1.一種體外三維呼吸道干/祖細胞的培養(yǎng)方法,其特征在于:具體步驟如下:
(1)將呼吸道干/祖細胞與MLg細胞均勻混合在50μl的含10%胎牛血清的HBSS緩沖液里,其中,呼吸道干/祖細胞的用量為1000-10000細胞/小室,MLg細胞用量為200000細胞/小室,加入50μl Matrigel基質膠,繼續(xù)混合均勻后將其加入細胞培養(yǎng)小室內;
(2)于37℃培養(yǎng)箱中靜置30分鐘,使Matrigel基質膠凝固;
(3)向細胞培養(yǎng)小室下方的對應孔板中加入410μl DMEM/F12培養(yǎng)基,將孔板置于細胞培養(yǎng)箱內培養(yǎng),每隔一天換一次培養(yǎng)基,培養(yǎng)14天后呼吸道干/祖細胞長成球狀結構。
2.根據(jù)權利要求1所述的體外三維呼吸道干/祖細胞的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述呼吸道干/祖細胞為懸浮人、小鼠或其它哺乳動物的呼吸道干/祖細胞。
3.根據(jù)權利要求1所述的體外三維呼吸道干/祖細胞的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述細胞培養(yǎng)小室為德國Greiner Bio-One 1孔圓形可反復使用的細胞培養(yǎng)小室。
4.根據(jù)權利要求1所述的體外三維呼吸道干/祖細胞的培養(yǎng)方法,其特征在于:所述DMEM/F12培養(yǎng)基包括10%胎牛血清、青霉素、鏈霉素、胰島素、運鐵蛋白、亞硒酸鈉、SB431542和蒸餾水,其中,每100ml DMEM/F12培養(yǎng)基含10ml胎牛血清,10000U青霉素,10mg鏈霉素,1mg胰島素,0.55mg運鐵蛋白,0.5μg亞硒酸鈉、10μM SB431542,其余為蒸餾水。