本發(fā)明涉及新型化合物；包含所述化合物的藥物組合物；使用所述化合物治療與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛和/或炎癥的方法；以及可用于合成所述化合物的中間體和方法。

關(guān)節(jié)炎涉及關(guān)節(jié)的炎癥并且常常伴隨著疼痛和僵硬。關(guān)節(jié)炎的最常見形式骨關(guān)節(jié)炎是復(fù)雜的關(guān)節(jié)退化疾病，其特征在于關(guān)節(jié)軟骨、關(guān)節(jié)周圍結(jié)構(gòu)（包括骨、滑膜和相關(guān)的纖維性關(guān)節(jié)組織）的漸進(jìn)性破壞；和不同程度的發(fā)炎。使用非甾體抗炎藥（nsaids）和環(huán)氧合酶-2抑制劑（cox-2抑制劑）的現(xiàn)有藥物療法可減輕與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛，但隨著時(shí)間可能僅中度有效并且各自具有變化的風(fēng)險(xiǎn)/益處考量。

nsaids和cox-2抑制劑通過(guò)抑制cox-2酶而減輕炎癥和疼痛。作為對(duì)促炎性刺激的響應(yīng)，cox-2酶將花生四烯酸代謝為前列腺素h2(pgh2)。pgh2進(jìn)一步被各種酶代謝為其它類花生酸(eicosanoid)，包括前列腺素e2(pge2)、前列腺素i2(pgi2)、前列腺素f2α(pgf2α)、前列腺素d2(pgd2)和血栓素a2(txa2)。已知這些代謝物誘發(fā)生理學(xué)和病生理學(xué)效應(yīng)。據(jù)信，藥物介導(dǎo)的pgi2和txa2的不平衡可解釋nsaids和cox-2抑制劑為何產(chǎn)生有害的胃腸和心血管副反應(yīng)。因此，對(duì)許多患者而言，由于先前存在或出現(xiàn)的心血管和/或胃腸病況，這些類別的藥物可能是禁忌的。另外，患者隨著時(shí)間可能難以用特定藥物療法治療。

在花生四烯酸代謝物中，pge2已被鑒定為與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的病況（例如，發(fā)燒、疼痛和炎癥）的重要介體。前列腺素e2特定地經(jīng)由微粒體前列腺素e2合成酶-1(mpges-1)對(duì)pgh2的代謝來(lái)產(chǎn)生。據(jù)信，選擇性抑制mpges-1可為患有關(guān)節(jié)炎的患者提供新的治療選項(xiàng)。

公開案wo2013/146970公開了三取代的喹啉化合物并提出所公開的化合物可尤其用于治療炎性疾病。然而，所述公開案沒有公開如本申請(qǐng)中請(qǐng)求保護(hù)的化合物。

仍然需要另外的選項(xiàng)以治療炎癥并減輕與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛。本發(fā)明提供抑制mpges-1并且可能有益于治療患有關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎的患者的新型化合物。

本發(fā)明提供式1化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，

其中r1是h或-ch3；r選自：

,和;且

g選自：

,和。

本發(fā)明提供式2化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

其中：r1是h或-ch3；r選自：

,和;且

g選自：

,和。

本發(fā)明還提供式1或2的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中r1是-ch3。

對(duì)于優(yōu)選的式1或2的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，r選自：

,和。

對(duì)于更優(yōu)選的式1或2的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，r選自：

,和。

對(duì)于再更優(yōu)選的式1或2的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，r選自：

和。

對(duì)于優(yōu)選的式1或2的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，g是：

或。

本發(fā)明還提供式3化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在一個(gè)實(shí)施方案中，式1、2或3的化合物以中性物質(zhì)的形式提供。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物以藥學(xué)上可接受的鹽的形式提供。在一種優(yōu)選的鹽形式中，式3化合物以鹽酸鹽形式提供。

本發(fā)明還提供藥學(xué)上可接受的組合物，所述組合物包括式1、2或3的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

本發(fā)明還提供治療需要治療與關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛的患者的方法。所述方法包括給予所述患者有效量的包括式1、2或3的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥學(xué)上可接受的組合物。

本發(fā)明還提供治療需要治療關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎的患者的方法。在一種形式中，本發(fā)明提供治療患者的骨關(guān)節(jié)炎體征和/或癥狀的方法。所述方法包括給予所述患者有效量的式1、2或3的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明還提供治療需要治療與關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的炎癥的患者的方法。所述方法包括給予所述患者有效量的包括式1、2或3的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥學(xué)上可接受的組合物。

本發(fā)明還提供治療需要治療與關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛的患者的方法。所述方法包括給予所述患者有效量的式1、2或3的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明還提供治療患者的與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛的方法。所述方法包括給予所述患者有效量的式1、2或3的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明提供用作藥物的式1、2或3的化合物。所述藥物或化合物可用于療法。所述療法可包括治療患者的關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述療法可以是治療與關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛或炎癥。

本發(fā)明還提供所述化合物用于制備治療關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎的藥物的用途。在一種形式中，所述藥物用于治療與關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛或炎癥。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“治療”或“以治療”包括遏止或降低與關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的現(xiàn)有癥狀或病癥（尤其是疼痛和/或炎癥）的嚴(yán)重程度。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“患者”是指哺乳動(dòng)物，例如豚鼠、大鼠、狗、貓、牛、馬、綿羊、山羊或人；或家禽例如雞或鴨。優(yōu)選的患者是哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選人。

本發(fā)明的示例性化合物可根據(jù)所接受的實(shí)踐配制成藥物組合物。藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和稀釋劑的實(shí)例可見于remington’spharmaceuticalsciences,gennaro,ed.,mackpublishingco.eastonpa.1990。非限制性實(shí)例包括下列：淀粉、糖、甘露醇和二氧化硅衍生物；粘合劑如羧甲基纖維素和其它纖維素衍生物、單硬脂酸甘油酯；吸附載體如高嶺土和膨潤(rùn)土；以及潤(rùn)滑劑如滑石、硬脂酸鈣和硬脂酸鎂，和固體聚乙二醇（polyethylglycols）。在一種形式中，所述藥物制劑包括25mm磷酸鹽緩沖液（ph2）中的20%captisol。

優(yōu)選的藥物組合物可配制為用于口服給藥的片劑或膠囊或配制為可注射溶液。片劑、膠囊或溶液包括有效治療需要治療的患者的量的本發(fā)明的化合物。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“有效量”是指本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的量或劑量，所述量或劑量在單劑量或多劑量給藥于患者后提供所需要的效應(yīng)，例如，減輕或消除診斷或治療下的患者的疼痛和/或炎癥。

有效量可容易地由主治診斷醫(yī)師通過(guò)使用已知技術(shù)和通過(guò)類似情況下獲得的觀察結(jié)果而確定。在確定患者的有效量時(shí)，可由主治診斷醫(yī)師考慮多種因素，包括但不限于：哺乳動(dòng)物的物種，其大小、年齡和一般健康狀況；癥狀的嚴(yán)重程度；個(gè)體患者的反應(yīng)；給藥模式；式1、2或3化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽形式作為配制的藥物產(chǎn)品在所選給藥方案中的生物利用度特征；使用的伴隨藥物；和其它相關(guān)情形。

在一個(gè)實(shí)施方案中，有效量可以是約0.0005mg/kg體重至約100mg/kg。更優(yōu)選地，有效量可以是約0.001mg/kg至約50mg/kg。再更優(yōu)選地，有效量可以是約0.001mg/kg至約20mg/kg。

本發(fā)明的化合物可以與其它治療方法和/或另外的治療劑組合。優(yōu)選本發(fā)明化合物可與也有效治療關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎的其它藥劑組合。這些另外的治療劑的實(shí)例包括：nsaids或cox-2抑制劑，如布洛芬、阿司匹林、對(duì)乙酰氨基酚、塞來(lái)昔布、萘普生和酮洛芬；阿片類如羥考酮和芬太尼；和皮質(zhì)類固醇類如氫化可的松、潑尼松龍和潑尼松。

本發(fā)明的化合物和另外的治療劑可經(jīng)由相同遞送途徑和裝置如單一丸劑、膠囊片劑或溶液一起給藥；或在單獨(dú)的遞送裝置中同時(shí)分別給藥或依序給藥。

