、中樞神經系統(tǒng)癌癥、結腸癌、內分泌癌、女性泌尿生殖器癌癥、頭頸癌、腎癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、皮膚癌和軟組織癌(以圖1中的化合物38為范例)。圖2：吡咯并嘧啶化合物在多種血液癌癥中顯示抗增殖活性，所述血液癌癥即各種淋巴瘤(ST486、CRO-AP2、Faji、MHH-PREB-1、BC-1、DOHH-2、DB、SR、RamosRA1、Daudi、HT、EB-3、SKO-007)和白血病MOLT-16、BV-173、J-RT3-T3-5、Jurkat、NALM-6、MX1、ARH-77、CML-T1、CCRF-CEM、MV-4-11、EM-2、MOLT-3、CEM-C1、HEL-92-1-7、MEG-01、K-562、THP-1)/骨髓瘤(RPMI-8226、U266B1)(在圖2中以化合物38為例)。圖3：吡咯并嘧啶化合物證明了針對幾種間充質GBMCSC(8311、32612、81611)的效力，IC50在1-2μM的范圍內。該數據表明以化合物38為范例的吡咯并嘧啶化合物對源自前神經亞型GBM患者的兩個GBMCSC球模型(52810和1912)特別有效，IC50在50-190nM范圍內。圖4：吡咯并嘧啶化合物(例如，化合物38)對GBM-CSC分化的誘導顯示在圖4中(左圖：DMSO，右圖：化合物38)?？s寫：DMSO＝二甲基亞砜；Oct4＝八聚體結合轉錄因子4；Tuj1＝微管蛋白β3；DAPI＝4',6-二脒基-2-苯基吲哚。在化合物施用前允許8311GBMCSC和HUAEC細胞共培養(yǎng)1天。在3天的化合物或模擬/DMSO處理后，固定細胞并通過間接免疫熒光監(jiān)測Oct4和Tuj1的表達。吡咯并嘧啶化合物(以化合物38為例)在HUAEC共培養(yǎng)模型的情況下誘導GBMCSC的分化。發(fā)明詳述定義“烷基”是具有1至10個碳原子，通常1至8個碳，或在一些實施方式中1至6、1至4或2至6或2至4個碳原子的飽和的、部分飽和的或不飽和的直鏈或支鏈非環(huán)狀烴。代表性的烷基包括-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基和-正己基；而飽和支鏈烷基包括-異丙基、-仲丁基、-異丁基、-叔丁基、-異戊基、-新戊基、叔戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。不飽和烷基的實例尤其包括但不限于，乙烯基、烯丙基、-CH＝CH(CH3)、-CH＝C(CH3)2、-C(CH3)＝CH2、-C(CH3)＝CH(CH3)、-C(CH2CH3)＝CH2、-C≡CH、-C≡C(CH3)、-C≡C(CH2CH3)、-CH2C≡CH、-CH2C≡C(CH3)和-CH2C≡C(CH2CH3)。烷基可以是取代的或未取代的。當本文所述的烷基描述為“取代的”時，其可以被任何取代基或多個取代基取代，所述任何取代基或多個取代基如本文公開的示例性化合物和實施方式中存在的那些，以及鹵素(氯、碘、溴或氟)、烷基、羥基、烷氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基、羧基、硝基、氰基、巰基、硫醚、亞胺、酰亞胺、脒、胍、烯胺、氨基羰基、?；被?、膦酸基、膦、硫羰基、亞磺酰基、砜、磺酰胺、酮、醛、酯、脲、尿烷、肟、羥胺、烷氧基胺、芳烷氧基胺、N-氧化物、肼、酰肼、腙、疊氮化物、異氰酸酯、異硫氰酸酯、氰酸酯、硫氰酸酯、B(OH)2或O(烷基)氨基羰基?！碍h(huán)烷基”是具有單環(huán)或多個稠環(huán)或橋環(huán)的3至10個碳原子的飽和的或部分飽和的環(huán)狀烷基，其可以任選地被1至3個烷基取代。在一些實施方式中，環(huán)烷基具有3至8個環(huán)成員，而在其他實施方式中，環(huán)碳原子的數量為3至5、3至6或3至7個。以舉例的方式，這樣的環(huán)烷基包括單環(huán)結構，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、1-甲基環(huán)丙基、2-甲基環(huán)戊基、2-甲基環(huán)辛基等，或多環(huán)或橋環(huán)結構，如1-雙環(huán)[1.1.1]戊基、雙環(huán)[2.1.1]己基、雙環(huán)[2.2.1]庚基、雙環(huán)[2.2.2]辛基、金剛烷基等。不飽和環(huán)烷基的實例尤其包括環(huán)己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己二烯基、丁二烯基、戊二烯基、己二烯基。環(huán)烷基可以是取代的或未取代的。以舉例的方式，這樣的取代的環(huán)烷基包括環(huán)己醇等?！胺蓟笔蔷哂袉苇h(huán)(例如，苯基)或多個稠環(huán)(例如，萘基或蒽基)的6至14個碳原子的芳族碳環(huán)基團。在一些實施方式中，芳基在基團的環(huán)部分中包含6-14個碳，在其他實施方式中包含6至12或甚至6至10個碳原子。具體的芳基包括苯基、聯苯基、萘基等。芳基可以是取代的或未取代的。術語“芳基”還包括含有稠環(huán)的基團，如稠合的芳族-脂族環(huán)系統(tǒng)(例如，茚滿基、四氫萘基等)?！半s芳基”是在雜芳族環(huán)系統(tǒng)中具有一至四個雜原子作為環(huán)原子的芳基環(huán)系統(tǒng)，其中剩余的原子為碳原子。在一些實施方式中，雜芳基在基團的環(huán)部分中包含3至6個環(huán)原子，在其他實施方式中包含6至9或甚至6至10個原子。適合的雜原子包括氧、硫和氮。在某些實施方式中，雜芳基環(huán)系統(tǒng)為單環(huán)的或二環(huán)的。非限定性實例包括但不限于，以下基團，如吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、苯并異噁唑基(例如，苯并[d]異噁唑基)、噻唑基、吡咯基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吲哚基(例如，吲哚基-2-酮基或異吲哚啉-1-酮基)、氮雜吲哚基(吡咯并吡啶基或1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基)、吲唑基、苯并咪唑基(例如，1H-苯并[d]咪唑基)、咪唑并吡啶基(例如，氮雜苯并咪唑基或1H-咪唑并[4,5-b]吡啶基)、吡唑并吡啶基、三唑并吡啶基、苯并三唑基(例如，1H-苯并[d][1,2,3]三唑基)、苯并噁唑基(例如，苯并[d]噁唑基)、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、異噁唑并吡啶基、硫萘基、嘌呤基、黃嘌呤基、腺嘌呤基、鳥嘌呤基、喹啉基、異喹啉基(例如，3,4-二氫異喹啉-1(2H)-酮基)、四氫喹啉基、喹喔啉基和喹唑啉基?！半s環(huán)基”為其中一至四個環(huán)碳原子獨立地被來自O、S和N組成的群組中的雜原子替代的芳族(也稱為雜芳基)或非芳族環(huán)烷基。在一些實施方式中，雜環(huán)基包括3至10個環(huán)成員，而其他這樣的基團具有3至5個、3至6個或3至8個環(huán)成員。雜環(huán)基還可以在任意環(huán)原子處(即，在雜環(huán)的任何碳原子或雜原子處)結合到其他基團。雜環(huán)烷基可以是取代的或未取代的。雜環(huán)基包括不飽和的、部分飽和的和飽和的環(huán)系統(tǒng)，例如，咪唑基、咪唑啉基和咪唑烷基(例如，咪唑烷-4-酮或咪唑烷-2,4-二酮基)。術語雜環(huán)基包括稠環(huán)種類，包括包含稠合芳族和非芳族基團的那些，例如，1-和2-氨基四氫化萘、苯并三唑基(例如，1H-苯并[d][1,2,3]三唑基)、苯并咪唑基(例如，1H-苯并[d]咪唑基)、2,3-二氫苯并[l,4]二氧雜環(huán)己烯基和苯并[l,3]二氧雜環(huán)戊烯基。術語還包括含有雜原子的橋接多環(huán)環(huán)系統(tǒng)，例如但不限于，喹嚀基。雜環(huán)基的代表性實例包括但不限于，氮雜環(huán)丙烷基、氮雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)庚基、氧雜環(huán)丁基、吡咯烷基、咪唑烷基(例如，咪唑烷-4-酮基或咪唑烷-2,4-二酮基)、吡唑烷基、噻唑烷基、四氫噻吩基、四氫呋喃基、二氧雜環(huán)戊烯基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、咪唑啉基、吡唑基、吡唑啉基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、苯并異噁唑基(例如，苯并[d]異噁唑基)、噻唑基、噻唑啉基、異噻唑基、噻二唑基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基(例如，哌嗪-2-酮基)、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫吡喃基(例如，四氫-2H-吡喃基)、四氫硫代吡喃基、氧硫雜環(huán)已基、二氧雜環(huán)己烷基、二噻烷基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、三嗪基、二氫吡啶基、二氫二硫雜環(huán)己烯基(dihydrodithiinyl)、二氫二硫雜環(huán)己基(dihydrodithionyl)、1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷基、高哌嗪基、喹嚀基、吲哚基(例如，吲哚基-2-酮基或異吲哚啉-1-酮基)、吲哚啉基、異吲哚基、異吲哚啉基、氮雜吲哚基(吡咯并吡啶基或1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基)、吲唑基、吲哚嗪基、苯并三唑基(例如，1H-苯并[d][1,2,3]三唑基)、苯并咪唑基(例如，1H-苯并[d]咪唑基或1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮基)、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁二唑基、苯并噁嗪基、苯并二硫雜環(huán)己烯基、苯并氧硫雜環(huán)己烯基、苯并噻嗪基、苯并噁唑基(即，苯并[d]噁唑基)、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[l,3]二氧雜環(huán)戊烯基、吡唑并吡啶基(例如，1H-吡唑并[3,4-b]吡啶基、1H-吡唑并[4,3-b]吡啶基)、咪唑并吡啶基(例如，氮雜苯并咪唑基或1H-咪唑并[4,5-b]吡啶基)、三唑并吡啶基、異噁唑并吡啶基、嘌呤基、黃嘌呤基、腺嘌呤基、鳥嘌呤基、喹啉基、異喹啉基(例如，3,4-二氫異喹啉-1(2H)-酮基)、喹嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、萘啶基、蝶啶基、硫萘基、二氫苯并噻嗪基、二氫苯并呋喃基、吲哚啉基、二氫苯并二氧雜環(huán)己烯基、四氫吲哚基、四氫吲唑基、四氫苯并咪唑基、四氫苯并三唑基、四氫吡咯并吡啶基、四氫吡唑并吡啶基、四氫咪唑并吡啶基、四氫三唑并吡啶基、四氫嘧啶-2(1H)-酮和四氫喹啉基。代表性的非芳族雜環(huán)基不包括包含稠合芳族基團的稠環(huán)種類。非芳族雜環(huán)基的實例包括氮雜環(huán)丙烷基、氮雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)庚基、吡咯烷基、咪唑烷基(例如，咪唑烷-4-酮基或咪唑烷-2,4-二酮基)、吡唑烷基、噻唑烷基、四氫噻吩基、四氫呋喃基、哌啶基、哌嗪基(例如，哌嗪-2-酮基)、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫吡喃基(例如，四氫-2H-吡喃基)、四氫噻喃基、氧硫雜環(huán)已基、二噻烷基、1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷基、高哌嗪基、喹嚀基或四氫嘧啶-2(1H)-酮。代表性的取代的雜環(huán)基可以是單取代的或多次取代的，例如但不限于，被各種取代基如以下列舉的那些2-、3-、4-、5-或6-取代的或二取代的吡啶基或嗎啉基?！碍h(huán)烷基烷基”是式-烷基-環(huán)烷基的基團，其中烷基和環(huán)烷基如上所定義。取代的環(huán)烷基烷基可以在基團的烷基、環(huán)烷基或烷基和環(huán)烷基兩者部分處被取代。代表性的環(huán)烷基烷基包括但不限于，甲基環(huán)丙基、甲基環(huán)丁基、甲基環(huán)戊基、甲基環(huán)己基、乙基環(huán)丙基、乙基環(huán)丁基、乙基環(huán)戊基、乙基環(huán)己基、丙基環(huán)戊基、丙基環(huán)己基等?！胺纪榛笔鞘?烷基-芳基的基團，其中烷基和芳基如上所定義。取代的芳烷基可以在基團的烷基、芳基或烷基或芳基兩者部分處被取代。代表性的芳烷基包括但不限于芐基和苯乙基和稠合(環(huán)烷基芳基)烷基，如4-乙基-茚滿基。“雜環(huán)基烷基”是式-烷基-雜環(huán)基的基團，其中烷基和雜環(huán)基如上所定義。取代的雜環(huán)基烷基可以在基團的烷基、雜環(huán)基或烷基和雜環(huán)基兩者部分處被取代。代表性的雜環(huán)基烷基包括但不限于，4-乙基-嗎啉基、4-丙基嗎啉基、呋喃-2-基甲基、呋喃-3-基甲基、吡啶-3-基甲基、四氫呋喃-2-基乙基和吲哚-2-基丙基?！胞u素”為氯、碘、溴或氟。“羥烷基”為被一個或多個羥基取代的如上所述的烷基?！巴檠趸睘?O-(烷基)，其中烷基如上所定義?！巴檠趸榛睘?(烷基)-O-(烷基)，其中烷基如上所定義?！鞍贰被鶠槭?NH2的基團。“羥胺”基為式-N(R#)OH或-NHOH的基團，其中R#為取代或未取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基或如本文所定義的雜環(huán)基?！巴檠趸贰被鶠槭?N(R#)O-烷基或-NHO-烷基的基團，其中R#如上所定義?！胺纪檠趸贰被鶠槭?N(R#)O-芳基或-NHO-芳基的基團，其中R#如上所定義。“烷基胺”基為式-NH-烷基或-N(烷基)2的基團，其中每個烷基獨立地如上所定義。