本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域，具體涉及一種同時制備海藻糖和葡萄糖酸內(nèi)酯的方法。
背景技術(shù)：
海藻糖是由兩個葡萄糖分子通過α，α-1，1糖苷鍵結(jié)合的非還原性糖，它廣泛存在于細(xì)菌、酵母、藻類、真菌、昆蟲以及一些抗逆性植物中。海藻糖對細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子具有非特異性的保護作用，具有良好的吸水性、穩(wěn)定、且不易焦糖化。外源性的海藻糖同樣對生物體和生物大分子有非特異性的保護作用，海藻糖這種獨特的生物學(xué)性質(zhì)使其在食品、醫(yī)藥、化妝品、疫苗等領(lǐng)域有重要的應(yīng)用。
海藻糖的生產(chǎn)方法主要有微生物提取法、發(fā)酵法和酶轉(zhuǎn)化法。
微生物提取法是指乳酸菌、酵母、霉菌等為提取源，通過干燥、高滲等逆境處理使其積累海藻糖，然后經(jīng)有機溶劑抽提、精制得到海藻糖。此方法海藻糖含量低，提取效率低，成本過高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。
發(fā)酵法一般是先經(jīng)過誘變、細(xì)胞融合、基因重組等方法選育海藻糖的高產(chǎn)菌株，然后采用高濃度培養(yǎng)基及高滲條件發(fā)酵，并在發(fā)酵結(jié)束前進行饑餓處理，從而得到海藻糖較高的培養(yǎng)物。這些菌株包括節(jié)桿菌屬、棒桿菌屬、短桿菌屬、微球菌屬等。但是高產(chǎn)菌株選育困難，轉(zhuǎn)化率低，副產(chǎn)物多，提取精制困難，因此也很難實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
酶法生產(chǎn)海藻糖根據(jù)底物來區(qū)分主要有三種：一是以葡萄糖為底物，二是以麥芽糖為底物，三是以淀粉為底物。
以葡萄糖為底物的反應(yīng)如下：UDP葡萄糖與葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸合成酶的作用下生成海藻糖-6-磷酸，海藻糖-6-磷酸在海藻糖-6-磷酸酯酶的作用下生成海藻糖，由于此方法中的需要以葡萄糖-6-磷酸為糖基受體，UDP-葡萄糖、ADP-葡萄糖、GDP-葡萄糖為糖基供體，需要反應(yīng)體系提供很高的能量，因此難以工業(yè)化生產(chǎn)。
以麥芽糖為底物是在海藻糖合成酶的作用下將α-1，4-麥芽糖在分子內(nèi)重組成α-1，1-海藻糖。以麥芽糖為底物：海藻糖合成酶具有較嚴(yán)格的底物專一性，只作用于麥芽糖生成海藻糖及海藻糖生成麥芽糖。此方法反應(yīng)工藝簡單，易于控制，底物麥芽糖價格便宜，耐熱菌中的海藻糖合成酶熱穩(wěn)定性好，因而使用耐熱菌可避免工業(yè)生產(chǎn)中雜菌的污染，這是較理想的工業(yè)生產(chǎn)途徑。但海藻糖合成酶催化的是一個可逆反應(yīng)，它既可以催化麥芽糖生成海藻糖，也可以催化海藻糖生成麥芽糖，當(dāng)反應(yīng)進行到一定程度時麥芽糖與海藻糖的轉(zhuǎn)化會達到相對平衡，因此轉(zhuǎn)化率達到70％以后難以再有提高。
以淀粉為底物的反應(yīng)是在麥芽寡糖基海藻糖合成酶與麥芽寡糖基海藻糖水解酶的作用下進行的，首先，麥芽寡糖基海藻糖合成酶是一種分子內(nèi)轉(zhuǎn)糖基酶，催化麥芽寡糖(淀粉液化液)還原端的葡萄糖基和相鄰的葡萄糖基間的α-1，4-葡萄糖苷鍵轉(zhuǎn)化成α-1，1-葡萄糖苷鍵，生成麥芽寡糖基海藻糖；麥芽寡糖基海藻糖水解酶專一水解麥芽寡糖基海藻糖的麥芽寡糖基和海藻糖基間的α-1，4-糖苷鍵，以上兩種酶聯(lián)合作用，每次從麥芽寡糖生成海藻糖和少兩個葡萄糖單位的麥芽寡糖。1995年，Nakada等人從Arthrobacter sp.Q36菌株中分離得到一種麥芽寡糖基海藻糖合成酶及一種麥芽寡糖基海藻糖水解酶。麥芽寡糖基海藻糖合成酶可將直鏈麥芽寡糖的還原端的葡萄糖基和相鄰的葡萄糖基間的α，α-1，4葡萄糖苷鍵轉(zhuǎn)化成α，α-1，4葡萄糖苷鍵，生成麥芽寡糖基海藻糖，麥芽寡糖基海藻糖水解酶可將生成的麥芽寡糖基海藻糖水解得到海藻糖及少了兩個葡萄糖基的麥芽寡糖，他們將這兩種酶用于海藻糖的工業(yè)化生產(chǎn)。目前的方法普遍存在，轉(zhuǎn)化時間長的問題，轉(zhuǎn)化效率也有待提高。