本發(fā)明化合物可以以藥學(xué)上可接受的鹽形式提供?！八帉W(xué)上可接受的鹽”是指被認(rèn)為是臨床和/或獸醫(yī)使用可接受的本發(fā)明的化合物的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽和制備它們的常用方法是本領(lǐng)域公知的。參見，例如，p.stahl等人,handbookofpharmaceuticalsalts:properties,selectionanduse,(vcha/wiley-vch,2002);s.m.berge等人,"pharmaceuticalsalts,"journalofpharmaceuticalsciences,vol.66,no.1,january1977。

本發(fā)明的化合物或其鹽可通過(guò)本領(lǐng)域已知的各種程序制備，一些程序例示于以下的方案、制備例和實(shí)施例中。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，用于所述各路徑的具體合成步驟可以以不同方式組合，或與不同方案的步驟聯(lián)合，以制備本發(fā)明的化合物或其鹽。以下方案中各步驟的產(chǎn)物可通過(guò)常規(guī)方法回收或純化，包括萃取、蒸發(fā)、沉淀、層析、超臨界流體層析、過(guò)濾、研磨和結(jié)晶。

單個(gè)異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在合成式1化合物中的任何方便時(shí)間點(diǎn)通過(guò)諸如選擇性結(jié)晶技術(shù)或手性層析的方法分離或拆分(參見例如j.jacques等人,"enantiomers,racemates,andresolutions",johnwileyandsons,inc.,1981,和e.l.eliel和s.h.wilen,”stereochemistryoforganiccompounds”,wiley-interscience,1994)。此外，下列制備例中所述的中間體含有氮和氧保護(hù)基。保護(hù)和脫保護(hù)條件是技術(shù)人員公知的并且描述于文獻(xiàn)中(參見例如“greene’sprotectivegroupsinorganicsynthesis”,第四版,peterg.m.wuts和theodoraw.greene,johnwileyandsons,inc.2007)。

試劑和起始物質(zhì)通常是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易獲得的。其它的可通過(guò)有機(jī)和雜環(huán)化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)和以下制備例和實(shí)施例中描述的程序制備。

如下所例示的用穿過(guò)鍵的線描繪鍵指示取代基與分子剩余部分的連接點(diǎn)。

本文所用的縮寫根據(jù)aldrichimicaacta,vol.17,no.1,1984定義。其它縮寫如下定義：“δ”是指相對(duì)于四甲基硅烷低場(chǎng)的百萬(wàn)分率；“atcc”是指美國(guó)模式菌種收集中心；“bop”是指(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽；“bsa”是指牛血清白蛋白；“cdi”是指1,1’-羰基二咪唑；“dcc”是指1,3-二環(huán)己基碳二亞胺；“dcm”是指二氯甲烷；“dic”是指1,3-二異丙基碳二亞胺；“dmf”是指二甲基甲酰胺；“dmso”是指二甲亞砜；“edci”是指1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；“edta”是指乙二胺四乙酸；“ee”是指對(duì)映體過(guò)量；“eia”是指酶免疫分析法；“eims”是指電子電離質(zhì)譜；“esms”是指電噴霧質(zhì)譜；“etoac”是指乙酸乙酯；“etoh”是指乙醇（ethanol）或乙醇（ethylalcohol）；“ex.no.”是指實(shí)施例編號(hào)；“hatu”是指(1-[雙(二甲基氨基)亞甲基-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化物六氟磷酸鹽)；“hbtu”是指(1h-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)-n,n-二甲基甲銨六氟磷酸鹽；“hoat”是指1-羥基-7-偶氮苯并三唑；“hobt”是指水合1-羥基苯并三唑；“ic50”是指產(chǎn)生該試劑可能的最大抑制反應(yīng)的50%的試劑濃度；“i-proh”是指異丙醇（isopropanol）或異丙醇（isopropylalcohol）；“l(fā)ps”是指脂多糖；“meoh”是指甲醇；“min”是指分鐘；“nsaids”是指非甾體抗炎藥；“pbs”是指磷酸鹽緩沖鹽水；“pge2”是指前列腺素e2；“pgh2”是指前列腺素h2；“pgi2”是指前列腺素i2；“pybop”是指(苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷子基鏻六氟磷酸鹽)；“pybrop”是指溴(三吡咯烷基)鏻六氟磷酸鹽；“rhil-1β”是指重組人白介素1β；“scf”是指超臨界流體；“sfc”是指超臨界流體層析；“tbme”是指叔丁基醚甲基醚；“thf”是指四氫呋喃；“tr”是指保留時(shí)間。

通用lcms方法。所有分析使用agilent1200infinityseriesliquidchromatography(lc)系統(tǒng)進(jìn)行，該系統(tǒng)由以下組成：1260hip脫氣裝置(g4225a)、1260二元泵(g1312b)、1290自動(dòng)進(jìn)樣器(g4226a)、1290恒溫柱溫箱(g1316c)和與agilent6150單四級(jí)桿質(zhì)譜(ms)檢測(cè)器偶聯(lián)的1260二極管陣列檢測(cè)器(g4212b)。ms使用電噴霧電離源(esi)在正&負(fù)離子模式下操作。噴霧器壓力設(shè)置為50psi，干燥氣溫度和流速分別為350℃和12.0l/min。使用的毛細(xì)管電壓為正離子模式下4000v和負(fù)離子模式下3500v。數(shù)據(jù)采集使用agilent化學(xué)工作站軟件進(jìn)行。

hplc方法1。在daicelchiralpakad-3r柱(長(zhǎng)度100mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑3μm)上進(jìn)行分析。使用的流動(dòng)相為：a2=含10mm碳酸氫銨的水，用氫氧化銨調(diào)節(jié)至ph9；和b2=乙腈。在溫度25℃和流速1.5ml/min下，使用50%至95%(b2)梯度洗脫3.0min，接著在95%(b2)保持3.0min來(lái)進(jìn)行運(yùn)行。uv(dad)采集在40hz下使用190–400nm的掃描范圍(步進(jìn)5nm)進(jìn)行。在ms檢測(cè)器前使用1:1分流比。ms采集范圍設(shè)置為100–800m/z，步長(zhǎng)0.2m/z，兩種極性模式。碰撞電壓設(shè)置為70(esi⁺)或120(esi^-)，增益設(shè)置為0.40(esi⁺)或1.00(esi^-)，離子計(jì)數(shù)閾值設(shè)置為4000(esi⁺)或1000(esi^-)?？俶s掃描周期時(shí)間為0.15s/周期。

sfc方法1。在daicelchiralpakoj-h柱(長(zhǎng)度100mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5μm)上進(jìn)行分析。流動(dòng)相為：8%(20mmnh3/i-proh)和92%co2(scf),壓力為100巴。在溫度35℃和流速3ml/分鐘下進(jìn)行運(yùn)行。uv(dad)采集在波長(zhǎng)220nm下進(jìn)行。

sfc方法2。在daicelchiralpakas-h柱(長(zhǎng)度100mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5μm)上進(jìn)行分析。流動(dòng)相為：20%(20mmnh3/i-proh)和80%co2(scf),壓力為100巴。在溫度35℃和流速5ml/分鐘下進(jìn)行運(yùn)行。uv(dad)采集在波長(zhǎng)220nm下進(jìn)行。

以下方案進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。

方案1

在方案1、步驟1中，在哌啶上安裝三氟甲基磺酰基以在隨后的步驟2的反應(yīng)中充當(dāng)離去基?！皃g”是針對(duì)氨基開發(fā)的保護(hù)基，例如氨基甲酸酯和酰胺。步驟1的產(chǎn)物接著使用鈀催化劑進(jìn)行羰基化以得到步驟2的酯產(chǎn)物。四氫吡啶中的雙鍵可在氫化條件下還原。在步驟3、子步驟2中，哌啶胺可在酸性條件下脫保護(hù)。步驟3的哌啶產(chǎn)物可接著與鹵素取代的g基團(tuán)在適于親核芳香族取代的條件下反應(yīng)生成步驟4的產(chǎn)物。例如，可使用無(wú)極堿諸如k2co3或有機(jī)堿諸如n,n-二異丙基乙胺、吡啶或三乙胺以生成步驟4、子步驟1的產(chǎn)物。或者，步驟3的哌啶產(chǎn)物可利用活化劑諸如pyprop與喹諾酮n-氧化物反應(yīng)以生成步驟4的產(chǎn)物。哌啶羧基的脫保護(hù)可在標(biāo)準(zhǔn)條件下使用無(wú)極堿諸如氫氧化鈉或氫氧化鋰的水溶液來(lái)完成以生成步驟4、子步驟2的產(chǎn)物，或在酸性條件下使用4mhcl或硫酸水溶液來(lái)完成。