“氨基羰基”為式-C(＝O)N(R#)2、-C(＝O)NH(R#)或-C(＝O)NH2的基團，其中每個R#如上所定義?！磅；被睘槭?NHC(＝O)(R#)或-N(烷基)C(＝O)(R#)的基團，其中每個烷基和R#獨立地如上所定義。“O(烷基)氨基羰基”為式-O(烷基)C(＝O)N(R#)2、-O(烷基)C(＝O)NH(R#)或-O(烷基)C(＝O)NH2的基團，其中每個R#獨立地如上所定義?！癗-氧化物”基團為式-N+-O-的基團。“羧基”為式-C(＝O)OH的基團?！巴被鶠槭?C(＝O)(R#)的基團，其中R#如上所定義。“醛”基為式-CH(＝O)的基團?！磅ァ被鶠槭?C(＝O)O(R#)或-OC(＝O)(R#)的基團，其中R#如上所定義?！半濉被鶠槭?N(烷基)C(＝O)N(R#)2、-N(烷基)C(＝O)NH(R#)、-N(烷基)C(＝O)NH2、-NHC(＝O)N(R#)2、-NHC(＝O)NH(R#)或-NHC(＝O)NH2#的基團，其中每個烷基和R#獨立地如上所定義?！皝啺贰被鶠槭?N＝C(R#)2或-C(R#)＝N(R#)的基團，其中每個R#獨立地如上所定義?！磅啺贰被鶠槭?C(＝O)N(R#)C(＝O)(R#)或-N((C＝O)(R#))2的基團，其中每個R#獨立地如上所定義?！鞍被姿狨ァ被鶠槭?OC(＝O)N(R#)2、-OC(＝O)NH(R#)、-N(R#)C(＝O)O(R#)或-NHC(＝O)O(R#)的基團，其中每個R#獨立地如上所定義?！半摺被鶠槭?C(＝N(R#))N(R#)2、-C(＝N(R#))NH(R#)、-C(＝N(R#))NH2、-C(＝NH)N(R#)2、-C(＝NH)NH(R#)、-C(＝NH)NH2、-N＝C(R#)N(R#)2、-N＝C(R#)NH(R#)、-N＝C(R#)NH2、-N(R#)C(R#)＝N(R#)、-NHC(R#)＝N(R#)、-N(R#)C(R#)＝NH或-NHC(R#)＝NH的基團，其中每個R#獨立地如上所定義。“胍”基為式-N(R#)C(＝N(R#))N(R#)2、-NHC(＝N(R#))N(R#)2、-N(R#)C(＝NH)N(R#)2、-N(R#)C(＝N(R#))NH(R#)、-N(R#)C(＝N(R#))NH2、-NHC(＝NH)N(R#)2、-NHC(＝N(R#))NH(R#)、-NHC(＝N(R#))NH2、-NHC(＝NH)NH(R#)、-NHC(＝NH)NH2、-N＝C(N(R#)2)2、-N＝C(NH(R#))2或-N＝C(NH2)2的基團，其中每個R#獨立地如上所定義。“烯胺”基為式-N(R#)C(R#)＝C(R#)2、-NHC(R#)＝C(R#)2、-C(N(R#)2)＝C(R#)2、-C(NH(R#))＝C(R#)2、-C(NH2)＝C(R#)2、-C(R#)＝C(R#)(N(R#)2)、-C(R#)＝C(R#)(NH(R#))或-C(R#)＝C(R#)(NH2)的基團，其中每個R#獨立地如上所定義?！半俊被鶠槭?C(＝NO(R#))(R#)、-C(＝NOH)(R#)、-CH(＝NO(R#))或-CH(＝NOH)的基團，其中每個R#獨立地如上所定義?！磅ｋ隆被鶠槭?C(＝O)N(R#)N(R#)2、-C(＝O)NHN(R#)2、-C(＝O)N(R#)NH(R#)、-C(＝O)N(R#)NH2、-C(＝O)NHNH(R#)2或-C(＝O)NHNH2的基團，其中每個R#獨立地如上所定義?！半隆被鶠槭?N(R#)N(R#)2、-NHN(R#)2、-N(R#)NH(R#)、-N(R#)NH2、-NHNH(R#)2或-NHNH2的基團，其中每個R#獨立地如上所定義?！半辍被鶠槭?C(＝N-N(R#)2)(R#)2、-C(＝N-NH(R#))(R#)2、-C(＝N-NH2)(R#)2、-N(R#)(N＝C(R#)2)或-NH(N＝C(R#)2)的基團，其中每個R#獨立地如上所定義?！隘B氮”基為式-N3的基團?！爱惽杷狨ァ被鶠槭?N＝C＝O的基團。“異硫氰酸酯”基為式-N＝C＝S的基團?！扒杷狨ァ被鶠槭?OCN的基團?！傲蚯杷狨ァ被鶠槭?SCN的基團?！傲蛎选被鶠槭?S(R#)的基團，其中R#如上所定義?！傲螋驶睘槭?C(＝S)(R#)的基團，其中R#如上所定義?！皝喕酋；睘槭?S(＝O)(R#)的基團，其中R#如上所定義。“砜”基為式-S(＝O)2(R#)的基團，其中R#如上所定義?！盎酋；被睘槭?NHSO2(R#)或-N(烷基)SO2(R#)的基團，其中每個烷基和R#如上所定義?！盎酋０贰被鶠槭?S(＝O)2N(R#)2或-S(＝O)2NH(R#)或-S(＝O)2NH2的基團，其中每個R#獨立地如上所定義。“膦酸酯”基為式-P(＝O)(O(R#))2、-P(＝O)(OH)2、-OP(＝O)(O(R#))(R#)或-OP(＝O)(OH)(R#)的基團，其中每個R#獨立地如上所定義。“膦”基為式-P(R#)2的基團，其中每個R#獨立地如上所定義。當本文所述的基團除烷基之外被描述為“取代的”時，它們可以被任何合適的取代基或多個取代基取代。取代基的說明性的實例是見于本文公開的示例性化合物和實施方式的那些，以及鹵素(氯、碘、溴或氟)；烷基；羥基；烷氧基；烷氧基烷基；氨基；烷基氨基；羧基；硝基；氰基；巰基；硫醚；亞胺；酰亞胺；脒；胍；烯胺；氨基羰基；酰基氨基；膦酸酯；膦；硫羰基；亞磺?；?；砜；磺酰胺；酮；醛；酯；脲；氨基甲酸酯；肟；羥胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；肼；酰肼；腙；疊氮化物；異氰酸酯；異硫氰酸酯；氰酸酯；硫氰酸酯；氧(═O)；B(OH)2、O(烷基)氨基羰基；環(huán)烷基，其可以是單環(huán)或稠合或非稠合多環(huán)(例如，環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基)或雜環(huán)基，其可以是單環(huán)或稠合或非稠合多環(huán)(例如，吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或噻嗪基)；單環(huán)或稠合或非稠合多環(huán)芳基或雜芳基(例如，苯基、萘基、吡咯基、吲哚基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、吖啶基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并噻吩基或苯并呋喃基)；芳氧基；芳烷基氧基；雜環(huán)基氧基；和雜環(huán)基烷氧基。如本文所使用的，術語“吡咯并嘧啶化合物”是指式(I)的化合物，以及本文提供的另外的實施方式。在一種實施方式中，“吡咯并嘧啶化合物”是表1所述的化合物。術語“吡咯并嘧啶化合物”包括本文提供的化合物的可藥用鹽、互變異構體、立體異構體、對映異構體和同位素體。如本文所使用，術語“可藥用鹽(或多種鹽)”是指由藥學上可接受的無毒酸或堿，包括無機酸和堿以及有機酸和堿制備的鹽。式(I)的化合物的適合的藥學上可接受的堿加成鹽包括但不限于鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅由制備的金屬鹽或由賴氨酸、N,N’-二芐基乙二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普魯卡因制備的有機鹽。適合的無毒酸包括但不限于，無機和有機酸，如乙酸、藻酸、鄰氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙烯磺酸、甲酸、富馬酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙基磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、撲酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、酒石酸和對甲苯磺酸。具體的無毒酸包括鹽酸、氫溴酸、馬來酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。具體的鹽的實例包括鹽酸和甲磺酸鹽。其他是本領域熟知的，參見例如，Remington’sPharmaceuticalSciences,第18版,MackPublishing,EastonPA(1990)或Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,第19版,MackPublishing,EastonPA(1995)。如本文所使用并且除非另外指出，術語“立體異構體”或“立體異構純”是指吡咯并嘧啶化合物的一種立體異構體，其基本上不含該化合物的其他立體異構體。例如，具有一個手性中心的立體異構純的化合物將基本上不含基本上不含該化合物的相反的對映異構體。具有兩個手性中心的立體異構純的化合物將基本上不含該化合物的其他非對映異構體。典型的立體異構純的化合物包含大于約80重量％的該化合物的一種立體異構體和小于約20重量％的該化合物的其他立體異構體，大于約90重量％的該化合物的一種立體異構體和小于約10重量％的該化合物的其他立體異構體，大于約95重量％的該化合物的一種立體異構體和小于約5重量％的該化合物的其他立體異構體或大于約97重量％的該化合物的一種立體異構體和小于約3重量％的該化合物的其他立體異構體。吡咯并嘧啶化合物可以具有手性中心并且可以作為外消旋體、單個對映異構體或非對映異構體及其混合物存在。所有這樣的異構形式均包括在本文公開的實施方式內，包括其混合物。這樣的吡咯并嘧啶化合物的立體異構純形式的用途，以及那些形式的混合物的用途包括在本文公開的實施方式中。例如，包含等量或不等量的特定吡咯并嘧啶化合物的對映異構體的混合物可以用于本文公開的方法和組合物中。這些異構體可以不對稱合成或使用標準技術如手性柱或手性拆分劑來拆分。參見例如，Jacques,J.,等人,Enantiomers,RacematesandResolutions(Wiley-Interscience,NewYork,1981)；Wilen,S.H.,等人,Tetrahedron33:2725(1977)；Eliel,E.L.,StereochemistryofCarbonCompounds(McGraw-Hill,NY,1962)；和Wilen,S.H.,TablesofResolvingAgentsandOpticalResolutionsp.268(E.L.Eliel,Ed.,Univ.ofNotreDamePress,NotreDame,IN,1972)。還應注意，吡咯并嘧啶化合物可以包括E和Z異構體或其混合物，以及順式和反式異構體或其混合物。在某些實施方式中，將吡咯并嘧啶化合物分離為E或Z異構體。在其他實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是E和Z異構體的混合物?！盎プ儺悩嬻w”是指化合物的相互平衡的異構形式。異構形式的濃度將取決于化合物所處的環(huán)境并且可以根據例如化合物是固體還是有機或水溶液而不同的。例如，在水溶液中，吡唑可以顯示以下異構形式，其稱為彼此的互變異構體：如本領域技術人員容易地理解的，各種官能團和其他結構可以顯示互變異構性，并且式(I)的化合物的所有互變異構體在本發(fā)明的范圍內。還應注意，吡咯并嘧啶化合物可以在一個或多個原子處包含非天然比例的原子同位素。例如，化合物可以用放射性同位素標記，所述放射性同位素例如氚(3H)、碘-125(125I)、硫-35(35S)或碳-14(14C)或可以同位素富集例如氘(2H)、碳-13(13C)或氮-15(15N)。如本文所使用，“同位素體”是同位素富集的化合物。術語“同位素富集”是指原子的同位素組成不同于該原子的天然同位素組成?！巴凰馗患边€可以指含有至少一個這樣的原子的化合物，所述原子的同位素組成不同于該原子的天然同位素組成。術語“同位素組成”是指給定原子存在的每種同位素的量。放射性標記和同位素富集的化合物用作治療劑，例如乳腺癌治療劑；研究試劑，例如結合分析試劑；和診斷劑，例如體內造影劑。本文所述的吡咯并嘧啶化合物的所有同位素變體，無論有放射性與否，均意在包括在本文提供的實施方式的范圍內。在一些實施方式中，提供了吡咯并嘧啶化合物的同位素體，例如，同位素體為氘、碳-13或氮-15富集的吡咯并嘧啶化合物。應注意，如果在描繪的結構與該結構的名稱之間存在矛盾，則更多以描繪的結構為準。如本文所使用的“治療”是指完全或部分減輕障礙、疾病或病癥或一種或多種與所述障礙、疾病或病癥相關的癥狀，或減緩或阻止那些癥狀的進一步進展或惡化，或減輕或消除障礙、疾病或病癥自身的病因(多種病因)。在一種實施方式中，所述障礙為癌癥，尤其是實體瘤或血液癌癥。在一些實施方式中，“治療”是指完全或部分減輕癌癥或與癌癥相關的癥狀，或減緩或阻止那些癥狀的進一步進展或惡化，所述癌癥尤其是實體瘤或血液癌癥。如本文所使用的“預防”是指完全或部分延遲和/或阻止癌癥，尤其是實體瘤或血液癌癥的發(fā)作、復發(fā)或擴散；阻止受試者獲得癌癥，尤其是實體瘤或血液癌癥；或降低受試者獲得癌癥，尤其是實體瘤或血液癌癥的方法。與吡咯并嘧啶化合物相關的術語“有效量”是指能夠治療或預防癌癥，尤其是實體瘤或血液癌癥或其癥狀的量，如本文所公開的。吡咯并嘧啶化合物的有效量，例如在藥物組合物中的吡咯并嘧啶化合物的有效量，可以在將實現希望效果的水平下；例如，在胃腸外施用的單位劑量中為約0.005mg/kg受試者體重至約100mg/kg患者體重。對本領域技術人員將顯而易見的是，預期本文公開的吡咯并嘧啶化合物的有效量可根據所治療的適應癥的嚴重程度而變化。如本文所使用的術語“患者”和“受試者”包括動物，包括但不限于動物如牛、猴、馬、綿羊、豬、雞、火雞、鵪鶉、貓、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠，在一種實施方式中包括哺乳動物，在另一種實施方式中包括人。在一種實施方式中，受試者是具有癌癥，尤其是實體瘤或血液癌癥或其癥狀的人或是處于具有癌癥，尤其是實體瘤或血液癌癥或其癥狀的風險的人。在一種實施方式中，患者是具有組織學或細胞學確認的實體瘤或血液癌癥的人，包括已經進行(或不能耐受)標準抗癌治療或不存在標準抗癌治療的受試者。如本文所使用，并且除非另有說明，術語“癌癥”是指或描述哺乳動物中特征通常在于不受調節(jié)的細胞生長的生理狀態(tài)。癌癥的實例包括實體瘤和血液癌癥。在一些實施方式中，癌癥是原發(fā)性癌癥，在其他實施方式中，癌癥是轉移的。