本發(fā)明涉及化學(xué)合成領(lǐng)域，尤其涉及一種多肽合成方法。

背景技術(shù)：

多肽合成通過在合成儀中依次加入合成物質(zhì)，對氨基酸進(jìn)行加肽鏈合成，形成所需序列的多肽產(chǎn)物。傳統(tǒng)多肽合成工藝中，采用普通合成儀，通過簡單控制實現(xiàn)依次加料合成，合成效率低，產(chǎn)量小。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是解決上述不足，提供一種高效自動化的多肽合成方法。

本發(fā)明提供的一種高效自動化的多肽合成方法，其具體步驟如下：

步驟（1）、使用樹脂作為不溶性的固相載體，將其投入合成儀反應(yīng)器中，并啟動合成儀。

步驟（2）、將一個氨基被封閉基團(tuán)保護(hù)的氨基酸溶劑通過合成儀自動加入到反應(yīng)器中，使得一個氨基被封閉基團(tuán)保護(hù)的氨基酸共價連接在固相載體上。通過加入相應(yīng)的溶劑反應(yīng)脫掉氨基的保護(hù)基，將第一個氨基酸接到了固相載體上。

步驟（3）、在步驟（2）反應(yīng)完成后，通過合成儀中蠕動泵注入相應(yīng)序列氨基酸溶液，并吹入氮?dú)夤呐莼旌希铣蛇^程中采用微波加熱，提高合成速度；固相載體上的氨基酸中的氨基被封閉的第二個氨基酸的羧基通過活化反應(yīng)被活化，羧基被活化的第二個氨基酸再與已接在固相載體的第一個氨基酸的氨基反應(yīng)形成肽鍵，使得固相載體上生成一個帶有保護(hù)基的氨基酸肽鏈。

步驟（4）、通過合成儀廢液排放系統(tǒng)將步驟（3）完成后的廢液排出。

步驟（5）、通過合成儀的清洗管路對步驟（4）反應(yīng)后的合成半成品加入溶劑進(jìn)行清洗，清洗后將廢液排出。

步驟（6）、將步驟（5）完成后的反應(yīng)器中通過合成儀加入相關(guān)溶劑脫掉多肽合成物上氨基的保護(hù)基，然后進(jìn)行廢液排放，廢液排放完成后加入溶劑進(jìn)行清洗操作。

步驟（7）、將步驟（6）完成后的反應(yīng)器中通過合成儀蠕動泵加料系統(tǒng)加入對應(yīng)序列的合成氨基酸，控制加入量及合成溫度，完成合成反應(yīng)后，將廢液排出。

步驟（8）、循環(huán)重復(fù)步驟（4）、（5）、（6）、（7），使肽鏈從C端向N端生長，直至達(dá)到所需要肽鏈的長度。

步驟（9）、通過加入相應(yīng)的溶劑反應(yīng)脫去保護(hù)基并水解肽鏈和固相載體之間的酯鍵，并進(jìn)行清洗，得到了合成好的氨基酸多肽產(chǎn)品。

本發(fā)明在多肽合成加料過程中，采用蠕動泵進(jìn)行加料，通過蠕動泵高精度控制加料量，大大減少了反應(yīng)因加料不精確所導(dǎo)致的反應(yīng)不充分，副反應(yīng)增多所導(dǎo)致的雜質(zhì)過多及分離提純困難，提高了合成產(chǎn)品質(zhì)量。本發(fā)明在合成多肽的反應(yīng)過程中，通過微波設(shè)備通入微波，提高反應(yīng)瓶內(nèi)試劑的溫度，提高反應(yīng)速度，在反應(yīng)器內(nèi)布置多個反應(yīng)瓶同時進(jìn)行合成反應(yīng)，采用轉(zhuǎn)盤帶動多個反應(yīng)瓶繞微波發(fā)生器旋轉(zhuǎn)，達(dá)到均衡溫度下進(jìn)行合成反應(yīng)，采用紅外溫度傳感器進(jìn)行檢測反應(yīng)環(huán)境溫度，根據(jù)實測反應(yīng)環(huán)境溫度對微波進(jìn)行調(diào)整以控制溫度在合理反應(yīng)內(nèi)；通過微波加熱提高反應(yīng)環(huán)境溫度以及在反應(yīng)器中布置多個反應(yīng)瓶實現(xiàn)了反應(yīng)高效及批量化生產(chǎn)，大大提升了合成的效率，此合成方法是普通多肽合成設(shè)備的10倍以上，并且微波環(huán)境下能合成部分難合成的多肽鏈。