方案2

在方案2中，步驟4的哌啶羧酸產(chǎn)物可與合適的胺r-nh2在酰胺化條件下使用有機(jī)堿諸如三乙胺或二異丙基乙胺、偶聯(lián)劑諸如edci和偶聯(lián)添加劑諸如hobt偶聯(lián)以生成步驟5、子步驟1的化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，存在多種方法和試劑用于自羧酸與胺的反應(yīng)形成酰胺。例如，胺化合物與合適的羧酸在偶聯(lián)劑存在下（使用或不使用有機(jī)堿）的反應(yīng)可提供式1化合物。偶聯(lián)劑包括碳二亞胺，如dcc、dic、edci，或羰基二咪唑，如cdi?？墒褂悯０放悸?lián)添加劑如hobt和hoat以增強(qiáng)反應(yīng)。此外，可使用非親核陰離子的脲鎓或鏻鹽如hbtu、hatu、bop、pybop和pybrop來(lái)代替更多的傳統(tǒng)偶聯(lián)劑?？墒褂锰砑觿┤鏳map以增強(qiáng)反應(yīng)。如果必要，步驟5、子步驟1的產(chǎn)物可接著在標(biāo)準(zhǔn)條件下使用無(wú)機(jī)堿如氫氧化鈉或氫氧化鋰水溶液在溶劑如meoh和thf中脫保護(hù)以生成式1化合物。

本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽（如鹽酸鹽）可例如通過(guò)合適的式1的游離堿與合適的藥學(xué)上可接受的酸（如鹽酸）在合適的溶劑如乙醚中在標(biāo)準(zhǔn)條件下的反應(yīng)來(lái)形成。此外，此類鹽的形成可在脫去氮保護(hù)基時(shí)同時(shí)發(fā)生。此類鹽的形成是本領(lǐng)域公知和了解的。參見，例如，gould,p.l.,“saltselectionforbasicdrugs,”internationaljournalofpharmaceutics,33:201-217(1986);bastin,r.j.等人.“saltselectionandoptimizationproceduresforpharmaceuticalnewchemicalentities,”organicprocessresearchanddevelopment,4:427-435(2000);和berge,s.m.等人,“pharmaceuticalsalts,”journalofpharmaceuticalsciences,66:1-19,(1977)。

以下制備例和實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。

制備例1

3,3-二甲基-4-(((三氟甲基)磺?；?氧基)-3,6-二氫吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯

在氮?dú)夥障拢瑢⒍惐?260ml,1.85mol)于thf(1.0l)中的溶液冷卻至–20℃，然后經(jīng)30分鐘逐滴添加正丁基鋰溶液(2.50m于己烷中,650ml,1.60mol)。使混合物溫?zé)嶂哩C10℃并攪拌1小時(shí)。將混合物冷卻至–74℃并經(jīng)60分鐘逐滴添加3,3-二甲基-4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(260g,1.14mol)于thf(1.0lml)中的溶液。將混合物在–74℃攪拌2小時(shí)，然后添加n-苯基雙(三氟甲烷磺酰亞胺)(430g,1.20mol)于thf(1.0l)中的溶液。將混合物溫?zé)嶂?℃并攪拌2小時(shí)。使混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜。用飽和nh4cl水溶液(1.0l)淬滅反應(yīng)；用水(2.0l)稀釋；分離各層；并用etoac(2×2l)萃取水層。合并有機(jī)萃取物；經(jīng)na2so4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮濾液。使所得粗物質(zhì)進(jìn)行硅膠快速層析，用0%-15%tbme/己烷梯度洗脫以提供為橙色油狀物的標(biāo)題化合物(430g,78%)，其純度以質(zhì)量計(jì)為約75%，如通過(guò)¹hnmr評(píng)估。

制備例2

3,3-二甲基-2,6-二氫吡啶-1,4-二甲酸o1-叔丁酯-o4-甲酯

將乙酸鈀(ii)(4.40g,20.0mmol)、1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵(13.3g,22.8mmol)、3,3-二甲基-4-(((三氟甲基)磺?；?氧基)-3,6-二氫吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯(72.0g,150mmol)、無(wú)水乙腈(850ml)、無(wú)水meoh(570ml)和三乙胺(36.0ml,245mmol)在配備有機(jī)械攪拌器的2-lparr?高壓釜中合并。將高壓釜密封。沖洗，接著用一氧化碳將高壓釜增壓至689kpa。將混合物加熱至65℃持續(xù)2.25小時(shí)；將混合物冷卻至室溫；并且小心地將高壓釜排出。(注意!毒氣!)。在減壓下濃縮以得到粗物質(zhì)。將該物質(zhì)與通過(guò)類似程序以相似規(guī)模制備的另外5批物質(zhì)合并。合并的物質(zhì)進(jìn)行硅膠快速層析，用0%-20%tbme/己烷梯度洗脫，以得到標(biāo)題化合物(260g,88%)，為黃色油狀物，純度以質(zhì)量計(jì)約83%。。

制備例3

(±)-3,3-二甲基哌啶-1,4-二甲酸o1-叔丁酯-o4-甲酯

將鈀(10wt%/碳,5.4g,5.1mmol)懸浮于meoh(700ml)中，然后將3,3-二甲基-2,6-二氫吡啶-1,4-二甲酸o1-叔丁酯-o4-甲酯(130g,396mmol)溶解于meoh(700ml)中的溶液添加至2.25lparr?反應(yīng)器。密封反應(yīng)器，首先用氮?dú)?、接著用氫氣進(jìn)行沖洗。將反應(yīng)器用氫增壓至414kpa并將混合物在室溫下攪拌1.5小時(shí)。釋放壓力并過(guò)濾混合物以除去催化劑。將濾液與獲自另一基本相同反應(yīng)的物質(zhì)合并并減壓濃縮以得到標(biāo)題化合物(240g,95%)，為黃色油狀物，純度以質(zhì)量計(jì)約85%。。

制備例4

(±)-3,3-二甲基哌啶-4-甲酸甲酯鹽酸鹽

將hcl(4.0m溶液于1,4-二氧雜環(huán)己烷中,2.0l,8.0mol)添加到3,3-二甲基哌啶-1,4-二甲酸o1-叔丁酯-o4-甲酯(240g,752mmol)于1,4-二氧雜環(huán)己烷(500ml)中的溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌過(guò)夜并減壓濃縮。用tbme(500ml)稀釋殘余物并通過(guò)過(guò)濾收集所得固體。用tbme(2×400ml)沖洗濾餅并在真空爐中在35℃下將固體干燥過(guò)夜以得到為白色固體的標(biāo)題化合物(144g,92%)。。

制備例5

(–)-(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸甲酯

將k2co3(210g,1.52mol)添加到3,3-二甲基哌啶-4-甲酸甲酯鹽酸鹽(144g,693mmol)和2-氯-8-甲基喹啉(125g,704mmol)于dmso(1.4l)中的混合物中。將所得混合物在131±1℃攪拌過(guò)夜。將混合物冷卻至室溫；過(guò)濾除去固體；收集濾液；用水(2l)稀釋濾液；然后用etoac(2×3l)萃取。用水(3×1.5l)洗滌合并的有機(jī)萃取物；經(jīng)na2so4干燥；過(guò)濾；收集并在減壓下濃縮濾液。所得粗物質(zhì)進(jìn)行硅膠快速層析，用25%-30%(10%tbme/dcm)/己烷梯度洗脫，以提供標(biāo)題化合物的外消旋物。將該物質(zhì)溶于meoh(7.5l)并過(guò)濾。該物質(zhì)進(jìn)行手性sfc(chiralpakoj-h,50mm×250mm×5μm)，使用含15%(0.2%二甲基乙胺/i-proh)的co2(scf)作為流動(dòng)相，流速400g/min，每95秒注射5ml溶液，直至所有物質(zhì)都耗盡。對(duì)于每次注射，收集洗脫的第一級(jí)分(tr=2.57min，sfc方法1)。將收集的級(jí)分與來(lái)自類似制備的之前反應(yīng)的那些級(jí)分合并以提供98g粗品3,3-二甲基哌啶-4-甲酸甲酯鹽酸鹽。在減壓下濃縮混合物并自熱etoh(1.38l)重結(jié)晶物質(zhì)。收集晶體并在真空爐中在40℃下將結(jié)晶物質(zhì)干燥過(guò)夜以提供為白色結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物(156g,43%產(chǎn)率，基于分批比例)。，如通過(guò)sfc方法1測(cè)定。