葡萄糖酸內(nèi)酯在中國有近30年生產(chǎn)歷史，是優(yōu)良、健康、綠色的食品添加劑，葡萄糖酸內(nèi)酯作為葡萄糖酸的結(jié)晶產(chǎn)物，在水溶液中可以緩慢水解生成葡萄糖酸，形成葡萄糖酸和葡萄糖酸內(nèi)酯的混合溶液。目前工業(yè)上生產(chǎn)葡萄糖酸內(nèi)酯一般先制備葡萄糖酸母液，再通過濃縮結(jié)晶工藝而來。雖然關(guān)于葡萄糖酸及內(nèi)酯的生產(chǎn)工藝方法眾多，但都存在一定程度的限制。
綜上所述，目前本領(lǐng)域缺乏高轉(zhuǎn)化率生產(chǎn)海藻糖的方法，因此迫切需要開發(fā)一種高效的、穩(wěn)定的海藻糖制備方法，而且在現(xiàn)有技術(shù)中也缺少可以生產(chǎn)海藻糖的同時，獲得葡萄糖酸內(nèi)酯的生產(chǎn)方法。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明提供了一種高效、穩(wěn)定生產(chǎn)海藻糖的同時，制備葡萄糖酸內(nèi)酯的生產(chǎn)方法。令人意外地，申請人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的方法，相比于傳統(tǒng)酶法生產(chǎn)海藻糖的方法，可以提高海藻糖轉(zhuǎn)化率8％左右；同時，本發(fā)明的方法兼具利用其副產(chǎn)物生產(chǎn)出葡萄糖酸內(nèi)酯的特點。即，本發(fā)明的第一目的在于提供一種同時制備海藻糖和葡萄糖酸內(nèi)酯的方法，包括以下步驟：
1)使用淀粉酶，將淀粉轉(zhuǎn)化為麥芽糊精；
2)加入普魯蘭酶去除麥芽糊精的支鏈，然后加入麥芽寡糖基海藻糖合成酶與麥芽寡糖基海藻糖水解酶，獲得海藻糖；
3)流加葡萄糖氧化酶與過氧化氫酶，將產(chǎn)生的葡萄糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸鈉；
4)加入糖化酶，糖化結(jié)束后，繼續(xù)流加葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶反應(yīng)，當(dāng)葡萄糖含量低于1g/L的時候結(jié)束反應(yīng)；
5)滅酶、脫色過濾去雜質(zhì)，分離海藻糖和葡萄糖酸；
6)海藻糖濃縮、結(jié)晶、分離干燥獲得海藻糖成品；葡萄糖酸濃縮、結(jié)晶，脫水形成葡萄糖酸內(nèi)酯，將所述葡萄糖酸內(nèi)酯分離、干燥獲得葡萄糖酸內(nèi)酯成品。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述同時制備海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯的方法中，所述步驟1)的反應(yīng)參數(shù)為：pH5.5-6.0，加入淀粉酶后控制溫度90-110℃；所述淀粉質(zhì)量百分比為35％-40％，所述淀粉酶的活力單位為5000-8000U/mL，用量為3.5-6.0g高溫淀粉酶/100g淀粉，處理3-4小時，將淀粉液化為DE值為8-13的麥芽糊精。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述同時制備海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯的方法中，所述步驟2)的反應(yīng)參數(shù)為：