如本文所使用的“實體瘤”包括但不限于膀胱癌(包括但不限于淺表性膀胱癌)、乳腺癌(包括但不限于管腔B型、ER+、PR+和Her2+乳腺癌)、中樞神經系統(tǒng)癌癥(包括但不限于多形性成膠質細胞瘤(GBM)、膠質瘤、成神經管細胞瘤和星形細胞瘤)、結腸直腸癌、胃腸癌(包括但不限于胃癌、食道癌和直腸癌)、內分泌癌(包括但不限于甲狀腺癌和腎上腺癌)、眼癌(包括但不限于視網膜母細胞瘤)、女性泌尿生殖器癌癥(包括但不限于胎盤癌、子宮癌、外陰癌、卵巢癌、宮頸癌)、頭頸癌(包括但不限于咽癌、食道癌和舌癌)、肝癌、肺癌(包括但不限于非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞肺癌(SCLC)、粘液表皮樣癌、支氣管癌、鱗狀細胞癌(SQCC)和間變性/NSCLC)、皮膚癌(包括但不限于黑色素瘤和SQCC)、軟組織癌(包括但不限于肉瘤、尤文氏肉瘤和橫紋肌肉瘤)、骨癌(包括但不限于肉瘤、尤文氏肉瘤和骨肉瘤)、鱗狀細胞癌(包括但不限于肺癌、食道癌、宮頸癌和頭頸癌)、胰腺癌、腎癌(包括但不限于腎維爾姆斯瘤和腎細胞癌)和前列腺癌。在一種實施方式中，所述實體瘤不是三陰性乳腺癌(TNBC)。在一些實施方式中，所述實體瘤為乳腺癌、結腸癌、肺癌或膀胱癌。在一個這樣的實施方式中，所述實體瘤為淺表性膀胱癌。在另一個這樣的實施方式中，實體瘤為肺鱗狀細胞癌。在又一個這樣的實施方式中，實體瘤為管腔B型乳腺癌。如本文使用的“血液癌癥”包括但不限于白血病(包括但不限于急性淋巴細胞性白血病(ALL)、慢性髓性白血病(CML)、急性T細胞白血病、B細胞前體白血病、急性早幼粒細胞白血病(APML)、漿細胞白血病、髓單核母細胞/T-ALL、B髓單核細胞白血病、紅白血病和急性髓性白血病(AML))、淋巴瘤(包括但不限于霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、伯基特氏淋巴瘤(BL)、B細胞淋巴瘤、淋巴母細胞性淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤(FL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、大細胞免疫母細胞性淋巴瘤)和多發(fā)性骨髓瘤。在癌癥的情況下，抑制尤其可以通過抑制疾病進展、抑制腫瘤生長、減少原發(fā)性腫瘤、緩解腫瘤相關癥狀、抑制腫瘤分泌因子(包括腫瘤分泌激素，如導致類癌瘤綜合征的那些)、原發(fā)性或繼發(fā)性腫瘤的出現延遲、原發(fā)性或繼發(fā)性腫瘤的發(fā)展減緩、原發(fā)性或繼發(fā)性腫瘤的出現減少、疾病的繼發(fā)性影響的嚴重性降低或減緩、腫瘤生長停止和腫瘤消退、疾病進展時間(TTP)增加、無進展生存率(PFS)增加、總生存率(OS)增加。如本文所使用的OS是指由于任何病因的從隨機化到死亡的時間，并且在意圖治療的群體中測量。如本文所使用的TTP是指從隨機化到客觀腫瘤進展的時間；TTP不包括死亡。如本文所使用，PFS是指從隨機化直到客觀腫瘤進展或死亡的時間。在一種實施方式中，PFS率將使用Kaplan-Meier估計值來計算。在極端情況下，完全抑制在本文中稱為預防或化學預防。在該情況下，術語“預防”包括完全預防臨床上明顯的癌癥的發(fā)作或預防癌癥的臨床前明顯的階段的發(fā)作。該定義還旨在包括預防轉化成惡性細胞或阻止或逆轉惡化前細胞進展成惡性細胞。這包括預防性治療處于患上癌癥的風險的那些。在某些實施方式中，淋巴瘤的治療可以由非霍奇金淋巴瘤(NHL)的國際研討會標準(IWC)(參見ChesonBD,PfistnerB,Juweid,ME等人.RevisedResponseCriteriaforMalignantLymphoma.J.Clin.Oncol:2007:(25)579-586)，使用以下顯示的反應和終點定義來評估：縮寫：CR，完全緩解；FDG，[18F]氟脫氧葡萄糖；PET，正電子發(fā)射斷層攝影術；CT，計算機斷層攝影術；PR，部分緩解；SPD，直徑乘積總和；SD，穩(wěn)定疾??；PD，進行性疾病。縮寫：CR：完全緩解；PR：部分緩解在一種實施方式中，淋巴瘤的終點為臨床益處的證據。臨床益處可以反應生活質量的改善，或患者癥狀、輸注需求、頻繁感染或其他參數減少。到淋巴瘤相關癥狀的再現或進展的時間可以用于該終點中。在某些實施方式中，CLL的治療可以通過CLL的國際研討會指南(參見HallekM,ChesonBD,CatovskyD,等人Guidelinesforthediagnosisandtreatmentofchroniclymphocyticleukemia:areportfromtheInternationalWorkshoponChronicLymphocyticLeukemiaupdatingtheNationalCancerInstitute-WorkingGroup1996guidelines.Blood,2008；(111)12:5446-5456)，使用其中顯示的反應及終點定義來評估，具體為：A組標準限定腫瘤負荷；B組標準限定造血系統(tǒng)(或骨髓)的功能。CR(完全緩解)：必須滿足所有標準，并且患者必須缺少疾病相關的體質癥狀s；PR(部分緩解)：必須滿足A組的至少兩個標準加上B組的一個標準；SD是無進行性疾病(PD)并不能實現至少一種PR；PD：必須滿足以上A組或B組的標準中的至少一個。多個淋巴結的乘積之和(通過臨床試驗中的CT掃描或通過全科診療中的體格檢查來評價)。這些參數對于一些反應類別是不相關的。在某些實施方式中，多發(fā)性骨髓瘤的治療可以通過多發(fā)性骨髓瘤的國際統(tǒng)一反應標準(IURC)(參見DurieBGM,HarousseauJ-L,MiguelJS等人.Internationaluniformresponsecriteriaformultiple骨髓瘤.Leukemia,2006；(10)10:1-7)，使用以下所示的反應和終點定義來評估：縮寫：CR，完全反應；FLC，游離輕鏈；PR，部分反應；SD，穩(wěn)定疾病；sCR，嚴格完全反應；VGPR，非常好的部分反應；a所有反應類別均需要在建立任何新治療之前的任何時間進行的兩個連續(xù)評估；如果進行了射線照相研究，所有類別也需要無已知的進行性或新的骨病變跡象。不需要以射線照相研究來滿足這些反應要求；b不需要用重復骨髓活檢來證實；c克隆細胞的存在/不存在基于κ/λ比。通過免疫組織化學和/或免疫熒光得到的異常κ/λ比需要最少100個漿細胞用于分析。反映異?？寺〉拇嬖诘漠惓１壤秊棣?λ>4:1或<1:2。d可測量的疾病由以下測量中的至少一種定義：骨髓漿細胞≥30％；血清M-蛋白≥1g/dl(≥10gm/l)[10g/l]；尿液M-蛋白≥200mg/24h；血清FLC分析：涉及的FLC水平≥10mg/dl(≥100mg/l)；條件是血清FLC比異常。在某些實施方式中，癌癥的治療可以通過實體瘤反應評價標準(RECIST1.1)來評估(參見ThereasseP.等人.NewGuidelinestoEvaluatetheResponsetoTreatmentinSolidTumors.J.oftheNationalCancerInstitute；2000；(92)205-216和EisenhauerE.A.,TherasseP.,BogaertsJ.等人.Newresponseevaluationcriteriainsolidtumours:RevisedRECISTguideline(版本1.1).EuropeanJ.Cancer；2009；(45)228–247)。靶標和非靶標病變中的腫瘤反應與出現或不出現新病變的所有可能組合的總體反應如下：CR＝完全反應；PR＝部分反應；SD＝穩(wěn)定疾??；和PD＝進行性疾病。對于靶標病變的評價，完全反應(CR)是所有靶標病變消失；部分反應(PR)是以基線總最長直徑作為參照，靶標病變的最長直徑總和至少降低30％；進行性疾病(PD)是以從開始治療或出現一個或多個新病變以來所記錄的最小總最長直徑作為參照，靶標病變的最長直徑的總和至少增大20％；且穩(wěn)定疾病(SD)為以從開始治療以來所記錄的最小總最長直徑作為參照，既不足以降低至對部分反應合格，也不足以增大至對進行性疾病合格。對于非靶標病變的評價，完全反應(CR)是所有非靶標病變消失且腫瘤標志物水平正?；?；不完全反應/穩(wěn)定疾病(SD)是一個或多個非靶標病變持續(xù)和/或腫瘤標志物水平維持在正常限度以上；進行性疾病(PD)是出現一個或多個新病變和/或現有的非靶標病變明確進展。以下所述的程序、慣例和定義為實施神經腫瘤學反應評估(RANO)工作組關于高級膠質瘤的反應標準的建議提供指導(WenP.,Macdonald,DR.,Reardon,DA.等人.Updatedresponseassessmentcriteriaforhighgradegliomas:Responseassessmentinneuro-oncologyworkinggroup.JClinOncol2010；28:1963-1972)。針對時間點反應標準(TPR)的RANO標準的主要修改可以包括加入用于限定糖皮質激素劑量變化的操作慣例，并且個體的臨床惡化組分的去除集中于目標放射學評估上。基線MRI掃描并定義為在手術后休息期結束時、在重新開始化合物治療之前進行的評估?；€MRI用作用于評估完全反應(CR)和部分反應(PR)的參考。然而，在基線處或在隨后的評估中獲得的最小SPD(垂直直徑乘積的總和)將命名為最低點評估并用作用于測定進展的參考。在任何方案限定的MRI掃描的前5天，個體不接受糖皮質激素或接受穩(wěn)定劑量的糖皮質激素。穩(wěn)定劑量被定義為在MRI掃描之前連續(xù)5天的相同每日劑量。如果開具的糖皮質激素劑量在基線掃描前5天內變化，則需要糖皮質激素使用滿足上述標準的新的基線掃描。將使用以下定義。可測量的病變：可測量的病變是可以二維地測量的對比增強病變。測量由最大增強腫瘤直徑(也稱為最長直徑，LD)組成。最大垂直直徑在同一影象上測量。二維測量的十字線應交叉且將計算這些直徑的乘積。最小直徑：T1-加權影像，其中各部分為5mm，具有1mm空白。可測量的病變的最小LD設置為5mm×5mm。入選和/或命名為靶標病變可以需要更大的直徑。在基線后，變得比測量的最低要求更小或變得不再可經受二維測量的靶標病變將在5mm的缺省值下針對5mm以下的每個直徑記錄。消失的病變將記錄為0mm×0mm。多中心病變：被視為多中心(與連續(xù)相對)的病變?yōu)槠渲性趦蓚€(或多個)病變之間有正常介入腦組織的病變。對于具有離散的增強病灶的多中心病變，方法為分別測量滿足入選標準的每個增強病變。如果在兩個(或多個)病變之間沒有正常腦組織，則將其視為相同病變。不可測量的病變：不滿足如上定義的可測量的疾病的標準的所有病變，以及所有非增強和其他真正不可測量的病變將被視為不可測量的病變。不可測量的病變包括小于規(guī)定的最小直徑(即，小于5mm×5mm)的增強的病灶、非增強病變(例如，如在T1加權對比后、T2加權或流體衰減反轉恢復(FLAIR)影像上所見的)、出血性或顯著囊性或壞死性病變及軟腦膜腫瘤。出血性病變通常具有固有T1加權高信號，豈可曲解為增強腫瘤，且出于該原因，可以檢查對比前T1加權影像以排除基線或區(qū)間亞急性出血。在基線處，病變將如下分類：靶標病變：高達5個可測量的病變可以選作靶標病變，其各自測量為至少10mm×5mm，代表個體的疾病；非靶標病變：所有其他病變，包括所有不可測量的病變(包括質量效應和T2/FLAIR結果)和未選作靶標病變的任何可測量的病變。在基線處，靶標病變將如可測量的病變的定義中所述進行測量，并且測定所有靶標病變的SPD。所有其他病變的存在將進行證明。在所有治療后評價下，病變作為靶標和非靶標病變的基線分類將保持，并且病變將以隨時間推移一致的方式證明和描述(例如，以源文件和eCRF的相同順序記錄)。所有可測量的和不可測量的病變在研究的持續(xù)過程中必須使用與在基線處相同的技術評估(例如，個體應在相同的MRI掃描儀上或至少使用相同的磁強度成像)以降低解釋變化的困難。在每次評估時，將測量靶標病變并計算SPD。將分別定性評估非靶標病變并且將證明新病變(如果有的話)。在每次評價時，將針對靶標病變、非靶標病變和新病變測定時間點反應。即使僅評估病變的子集，也可以確定腫瘤進展。然而，除非觀察到進展，否則當評估所有病變時才可以測定目標狀態(tài)(穩(wěn)定疾病、PR或CR)。CR和PR的總體時間點反應的證實評估將在下一個定期評估中進行，但如果掃描具有<28天的間隔，則可以不進行確證。最佳反應與證實要求一起將來自該系列時間點。TTK(也稱為Mps1、hMps1或PYT)是具有磷酸化酪氨酸、絲氨酸和蘇氨酸的能力的雙特異性蛋白激酶。該蛋白質與細胞增殖相關，對于有絲分裂過程中在著絲粒處的染色體對齊是必要的，并且是中心體復制所必需的。已經發(fā)現它是用于在有絲分裂期間精確分離染色體的關鍵有絲分裂檢驗點蛋白。當這種蛋白質不能降解并產生過量的中心體，導致異常有絲分裂紡錘體時，可能發(fā)生腫瘤發(fā)生。供選擇的剪接導致多個轉錄物變體。[RefSeq,Nov2009]。TTK對于紡錘體檢驗點功能是必需的，并且其抑制通過有絲分裂加速細胞進展。TTK還在癌癥干細胞存活中起重要作用。CLK1是雙特異性蛋白激酶的CDC2-樣(或LAMMER)家族的成員。在細胞核中，編碼的蛋白參與前-mRNA加工的富絲氨酸/精氨酸(SR)的蛋白質磷酸化，將其釋放到核質中。前mRNA加工期間剪接位點的選擇可以通過剪接因子(包括富絲氨酸/精氨酸(SR)的蛋白質)的濃度和定位來調節(jié)。因此，編碼的蛋白質可以在控制剪接位點選擇中起間接作用。已經發(fā)現該基因的編碼不同同種型的多種轉錄物變體。[由RefSeq提供，2009年6月]CLK2是雙特異性蛋白激酶的CLK家族的成員。已經顯示CLK家族成員與剪接體復合物的富絲氨酸/精氨酸(SR)的蛋白相互作用并使其磷酸化，其是使SR蛋白能夠控制RNA剪接的調節(jié)機制的一部分。這種蛋白激酶參與幾種細胞過程的調節(jié)，并且可以充當細胞周期進程、凋亡和端粒長度調節(jié)之間的聯系[RefSeq，2008年7月]。CLK2的抑制改變蛋白同種型的表達，所述蛋白同種型中許多有助于致癌表型。CAMKK2屬于絲氨酸/蘇氨酸特異性蛋白激酶家族，并且屬于Ca++/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶亞家族。該蛋白通過磷酸化下游激酶CaMK1和CaMK4在鈣/鈣調蛋白依賴性(CaM)激酶級聯中起作用[RefSeq，2012年7月]。據報道，CAMKK2在腫瘤能量穩(wěn)態(tài)中起作用。吡咯并嘧啶化合物本文提供了具有下式(I)的化合物：及其可藥用鹽、互變異構體、立體異構體、對映異構體和同位素體，其中：R1為取代或未取代的C1-8烷基、取代或未取代的C3-8環(huán)烷基、或取代或未取代的非芳族雜環(huán)基；R2為取代或未取代的芳基或取代、或未取代的雜芳基；R3為取代或未取代的雜環(huán)基或取代或未取代的芳基，和L為NH或O；條件是當L為NH時，R3不為吡啶基。