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一株高效降解氮污染物的芽孢桿菌及其復合菌制劑的制作方法

文檔序號:12457059閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一株高效降解氮污染物的芽孢桿菌,為白翎芽孢桿菌BBHS-01(Bacillus baekryungensis),于2012年12月7日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心進行了保藏,保藏號為:CGMCC NO.6939。

2.一種權利要求1所述的高效降解氮污染物的芽孢桿菌BBHS-01在降解水產養(yǎng)殖污染物中的應用。

3.一種以權利要求1所述的芽孢桿菌BBHS-01為主要成分的復合菌制劑,其特征在于:所述復合菌制劑是由白翎芽孢桿菌BBHS-01、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌以6~8:1:1的細菌數(shù)比例復合而成。

4.一種權利要求3所述的以芽孢桿菌BBHS-01為主要成分的復合菌制劑的制備方法,所述復合菌制劑的制備方法包括以下步驟:

(1)菌種活化與純化:將白翎芽孢桿菌BBHS-01、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌分別接種到改良后的2216E固體培養(yǎng)基上,于28℃培養(yǎng)22小時;所述改良后的2216E固體培養(yǎng)基的配方如下:蛋白胨6.0g、酵母粉3.0g、陳海水1000mL、瓊脂25g以及微量元素液1ml,所述微量元素液的微量元素成分為:0.4g/L的K2HPO4·3H2O,0.3g/L的MgSO4·7H2O,0.5g/L的MnSO4,0.1g/L的FeSO4·7H2O,0.2g/L的CuSO4,調節(jié)pH為7.6,121℃、101KPa滅菌30min;挑取單菌落接種到2216E固體斜面培養(yǎng)基,于28℃純化培養(yǎng)20小時,所得的試管斜面菌株為固體純化菌株,所述2216E固體斜面培養(yǎng)基所含成分同改良后的2216E固體培養(yǎng)基;

(2)制作三角瓶液體菌種:將試管斜面菌株分別接種于改良后的2216E液體培養(yǎng)基上,于28℃、160rpm培養(yǎng)20小時,得到各菌株的三角瓶液體菌種;所述改良后的2216E液體培養(yǎng)基的配方如下:蛋白胨6.0g、酵母粉3.0g、陳海水1000mL、瓊脂25g以及微量元素液1ml,所述微量元素液的微量元素組分為:0.4g/L的K2HPO4·3H2O,0.3g/L的MgSO4·7H2O,0.5g/L的MnSO4,0.1g/L的FeSO4·7H2O,0.2g/L的CuSO4;

(4)混合菌液的制備:將培養(yǎng)好的各菌株的三角瓶液體菌種按照白翎芽孢桿菌BBHS-01、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌以6~8:1:1的細菌數(shù)比例接種到2216E液體培養(yǎng)基中,于28℃、160rpm培養(yǎng)20小時,得到三菌株的三角瓶混合液體菌種;

(5)復合菌制劑的制備:

a.將酵母粉、蛋白胨、氯化鈉、豆粕粉、麥麩皮和水以2:6:1:1:2:10的重量比混合均勻,制成培養(yǎng)基固型物;

b.將沸石粉、花生粕和麥飯石粉以1:1:1的重量比例混合,所得混合物作為輔料填充物;

c.將海泥用粉碎機粉碎,過100目篩,過篩后加入提取罐中,將質量濃度為50%的酒精加入提取罐中,酒精用量為海泥重量的10倍,開啟攪拌,將提取罐置于恒溫水浴搖床,在140rpm、70~80℃條件下提取30min,100目過濾取濾液,濾渣返回提取罐中重復提取一次,100目過濾取濾液,合并兩次所得濾液,得海泥浸出液;

d.稱取以下重量份數(shù)的各組分:碎木屑12~15份、麥秸10~12份、桑葉10~12份、浮萍9~10份、白楊樹皮9~10份、魚鱗5份、苦瓜4~5份、蘆根1份、干酒糟1份、干酵母1份、貝殼粉1份,將稱量好的各組分混勻,并向混合物中加入等量的純化水,攪拌混勻,放入玻璃容器,28℃~30℃條件下避光發(fā)酵56小時,得發(fā)酵產物,將所得發(fā)酵產物用100目篩網(wǎng)過濾,取過濾所得的發(fā)酵液;

e.將培養(yǎng)基固型物、海泥浸出液、三角瓶混合液體菌種按照4:1:60的重量比例均勻混合,然后置于發(fā)酵罐內于28℃,攪拌速度180~200rpm,通氣量為4V/V.min,培養(yǎng)5d,得到混合發(fā)酵菌液;

f.將輔料填充物、發(fā)酵液、膨潤土、混合發(fā)酵菌液按照1:1~2:1:8~9的重量比混合,置于50℃烘干機烘干,粉碎,制成復合菌制劑。

5.根據(jù)權利要求4所述的復合菌制劑的制備方法,其特征在于:所述沸石粉和麥飯石粉的粒徑為100目,所述膨潤土的粒徑為150目。

6.根據(jù)權利要求4所述的復合菌制劑的制備方法,其特征在于:步驟(4)中,白翎芽孢桿菌BBHS-01、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌以7:1:1的細菌數(shù)比例接種到2216E液體培養(yǎng)基中。

7.根據(jù)權利要求4所述的復合菌制劑的制備方法,其特征在于:步驟(5)的d操作步驟中,稱取的各組分的重量份數(shù)如下:碎木屑15份、麥秸12份、桑葉10份、浮萍10份、白楊樹皮9份、魚鱗5份、苦瓜4份、蘆根1份、干酒糟1份、干酵母1份、貝殼粉1份。

8.根據(jù)權利要求4-7中任一項所述的復合菌制劑的制備方法,其特征在于:步驟(5)的f操作步驟中,輔料填充物、發(fā)酵液、膨潤土混合發(fā)酵菌液按照1:2:1:8的重量比混合。

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