控制溫度60℃，pH5.0-5.5，加入普魯蘭酶，處理6h，將麥芽糊精的支鏈去除，所述普魯蘭酶的活力單位為1000-1500U/mL，用量為0.5-1.0g普魯蘭酶/100g麥芽糊精；
控制溫度40℃，pH5.5-6.0，加入麥芽寡糖基海藻糖合成酶與麥芽寡糖基海藻糖水解酶，處理6h，所述麥芽寡糖基海藻糖合成酶為100-150U/mg、所述麥芽寡糖基海藻糖水解酶的酶活為350-400U/mg，所述麥芽寡糖基海藻糖合成酶的用量為35-40g/100g麥芽糊精、所述麥芽寡糖基海藻糖水解酶的酶活為15-20g/100g麥芽糊精。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述同時制備海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯的方法中，所述步驟3)的反應(yīng)參數(shù)為：控制PH5.5-6.0，流加所述葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶開始反應(yīng)，其中所述葡萄糖氧化酶酶活為6500U/ml，所述過氧化氫酶酶活為37.5萬U/ml。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述同時制備海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯的方法中，所述步驟4)的反應(yīng)參數(shù)為：控制溫度60℃，pH4.0-4.5，加入糖化酶，所述糖化酶的活力單位為10萬U/mL，所述糖化酶的用量為0.1g糖化酶/100g干物質(zhì)，反應(yīng)2h，糖化結(jié)束；控制溫度40℃，繼續(xù)流加葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶反應(yīng)，控制PH5.5-6.0，當(dāng)葡萄糖含量低于1g/L的時候結(jié)束反應(yīng)。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述同時制備海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯的方法中，所述步驟5)的滅酶反應(yīng)參數(shù)為升溫80℃、滅酶30分鐘；所述步驟5)中脫色為使用活性炭脫色；所述過濾為使用板框過濾除雜質(zhì)。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述同時制備海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯的方法中，所述步驟5)還包括離子交換去除Na+的過程。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述同時制備海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯的方法中，所述步驟5)中分離方法為：模擬移動床分離海藻糖和葡萄糖酸。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述同時制備海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯的方法中，所述步驟6)中所述海藻糖濃縮、結(jié)晶的操作參數(shù)為：將分離出的海藻糖105-115℃濃縮至70％以上含量，冷卻結(jié)晶；所述海藻糖分離干燥的方法為：分離機將海藻糖晶體與液體分離，然后流化床干燥，得海藻糖成品。