本文提供了具有下式(I)的化合物：及其可藥用鹽、互變異構體、立體異構體、對映異構體和同位素體，其中：R1為取代或未取代的C1-8烷基、取代或未取代的C3-8環(huán)烷基、或取代或未取代的非芳族雜環(huán)基；R2為取代或未取代的芳基或取代、或未取代的雜芳基；R3為取代或未取代的雜環(huán)基或取代或未取代的芳基，和L為NH或O；條件是當L為NH或當R2為吡唑基時，R3不為吡啶基；并且所述化合物不是N-甲基-N-[反式-3-[[5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-[(1-甲基-1H吡唑-4-基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基]環(huán)丁基]-2-丙烯酰胺；或N-甲基-N-[反式-3-[[5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-[(1-甲基-1H吡唑-4-基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基]環(huán)丁基]-2-丙烯酰胺。如本文所述的化合物不是選自以下的化合物：如本文所述，所述化合物不是在一種實施方式中，所述化合物不是N-甲基-N-[反式-3-[[5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-[(1-甲基-1H吡唑-4-基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基]環(huán)丁基]-2-丙烯酰胺(也稱為N-甲基-N-((1r,3r)-3-((5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氧基)環(huán)丁基)丙烯酰胺)或N-甲基-N-[反式-3-[[5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-[(1-甲基-1H吡唑-4-基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基]環(huán)丁基]-2-丙烯酰胺(也稱為N-甲基-N-((1r,3r)-3-((5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-((1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氧基)環(huán)丁基)丙烯酰胺)在又一種實施方式中，所述化合物不是在一種實施方式中，本文提供了式(I)的化合物，其中L為O。在式(I)的化合物的一些實施方式中，R1為取代或未取代的烷基，例如R1為取代或未取代的甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、叔戊基或2,2-二甲基丙基。在一些實施方式中，R1為取代或未取代的甲基、乙基、異丙基、仲丁基、叔丁基或2,2-二甲基丙基。在式(I)的一些實施方式中，其中R1為烷基，所述烷基被一個或多個-OR或-NR2取代，其中每個R獨立地為-H或取代或未取代的(C1-4)烷基。例如，R1為-CH2CH2OH、-CH2CH2OCH3或-CH2CH2NHCH3。在式(I)的化合物的其他實施方式中，R1為取代或未取代的C3-8環(huán)烷基，例如，R1為取代或未取代的環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基或環(huán)庚基。在一些這樣的實施方式中，環(huán)烷基被一個或多個以下基團取代：-CN、鹵素、-OR或取代或未取代的C1-3烷基，其中每個R獨立地為–H或取代或未取代的(C1-4)烷基。例如，在一些實施方式中，環(huán)烷基被一個或多個以下基團取代：-CN、-F、-OH或-CH3。在式(I)的化合物的一些其他實施方式中，R1為取代或未取代的非芳族雜環(huán)基，例如，R1為取代或未取代的氧雜環(huán)丁基、四氫呋喃基、四氫吡喃基或哌啶基。在式(I)的化合物的一些其他實施方式中，R1為取代或未取代的C1-8烷基，其中每個R’獨立地為-CN、鹵素、-OR或C1-3烷基；R”為-H或C1-3烷基；每個R獨立地為–H或取代或未取代的(C1-4)烷基；和n為0-2。在一些這樣的實施方式中，R1為取代或未取代的甲基、乙基、異丙基、仲丁基、叔丁基或2,2-二甲基丙基，并且R’為-CN、-F、-OH或-CH3；R”為-CH3；n為0、1或2；和q為0或1。本文還提供了式(I)的化合物，其中R2是取代的苯基。在一些這樣的實施方式中，R2是被一個或多個以下基團取代的苯基：取代或未取代的C1-6烷基、鹵素、-CN、-OR5、-C(＝O)NR52、-C(＝O)(取代或未取代的雜環(huán)基)、-C(＝O)(取代或未取代的烷基雜環(huán)基)、-NHC(＝O)R5、-SO2NR52或取代或未取代的雜芳基，其中每個R5獨立地為-H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的環(huán)烷基、取代或未取代的雜環(huán)基或取代或未取代的烷基雜環(huán)基。例如，R2為被一個或多個以下基團取代的苯基：-(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)NR2、-CF3、-Cl、-F、-CN、-OCH3、-OCF3、-C(＝O)NR2、-C(＝O)NR(取代或未取代的環(huán)烷基)、-C(＝O)NR(CH2)0-2CR2(CH2)0-2OR、-C(＝O)NR(CH2)0-2CR2(CH2)0-2NR2、-C(＝O)NR(CH2)0-2CR2(CH2)0-2C(＝O)NR2、-C(＝O)N(取代或未取代的環(huán)烷基)(CH2)0-2OR、-C(＝O)NR(CH2)0-3(取代或未取代的雜環(huán)基)、-C(＝O)(CH2)0-3(取代或未取代的雜環(huán)基)、-C(＝NR)NR2、-NRC(＝O)R、-SO2NR2、-SO2R或取代或未取代的雜環(huán)基，其中每個R獨立地為-H或取代或未取代的(C1-4)烷基。在一些這樣的實施方式中，每個R獨立地為-H或-CH3。在式(I)的化合物的一些實施方式中，R2為被一個或多個以下基團取代的苯基：-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2NH2、-CF3、-Cl、-F、-CN、-OCH3、-OCF3、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3、-C(＝O)N(CH3)2、-C(＝O)NC(CH3)3、-C(＝O)NHCH2CH2F、-C(＝O)NHCH2CHF2、-C(＝O)NHCH2CF3、-C(＝O)NHCH2CF2CH3、-C(＝O)NHCH2CN、-C(＝O)N(CH3)CH2CN、-C(＝O)NHCH2CH2CN、-C(＝O)N(CH3)CH2CH2CN、-C(＝O)NH-環(huán)丁基、-C(＝O)NH-(羥基-環(huán)丁基)、-C(＝O)NH-環(huán)戊基、-C(＝O)NH-(羥基-環(huán)戊基)、-C(＝O)NHCH2CH2OH、-C(＝O)NHCH2CH2OCH3、-C(＝O)N(CH3)CH2CH2OH、-C(＝O)N(CH3)CH2CH2OCH3、-C(＝O)NHCH2CH2CH2OH、-C(＝O)N(CH3)CH2CH2CH2OH、-C(＝O)N(CH3)CH2CH2CH2OCH3、-C(＝O)NHCH2CH(CH3)OH、-C(＝O)NHCH2C(CH3)2OH、-C(＝O)NHCH(CH3)CH2OH、-C(＝O)NHC(CH3)2CH2OH、-C(＝O)NHCH2CH2NH2、-C(＝O)NHCH2CH2NH(CH3)、-C(＝O)NHCH2CH2N(CH3)2、-C(＝O)NHCH2C(＝O)NH2、-C(＝O)N(CH3)CH2C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH2CH2C(＝O)NH2、-C(＝O)N(CH3)CH2CH2C(＝O)NH2、-C(＝O)N(環(huán)丙基)CH2CH2OH、-C(＝O)NH-氧雜環(huán)丁基、-C(＝O)N(CH3)-氧雜環(huán)丁基、-C(＝O)NH-(甲基-氧雜環(huán)丁基)、-C(＝O)NH-氮雜環(huán)丁烷基、-C(＝O)NH-(甲基氮雜環(huán)丁烷基)、-C(＝O)NH-(1-乙?；s環(huán)丁烷基)、-C(＝O)NH-吡咯烷基、-C(＝O)NH-哌啶基、-C(＝O)NH-四氫呋喃基、-C(＝O)N(CH3)-四氫呋喃基、-C(＝O)NH-四氫吡喃基、-C(＝O)N(CH3)-四氫吡喃基、-C(＝O)NHCH2-氧雜環(huán)丁基、-C(＝O)N(CH3)CH2-氧雜環(huán)丁基、-C(＝O)NHCH2-(甲基-氧雜環(huán)丁基)、-C(＝O)N(CH3)CH2-(甲基-氧雜環(huán)丁基)、-C(＝O)NHCH2-四氫呋喃基、-C(＝O)NHCH2-四氫吡喃基、-C(＝O)NHCH2-二噁烷基、-C(＝O)氮雜環(huán)丙烷基、-C(＝O)(甲基-氮雜環(huán)丙烷基)、-C(＝O)(二甲基-氮雜環(huán)丙烷基)、-C(＝O)(羥基甲基-氮雜環(huán)丙烷基)、-C(＝O)氮雜環(huán)丁烷基、-C(＝O)吡咯烷基、-C(＝O)(羥基-吡咯烷基)、-C(＝O)(羥基甲氧基吡咯烷基)、-C(＝O)(二甲氧基吡咯烷基)、-C(＝O)嗎啉基、-C(＝O)哌嗪基、-C(＝O)(甲基哌嗪基)、-C(＝O)(羥基-哌啶基)、-C(＝O)(氟哌啶基)、-(C＝O)(甲氧基-哌啶基)、-C(＝NH)NH2、-NHC(＝O)CH3、-SO2NHCH3、-SO2CH3或取代或未取代的吡唑基。在一些其他實施方式中，R2為被一個或多個以下基團取代的苯基：-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2NH2、-CF3、-Cl,-F、-CN、-OCH3、-OCF3、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3、-C(＝O)N(CH3)2、-C(＝O)NC(CH3)3、-C(＝O)NHCH2CH2F、-C(＝O)NHCH2CF2CH3、-C(＝O)N(CH3)CH2CN、-C(＝O)N(CH3)CH2CH2CN、-C(＝O)NH-(3-羥基-環(huán)丁基)、-C(＝O)NH-環(huán)戊基、-C(＝O)NH-(2-羥基環(huán)戊基)、-C(＝O)NHCH2CH2OH、-C(＝O)NHCH2CH2OCH3、-C(＝O)N(CH3)CH2CH2OH、-C(＝O)N(CH3)CH2CH2OCH3、-C(＝O)NHCH2CH2CH2OH、-C(＝O)N(CH3)CH2CH2CH2OH、-C(＝O)NHCH2CH(CH3)OH、-C(＝O)NHCH2C(CH3)2OH、-C(＝O)NHCH(CH3)CH2OH、-C(＝O)NHC(CH3)2CH2OH、-C(＝O)NHCH2CH2NH2、-C(＝O)NHCH2CH2NH(CH3)、-C(＝O)NHCH2CH2N(CH3)2、-C(＝O)N(CH3)CH2C(＝O)NH2、-C(＝O)N(CH3)CH2CH2C(＝O)NH2、-C(＝O)N(環(huán)丙基)CH2CH2OH、-C(＝O)NH-氧雜環(huán)丁基、-C(＝O)N(CH3)-氧雜環(huán)丁基、-C(＝O)NH-(3-甲基-氧雜環(huán)丁基)、-C(＝O)NH-(1-甲基氮雜環(huán)丁烷基)、-C(＝O)NH-(1-乙?；s環(huán)丁烷基)、-C(＝O)NH-哌啶基、-C(＝O)NH-四氫呋喃基、-C(＝O)NH-四氫吡喃基、-C(＝O)N(CH3)-四氫吡喃基、-C(＝O)NHCH2-氧雜環(huán)丁基、-C(＝O)N(CH3)CH2-(3-甲基-氧雜環(huán)丁基)、-C(＝O)NHCH2-四氫呋喃基、-C(＝O)NHCH2-四氫吡喃基、-C(＝O)NHCH2--二噁烷基、-C(＝O)氮雜環(huán)丙烷基、-C(＝O)(2-甲基-氮雜環(huán)丙烷基)、-C(＝O)(2,2-二甲基-氮雜環(huán)丙烷基)、-C(＝O)(2-(羥基甲基)氮雜環(huán)丙烷基)、-C(＝O)氮雜環(huán)丁烷基、-C(＝O)吡咯烷基、-C(＝O)(3-羥基-4-甲氧基吡咯烷基)、-C(＝O)(3,4-二甲氧基吡咯烷基)、-C(＝O)嗎啉基、-C(＝O)哌嗪基、-C(＝O)(4-甲基哌嗪基)、-C(＝O)(4-羥基-哌啶基)、-C(＝O)(4,4-二氟哌啶基)、-(C＝O)(4-甲氧基-哌啶基)、-C(＝NH)NH2、-NHC(＝O)CH3、-SO2NHCH3、-SO2CH3或取代或未取代的吡唑基。在式(I)的化合物的一些實施方式中，R2為取代或未取代的吡唑基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的吲唑基或取代或未取代的異吲哚啉酮。在一些這樣的實施方式中，R2被一個或多個以下基團取代：鹵素、取代或未取代的(C1-4)烷基、-OR、-C(＝O)NR2或取代或未取代的雜環(huán)基，其中每個R獨立地為-H或取代或未取代的(C1-4)烷基。例如，R2為被一個或多個以下基團取代的吡唑基：-Cl、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2OCH3、-CH2C(CH3)2OH或四氫吡喃基。供選擇地，R2為被一個或多個以下基團取代的吡啶基：-OCH3、C(＝O)NHCH3或四氫吡喃基。在其他實施方式中，R2為被一個或多個-CH3取代的吲唑基或異吲哚啉酮。在R2的一些這樣的實施方式中，R1為取代或未取代的C1-8烷基，其中每個R’獨立地為-OR或C1-3烷基；R”為-H或C1-3烷基；每個R獨立地為-H或取代或未取代的(C1-4)烷基；和n為0-2。在式(I)的化合物的其他的實施方式中，R3為取代或未取代的雜環(huán)基，例如，取代或未取代的吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑酮基、苯并噁二唑基、苯并咪唑基或喹啉基。