制備例6

(–)-(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸

用硫酸(10%v/v于水中,2.31l,2.75mol)處理(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸甲酯(154g,493mmol)并將混合物回流過(guò)夜。將混合物冷卻至室溫并添加naoh(50wt%于水中)直至ph達(dá)到13。添加tbme(500ml)以提供三相混合物。從上至下將各層標(biāo)記為：“層a”、“層b”和“層c”。除去層c(底層)。將水(600ml)添加至層a和層b并自有機(jī)層分離水層。留出有機(jī)層(a和b)。將水層與層c合并。用tbme(500ml)萃取合并的水層；分離各層；并留出有機(jī)萃取物。將hcl(5.0m)添加至水層直至ph為6.5。用tbme(2×400ml)萃取所得含水混合物。合并所有有機(jī)萃取物(包括層a和b)；經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集并在減壓下濃縮濾液以得到96%純度的為白色固體的標(biāo)題化合物(145g,95%)。。

制備例7

(±)-2-((芐氧基)甲基)-2,3-二氫-4h-吡喃-4-酮

經(jīng)90分鐘將zncl2于thf中的溶液(0.5m,1.21l,607mmol)添加到(e)-1-甲氧基-3-(三甲基甲硅烷基)氧基-1,3-丁二烯(95%純,100g,551mmol)和(芐基氧基)乙醛(97%純,80ml,551.370mmol)于甲苯(551ml)中的冷(0℃)溶液中，同時(shí)維持反應(yīng)混合物的內(nèi)部溫度低于10℃。使混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜。將反應(yīng)混合物分為兩等份；對(duì)每一份進(jìn)行以下程序。以四份添加三氟乙酸(35ml,457mmol)。20分鐘后，在減壓下濃縮所得混合物；用etoac稀釋；添加過(guò)量的飽和nahco3；過(guò)濾除去固體；收集濾液；分離并收集有機(jī)層。用飽和nacl水溶液洗滌有機(jī)溶液；分離有機(jī)萃取物；經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮。合并從之前分離部分各自所得的物質(zhì)。所得物質(zhì)進(jìn)行硅膠快速層析，用20%-50%etoac/己烷梯度洗脫，以得到92%純度的為橙色油狀物的標(biāo)題化合物(96g,73%)。

制備例8

(±)-2-(芐氧基甲基)四氫吡喃-4-酮

在氫氣氛下在室溫將etoac(880ml)、(±)-2-((芐氧基)甲基)-2,3-二氫-4h-吡喃-4-酮(96g,0.440mol)、三乙胺(123ml,0.882mol)和鈀(10%/碳,4.68g,4.40mmol)的混合物攪拌73小時(shí)。經(jīng)由硅藻土過(guò)濾混合物；用etoac(250ml)沖洗濾餅；并依此用hcl水溶液(0.1m)、飽和nahco3水溶液和飽和nacl水溶液洗滌濾液。經(jīng)mgso4干燥有機(jī)層；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮以得到為淺黃色物質(zhì)的標(biāo)題化合物(81.4g,84%)。。

制備例9

(2s,4r)-2-(芐氧基甲基)四氫吡喃-4-醇

將(±)-2-(芐氧基甲基)四氫吡喃-4-酮(40.6g,184mmol)于thf(1.08l)中的溶液冷卻至–78℃。經(jīng)15分鐘逐滴添加lialh4溶液(1.0m于thf中,240ml,240mmol)。添加完成后使混合物溫?zé)嶂?℃并緩慢地逐滴添加水(8.4ml)。將混合物攪拌5分鐘后，添加naoh溶液(15質(zhì)量%，于水中,8.4ml)并再攪拌5分鐘。然后添加水(3×8.4ml)并使混合物溫?zé)嶂潦覝亍?0分鐘后，過(guò)濾混懸液以除去固體并在減壓下濃縮濾液以提供為無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物。用thf沖洗固體一次；過(guò)濾；并在減壓下濃縮濾液。將該物質(zhì)與獲自基本按照相同程序使用40g、22g和45g的(±)-2-(芐氧基甲基)四氫吡喃-4-酮起始進(jìn)行的之前反應(yīng)的那些物質(zhì)合并。將合并的物質(zhì)溶于i-proh(637ml)。使用含25%i-proh的co2(scf)作為流動(dòng)相以流速300g/min通過(guò)每114秒注射1.35g溶液直至已注射所有物質(zhì)來(lái)使所述物質(zhì)進(jìn)行手性sfc(chiralpakas-h,50mm×150mm×5μm)。對(duì)于每次注射，收集洗脫的第一級(jí)分(主要異構(gòu)體)。合并所有收集的級(jí)分以得到如通過(guò)sfc方法2測(cè)定的為>99%ee的標(biāo)題化合物(62.8g,42%產(chǎn)率，基于分批比例)。。

制備例10

甲磺酸((2s,4r)-2-(芐氧基甲基)四氫吡喃-4-基)酯

在0℃下將甲磺酰氯(11.7ml,150.6mmol)于dcm(70ml)中的溶液逐滴添加到(2s,4r)-2-(芐氧基甲基)四氫吡喃-4-醇(31g,139.5mmol)、dcm(1.40l)和n,n-二異丙基乙胺(73.0ml,418.4mmol)的混合物中。使混合物溫?zé)嶂潦覝夭⑵鋽嚢柽^(guò)夜。此后添加甲磺酰氯(0.537ml,6.98mmol)于dcm(5ml)中的溶液并將混合物在室溫下攪拌5分鐘。將混合物冷卻至0℃，將其倒入水中；分離；并收集有機(jī)層。用水(500ml)洗滌有機(jī)層；將有機(jī)層與獲自其它基本相同反應(yīng)的有機(jī)層/萃取物合并。經(jīng)mgso4干燥合并的有機(jī)溶液；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮濾液以得到為淺橙色油狀物的標(biāo)題化合物(84.7g,97%產(chǎn)率，基于分批比例)。

制備例11

((2s,4s)-4-氨基四氫-2h-吡喃-2-基)甲醇鹽酸鹽

將疊氮化鈉(12.85g,191.7mmol)添加到甲磺酸((2s,4r)-2-(芐氧基甲基)四氫吡喃-4-基)酯(32.0g,106.5mmol)于dmf(304ml)中的溶液中。將所得混合物加熱至100℃并將其攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫。將混合物倒入水(400ml)中，然后用etoac(2×400ml)萃取。合并有機(jī)萃取物并用飽和nacl水溶液(3×200ml)洗滌。經(jīng)mgso4干燥有機(jī)萃取物；過(guò)濾；并收集濾液。在減壓下將濾液濃縮至約100ml總體積。將所得混合物溶于etoac(700ml)并將其添加至含有pto2(2.7g,12mmol)和etoac(700ml)的parr?容器。用氮沖洗容器；然后用氫將其增壓至414kpa。在室溫下攪動(dòng)混合物4小時(shí)。過(guò)濾混合物并在減壓下濃縮無(wú)色濾液以提供23.2g無(wú)色油狀物。與36.2g來(lái)自通過(guò)基本相同的程序制備的之前反應(yīng)的物質(zhì)合并。將合并的物質(zhì)溶于etoh(600ml)并添加hcl(37wt%于h2o中,50ml)。將所得混合物添加至含有pd(10%/碳,10.0g,9.40mmol)和etoh(600ml)的parr?容器。用氮沖洗反應(yīng)器并用氫將其增壓至414kpa。在室溫下攪動(dòng)混合物1小時(shí)。過(guò)濾混合物；收集濾液；并在減壓下濃縮無(wú)色濾液以得到約72%純度的為深色稠油狀物的標(biāo)題化合物(54.2g,85%)。。

制備例12

(±)-3,3-二甲基-1-[4-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-甲酸甲酯

將k2co3(460mg,3.33mmol)添加到3,3-二甲基哌啶-4-甲酸甲酯鹽酸鹽(300mg,1.44mmol)、1-氟-4-(三氟甲基)苯(475mg,2.89mmol)和dmso(2ml)的混合物中。將所得混合物在130℃下攪拌2天。將混合物冷卻至室溫并攪拌3天。所得物質(zhì)在c18硅膠上進(jìn)行反相快速層析，用10%-100%乙腈(0.1%甲酸)/水(0.1%甲酸)的梯度洗脫，以得到為黃色油狀物的標(biāo)題化合物(113mg,25%)。。

制備例13

(±)-3,3-二甲基-1-[4-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-甲酸.

