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一種檢測豬NLRP12的核苷酸序列及應(yīng)用的制作方法

文檔序號:11809718閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一組檢測豬NLRP12的核苷酸序列,其特征在于,該核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.3所示,其中SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.2分別為檢測豬NLRP12的正義引物和反義引物,序列SEQ ID NO.3為檢測豬NLRP12的熒光探針。

2.權(quán)利要求1所述的檢測豬NLRP12的核苷酸序列,其特征在于:所述探針序列SEQ ID NO.3的5’端標(biāo)記報告熒光基團FAM,3’端標(biāo)記淬滅熒光基團MGB。

3.一種采用權(quán)利要求1所述的核苷酸序列檢測豬NLRP12的方法,其特征在于,由以下組分作為檢測NLRP12所用的必備材料:

1)裂解液;

2)RT反應(yīng)液,包括:5′RT緩沖液、25 mM MgCl2、2.5 mM dNTPs、200 mM隨機引物、40 U/mL RNase抑制劑、200 U/mL反轉(zhuǎn)錄酶M-MLV;

3)qPCR反應(yīng)液,包括:10′PCR緩沖液、25 mM MgCl2、2.5 mM dNTPs(each)、2.5 U/mL Taq DNA聚合酶、20 mM正義引物、20 mM反義引物、20 mM熒光探針;

4)DEPC水:用自來水三次蒸餾獲取三蒸水,在三蒸水中加入DEPC至終濃度為0.1%,37°C攪拌處理12 h,121°C高壓蒸汽滅菌15 min;

5)豬NLRP12標(biāo)準(zhǔn)品:為體外轉(zhuǎn)錄的RNA片段,豬NLRP12標(biāo)準(zhǔn)品的序列為序列表SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列;

其中,正義引物為序列表SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列,反義引物為序列表SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列,熒光探針為序列表SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列,其中5’端標(biāo)記報告熒光基團FAM,3’端標(biāo)記淬滅熒光基團MGB。

4.權(quán)利要求3所述的檢測方法,其特征在于,所述RT反應(yīng)液中各成分的使用濃度為1′RT緩沖液、2.5 mM MgCl2、0.25 mM dNTPs、20 mM隨機引物、1 U/mL的RNase抑制劑、5 U/mL的反轉(zhuǎn)錄酶M-MLV。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測方法,其特征在于,所述qPCR反應(yīng)液中各成分的使用濃度為1′PCR緩沖液、3.5mM MgCl2、0.2 mM dNTPs、0.05 U/mLTaq DNA聚合酶、0.2 mM正義引物、0.2 mM反義引物、0.1 mM熒光探針。

6.權(quán)利要求3所述的檢測方法,其中所述的檢測豬NLRP12的方法指的是:在豬組織器官中NLRP12 mRNA表達方面的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求3所述采用檢測豬NLRP12的核苷酸序列檢測豬NLRP12的方法在豬組織器官中NLRP12 mRNA表達方面的應(yīng)用。

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