在一些這樣的實施方式中，雜環(huán)基被一個或多個選自以下的取代基取代：取代或未取代的(C1-4)烷基、鹵素、-OR、-CN、-NR2、-C(＝O)NR2、-NRC(＝O)R或取代或未取代的三唑基，其中每個R獨立地為–H或取代或未取代的(C1-4)烷基。例如，雜環(huán)基被一個或多個選自以下的取代基取代：-CH3、-CH(CH3)2、-F、-Cl、-OH、-OCH3,-OCH2CH3、-CN、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-C(＝O)NH(CH3)、-NHC(＝O)CH3或取代或未取代的三唑基。在一些這樣的實施方式中，吡唑基被一個或多個-CH3或-Cl取代。在其他這樣的實施方式中，吡啶基被一個或多個以下基團取代：-CH3、-F、-Cl、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-CN、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-C(＝O)NH(CH3)或-NHC(＝O)CH3。在其他這樣的實施方式中，苯并噁唑基被一個或多個以下基團取代：-CH3、-CH(CH3)2、-F或-OCH2CH3。在式(I)的化合物的其他實施方式中，R3為取代或未取代的芳基、例如，R3為取代或未取代的苯基。在一些這樣的實施方式中，苯基被一個或多個選自以下的取代基取代：取代或未取代的C1-4烷基、鹵素、-CN、-OR、-NR2、-NRSO2R’、-NR(C＝O)NR2、-NR(C＝O)R’、-COOR、-(C＝O)NR2、-C(＝NH)NR2、-SO2R’或取代或未取代的雜芳基，其中每個R獨立地為–H或取代或未取代的(C1-4)烷基，并且R’為C1-3烷基。在又其他的實施方式中，苯基被一個或多個選自以下的取代基取代：-CH3、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-C(CH3)2OH、-CN、-F、-Cl、-OH、-OCH3、-NH2、-N(CH3)2、-NHSO2CH3、-NH(C＝O)NH2、-NH(C＝O)CH3、-COOCH3、-(C＝O)NHCH3、-C(＝N)NH2、-SO2CH3、取代或未取代的三唑基、取代或未取代的吡唑基或取代或未取代的咪唑基。在R3的一些這樣的實施方式中，R1為取代或未取代的C1-8烷基，其中每個R’獨立地為-OR或C1-3烷基；R”為-H或C1-3烷基；每個R獨立地為-H或取代或未取代的(C1-4)烷基；和n為0-2。在一些這樣的實施方式中，R2為被一個或多個以下基團取代的苯基：-(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)NR2、-CF3、-Cl、-F、-CN、-OCH3、-OCF3、-C(＝O)NR2、-C(＝O)NR(取代或未取代的環(huán)烷基)、-C(＝O)NR(CH2)0-2CR2(CH2)0-2OR、-C(＝O)NR(CH2)0-2CR2(CH2)0-2NR2、-C(＝O)NR(CH2)0-2CR2(CH2)0-2C(＝O)NR2、-C(＝O)N(取代或未取代的環(huán)烷基)(CH2)0-2OR、-C(＝O)NR(CH2)0-3(取代或未取代的雜環(huán)基)、-C(＝O)(CH2)0-3(取代或未取代的雜環(huán)基)、-C(＝NR)NR2、-NRC(＝O)R、-SO2NR2、-SO2R或取代或未取代的雜環(huán)基，其中每個R獨立地為–H或取代或未取代的(C1-4)烷基。本文提供的另外的實施方式包括上述的具體實施方式中的一個或多個的組合。在式(I)的化合物的一些實施方式中，所述化合物選自表A或其可藥用鹽、互變異構體、立體異構體、對映異構體或同位素體。在本文所述的分析中測試了表A中所述的吡咯并嘧啶化合物，并發(fā)現其作為癌癥治療劑具有活性，尤其是用于如本文所述的實體瘤和血液癌癥的治療。在一些實施方式中，實體瘤為膀胱癌(包括淺表性膀胱癌)、乳腺癌(包括管腔B型、ER+、PR+和Her2+乳腺癌)、中樞神經系統(tǒng)癌癥(包括多形性成膠質細胞瘤(GBM)、膠質瘤、成神經管細胞瘤和星形細胞瘤)、結腸直腸癌、胃腸癌(包括胃癌、食道癌和直腸癌)、內分泌癌(包括甲狀腺癌和腎上腺癌)、眼癌(包括視網膜母細胞瘤)、女性泌尿生殖器癌癥(包括胎盤癌、子宮癌、外陰癌、卵巢癌、宮頸癌)、頭頸癌(包括咽癌、食道癌和舌癌)、肝癌、肺癌(包括非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞肺癌(SCLC)、粘液表皮樣癌、支氣管癌、鱗狀細胞癌(SQCC)和間變性/NSCLC)、皮膚癌(包括黑色素瘤和SQCC)、軟組織癌(包括肉瘤、尤文氏肉瘤和橫紋肌肉瘤)、骨癌(包括肉瘤、尤文氏肉瘤和骨肉瘤)、鱗狀細胞癌(包括肺癌、食道癌、宮頸癌和頭頸癌)、胰腺癌、腎癌(包括腎維爾姆斯瘤和腎細胞癌)或前列腺癌。在一些實施方式中，實體瘤為乳腺癌、結腸癌、肺癌或膀胱癌。在一個這樣的實施方式中，實體瘤為淺表性膀胱癌。在另一個這樣的實施方式中，實體瘤為肺鱗狀細胞癌。在又一種實施方式中，實體瘤為管腔B型乳腺癌。在一些實施方式中，血液癌癥為白血病(包括急性淋巴細胞性白血病(ALL)、慢性髓性白血病(CML)、急性T細胞白血病、B細胞前體白血病、急性早幼粒細胞白血病(APML)、漿細胞白血病、髓單核母細胞/T-ALL、B髓單核細胞白血病、紅白血病和急性髓性白血病(AML))、淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、伯基特氏淋巴瘤(BL)、B細胞淋巴瘤、淋巴母細胞性淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤(FL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)和大細胞免疫母細胞性淋巴瘤)或多發(fā)性骨髓瘤。在一種實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是如本文所述的化合物，其中在10μM的濃度下的該化合物抑制癌細胞增殖，例如本文所述的實體瘤或血液癌癥細胞增殖至少約50％或更多。表A.用于制備吡咯并嘧啶化合物的方法本文所述的吡咯并嘧啶化合物可以使用常規(guī)有機合成和市售起始原料獲得。用于制備式(I)的化合物及其中間體的起始原料有市售或可以使用已知的合成方法和試劑由市售材料制備。用于制備式(I)的化合物的具體方法公開于2014年1月15日提交的第14/155,485號美國專利申請和2014年1月15日提交的第14/155,498號美國專利申請，將其各自的全部內容以引用方式并入本文。使用方法吡咯并嘧啶化合物可以用作治療、預防或改善動物或人的癌癥的藥物。因此，本文提供的吡咯并嘧啶化合物可以用于如本文提供的所有方法中。具體地，本文提供的吡咯并嘧啶化合物可以用于治療、預防或改善本文提供的所有疾病、障礙或病癥。因此，本文提供了吡咯并嘧啶化合物的用途，包括治療或預防以下所述的那些癌癥。本文提供的方法包括向有需要的受試者給予有效量的一種或多種吡咯并嘧啶化合物。在另一個方面中，本文提供了用于治療或預防癌癥的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的如本文所述的吡咯并嘧啶化合物。在一些實施方式中，癌癥為實體瘤或血液腫瘤。在一些實施方式中，所述癌癥不為三陰性乳腺癌(TNBC)。在一些實施方式中，所述實體瘤為膀胱癌(包括淺表性膀胱癌)、乳腺癌(包括管腔B型、ER+、PR+和Her2+乳腺癌)、中樞神經系統(tǒng)癌癥(包括多形性成膠質細胞瘤(GBM)、膠質瘤、成神經管細胞瘤和星形細胞瘤)、結腸直腸癌、胃腸癌(包括胃癌、食道癌和直腸癌)、內分泌癌(包括甲狀腺癌和腎上腺癌)、眼癌(包括視網膜母細胞瘤)、女性泌尿生殖器癌癥(包括胎盤癌、子宮癌、外陰癌、卵巢癌、宮頸癌)、頭頸癌(包括咽癌、食道癌和舌癌)、肝癌、肺癌(包括非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞肺癌(SCLC)、粘液表皮樣癌、支氣管癌、鱗狀細胞癌(SQCC)和間變性/NSCLC)、皮膚癌(包括黑色素瘤和SQCC)、軟組織癌(包括肉瘤、尤文氏肉瘤和橫紋肌肉瘤)、骨癌(包括肉瘤、尤文氏肉瘤和骨肉瘤)、鱗狀細胞癌(包括肺癌、食道癌、宮頸癌和頭頸癌)、胰腺癌、腎癌(包括腎維爾姆斯瘤和腎細胞癌)或前列腺癌。在一些實施方式中，所述實體瘤為乳腺癌、結腸癌、肺癌或膀胱癌。在一個這樣的實施方式中，所述實體瘤為淺表性膀胱癌。在另一個這樣的實施方式中，所述實體瘤為肺鱗狀細胞癌。在又一種實施方式中，所述實體瘤為管腔B型乳腺癌。在一些實施方式中，血液癌癥為白血病(包括急性淋巴細胞性白血病(ALL)、慢性髓性白血病(CML)、急性T細胞白血病、B細胞前體白血病、急性早幼粒細胞白血病(APML)、漿細胞白血病、髓單核母細胞/T-ALL、B髓單核細胞白血病、紅白血病和急性髓性白血病(AML))、淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、伯基特氏淋巴瘤(BL)、B細胞淋巴瘤、淋巴母細胞性淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤(FL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)和大細胞免疫母細胞性淋巴瘤)或多發(fā)性骨髓瘤。在一些實施方式中，本文提供了用于預防癌癥轉移的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的如本文所述的吡咯并嘧啶化合物。在一些實施方式中，癌癥是轉移性癌癥，尤其是轉移性實體瘤或轉移性血液癌癥，其中實體瘤和血液癌癥如本文所述。在其他實施方式中，本文提供了預防癌癥轉移的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的如本文所述的吡咯并嘧啶化合物。在又一個方面中，本文提供了消除受試者中的癌癥干細胞的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的如本文所述的吡咯并嘧啶化合物。在其他實施方式中，本文提供了在受試者中誘導癌癥干細胞分化的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的如本文所述的吡咯并嘧啶化合物。在其他實施方式中，本文提供了在受試者中誘導癌癥干細胞死亡的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的如本文所述的吡咯并嘧啶化合物。在一些這樣的實施方式中，所述癌癥為實體瘤，例如，CNS癌癥(例如GBM)或乳腺癌或血液癌癥，如白血病。在另一個方面中，本文提供了用于治療或預防癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤或血液腫瘤的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性，和任選地抑制CAMKK2激酶活性的化合物。在一些實施方式中，提供了用于治療或預防癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤或血液腫瘤的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性的化合物。在一些實施方式中，在細胞中抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性。在一些實施方式中，在體內抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性。在一些實施方式中，抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性的化合物是如本文所述的吡咯并嘧啶化合物。在另一個方面中，本文提供了用于治療或預防與涉及TTK、CLK1和CLK2和任選地CAMKK2及其突變體或同種型的途徑相關的癌癥的方法，包括向有需要的受試者給予有效量的抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性，以及任選地抑制CAMKK2激酶活性的化合物。在一些實施方式中，與TTK、CLK1和CLK2和任選地CAMKK2途徑相關的癌癥包括如本文所述的實體瘤或血液腫瘤。在一些實施方式中，在細胞中抑制TTK、CLK1和CLK2，以及任選地抑制CAMKK2途徑。在一些實施方式中，在體內抑制TTK、CLK1和CLK2，和任選地抑制CAMKK2途徑。在一些實施方式中，抑制TTK、CLK1和CLK2和任選地抑制CAMKK2途徑的化合物是如本文所述的吡咯并嘧啶化合物。在某些實施方式中，本文提供了用于測量患有癌癥，例如實體瘤或血液腫瘤的患者中的TTK、CLK1和CLK2激酶活性的抑制和任選地CAMKK2激酶活性的抑制的方法，包括給予所述患者有效量的吡咯并嘧啶化合物，測量在所述患者中的TTK、CLK1和CLK2激酶活性的量，并將TTK、CLK1和CLK2激酶活性的所述量與給予有效量的吡咯并嘧啶化合物之前的所述患者的量進行比較。在某些實施方式中，相對于在給予所述吡咯并嘧啶化合物之前獲得的生物樣品中的TTK、CLK1和CLK2激酶活性和任選地CAMKK2激酶活性的量，在給予所述吡咯并嘧啶化合物后獲得的所述生物樣品中的更低的TTK、CLK1和CLK2激酶活性和任選地CAMKK2激酶活性表明抑制。在一種實施方式中，使用基于放射性的激酶分析測量激酶活性，其測量放射性標記的磷酸部分(例如，33P標記的磷酸)摻入到底物，例如肽底物。放射性標記的磷酸摻入到底物的水平降低表明激酶活性的抑制。在另一種實施方式中，使用基于時間分辨熒光共振能量轉移(TR-FRET)的激酶分析測量激酶活性，其測量由于底物磷酸化，例如肽底物磷酸化的熒光損失(參見例如，InvitrogenZ’-Lyte分析)。熒光水平升高表明激酶活性的抑制。在另一種實施方式中，使用競爭性示蹤劑結合分析測量激酶活性(例如，InvitrogenEu結合分析))，其測量由于示蹤劑結合(例如，ATP位點結合)而產生的熒光。降低的熒光表明示蹤劑結合的位移，其表明激酶活性的抑制。在又一種實施方式中，使用細胞生物標志物分析測量激酶活性，其使用白質印跡、ELISA或Mesoscale測量底物，例如下游底物的磷酸化。降低的底物磷酸化表明激酶活性的抑制。