優(yōu)選地，本發(fā)明所述同時制備海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯的方法中，所述步驟6)中所述葡萄糖酸濃縮、結(jié)晶的操作參數(shù)為：將分離出的葡萄糖酸濃縮至80％左右，控制參數(shù)為溫度從80℃緩慢降低到35℃，晶種1％，此過程葡萄糖酸分子脫水形成葡萄糖酸內(nèi)酯；所述葡萄糖酸內(nèi)酯分離、干燥方法為使用分離機分離，流化床干燥，得葡萄糖酸內(nèi)酯成品。
令人意外地，本發(fā)明在生產(chǎn)海藻糖的同時，獲得了另外一種有用的產(chǎn)品——葡萄糖酸內(nèi)酯，特別地，本發(fā)明的方法相比于傳統(tǒng)方法海藻糖的轉(zhuǎn)化率提高8％左右，獲得的海藻糖的轉(zhuǎn)化率大于78％。
由上可知，本發(fā)明的同時制備海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯的方法，至少有以下優(yōu)點：
1)海藻糖的轉(zhuǎn)化時間明顯減少，而且轉(zhuǎn)化率明顯提高；
2)在提高海藻糖轉(zhuǎn)化率8％左右的同時又可生產(chǎn)出葡萄糖酸內(nèi)酯這種新產(chǎn)品。
具體實施方式
在本發(fā)明實施例中，本發(fā)明同時制備海藻糖和葡萄糖酸內(nèi)酯的方法，包括以下步驟：
1)使用淀粉酶，將淀粉轉(zhuǎn)化為麥芽糊精；
2)加入普魯蘭酶去除麥芽糊精的支鏈，然后加入麥芽寡糖基海藻糖合成酶與麥芽寡糖基海藻糖水解酶，獲得海藻糖；
3)流加葡萄糖氧化酶與過氧化氫酶，將產(chǎn)生的葡萄糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸鈉；
4)加入糖化酶，糖化結(jié)束后，繼續(xù)流加葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶反應(yīng)，當(dāng)葡萄糖含量低于1g/L的時候結(jié)束反應(yīng)；
5)滅酶、脫色過濾去雜質(zhì)，分離海藻糖和葡萄糖酸；
6)海藻糖濃縮、結(jié)晶、分離干燥獲得海藻糖成品；葡萄糖酸濃縮、結(jié)晶，脫水形成葡萄糖酸內(nèi)酯，將所述葡萄糖酸內(nèi)酯分離、干燥獲得葡萄糖酸內(nèi)酯成品。
在本發(fā)明的一個實施例中，所述步驟1)的反應(yīng)參數(shù)為：pH5.5-6.0，加入淀粉酶后控制溫度90-110℃；所述淀粉質(zhì)量百分比為35％-40％，所述淀粉酶的活力單位為5000-8000U/mL，用量為3.5-6.0g高溫淀粉酶/100g淀粉，處理3-4小時，將淀粉液化為DE值為8-13的麥芽糊精。
在本發(fā)明的又一個實施例中，上述步驟2)的反應(yīng)參數(shù)為：
控制溫度60℃，pH5.0-5.5，加入普魯蘭酶，處理6h，將麥芽糊精的支鏈去除，所述普魯蘭酶的活力單位為1000-1500U/mL，用量為0.5-1.0g普魯蘭酶/100g麥芽糊精；
控制溫度40℃，pH5.5-6.0，加入麥芽寡糖基海藻糖合成酶與麥芽寡糖基海藻糖水解酶，處理6h，所述麥芽寡糖基海藻糖合成酶為100-150U/mg、所述麥芽寡糖基海藻糖水解酶的酶活為350-400U/mg，所述麥芽寡糖基海藻糖合成酶的用量為35-40g/100g麥芽糊精、所述麥芽寡糖基海藻糖水解酶的酶活為15-20g/100g麥芽糊精。
在本發(fā)明的又一個實施例中，上述步驟3)的反應(yīng)參數(shù)為：控制PH5.5-6.0，流加所述葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶開始反應(yīng)，其中所述葡萄糖氧化酶酶活為6500U/ml，所述過氧化氫酶酶活為37.5萬U/ml。
在本發(fā)明的又一個實施例中，上述步驟4)的反應(yīng)參數(shù)為：控制溫度60℃，pH4.0-4.5，加入糖化酶，所述糖化酶的活力單位為10萬U/mL，所述糖化酶的用量為0.1g糖化酶/100g干物質(zhì)，反應(yīng)2h，糖化結(jié)束；控制溫度40℃，繼續(xù)流加葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶反應(yīng)，控制PH5.5-6.0，當(dāng)葡萄糖含量低于1g/L的時候結(jié)束反應(yīng)。