將2mnaoh水溶液(1ml,2mmol)添加到(±)-3,3-二甲基-1-[4-(三氟甲基)苯基]哌啶-4-甲酸甲酯(113mg,0.36mmol)、meoh(1ml)和thf(5ml)的混合物中。將所得混合物在50℃下攪拌過(guò)夜。將混合物冷卻至室溫，添加hcl(33wt%于水中)直至混合物的ph為3。在減壓下濃縮混合物以得到88%純度的為黃色固體的標(biāo)題化合物(123mg,99%產(chǎn)率)。。

制備例14

(±)-3,3-二甲基-1-[5-(三氟甲基)嘧啶-2-基]哌啶-4-甲酸

將三乙胺(7.65ml,54.9mmol)添加到(±)-3,3-二甲基哌啶-4-甲酸甲酯鹽酸鹽(8.55g,41.2mmol)、2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶(5.0g,27.4mmol)和乙腈(67ml)的混合物中。將混合物在微波中加熱至180℃持續(xù)1小時(shí)；然后將混合物冷卻至室溫；并在減壓下濃縮。添加meoh(40ml)、thf(80ml)和2mnaoh水溶液(40ml,80mmol)。將所得混合物在50℃下攪拌2天。添加2mnaoh水溶液(45ml,90mmol)并將所得混合物在50℃下攪拌4小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，然后添加hcl(33wt%于水中)直至ph達(dá)到3。在減壓下濃縮。用1nhcl水溶液(100ml)稀釋并用etoac(2×100ml)萃取。用鹽水(100ml)洗滌合并的有機(jī)萃取物；經(jīng)na2so4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮以得到標(biāo)題化合物(7.60g,61%)。。

制備例15

5,8-二甲基喹啉-1-氧化物

將3-氯過(guò)氧苯甲酸(5.96g,24.1mmol)添加到保持在0℃下的5,8-二甲基喹啉(2g,12.1mmol)和dcm(80ml)的混合物中。1小時(shí)后，添加na2so4(5g)并過(guò)濾混合物。收集濾液。將所得混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。用dcm(100ml)稀釋；用1nnaoh水溶液(3×50ml)洗滌；經(jīng)na2so4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮至干。所得粗物質(zhì)在c18硅膠上進(jìn)行反相快速層析，用15%-70%乙腈(10mm碳酸氫銨)/水(10mm碳酸氫銨)梯度洗脫以得到標(biāo)題化合物(372mg,18%)。。

制備例16

(±)-1-(5,8-二甲基-2-喹啉基)-3,3-二甲基-哌啶-4-甲酸甲酯.

將n,n-二異丙基乙胺(2.02ml,11.6mmol)和pybrop(1.75g,3.75mmol)添加到(±)-3,3-二甲基哌啶-4-甲酸甲酯鹽酸鹽(600mg,2.89mmol)、5,8-二甲基喹啉-1-氧化物(678mg,3.91mmol)和dcm(15ml)的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌3天。粗反應(yīng)物在c18硅膠上進(jìn)行反相快速層析，用10%-100%乙腈(0.1%甲酸)/水(0.1%甲酸)梯度洗脫。合并含有目標(biāo)產(chǎn)物的級(jí)分并真空濃縮至約30ml體積。通過(guò)添加1nnaoh水溶液將ph調(diào)節(jié)至6。用etoac(2x30ml)萃取水溶液，用ph6緩沖水溶液(4x30ml)洗滌，經(jīng)mgso4干燥，過(guò)濾，并在減壓下濃縮以得到標(biāo)題化合物(166mg,18%)。。

制備例17

(±)-1-(5,8-二甲基-2-喹啉基)-3,3-二甲基-哌啶-4-甲酸.

在微波容器中合并(±)-1-(5,8-二甲基-2-喹啉基)-3,3-二甲基-哌啶-4-甲酸甲酯(166mg,0.51mmol)、meoh(0.1ml)、thf(0.5ml)和1mnaoh水溶液(2.5ml,2.5mmol)的混合物。將所得混合物在120℃下在微波反應(yīng)器中加熱2小時(shí)。將混合物冷卻至室溫并添加1nhcl水溶液直至ph為6。用chcl3(2×25ml)萃??；經(jīng)na2so4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮以得到標(biāo)題化合物(135mg,85%)。。

制備例18

(±)-1-(8-氯-2-喹啉基)-3,3-二甲基-哌啶-4-甲酸甲酯.

將k2co3(1.07g,7.75mmol)添加到(±)-3,3-二甲基哌啶-4-甲酸甲酯鹽酸鹽(700mg,3.37mmol)、2,8-二氯喹啉(876mg,4.38mmol)和dmso(4.5ml)的混合物中。將所得混合物在130℃下攪拌過(guò)夜。將混合物冷卻至室溫；過(guò)濾以除去固體；用水(5ml)稀釋；并用etoac(4×20ml)萃取。用水(20ml)、接著鹽水(20ml)洗滌合并的有機(jī)萃取物。有機(jī)萃取物經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮。所得粗物質(zhì)在硅膠上進(jìn)行快速層析，用0%-40%etoac/己烷梯度洗脫以得到標(biāo)題化合物(1.1g,98%)。。

制備例19

(±)-1-(8-氯-2-喹啉基)-3,3-二甲基-哌啶-4-甲酸

在微波容器中合并(±)-1-(8-氯-2-喹啉基)-3,3-二甲基-哌啶-4-甲酸甲酯(1.1g,3.3mmol)、meoh(0.8ml)、thf(3.3ml)和1mnaoh水溶液(3.3ml,17mmol)的混合物。將所得混合物在120℃下在微波中加熱2小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，然后添加5nhcl水溶液直至ph為6。用etoac(3×10ml)萃取混合物。合并有機(jī)萃取物；經(jīng)na2so4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮以得到標(biāo)題化合物(815mg,77%)。。

制備例20

4-苯胺基-2,5-二氫呋喃-3-甲酸甲酯

將p-甲苯磺酸(500mg,3.16mmol)添加到(±)-4-氧代四氫呋喃-3-甲酸甲酯(6.6g,45.8mmol)、苯胺(4.3ml,47.2mmol)和甲苯(70ml)的混合物中。給反應(yīng)容器配備dean-stark阱并加熱至140℃。將所得混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)加熱至140℃并攪拌2小時(shí)。冷卻混合物并添加乙醚(100ml)和水(100ml)。用乙醚(3×50ml)萃取混合物；經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮。所得粗物質(zhì)在硅膠上進(jìn)行快速層析，用0%-100%etoac/庚烷梯度洗脫，以得到標(biāo)題化合物(6.7g,67%)。。

制備例21

(±)-3-(碘甲基)-4-苯基亞氨基-四氫呋喃-3-甲酸甲酯

將(±)-4-苯胺基-2,5-二氫呋喃-3-甲酸甲酯(3.6g,16.4mmol)和18-冠-6(4.8g,18mmol)于甲苯(15ml)中的溶液添加到叔丁醇鉀(2.0g,17.8mmol)和甲苯(15ml)的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘。添加二碘甲烷(4ml)并在室溫下將反應(yīng)攪拌過(guò)夜。添加水(50ml)并用乙醚(2×50ml)萃取。收集有機(jī)萃取物并用鹽水(50ml)洗滌。有機(jī)萃取物經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮。所得粗物質(zhì)在硅膠上進(jìn)行快速層析，用0%-60%etoac/庚烷梯度洗脫，以得到標(biāo)題化合物(1.0g,17%)。。

制備例22

(±)-5-氧代四氫吡喃-3-甲酸甲酯

將氫化三正丁基錫(1.12ml,4.18mmol)、2,2’-偶氮雙(2-甲基丙腈)(35mg,0.21mmol)和甲苯(10ml)的混合物加熱至回流。經(jīng)三小時(shí)逐滴添加(±)-3-(碘甲基)-4-苯基亞氨基-四氫呋喃-3-甲酸甲酯(1.0g,2.78mmol)于甲苯(50ml)中的溶液。將所得混合物在回流下攪拌3小時(shí)。在減壓下濃縮反應(yīng)物。所得粗物質(zhì)在硅膠上進(jìn)行快速層析，用0%-80%etoac/庚烷梯度洗脫，以得到標(biāo)題化合物(0.37g,84%)。