在一些實施方式中，在患者的生物樣品，如循環(huán)血細胞或腫瘤或皮膚活檢中評估TTK、CLK1和CLK2激酶活性的抑制和任選地CAMKK2激酶活性的抑制。在這樣的實施方式中，通過比較在給予患者吡咯并嘧啶化合物之前和之后的磷酸化底物(例如，對于TTK：磷酸-TTK，如p-TTKT686或磷酸化borealin，BubR1，Chk2，c-Abl，p53，Mip1或TACC2；對于CLK2(磷酸-SRp75或磷酸化PP2A調節(jié)亞基B56β(PPP2R5B、B'β)或PGC-1α)的量評估激酶活性的抑制的量。在一些這樣的實施方式中，相對于在給予所述吡咯并嘧啶化合物之前獲得的所述生物樣品中的磷酸化TTK底物和磷酸化CLK2底物的量，在給予所述吡咯并嘧啶化合物之后獲得的所述生物樣品中的更少的磷酸化TTK底物和更少的磷酸化CLK2底物表明抑制。在一些這樣的實施方式中，相對于在給予所述吡咯并嘧啶化合物之前獲得的所述生物樣品中的磷酸-TTK(例如，p-TTKT686)和磷酸-SRp75的量，在給予所述吡咯并嘧啶化合物之后獲得的所述生物樣品中的更少的磷酸-TTK(例如，p-TTKT686)和磷酸-SRp75表明抑制。在某些實施方式中，本文提供了用于在患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤或血液腫瘤的患者中抑制TTK、CLK1和CLK2激酶活性，和任選地抑制CAMKK2激酶活性的方法，包括給予所述患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在一些實施方式中，所述方法另外包括將給予所述吡咯并嘧啶化合物之前和之后獲得的患者的生物樣品中的TTK、CLK1和CLK2激酶活性的量，和任選地CAMKK2活性的量進行比較，其中相對于在給予所述吡咯并嘧啶化合物之前獲得的所述生物樣品中的TTK、CLK1和CLK2激酶活性的量，和任選地CAMKK2激酶活性的量，在給予所述吡咯并嘧啶化合物之后獲得的所述生物樣品中的更少的TTK、CLK1和CLK2激酶活性，以及任選地CAMKK2激酶活性表明抑制。在一些實施方式中，所述方法另外包括將給予所述吡咯并嘧啶化合物之前和之后獲得的患者的生物樣品中的磷酸化底物(例如，對于TTK：磷酸-TTK，如p-TTKT686或磷酸化borealin，BubR1，Chk2，c-Abl，p53，Mip1或TACC2；對于CLK2(磷酸-SRp75或磷酸化PP2A調節(jié)亞基B56β(PPP2R5B、B'β)或PGC-1α)的量，其中相對于在給予所述吡咯并嘧啶化合物之前獲得的所述生物樣品中的磷酸化底物的量，在給予所述吡咯并嘧啶化合物之后獲得的所述生物樣品中的更少的磷酸化底物表明抑制。在其他實施方式中，所述方法另外包括將給予所述吡咯并嘧啶化合物之前和之后獲得的患者的生物樣品中的磷酸-TTK(例如，p-TTKT686)和磷酸-SRp75的量進行比較，其中相對于在給予所述吡咯并嘧啶化合物之前獲得的所述生物樣品中的磷酸-TTK(例如，p-TTKT686)和磷酸-SRp75的量，在給予所述吡咯并嘧啶化合物之后獲得的所述生物樣品中的更少的磷酸-TTK(例如，p-TTKT686)和磷酸-SRp75表明抑制。在一些實施方式中，以不大于約20nM的IC50抑制TTK激酶活性。在另一種實施方式中，以約0.01nM至約20nM的IC50抑制TTK激酶活性。在其他實施方式中，以約0.01nM至約100nM的IC50抑制TTK激酶活性。在再其他實施方式中，以約0.01nM至約200nM的IC50抑制TTK激酶活性。在再其他實施方式中，以約0.1nM至約500nM的IC50抑制TTK激酶活性。在一些實施方式中，以不大于約300nM的IC50抑制CLK1激酶活性。在一些實施方式中，以約1nM至約100nM的IC50抑制CLK1激酶活性。在其他實施方式中，以約1nM至約500nM的IC50抑制CLK1激酶活性。在再其他實施方式中，以約1nM至約1000nM的IC50抑制CLK1激酶活性。在一些實施方式中，以不大于約10nM的IC50抑制CLK2激酶活性。在另一種實施方式中，以約0.01nM至約20nM的IC50抑制CLK2激酶活性。在其他實施方式中，以約0.01nM至約100nM的IC50抑制CLK2激酶活性。在又其他實施方式中，以約0.01nM至約200nM的IC50抑制CLK2激酶活性。在再其他實施方式中，以約0.1nM至約500nM的IC50抑制CLK2激酶活性。在一些實施方式中，以不大于約1000nM的IC50抑制CAMKK2激酶活性。在另一種實施方式中，以約1nM至約500nM的IC50抑制CAMKK2激酶活性。在其他實施方式中，以約1nM至約1000nM的IC50抑制CAMKK2激酶活性。在又其他實施方式中，以約1nM至約2000nM的IC50抑制CAMKK2激酶活性。在再其他實施方式中，以約1nM至約5000nM的IC50抑制CAMKK2激酶活性。在一種實施方式中，本文提供了用于在患者中實現完全反應、部分反應或穩(wěn)定疾病的實體瘤反應評價標準(例如，RECIST1.1)的方法，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，本文提供了提高無進展生存率的方法，如Kaplan-Meier估計值確定的。在一種實施方式中，本文提供了用于預防或延遲患者的進行性疾病的實體瘤反應評價標準(例如，RECIST1.1)的方法，包括給予患有如本文所述的實體瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在一種實施方式中，進行性疾病的預防或延遲的特征為靶病變的的總體尺寸與治療前相比改變，例如-30％至+20％，或通過靶病變的的總體尺寸與治療前相比改變，例如-30％至+20％來實現。在另一種實施方式中，靶病變的尺寸改變?yōu)榭傮w尺寸與治療前相比降低大于30％，例如，靶病變尺寸降低大于50％。在另一種實施方式中，預防的特征為非靶病變的進展與治療前相比尺寸降低或進展延遲或由此實現。在一種實施方式中，預防通過靶病變的數量與治療前相比降低來實現或以此為特征。在另一種實施方式中，預防通過非靶病變的數量或質量與治療前相比降低來實現或以此為特征。在一種實施方式中，預防通過靶病變與治療前相比缺少或消失來實現或以此為特征。在另一種實施方式中，預防通過非靶病變與治療前相比缺少或消失來實現或以此為特征。在另一種實施方式中，預防通過與治療前相比預防新病變來實現或以此為特征。在又一種實施方式中，預防通過與治療前相比預防疾病進展的臨床癥狀或癥狀(如癌癥相關的惡病質或疼痛增加)來實現或以此為特征。在某些實施方式中，本文提供了用于降低與治療前相比患者的靶病變的尺寸的方法，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在某些實施方式中，本文提供了用于降低與治療前相比患者的非靶病變的尺寸的方法，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在某些實施方式中，本文提供了用于實現與治療前相比患者的靶病變的數量降低的方法，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在某些實施方式中，本文提供了用于實現與治療前相比患者的非靶病變的數量降低的方法，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在某些實施方式中，本文提供了用于實現患者的所有靶病變均不存在的方法，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在某些實施方式中，本文提供了用于實現患者的所有非靶病變均不存在的方法，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在某些實施方式中，本文提供了用于治療癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的方法，所述方法包括給予患有癌癥，尤其是實體瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物，其中所述治療產生通過實體瘤反應評價標準(例如，RECIST1.1)確定的完全反應、部分反應或穩(wěn)定疾病。在某些實施方式中，本文提供了用于治療癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的方法，所述方法包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物，其中所述治療與治療前相比導致靶病變尺寸降低、非靶病變尺寸降低和/或新的靶和/或非靶病變不存在。在某些實施方式中，本文提供了用于治療癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的方法，所述方法包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物，其中所述治療導致臨床進展的阻止或延遲，如癌癥相關的惡病質或疼痛增加的阻止或延遲。在另一種實施方式中，本文提供了用于誘導患者的以NHL的國際研討會標準(IWC)表征的治療反應的方法(參見ChesonBD,PfistnerB,Juweid,ME等人.RevisedResponseCriteriaforMalignantLymphoma.J.Clin.Oncol:2007:(25)579-586)，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的血液癌癥如淋巴瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，本文提供了用于在患者中實現由NHL的國際研討會標準(IWC)確定的完全消退、部分消退或穩(wěn)定疾病的的方法，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的血液癌癥如淋巴瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，本文提供了用于實現患者的由NHL的國際研討會標準(IWC)確定的總生存率、無進展生存率、無事件生存率、到進展的時間、無疾病生存率或無淋巴瘤生存率的提高的方法，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的血液癌癥如淋巴瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，本文提供了用于誘導患者的由多發(fā)性骨髓瘤的國際統(tǒng)一反應標準(IURC)評估的治療反應的方法(參見DurieBGM,HarousseauJ-L,MiguelJS等人.Internationaluniformresponsecriteriaformultiplemyeloma.Leukemia,2006；(10)10:1-7)包括給予患有癌癥，尤其是多發(fā)性骨髓瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，本文提供了用于實現患者的由多發(fā)性骨髓瘤的國際統(tǒng)一反應標準(IURC)確定的嚴格完全反應、完全反應或非常好的部分反應的方法，包括給予患有癌癥，尤其是多發(fā)性骨髓瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，本文提供了用于實現患者的總生存率、無進展生存率、無事件生存率、到進展的時間或無疾病生存率提高的方法，包括給予患有癌癥，尤其是多發(fā)性骨髓瘤的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，本文提供了用于誘導患者的由GBM的神經腫瘤反應評估(RANO)工作組評估的治療反應的方法(參見WenP.,Macdonald,DR.,Reardon,DA.等人.Updatedresponseassessmentcriteriaforhighgradegliomas:Responseassessmentinneuro-oncologyworkinggroup.J.Clin.Oncol.2010；28:1963-1972)，包括給予患有癌癥，尤其是多形性成膠質細胞瘤(GBM)的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在一種實施方式中，RANO將用于建立相對于GBM類型中的功效可評價的受試者從第1天起6個月無進展的受試者的比例。在另一種實施方式中，本文提供了用于改善患者的東部合作腫瘤組體能狀態(tài)(ECOG)的方法，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤或血液癌癥的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，本文提供了用于誘導患者的由正電子發(fā)射斷層攝影術(PET)結果評估的治療反應的方法，包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤或血液癌癥的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物。在某些實施方式中，本文提供了用于治療癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤或血液癌癥的方法，所述方法包括給予患有癌癥，尤其是如本文所述的實體瘤或血液癌癥的患者有效量的吡咯并嘧啶化合物，其中所述治療導致例如通過PET成像測量的腫瘤代謝活性的降低。在本文所述的方法的一些實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是如本文所述的化合物。在一種實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是式(I)的化合物。在另一種實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是來自表A的化合物。在一種實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是本文所述的具有分子式C26H24N6O4的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是本文所述的具有分子式C26H26N6O4的吡咯并嘧啶化合物。在再一種實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是本文所述的具有分子式C26H27N5O4的吡咯并嘧啶化合物。