1.一種游離DNA文庫構(gòu)建方法,其特征在于,包括以下步驟:
1)抽提血漿中游離DNA,加入游離DNA末端補平酶和dNTP,補平游離DNA末端并在游離DNA的3’端增加堿基A;
2)直接往步驟1反應體系中加入磷酸化酶去除多余的dNTP;
3)直接往步驟2反應體系中加入DNA連接試劑,使目標待測DNA與DNA接頭連接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述構(gòu)建方法還包括步驟4):將步驟3)的產(chǎn)物用硅膠柱或磁性顆粒純化。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述游離DNA末端補平酶為T4 DNA聚合酶、Klenowexo-、T4 DNA磷酸激酶(T4 DNA PNK)、Taq聚合酶或Klenow酶中的一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的構(gòu)建方法,其特征在于,步驟1反應條件是37℃20分鐘,反應后無需純化。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述磷酸化酶為細菌堿性磷酸酶(BAP)或蝦源磷酸酶(SAP)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的構(gòu)建方法,其特征在于,步驟2反應條件是37℃1分鐘,75℃變性,反應后無需純化。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述DNA連接試劑主要由T4DNA連接酶和DNA接頭組成。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的構(gòu)建方法,其特征在于,步驟3反應條件是20℃15~20分鐘,反應后無需純化。
9.一種構(gòu)建游離DNA文庫的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒主要包括游離DNA末端補平酶、dNTP、ATP、磷酸化酶、DNA連接試劑、Tris、二硫蘇糖醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒,其特征在于,所述游離DNA末端補平酶為T4 DNA聚合酶、Klenowexo-、T4 DNA磷酸激酶(T4 DNA PNK)、Taq聚合酶或Klenow酶中的一種或多種。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒,其特征在于,所述磷酸化酶為細菌堿性磷酸酶(BAP)或蝦源磷酸酶(SAP)。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒,其特征在于,所述DNA連接試劑主要由T4 DNA連接酶和DNA接頭組成。