制備例23

(±)-反式-5-(芐基氨基)四氫吡喃-3-甲酸甲酯

將三乙酰氧基硼氫化鈉(0.96g,4.53mmol)添加到(±)-5-氧代四氫吡喃-3-甲酸甲酯(0.33g,2.08mmol)、芐胺(0.31ml,2.84mmol)和1,2-二氯乙烷(5ml)的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌2.5小時(shí)。添加碳酸氫鈉的飽和水溶液(10ml)；用dcm(3×10ml)萃?。环蛛x有機(jī)層；用鹽水(10ml)洗滌；經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮。所得粗物質(zhì)在硅膠上進(jìn)行快速層析，用0%-60%etoac/庚烷梯度洗脫，以得到標(biāo)題化合物(0.085g,16%產(chǎn)率)。。

制備例24

(±)-反式-5-氨基四氫吡喃-3-甲酸甲酯

將10%鈀/碳(0.07g,0.66mmol)添加到(±)-反式-5-(芐基氨基)四氫吡喃-3-甲酸甲酯(0.085g,0.34mmol)和乙醇(8ml)的混合物中。用氫沖洗混合物并將所得混合物在室溫下在氫氣下(1atm)攪拌過(guò)夜。過(guò)濾混合物并在減壓下濃縮以得到標(biāo)題化合物(0.045g,83%產(chǎn)率)。

制備例25

(±)-反式-5-[[(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-羰基]氨基]四氫吡喃-3-甲酸甲酯

將edci(0.087g,0.45mmol)添加到(–)-(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸(0.087g,0.29mmol)、(±)-反式-5-氨基四氫吡喃-3-甲酸甲酯(0.045g,0.28mmol)、hobt(9mg,0.06mmol)、三乙胺(0.15ml,1.08mmol)于dcm(5ml)中的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。所得混合物在硅膠上進(jìn)行快速層析，用5%-100%etoac/庚烷梯度洗脫，以得到標(biāo)題化合物(0.085g,66%)。。

制備例26

(±)-反式-3-(二芐基氨基)環(huán)己烷甲酸甲酯

將碳酸鉀(3.53g,25.6mmol)和芐基溴(1.9ml,15.9mmol)添加到(±)-反式-3-氨基環(huán)己烷甲酸甲酯(1.07g,6.8mmol)于乙腈(40ml)中的混合物中。將所得混合物加熱至80℃并攪拌5小時(shí)。冷卻混合物并添加乙腈(40ml)。經(jīng)由硅藻土過(guò)濾并在減壓下濃縮濾液。所得粗物質(zhì)在硅膠上進(jìn)行快速層析，用0%-20%etoac/己烷梯度洗脫，以得到標(biāo)題化合物(1.6g,70%)。。

制備例27

(±)-2-[反式-3-(二芐基氨基)環(huán)己基]丙-2-醇

將甲基溴化鎂(于乙醚中的3.0m溶液,16ml,48mmol)添加到保持在0℃下的(±)-反式-3-(二芐基氨基)環(huán)己烷甲酸甲酯(1.6g,4.7mmol)和thf(50ml)的混合物中。使反應(yīng)溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^(guò)夜。添加水(25ml)并經(jīng)由硅藻土過(guò)濾。收集含水濾液。用etoac(50ml)萃取所得含水物質(zhì)。收集有機(jī)萃取物；經(jīng)na2so4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮。添加etoac(50ml)；用飽和nh4cl水溶液(2×25ml)洗滌；經(jīng)na2so4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮以得到標(biāo)題化合物(1.1g,69%)。。

制備例28

2-[(1s,3s)-3-(二芐基氨基)環(huán)己基]丙-2-醇

將(±)-2-[反式-3-(二芐基氨基)環(huán)己基]丙-2-醇(1.1g,3.26mmol)溶解在乙醇(13mg/ml)中。該物質(zhì)進(jìn)行手性sfc(chiralpakia,2cm×15cm)，使用含12%(0.1%二甲基乙胺/i-proh)的co2(scf)作為流動(dòng)相，在220nm下，流速70ml/分鐘。收集并合并洗脫的第一級(jí)分并在減壓下濃縮以提供標(biāo)題化合物(0.54g,49%)，ee=>99%。ms(m/z):338(m+h)⁺。sfc分析方法(chiralpakia,(15cm×0.46cm)使用含10%(0.1%二甲基乙胺/i-proh)的co2(scf)作為流動(dòng)相，在220nm下，流速3ml/分鐘)。

制備例29

2-[(1s,3s)-3-氨基環(huán)己基]丙-2-醇鹽酸鹽

將氫氧化鈀(20%/碳,0.51g,3.7mmol)添加到parr?振動(dòng)容器中的2-[(1s,3s)-3-(二芐基氨基)環(huán)己基]丙-2-醇(0.54g,1.6mmol)于meoh(20ml)中的混合物中。用氫沖洗并將容器增壓至414kpa。在室溫下將混合物振搖4天。經(jīng)由硅藻土過(guò)濾混合物并在減壓下濃縮濾液。在乙醚(25ml)和dcm(25ml)中稀釋混合物。添加hcl(1,4-二氧雜環(huán)己烷中的4.0m溶液,0.8ml)并在減壓下濃縮以得到標(biāo)題化合物(0.24g,77%)。。

制備例30

n-[(1rs,2rs,4sr,6rs)-6-(羥甲基)降冰片烷-2-基]氨基甲酸叔丁酯

將(乙酰丙酮)二羰基銠(10mg,0.03mmol)、1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵(27mg,0.05mmol)、二環(huán)[2.2.1]庚-2-烯-5-甲酸甲酯(2.5g,11.9mmol)和叔丁醇(25ml)合并在帶有機(jī)械攪拌器的parr?高壓釜中。用合成氣(一氧化碳和氫氣的1:1混合物，310kpa)沖洗和增壓容器。攪拌過(guò)夜。在減壓下濃縮混合物。在dcm(29ml)和meoh(2.9ml)中稀釋。添加硼氫化鈉(0.26g,6.9mmol)并在室溫下攪拌20min。添加dcm(60ml)并用飽和碳酸鈉水溶液(2x25ml)和鹽水(25ml)洗滌。經(jīng)na2so4干燥有機(jī)層；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮。所得粗物質(zhì)在硅膠上進(jìn)行快速層析，用30%dcm、30%叔丁基甲基醚和40%己烷的溶液洗脫，以得到為非對(duì)映異構(gòu)體混合物的標(biāo)題化合物(0.58g,21%)。

制備例31

[(1rs,2rs,4sr,6rs)-6-氨基降冰片烷-2-基]甲醇鹽酸鹽

將hcl(1,4-二氧雜環(huán)己烷中的4.0m溶液,2.1ml,8.3mmol)添加到保持在0℃下的n-[(1rs,2rs,4sr,6rs)-6-(羥甲基)降冰片烷-2-基]氨基甲酸叔丁酯(0.2g,0.83mmol)于dcm(8ml)中的混合物中。使所得混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?小時(shí)。在減壓下濃縮混合物以得到標(biāo)題化合物(0.15g,100%)。

制備例32

((順式-4-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)己基)甲基)(氨磺?；?氨基甲酸叔丁酯

將偶氮二甲酸二異丙酯(1.6ml,7.8mmol)添加到順式-4-(羥甲基)環(huán)己基氨基甲酸叔丁酯(1.5g,6.5mmol)、n-氨磺?；被姿崾宥□?1.9g,9.8mmol)、三苯基膦(2.1g,7.8mmol)和etoac(33ml)的混合物中。在室溫下攪拌過(guò)夜。添加水(50ml)；用etoac(2×50ml)萃??；收集有機(jī)萃取物。用鹽水(25ml)洗滌有機(jī)萃取物；經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮。所得粗物質(zhì)在硅膠上進(jìn)行快速層析，用10%-80%etoac/己烷梯度洗脫，以得到標(biāo)題化合物(1.78g,67%)。。

制備例33

順式-1-氨基-4-[(氨磺?；被?甲基]環(huán)己烷鹽酸鹽

將hcl(1,4-二氧雜環(huán)己烷中的4.0m溶液,15ml,60mmol)添加到((順式-4-((叔丁氧基羰基)氨基)環(huán)己基)甲基)(氨磺?；?氨基甲酸叔丁酯(1.78g,4.37mmol)中。將所得混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。在減壓下濃縮。在meoh(10ml)中稀釋并逐滴添加乙醚(150ml)，同時(shí)劇烈攪拌。通過(guò)真空過(guò)濾收集所得白色沉淀物以得到標(biāo)題化合物(0.68g,56%)。。