在再一種實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是本文所述的具有分子式C28H28N6O4的吡咯并嘧啶化合物。在又一種實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是本文所述的具有分子式C28H30N6O4的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是本文所述的具有分子式C29H30N6O5的吡咯并嘧啶化合物。在一種實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是4-((4-(環(huán)戊基氧基)-5-(4-羥基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物3)。在另一種實施方式中，吡咯并嘧啶化合物是4-((4-環(huán)丙氧基-5-(2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物152)。在再一種實施方式中，吡咯并嘧啶是4-((4-異丙氧基-5-(2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物125)。在又一種實施方式中，吡咯并嘧啶是4-((4-(環(huán)戊基氧基)-5-(2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物38)。在另一種實施方式中，吡咯并嘧啶是4-((4-(環(huán)戊基氧基)-5-(4-(甲基氨基甲?；?苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物79)。在又一種實施方式中，吡咯并嘧啶是4-((4-(環(huán)戊基氧基)-5-(2-甲基苯并[d]噁唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-N-(2-羥基乙基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物101)。本文另外提供了用于治療之前已接受癌癥治療，尤其是如本文所述的實體瘤或血液癌癥治療的患者以及之前未經治療的患者的方法。由于患有癌癥的患者具有異質的臨床表現和不同的臨床結果，因此給予患者的治療可以根據他/她的預后而變化。熟練的臨床醫(yī)生將能夠容易地在沒有過度實驗的情況下確定能夠用于治療患有癌癥的個別患者的具體的第二藥劑、手術類型和基于非藥物標準的治療。藥物組合物和給予途徑吡咯并嘧啶化合物可以可以以常規(guī)制劑形式腸胃外給予受試者，所述常規(guī)制劑形式如注射劑、混懸劑、溶液劑和乳劑?？梢杂糜谔峁┻量┎⑧奏せ衔锏撵o脈內制劑的適合的溶媒是本領域技術人員熟知的。實例包括但不限于：注射用水USP；水性溶媒，例如但不限于氯化鈉注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化鈉注射液和乳酸林格氏注射液；水混溶性溶媒，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和非水性溶媒，例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯和苯甲酸芐酯。靜脈內制劑可以通過用這樣的合適的液體溶媒重新配制吡咯并嘧啶化合物來制備。可以通過用適當體積的液體溶媒重新配制適量的吡咯并嘧啶化合物來獲得靜脈內制劑的期望濃度。靜脈內制劑的期望濃度向需要該靜脈內制劑的患者提供治療有效量的吡咯并嘧啶化合物，并在患者中維持吡咯并嘧啶化合物的治療有效水平。治療有效的劑量將取決于靜脈內制劑遞送給患者的速率和靜脈內制劑的濃度。藥物組合物中吡咯并嘧啶化合物的有效量可以在將實現期望效果的水平下；例如，在用于胃腸外給予的單位劑量中為約0.005mg/kg受試者體重至約100mg/kg受試者體重。待給予受試者的吡咯并嘧啶化合物的劑量相當廣泛地可變并且可以依照衛(wèi)生保健從業(yè)者判斷。一般地，吡咯并嘧啶化合物可以約0.005mg/kg受試者體重至約10mg/kg受試者體重的劑量一周一至七次、每兩周一次、每三周一次或每四周一次給予患者，但是以上劑量可以根據受試者的年齡、體重和醫(yī)學病癥和給予類型而適當變化。在一種實施方式中，劑量為約0.01mg/kg受試者體重至約5mg/kg受試者體重、約0.05mg/kg患者體重至約1mg/kg受試者體重、約0.1mg/kg受試者體重至約0.75mg/kg受試者體重或約0.25mg/kg受試者體重至約0.5mg/kg受試者體重。在一種實施方式中，每周給予一個劑量。在其他實施方式中，一個劑量每周給予兩次、三次或四次。在又其他實施方式中，一個劑量每兩周、每三周或每四周給予。在任何給定的情況下，給予的吡咯并嘧啶化合物的量將取決于諸如活性組分的溶解度、使用的制劑和給予途徑等因素。在另一種實施方式中，本文提供了用于治療或預防疾病或障礙的方法，包括向有需要的受試者給予約0.375mg/劑量至約750mg/劑量、約0.75mg/劑量至約375mg/劑量、約3.75mg/劑量至約75mg/劑量、約7.5mg/劑量至約55mg/劑量或約18mg/劑量至約37mg/劑量的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，本文提供了用于治療或預防疾病或障礙的方法，包括向有需要的受試者給予約1mg/劑量至約1200mg/劑量、約10mg/劑量至約1200mg/劑量、約100mg/劑量至約1200mg/劑量、約400mg/劑量至約1200mg/劑量、約600mg/劑量至約1200mg/劑量、約400mg/劑量至約800mg/劑量或約600mg/劑量至約800mg/劑量的吡咯并嘧啶化合物。在一個具體的實施方式中，本文公開的方法包括向有需要的受試者給予400mg/劑量、600mg/劑量或800mg/劑量的吡咯并嘧啶化合物。在另一種實施方式中，本文提供了單位劑量制劑，其包含約1mg至200mg、約35mg至約1400mg、約125mg至約1000mg、約250mg至約1000mg或約500mg至約1000mg的吡咯并嘧啶化合物。在一個具體的實施方式中，本文提供了包含約100mg或400mg的吡咯并嘧啶化合物的單位劑量制劑。在另一種實施方式中，本文提供了單位劑量制劑，其包含1mg、5mg、10mg、15mg、20mg、30mg、35mg、50mg、70mg、100mg、125mg、140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、350mg、500mg、560mg、700mg、750mg、1000mg或1400mg的吡咯并嘧啶化合物。吡咯并嘧啶化合物可以每天給予一次、兩次、三次、四次或更多次。在一種具體的實施方式中，600mg或更低的劑量作為每日一次的劑量給予，并且多于600mg的劑量以等于總日劑量的一半的量每天給予兩次。在另一種實施方式中，本文提供了包含有效量的吡咯并嘧啶化合物和藥學上可接受的載體或溶媒的組合物，其中藥學上可接受的載體或溶媒可以包括賦形劑、稀釋劑或其混合物。在一種實施方式中，組合物為藥物組合物。組合物可以是溶液、腸胃外溶液和混懸劑等的形式。組合物可以經配制而在劑量單位中含有單次劑量或單次劑量的適宜部分，所述劑量單位可以是單個小瓶或膠囊或適宜體積的液體。在一種實施方式中，溶液由水溶性鹽如鹽酸鹽來制備。一般地，所有組合物均根據藥物化學中的已知方法制備。吡咯并嘧啶化合物的作用可以通過適當的制劑而延遲或延長。腸胃外制劑也可以通過將吡咯并嘧啶化合物溶解或懸浮在允許其緩慢分散于血清中的油性或乳化的溶媒中制備成長效的。實施例以下實施例是通過說明而不是限制的方式提供的。酶分析CLK1激酶分析.使用基于熒光共振能量轉移的激酶分析試劑盒-Ser/Thr09(Invitrogen,Carlsbad,CA,目錄號PV3324)測定CLK1激酶活性抑制的IC50值。以每孔10μl的反應體積在384孔板中進行反應，每孔包含CLK1酶(16.2-128ng)，25μM三磷酸腺苷(ATP)，50mM4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)中的2μMSer/Thr9肽底物，pH7.5，0.01％Brij-35，10mM氯化鎂(MgCl2)，具有連續(xù)3倍稀釋的測試化合物的1mM乙二醇四乙酸(EGTA)緩沖液。孵育1小時后，加入5μL顯影劑A(1:256稀釋)，并且計算熒光比。使用來自IDBS的XLfit將劑量-反應曲線擬合成S形劑量-反應模型。IC50值測定為導致50％的剩余酶活性的化合物的濃度。在表B和表C中示出了某些吡咯并嘧啶化合物的結果。CLK2激酶分析.使用基于熒光共振能量轉移的激酶分析試劑盒-Ser/Thr6肽(Invitrogen,Carlsbad,CA,目錄號PV3179)測定CLK2激酶活性抑制的IC50值。以每孔10μl的反應體積在384孔板中進行反應，每孔包含CLK2酶(0.97-11.5ng)，25μMATP，50mMHEPES中的2μMSer/Thr6肽底物，pH7.5，0.01％Brij-35，10mMMgCl2，具有連續(xù)3倍稀釋的測試化合物的1mMEGTA緩沖液。孵育1小時后，加入5μL顯影劑A(1:2048稀釋)，并且計算熒光比。使用來自IDBS的XLfit將劑量-反應曲線擬合成S形劑量-反應模型。IC50值測定為導致50％的剩余酶活性的化合物的濃度。在表B和表C中示出了某些吡咯并嘧啶化合物的結果。TTK激酶分析.使用Eu激酶結合分析(Invitrogen,Carlsbad,CA目錄號)測定TTK激酶活性抑制的IC50值。以每孔16μl的反應體積在384孔板中進行反應，每孔包含5nMTTK酶、30nM示蹤劑236(InvitrogenPV5592)和在50mMHEPESpH7.5中的2nMEu-抗-GST抗體，0.01％BRIJ-35，10mMMgCl2，具有連續(xù)3倍稀釋的測試化合物的1mMEGTA緩沖液。反應在室溫下孵育1小時，然后在熒光讀板器上讀板(激發(fā)340nM，激酶示蹤劑236發(fā)射：665nM，LanthaScreenTMEu-抗-標簽抗體：發(fā)射615nM)。TR-FRET比計算為受體信號強度(665nM)除以供體信號強度(615nM)。使用來自IDBS的XLfit將劑量-反應曲線擬合成S形劑量-反應模型。IC50值測定為導致50％的置換的示蹤劑236(ATP競爭性抑制劑)的化合物的濃度。在表B和表C中示出了某些吡咯并嘧啶化合物的結果。CAMKK2激酶分析.使用Eu激酶結合分析(Invitrogen,Carlsbad,CA)測定CAMKK2激酶活性抑制的IC50值。以每孔16μl的反應體積在384孔板中進行反應，每孔包含5nMCAMKK2酶、10nM激酶示蹤劑236和在50mMHEPESpH7.5中的2nMEu-抗-GST抗體，0.01％BRIJ-35，10mMMgCl2，具有連續(xù)3倍稀釋的測試化合物的1mMEGTA緩沖液。反應在室溫下孵育1小時，然后在熒光讀板器上讀板(激發(fā)340nM，激酶示蹤劑236發(fā)射：665nM，LanthaScreenTMEu-抗-標簽抗體：發(fā)射615nM)。TR-FRET比計算為受體信號強度(665nM)除以供體信號強度(615nM)。使用來自IDBS的XLfit將劑量-反應曲線擬合成S形劑量-反應模型。IC50值測定為導致50％的置換的示蹤劑236(ATP競爭性抑制劑)的化合物的濃度。供選擇的CAMKK2激酶分析.將CAMKK2酶與以下混合：在反應緩沖液中的1μMCa2+-鈣調蛋白和10μM髓鞘堿性蛋白(MBP)底物；20mM4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)，10mM氯化鎂(MgCl2)，1mM乙二醇四乙酸(EGTA)，0.02％Brij35，0.02mg/ml牛血清白蛋白(BSA)，0.1mM原釩酸鈉，2mM二硫蘇糖醇(DTT)，1％二甲基亞砜(DMSO)，pH7.5。將化合物遞送到反應中，20分鐘后加入ATP(Sigma)和33PATP(PerkinElmer)的混合物至10μM的終濃度。在25℃下進行反應120分鐘，接著將反應點樣到P81離子交換濾紙(Whatman)上。通過在0.75％磷酸中大量洗滌去除未結合的磷酸。在扣除源自包含無活性的酶的對照反應的背景后，將激酶活性數據表示為與DMSO溶媒反應相比的測試樣品中的剩余的激酶活性百分比。使用Prism(GraphPadSoftware)獲得IC50值和曲線擬合。在表C中示出了某些吡咯并嘧啶化合物的結果。表B.吡咯并嘧啶化合物對TTK、CLK1和CLK2激酶活性的抑制(3μM下的抑制％)表C.吡咯并嘧啶化合物對TTK、CLK1、CLK2和CAMKK2激酶活性的抑制結論.表B和表C示出了如本文所述的吡咯并嘧啶化合物抑制TTK、CLK1和CLK2的激酶活性。在一些實施方式中，吡咯并嘧啶化合物還抑制CAMKK2的激酶活性。細胞分析乳腺癌細胞系生長抑制.表1中示出了用于研究的49個乳腺癌細胞系。管腔和基底亞型分類基于內部驗證的公共信息。每個細胞系的雌激素受體(ER)、孕酮受體(PR)和人表皮生長因子受體2(HER2)狀態(tài)基于內部驗證的公共信息。表1：乳腺癌細胞系ATCC＝美國典型培養(yǎng)物保藏中心；DMEM＝改良杜氏伊格爾培養(yǎng)基；DSMZ＝德國微生物菌種保藏中心(DeutscheSammlungvon.MikroorganismenundZellkulturen)；ER＝雌激素受體；FBS＝胎牛血清；HER2＝人表皮生長因子受體2；NCI＝美國國家癌癥研究所；PR＝孕酮受體；TN＝三陰性乳腺癌：ER-、PR-和HER2-。實驗程序.在表1所示的培養(yǎng)基中維持和測試所有乳腺癌細胞系。優(yōu)化每個細胞系的接種密度以確保384孔板中的測定線性。將濃度遞增的化合物通過聲學分配器(EDCATS-100)點樣到空的384孔板中。將化合物以10點連續(xù)稀釋方式(3倍稀釋)在平板內一式兩份點樣。對于0.1％二甲基亞砜(DMSO)的最終分析濃度，將二甲基亞砜(DMSO)濃度保持恒定。將板復制用于不同的細胞系和測試期。化合物板復制后，將所有板密封(AgilentThermoLoc)，并在-20℃下儲存長達1個月。當準備好測試時，將板從冷凍器中取出，解凍，并在加入測試細胞之前開封。在測試之前，使細胞在培養(yǎng)瓶中生長和擴增，以提供足量的起始材料。