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一種人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉的制備方法及制得的凍干粉與流程

文檔序號:12457433閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種誘導(dǎo)人間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)干細(xì)胞因子的方法,其特征在于:將人間充質(zhì)干細(xì)胞置于2~10℃的低溫下培養(yǎng)。

2.一種人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉的制備方法,其特征在于:包括以下步驟:

1)將人間充質(zhì)干細(xì)胞置于2~10℃的低溫下進(jìn)行增殖性培養(yǎng);

2)收集培養(yǎng)上清液,濃縮、凍干后,即得人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉的制備方法,其特征在于:所述步驟1)中,人間充質(zhì)干細(xì)胞為傳代倍數(shù)為1~10代的低傳代人間充質(zhì)干細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉的制備方法,其特征在于:所述步驟1)中,培養(yǎng)時使用的培養(yǎng)基為DMEM無血清培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉的制備方法,其特征在于:所述步驟1)具體為:在2~10℃的低溫下培養(yǎng)人間充質(zhì)干細(xì)胞,當(dāng)人間充質(zhì)干細(xì)胞生長到70-90%匯合度時,收集培養(yǎng)上清液,并與DMEM無血清培養(yǎng)基混合,繼續(xù)用于人間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)大培養(yǎng),如此反復(fù)至細(xì)胞傳代至10~15代。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉的制備方法,其特征在于:所述培養(yǎng)的時間為48~96h。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉的制備方法,其特征在于:所述步驟1)中,人間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取方法為:(1)人間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng):用含有胎牛血清的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)傳代人間充質(zhì)干細(xì)胞;(2)人間充質(zhì)干細(xì)胞的收集:收集低傳代人間充質(zhì)干細(xì)胞并用生理鹽水洗脫數(shù)次,然后將其重懸于生理鹽水中,其中低傳代人間充質(zhì)干細(xì)胞是指傳代倍數(shù)為0~10代的人間充質(zhì)干細(xì)胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉的制備方法,其特征在于:所述間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基中的胎牛血清含量小于1%。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉的制備方法,其特征在于:所述步驟2)具體為:①收集培養(yǎng)上清液,在無菌環(huán)境下將人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液置于3.5KDa超濾離心管中,離心;②在無菌環(huán)境下打開離心管,用無菌槍頭吸出離心管中的上清液至3.5KDa透析袋中,在4℃條件下,將透析袋埋入PEG20000中脫水4小時;③將透析袋抽真空,升華干燥,除去冰晶,最后制得凍干粉。

10.根據(jù)權(quán)利要求2~9所述的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉的制備方法制得的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液凍干粉。

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