本發(fā)明具有如下有益效果：生產(chǎn)工藝簡單，操作方便；合成過程中通過微波加溫，提高合成速度，合成效率高；通過蠕動泵高精度控制加料，合成充分，雜質(zhì)少，合成產(chǎn)品純度高，產(chǎn)量大。

具體實施方式

本發(fā)明提供的一種高效自動化的多肽合成方法，其具體步驟如下：

步驟（1）、使用樹脂作為不溶性的固相載體，將其投入合成儀反應(yīng)器中，并啟動合成儀。

步驟（2）、將一個氨基被封閉基團(tuán)保護(hù)的氨基酸溶劑通過合成儀自動加入到反應(yīng)器中，使得一個氨基被封閉基團(tuán)保護(hù)的氨基酸共價連接在固相載體上。通過加入相應(yīng)的溶劑反應(yīng)脫掉氨基的保護(hù)基，將第一個氨基酸接到了固相載體上。

步驟（3）、在步驟（2）反應(yīng)完成后，通過合成儀中蠕動泵注入相應(yīng)序列氨基酸溶液，并吹入氮?dú)夤呐莼旌?，合成過程中采用微波加熱，提高合成速度；固相載體上的氨基酸中的氨基被封閉的第二個氨基酸的羧基通過活化反應(yīng)被活化，羧基被活化的第二個氨基酸再與已接在固相載體的第一個氨基酸的氨基反應(yīng)形成肽鍵，使得固相載體上生成一個帶有保護(hù)基的氨基酸肽鏈。

步驟（4）、通過合成儀廢液排放系統(tǒng)將步驟（3）完成后的廢液排出。

步驟（5）、通過合成儀的清洗管路對步驟（4）反應(yīng)后的合成半成品加入溶劑進(jìn)行清洗，清洗后將廢液排出。

步驟（6）、將步驟（5）完成后的反應(yīng)器中通過合成儀加入相關(guān)溶劑脫掉多肽合成物上氨基的保護(hù)基，然后進(jìn)行廢液排放，廢液排放完成后加入溶劑進(jìn)行清洗操作。

步驟（7）、將步驟（6）完成后的反應(yīng)器中通過合成儀蠕動泵加料系統(tǒng)加入對應(yīng)序列的合成氨基酸，控制加入量及合成溫度，完成合成反應(yīng)后，將廢液排出。

步驟（8）、循環(huán)重復(fù)步驟（4）、（5）、（6）、（7），使肽鏈從C端向N端生長，直至達(dá)到所需要的肽鏈長度。

步驟（9）、通過加入相應(yīng)的溶劑反應(yīng)脫去保護(hù)基并水解肽鏈和固相載體之間的酯鍵，并進(jìn)行清洗，得到了合成好的氨基酸多肽產(chǎn)品。

本發(fā)明在多肽合成加料過程中，采用蠕動泵進(jìn)行加料，通過蠕動泵高精度控制加料量，大大減少了反應(yīng)因加料不精確所導(dǎo)致的反應(yīng)不充分，副反應(yīng)增多所導(dǎo)致的雜質(zhì)過多及分離提純困難，提高了合成產(chǎn)品質(zhì)量。本發(fā)明在合成多肽的反應(yīng)過程中，通過微波設(shè)備通入微波，提高反應(yīng)瓶內(nèi)試劑的溫度，提高反應(yīng)速度，在反應(yīng)器內(nèi)布置多個反應(yīng)瓶同時進(jìn)行合成反應(yīng)，采用轉(zhuǎn)盤帶動多個反應(yīng)瓶繞微波發(fā)生器旋轉(zhuǎn)，達(dá)到均衡溫度下進(jìn)行合成反應(yīng)，采用紅外溫度傳感器進(jìn)行檢測反應(yīng)環(huán)境溫度，根據(jù)實測反應(yīng)環(huán)境溫度對微波進(jìn)行調(diào)整以控制溫度在合理反應(yīng)內(nèi)；通過微波加熱提高反應(yīng)環(huán)境溫度以及在反應(yīng)器中布置多個反應(yīng)瓶實現(xiàn)了反應(yīng)高效及批量化生產(chǎn)，大大提升了合成的效率，此合成方法是普通多肽合成設(shè)備的10倍以上，并且微波環(huán)境下能合成部分難合成的多肽鏈。