然后將細胞稀釋至其期望的密度，并直接加入到化合物點樣的384孔板中。使細胞在37℃/5％CO2下生長96小時。在設置時(t0)，通過活力分析(CellTiter-Glo)評估初始細胞數，并讀取發(fā)光。96小時后，通過CellTiter-Glo評估化合物處理的細胞的活力，并讀取發(fā)光。在至少兩次獨立測試中分析吡咯并嘧啶化合物對細胞系的生長抑制。為了確保在整個分析期間相當的化合物反應以完成所有49個細胞系，在每個分析中包括對照細胞系(A549)。將所有數據歸一化并表示為DMSO處理的對照細胞的百分比。然后將結果表示為IC50(表2)。此外，計算GI50(表3)。R軟件(RDevelopmentCoreTeam,2009)實現所有統(tǒng)計分析。抑制濃度和生長抑制的測定(IC50和GI50).IC50是當Y＝50％的DMSO對照時的化合物濃度。GI50是當Y＝(YMax+Yt0)/2時的化合物濃度。使用ActivityBaseXE(IDBS)處理并評價所有生長抑制曲線。表2.生長抑制IC50(μM)表3.生長抑制GI50(μM)n/a：不適用結論.從表2和3可以看出，吡咯并嘧啶化合物抑制乳腺癌細胞系生長，如通過IC50和GI50所測量的。細胞增殖抑制顯示在TNBC，以及ER+/PR+和Her2+中達到不同程度。非小細胞肺癌細胞系生長抑制.十六個非小細胞肺癌(NSCLC)細胞系購自美國組織培養(yǎng)物保藏所(AmericanTissueCultureCollection)并保持在由90％RPMI1640(Invitrogen)和10％胎牛血清(Hyclone)組成的生長培養(yǎng)基中。所有細胞在37℃下在95％空氣和5％CO2中培養(yǎng)。將細胞以對于每個細胞系最佳的密度(參見表5)接種到96孔板中的每個孔的100μL生長培養(yǎng)基中。培養(yǎng)過夜后，將化合物儲備溶液(30mM)在DMSO中連續(xù)稀釋，進一步在生長培養(yǎng)基中稀釋，并作為10x濃縮溶液以11μL的體積添加到每孔中，混合，并允許與細胞一起孵育。在所有孔中將化合物溶媒(DMSO)保持在0.2％的終濃度。72小時后，將100μL的CellTiterGlo溶液(Promega)添加到96孔板中的每個孔中。將板置于振蕩器上2分鐘。孵育10分鐘后，使用Envision酶標儀(PerkinElmer)檢測發(fā)光信號。將IC50值計算為發(fā)光信號的水平降低至信號窗口的50％的化合物濃度。表4顯示了化合物3的結果。在該分析中，化合物顯示或將顯示0.01-30μM的IC50值。表4.生長抑制IC50值和生長條件細胞系接種密度平均IC50(μM)SDH1734160000.910.59H18381200016.1119.65H2228200001.580.41H441160002.100.32H1437120000.390.33Hop6228000.05N/AH165080000.620.02HOP9260001.270.62H520320001.450.18H129928000.360.34H22911600016.2919.39H156360001.770.09SK-LU-150000.830.10SW157350000.960.23A54925000.050.04H46015000.040.01結論.吡咯并嘧啶化合物顯示出對描述的一組小細胞肺癌細胞(NSCLC)系強力的生長抑制，如表4所示。大部分NSCLC細胞系(16個中的14個)對吡咯并嘧啶化合物(例如化合物3)的生長抑制敏感，IC50值≤2μM。多重細胞毒性分析.細胞在37℃下在5％CO2的潮濕氣氛中在RPMI1640，10％FBS，2mML-丙氨酰-L-谷氨酰胺，1mM丙酮酸鈉或特殊培養(yǎng)基中生長。將細胞接種到384孔板中并在37℃在5％CO2的潮濕氣氛中孵育。在細胞接種后24小時添加化合物。同時，生成時間零點未處理的細胞板。在72小時孵育期后，固定細胞并用熒光標記的抗體和核染料染色，以允許細胞核、凋亡細胞和有絲分裂細胞的可視化。使用抗活性胱天蛋白酶-3抗體檢測凋亡細胞。使用抗磷酸組蛋白-3抗體檢測有絲分裂細胞。將化合物連續(xù)稀釋3.16倍，并在來自10μM的最高測試濃度的0.1％DMSO的最終分析濃度下分析10個濃度。使用GEHealthcareINCellAnalyzer1000進行自動熒光顯微鏡檢查，并用4倍物鏡收集圖像。數據分析.使用InCellAnalyzer10003.2獲取12位tiff圖像，并用DeveloperToolbox1.6軟件分析。通過摻入的核染料的信號強度測量細胞增殖。化合物38的結果顯示在表6中。細胞增殖分析輸出稱為相對細胞計數。為了測定細胞增殖終點，使用下式將細胞增殖數據輸出轉化為對照的百分比(POC)：POC＝相對細胞計數(化合物孔)/相對細胞計數(溶媒)×100相對細胞計數IC50是相對于DMSO對照的最大可能反應的50％下的測試化合物濃度。GI50是將觀察到的生長減少一半所需的濃度。這是將生長抑制到未處理細胞中的生長和接種在孔中的細胞數之間的中間水平的濃度(時間零點值)。使用非線性回歸計算IC50值以將數據擬合到S形4點，4參數單位點劑量反應模型，其中：y(擬合)＝A+[(B–A)/(1+((C/x)^D))]。激活的胱天蛋白酶-3標記物標記從早期到晚期凋亡的細胞。輸出顯示為歸一化到每個孔中的相對細胞計數的在溶媒背景上方的凋亡細胞的倍數增加。引起半胱天冬酶-3信號(Cal_X5)中5倍誘導的測試化合物的濃度表明顯著的凋亡誘導。與DMSO對照相比，化合物對半胱天冬酶3的最大誘導報道為最大倍數變化(Max_Fold_Change)。表5.細胞系表6.細胞系篩選結果注：NaN：變量數據結論.如表6和圖1和2所示，吡咯并嘧啶化合物(以化合物38為范例)在多種癌癥中顯示抗增殖活性，包括實體瘤(圖1)，例如，膀胱癌、乳腺癌、CNS癌、結腸癌、內分泌癌、女性GU癌、頭頸癌、腎癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、皮膚癌、骨癌和軟組織癌，以及血液癌癥(圖2)，例如，淋巴瘤、白血病和多發(fā)性骨髓瘤。GBM癌癥干細胞活力分析.如前所述，建立了富集GBM-CSC腫瘤亞組分的限定的無血清培養(yǎng)基中的五種高級成膠質細胞瘤源性腫瘤培養(yǎng)物[MaoP等人.ProcNatAcadSci2013；110(21):8644-9]。進行臨床診斷和干細胞標志物分析。將癌癥干細胞(CSC)(8311、81611、32612、1912和52810)以800個細胞/孔的密度接種在384孔板中的20μL/孔體積的無血清生長培養(yǎng)基中。GBMCSC在計數和接種前通過研磨機械解離。作為正常細胞對照，將1200個HUVEC接種在384孔板的每孔20μL的內皮生長培養(yǎng)基微血管-2中。培養(yǎng)1天后，加入20μL/孔的每種細胞類型的相應的新鮮培養(yǎng)基，并且在5％CO2/37℃培養(yǎng)條件下用多種濃度的吡咯并嘧啶化合物或0.04μLDMSO處理細胞3天?；衔锾幚?天后，通過加入30μL的CellTiter-Glo(CTG)試劑裂解細胞以評價相對細胞密度。將板在室溫下放置30分鐘，之后監(jiān)測發(fā)光信號。結果.表7總結了所使用的每個GBMCSC模型的GBM亞型歸屬。在確定的無血清培養(yǎng)條件下通過CTG測試吡咯并嘧啶化合物對GBM-CSC生長的影響。在這五個模型中測定使細胞生長抑制50％的化合物的濃度(化合物38的數據總結在圖3中)。吡咯并嘧啶化合物(以化合物38為范例)證明了對間充質GBMCSC的效力，IC50在1-2μM的范圍內。該數據還表明，吡咯并嘧啶化合物(如針對化合物38所示)對源自前神經亞型GBM患者的兩種GBMCSC球模型特別有效，IC50在50-190nM的范圍內。表7.GBM-癌癥干細胞的特征患者CSC臨床診斷亞型8311GBM間充質(Mes)52810GBM前神經(PN)81611GBMPN/復發(fā)32612GBM間充質(Mes)1912GBM前神經(PN)干細胞標志物Oct-4分析.將1200個HUAEC接種在384孔板的每個孔中。1天后，通過研磨機械解離8311GBMCSC，并以每孔600個細胞的密度加入。使細胞共培養(yǎng)1天，然后在37℃下在5％CO2中用各種濃度的吡咯并嘧啶化合物或DMSO處理3天。與化合物孵育后，加入40μL的4％多聚甲醛。細胞固定在室溫下進行1小時，每孔用50μL體積的PBS洗滌5次。每個孔在4℃下用50μL體積的補充有3％山羊血清和0.25％tritonX-100的PBS處理過夜。將細胞在4℃下與在PBS/3％山羊血清/0.25％triton中分別以1:100和1:1000稀釋的抗Oct4和抗Tuj1抗體孵育過夜。用PBS/0.25％triton洗滌細胞5次，并在室溫下用AlexaFluor標記的二抗孵育3小時，然后用PBS/0.25％Triton洗滌孔5次。使用EVOS細胞成像系統(tǒng)以10X放大倍數獲取4個隨機選擇的視野的圖像。使用AdobePhotoshop(AdobeSystemsIncorporated)處理原始圖像、分配和合并通道。代表性圖像如圖4所示。結果.干細胞的定義性質是它們產生分化后代的能力。GBMCSC顯示了在生長因子撤除或暴露于BMP-4后經歷神經元和星形細胞分化的能力[Pollard等人CellStemCell2009；4(6):568-80]。我們評估吡咯并嘧啶化合物對8311膠質瘤干細胞在病理相關GBM-CSC/HUAEC共培養(yǎng)模型中的影響。已知內皮細胞與自我更新GBM-CSC和保持這些細胞處于干細胞樣狀態(tài)的秘密因子(secretfactor)緊密相互作用[Calabrese等人.Cancercell2007；11(1):69-82]。在該分析中，Oct4用作干細胞標志物，Tuj-1分別用作GBMCSC和分化的神經元細胞群的神經元標志物。如圖4所示，在吡咯并嘧啶化合物處理(如化合物38所示)時，Oct4陽性GBMCSC群體減少，而Tuj-1陽性神經元細胞的比例增加。該數據表明吡咯并嘧啶化合物可以消除Oct-4陽性癌干細胞群體并誘導8311/HUAEC共培養(yǎng)模型中的神經元分化。結論.顯示吡咯并嘧啶化合物損害GBMCSC模型的增殖。從代表間充質和前神經GBM子類的原代GBM患者樣本分離的五個模型用于測試的吡咯并嘧啶化合物對GBMCSC的活性。吡咯并嘧啶化合物(以化合物38為范例)有效抑制前神經52810和1912細胞的增殖，IC50值分別為0.048和0.19μM。吡咯并嘧啶化合物(以化合物38為范例)在抑制間充質模型8311和32612細胞方面具有較低的效力，IC50值分別為1.6和1.8μM。此外，吡咯并嘧啶化合物(以化合物38為范例)在HUAEC共培養(yǎng)模型的環(huán)境下誘導GBMCSC的分化。因此，我們的數據表明吡咯并嘧啶化合物可以抑制增殖和誘導GBMCSC的神經元分化。動物模型癌癥異種移植模型.對于異種移植模型研究，將人癌細胞系注射到SCID(嚴重聯合免疫缺陷)小鼠中。癌細胞系在培養(yǎng)物中體外增殖。通過將精確確定數量的細胞注射到小鼠中產生荷瘤動物。在接種動物后，使腫瘤生長至一定尺寸，然后隨機化。將攜帶通常100在400mm3之間的異種移植腫瘤的小鼠匯集在一起并隨機分入不同治療組。原代腫瘤移植物在體內繁殖。將來自供體小鼠的腫瘤片段植入少量小鼠用于維持，或植入更大數目的小鼠用于研究起始。典型的功效研究設計涉及以不同劑量水平給予荷瘤小鼠一種或多種化合物。另外，類似地給予和維持參考化療劑(陽性對照)和陰性對照。給予途徑可以包括皮下(SC)、腹膜內(IP)、靜脈內(IV)、肌內(IM)和口服(PO)。在研究過程中進行腫瘤測量和體重，并記錄發(fā)病率和死亡率。也可以進行尸檢、組織病理學和PCR以增強對疾病和藥物作用的理解。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人膀胱癌細胞系，例如移行細胞癌是：HT-1376、HT-1197、UMUC-3、KU-7和KU-19-19細胞系。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人乳腺癌細胞系是：管腔B型細胞系，例如BT-474或ZR-75，以及基底型細胞系，例如，MDA-MB-231、T47D和Cal-51細胞系。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人肺鱗狀細胞癌細胞系是：SK-MES-1、NCI-H1703、HCC-15和Calu-1細胞系。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人食道鱗狀細胞癌細胞系是：Kyse-140和KYSE-510細胞系。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人鱗狀宮頸癌細胞系是：A-431和SiHa細胞系。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人鱗狀頭頸癌細胞系是：FaDu和SCC-15細胞系。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人白血病細胞系是：CCRF-CEM和MOLT-4。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人淋巴瘤細胞系是：WSU-DLCL2和OCI-Ly10。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人結腸直腸癌(CRC)細胞系是：HCT-116、HT-29和LOVO。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人甲狀腺癌細胞系是：TT和8305C。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人中樞神經系統(tǒng)(CNS)癌細胞系是：U87MG和U-118。已經或可以用于上述異種移植模型的一些典型的人胰腺癌細胞系是：PANC-1和BxPC3。對于典型的異種移植研究，將荷瘤的SCID小鼠隨機化并用不同劑量計劃給予例如100mg/kg至0.1mg/kg的化合物。給小鼠服用2-4周。使用卡尺每周兩次測量腫瘤，并使用公式W2xL/2計算腫瘤體積。在這些異種移植癌癥模型中，吡咯并嘧啶化合物具有或預期具有<100mg/kg的ED50值，其中一些化合物的ED50<10mg/kg，而其他化合物的ED50<1mg/kg。已經引用了許多參考文獻，其公開內容通過引用整體并入本文。當前第1頁1 2 3