制備例34

(1rs,3rs)-3-((s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酰胺基)環(huán)己烷-1-甲酸甲酯

將三乙胺(0.9ml,7mmol)添加到(–)-(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸(0.8g,3mmol),(±)-反式-3-氨基環(huán)己烷甲酸甲酯鹽酸鹽(0.5g,3mmol)、bop(2.0g,3mmol)和dmf(5ml)的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。添加碳酸氫鈉的飽和水溶液(20ml)并用etoac(2×25ml)萃取。收集有機(jī)萃取物；用鹽水(25ml)洗滌；經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮。所得粗物質(zhì)在硅膠上進(jìn)行快速層析，用10%-90%etoac/己烷梯度洗脫，以得到標(biāo)題化合物(1.00g,80%)。。

實(shí)施例1

(s)-n-((2s,4s)-2-(羥甲基)四氫-2h-吡喃-4-基)-3,3-二甲基-1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酰胺

將為dmf(152ml)中的漿液形式的苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷子基鏻六氟磷酸鹽(153g,293mmol)添加到(–)-(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸(76.0g,245mmol)、((2s,4s)-4-氨基四氫-2h-吡喃-2-基)甲醇鹽酸鹽(72%純,57.37g,246mmol)、三乙胺(153ml,1.10mol)和dmf(380ml)的冷(10℃)混合物中，同時(shí)保持內(nèi)部反應(yīng)溫度低于20℃。此后使混合物溫?zé)嶂潦覝夭⑵鋽嚢?0分鐘。將混合物倒入冰水中(1.5l)，同時(shí)將其攪拌。用dcm(2×600ml)萃取混合物并用半飽和nacl水溶液(1.0l)洗滌合并的有機(jī)萃取物。有機(jī)溶液經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮濾液以得到濕固體。用水研磨濕固體并通過(guò)過(guò)濾分離固體。再次用水(1.5l)研磨固體并通過(guò)過(guò)濾分離固體。用水(2×250ml)洗滌固體。留出該第一批次的分離固體。收集水洗液；用dcm(2×800ml)萃?。缓喜cm萃取物。將第一批次的分離固體添加到合并的dcm萃取物中并用hcl水溶液(2.5m,2×800ml)洗滌。分離水層并添加50%naoh水溶液至水層直至ph達(dá)到12以誘發(fā)沉淀。過(guò)濾混合物以收集所得固體。用水(2×300ml)沖洗固體。將固體在真空爐中在50℃干燥3小時(shí)。將固體溶解在meoh(1.2l)中；添加巰丙基介孔二氧化硅清除樹脂(1.2mmol/g,715m²/g,54μm平均粒徑)；并在50℃攪拌過(guò)夜。過(guò)濾除去固體，收集濾液。用1:1ch2cl2:meoh(2×500ml)沖洗固體。合并濾液并在減壓下濃縮以得到白色固體。用tbme(1.5l)研磨固體并收集固體。自熱etoh(1.8l)結(jié)晶固體。將固體在真空爐中在50℃干燥2.5小時(shí)以得到為結(jié)晶白色固體的標(biāo)題化合物(76.7g,76%)。。

表1中的下列實(shí)施例可基本通過(guò)制備例34的程序使用適當(dāng)?shù)钠鹗及反?±)-反式-3-氨基環(huán)己烷甲酸甲酯鹽酸鹽和適當(dāng)?shù)钠鹗剪人岽?–)-(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸而制備。

純化方法(purifmeth):a=粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠正相柱層析純化，使用etoac/己烷梯度洗脫。b=粗產(chǎn)物通過(guò)c18反相柱層析純化，使用乙腈和水的梯度洗脫。c=粗產(chǎn)物通過(guò)chiralpakas-h(21×150mm)的手性柱層析純化，使用含15%ipa的co2作為流動(dòng)相，流速70ml/min。

實(shí)施例13

(4s)-n-[(1s,3s)-3-(1-羥基-1-甲基-乙基)環(huán)己基]-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酰胺

將n,n-二異丙基乙胺(0.7ml,4mmol)和hatu(0.31g,0.8mmol)添加到(–)-(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸(0.2g,0.67mmol)、2-[(1s,3s)-3-氨基環(huán)己基]丙-2-純鹽酸鹽(0.13g,0.67mmol)和dmf(5ml)的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌45分鐘。所得反應(yīng)混合物進(jìn)行c18上的反相快速層析，用5%-80%acn/水的梯度洗脫，以得到標(biāo)題化合物(0.26g,88%)。。

基本通過(guò)實(shí)施例13的程序使用適當(dāng)?shù)钠鹗剪人岽?–)-(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸來(lái)制備表2中的下列實(shí)施例。

基本通過(guò)制備例25的程序使用適當(dāng)?shù)钠鹗及反?±)-反式-5-氨基四氫吡喃-3-甲酸甲酯和適當(dāng)?shù)钠鹗剪人岽?–)-(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-甲酸來(lái)制備表3中的下列實(shí)施例。

純化方法:a=粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠正相柱層析純化，使用etoac/己烷梯度洗脫。c=粗產(chǎn)物通過(guò)手性柱層析純化，使用手性sfc(chiralcelod-h,21×250mm)，使用含25%etoh(0.2%ipam)的co2(scf)作為流動(dòng)相，流速70ml/min。

實(shí)施例18

(s)-n-((3rs,5sr)-5-(羥甲基)四氫-2h-吡喃-3-基)-3,3-二甲基-1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酰胺

將5nnaoh水溶液(0.5ml)添加到(3rs,5rs)-5-((4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-羰基]氨基]四氫吡喃-3-甲酸甲酯(0.085g,0.19mmol)、meoh(2ml)和thf(2ml)的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。添加5nhcl水溶液(0.5ml)并濃縮。粗混合物在thf(6ml)中稀釋并冷卻至0℃。逐滴添加硼烷-thf絡(luò)合物于thf中的2m溶液(0.15ml,0.3mmol)。將混合物緩慢溫?zé)嶂潦覝夭⒃谑覝叵聰嚢柽^(guò)夜。添加碳酸氫鈉飽和水溶液(10ml)并用etoac(3×10ml)萃取混合物。收集有機(jī)萃取物；用鹽水(10ml)洗滌；經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮。所得粗物質(zhì)進(jìn)行硅膠上的快速層析，用100%etoac洗脫以得到標(biāo)題化合物(0.046g,經(jīng)2個(gè)步驟59%產(chǎn)率)。。

實(shí)施例19

甲基(1rs,3rs)-3-((s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-羰基]氨基]環(huán)己烷甲酸

將5nnaoh水溶液(2.2ml)添加到(±)-反式-[[(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-羰基]氨基]環(huán)己烷-3-甲酸甲酯(1.0g,2.2mmol)、meoh(2ml)和thf(8ml)的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。添加5nhcl水溶液(2.2ml)以調(diào)節(jié)ph至6.5。用etoac(2×25ml)萃取并收集有機(jī)萃取物。用鹽水(25ml)洗滌有機(jī)萃取物；經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮以得到標(biāo)題化合物(0.935g,98%)。。

實(shí)施例20

(s)-n-((1rs,3rs)-3-(乙基氨基甲酰基)環(huán)己基)-3,3-二甲基-1-(8-甲基喹啉-2-基)哌啶-4-甲酰胺

將三乙胺(0.7ml,5mmol)添加到(±)-反式-3-[[(4s)-3,3-二甲基-1-(8-甲基-2-喹啉基)哌啶-4-羰基]氨基]環(huán)己烷甲酸(0.9g,2mmol)、乙胺(2ml,3mmol)、bop(1.0g,3mmol)和dmf(4ml)的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。添加碳酸氫鈉的飽和水溶液(20ml)。用etoac(2×50ml)萃取所得混合物。收集有機(jī)萃取物；用鹽水(3×25ml)洗滌；經(jīng)mgso4干燥；過(guò)濾；收集濾液；并在減壓下濃縮。所得物質(zhì)進(jìn)行c18硅膠上的反相快速層析，使用20%-80%乙腈(0.1%甲酸)/水(0.1%甲酸)梯度洗脫，以得到標(biāo)題化合物(0.25g,30%)。。

生物測(cè)定

人mpges-1酶抑制測(cè)定

將人mpges-1(invitrogen?(cat#97002rg,克隆id6374722))亞克隆至pcdna3.1并在293e細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)。基于已公布的方法由細(xì)胞團(tuán)塊制備微粒體(oullet等人,purificationandcharacterizationofrecombinantmicrosomalprostaglandinesynthase-1,proteinexpressionandpurification,26pp489-495(2002);和thoren等人,humanmicrosomalprostanglandinesynthase-1,j.biolchem.278(25)pp22199-22209(2003))。簡(jiǎn)言之，將團(tuán)塊引入均化緩沖液(15mmtris-hcl,ph8.0;0.25m蔗糖;0.1mmedta;1mm谷胱甘肽)并在冰上超聲處理5×30秒。勻漿在4℃下以5,000×g離心10分鐘。傾析上清液部分并裝載至beckmanquick-seal?管中并在4℃下以150,000×g離心90分鐘。通過(guò)傾析棄去上清液部分并將團(tuán)塊再懸浮于測(cè)定緩沖液(10mm磷酸鈉，ph7.0;10%甘油;2.5mm谷胱甘肽；完全蛋白酶抑制劑混合物(cocktail)(roche))中。使用piercecoomassieplus?試劑測(cè)定蛋白濃度。

對(duì)于酶測(cè)定，將微粒體稀釋至測(cè)定緩沖液并將14μl/孔的所得溶液添加到384孔測(cè)定板中。在tecan_mc384?上生成化合物稀釋板(nunccat#249944)并將4μl/孔添加到測(cè)定板中。在臨用前將前列腺素h2(pgh2)稀釋至測(cè)定緩沖液并將14μl/孔添加到測(cè)定板中。終濃度為6.55μg/ml微粒體和1.67μmpgh2。在室溫下孵育1.5分鐘后，添加5μl/孔的1mg/mlsncl2/0.5nhcl以中止反應(yīng)。將5μl中止的反應(yīng)物轉(zhuǎn)移至含有45μl0.1%甲酸的384孔板并將板在–80℃下儲(chǔ)存。將板運(yùn)至agilenttechnologies（之前為biociuslifesciences(wakefield,ma01880)）用于pge2的標(biāo)準(zhǔn)lc/ms分析。使用數(shù)據(jù)計(jì)算ic50(μm)。實(shí)施例的化合物以小于100nm的ic50μm值抑制人mpges-1。示例性的實(shí)施例1的化合物以0.00193,+0.00064(n=17)的ic50μm值抑制人mpges-1。該結(jié)果證實(shí)示例性的實(shí)施例1的化合物在分離的酶制品中是強(qiáng)效的mpges-1酶抑制劑。

用于測(cè)量類花生酸選擇性的基于細(xì)胞的測(cè)定

人上皮肺癌細(xì)胞株a549獲自atcc(ccl-185)并在kaighn’sf12細(xì)胞培養(yǎng)基+10%胎牛血清(fbs)(平板培養(yǎng)基)中在標(biāo)準(zhǔn)5%co2增濕氣氛下在37℃下維持。細(xì)胞每周以1:3繼代兩次。

對(duì)于該測(cè)定，通過(guò)用pbs洗滌一次、接著用胰蛋白酶/edta洗滌一次，從瓶中釋放細(xì)胞。在37℃下3-5分鐘后，將細(xì)胞懸浮在平板培養(yǎng)基中并以2,000rpm在25℃下離心5分鐘。抽吸上清液并將細(xì)胞團(tuán)塊再懸浮于f12k平板培養(yǎng)基中。通過(guò)在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上對(duì)已在pbs和臺(tái)盼藍(lán)中稀釋的細(xì)胞等分試樣進(jìn)行計(jì)數(shù)來(lái)測(cè)定細(xì)胞數(shù)目。在處理前24小時(shí)將細(xì)胞以40,000/孔鋪板于96孔falcon板。將化合物在screenmates管中在dmso中稀釋至100×終濃度。從細(xì)胞中除去培養(yǎng)基并向細(xì)胞添加新鮮培養(yǎng)基(90μl/孔)。以1μl/孔(n=2)添加化合物以得到各自的7個(gè)濃度。在37℃、5%co2下用化合物預(yù)處理細(xì)胞30分鐘。通過(guò)添加在平板培養(yǎng)基中稀釋至10×終濃度的重組人白介素(rhil-1β)來(lái)誘發(fā)前列腺素e2生成。添加10μl/孔等分試樣以得到0.1ng/ml的最終rhil-1β濃度。處理周期為大約18小時(shí)。移出條件培養(yǎng)基至v-底聚丙烯板。根據(jù)生產(chǎn)商的方案(cayman)，通過(guò)特定酶免疫分析eias測(cè)定條件培養(yǎng)基的pge2水平和前列腺素i2(pgi2)水平。簡(jiǎn)言之，將條件培養(yǎng)基(1μl)添加到涂覆有捕獲抗體并含有生產(chǎn)商提供的eia緩沖液(49μl)的96孔板的各孔中。用eia緩沖液(50μl)稀釋示蹤物。用eia緩沖液(50μl)稀釋檢測(cè)抗體。板用膠粘密封膜覆蓋并在室溫下在定軌振蕩器上以100rpm孵育1小時(shí)。將洗滌緩沖液稀釋至millipore純凈水中，并將板用平板清洗器清洗(5×350μl/孔)。將底物(ellman’s試劑)用millipore純凈水稀釋，然后以200μl/孔添加到板中。在室溫下在定軌振蕩器上以100rpm大約90-120分鐘后，在讀板器上在a412下讀板。使用pge2的標(biāo)準(zhǔn)曲線校正未知物。示例性的實(shí)施例1的化合物以0.00471μm+0.00301(n=2)的ic50抑制pge2形成。

人全血分析

收集正常自愿供者的血液于肝素鈉vacutainer管中。選擇供者的部分依據(jù)為確認(rèn)其在供給的兩周內(nèi)未服用nsaids、阿司匹林、celebrex?或糖皮質(zhì)激素。將所有管/供者匯集到250mlcorning圓錐形離心管中并將436.5μl/孔分配到深孔聚丙烯板中。化合物在dmso中稀釋至100×最終濃度并一式兩份或一式三份添加4.5μl/孔以得到7點(diǎn)曲線。血液在37℃、5%co2下在增濕氣氛下用化合物預(yù)處理，用microclimeenvironmental微板蓋覆蓋，30分鐘后，每孔添加9μl的5mg/mllps(sigma,serotype0111:b4)于1mg/mlbsa/pbs中的溶液以得到100μg/ml的最終lps濃度。將板在37℃、5%co2下在增濕氣氛下孵育20-24小時(shí)。板用鋁箔蓋緊密密封并在冰上冷凍大約1小時(shí)。然后將板以1,800×g在4℃下在eppendorf5810r離心器中離心10分鐘。使用具有無(wú)菌過(guò)濾嘴的raininl200從細(xì)胞層移去血漿并轉(zhuǎn)移至v-底聚丙烯板。將100微升定量轉(zhuǎn)移至costar聚集管座中并添加400μl/孔的meoh中止試劑和內(nèi)標(biāo)d4-pge2、d4-pgf2α和d4-txa2β。將樣品渦旋5分鐘并在–20℃下放置至少一小時(shí)。樣品在eppendorf5810r中以4000rpm離心10分鐘。

使用watershlb30mg/床96孔板在真空歧管上進(jìn)行固相萃?。翰襟E1，基質(zhì)用meoh(1ml)洗滌，接著用0.1%甲酸/水(1ml)洗滌；步驟2，400μl樣品連同0.1%甲酸/水(900μl)一起涂覆并允許結(jié)合5分鐘；步驟3，基質(zhì)用0.1%甲酸/水(600μl)洗滌，接著用80/20水/meoh(600μl)洗滌；步驟4，產(chǎn)物用2-500μl體積的etoac稀釋；步驟5，樣品在氮?dú)庀赂稍锊⒃?5/25水/含0.1%甲酸的乙腈(50μl)中重構(gòu)。通過(guò)lc/ms/ms分析產(chǎn)物。在該分析中，實(shí)施例1以0.00205±0.00082(n=11)的ic50抑制pge2形成。該結(jié)果支持實(shí)施例1在人全血中抑制pge2合成。