在本發(fā)明的又一個實施例中，上述步驟5)的滅酶反應(yīng)參數(shù)為升溫80℃、滅酶30分鐘；所述步驟5)中脫色為使用活性炭脫色；所述過濾為使用板框過濾除雜質(zhì)。
在本發(fā)明的又一個實施例中，所述步驟5)還包括去除離子過程，所述離子主要是Na+、還有少量Ca2+；在本發(fā)明的再一個實施例中，上述步驟5)為陽離子交換去除Na+的過程。
在本發(fā)明的另一個實施例中，上述步驟5)中分離方法為：模擬移動床分離海藻糖和葡萄糖酸。
在本發(fā)明的另一個實施例中，上述步驟6)中所述海藻糖濃縮、結(jié)晶的操作參數(shù)為：將分離出的海藻糖105-115℃濃縮至70％以上含量，冷卻結(jié)晶；所述海藻糖分離干燥的方法為：分離機將海藻糖晶體與液體分離，然后流化床干燥，得海藻糖成品。
在本發(fā)明的另一個實施例中，上述步驟6)中所述葡萄糖酸濃縮、結(jié)晶的操作參數(shù)為：將分離出的葡萄糖酸濃縮至80％左右，控制參數(shù)為溫度從80℃緩慢降低到35℃，晶種1％，此過程葡萄糖酸分子脫水形成葡萄糖酸內(nèi)酯；所述葡萄糖酸內(nèi)酯分離、干燥方法為使用分離機分離，流化床干燥，得葡萄糖酸內(nèi)酯成品。
以下通過具體實施例進一步對本發(fā)明的技術(shù)方案進行說明，應(yīng)理解以下僅為本發(fā)明的示例性說明，并不用于限制本發(fā)明權(quán)利要求的保護范圍。
對比例1酶法生產(chǎn)海藻糖(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35％的淀粉)
第一步在50L罐中加入30L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35％的淀粉乳，控制pH5.6，加入高溫淀粉酶后控制溫度95℃，所述高溫淀粉酶的活力單位為5000U/mL，用量為6.0g高溫淀粉酶/100g淀粉，處理3h，將淀粉液化為DE值為8.9的麥芽糊精。
第二步控制溫度60℃，pH5.0-5.5，加入普魯蘭酶，所述普魯蘭酶的活力單位為1000U/mL，用量為1.0g普魯蘭酶/100g麥芽糊精，處理6h后，將麥芽糊精的支鏈去除，控制溫度40℃，pH5.5-6.0，加入麥芽寡糖基海藻糖合成酶與麥芽寡糖基海藻糖水解酶的粗酶液，酶活分別為100U/mg、350U/mg，用量分別為40g/100g麥芽糊精、20g/100g麥芽糊精，處理12h。控制溫度60℃，pH4.0-4.5，加入糖化酶，所述糖化酶的活力單位為10萬U/mL，用量為0.1g糖化酶/100g干物質(zhì)，反應(yīng)2h，糖化結(jié)束。
第三步，滅酶、脫色：升溫80℃滅酶30min，活性炭脫色。
第四步、過濾：板框過濾除雜質(zhì)。
第五步、離交：陽離子離交去除Na+。
第六步、分離：模擬移動床分離海藻糖和葡萄糖。
第七步、海藻糖濃縮、結(jié)晶：將分離出的海藻糖105℃濃縮至73％，冷卻結(jié)晶。
第八步、海藻糖分離、干燥：分離機將海藻糖晶體與液體分離，然后流化床干燥，得海藻糖成品。
結(jié)果：海藻糖純度為99.5％，轉(zhuǎn)化率為69.8％。
對比例2酶法生產(chǎn)海藻糖(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％的淀粉)
第一步在50L罐中加入30L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％的淀粉乳，控制pH6.0，加入高溫淀粉酶后控制溫度105℃，所述高溫淀粉酶的活力單位為8000U/mL，用量為3.5g高溫淀粉酶/100g淀粉，處理3.5h，將淀粉液化為DE值為11.6的麥芽糊精；
第二步，控制溫度60℃，pH5.0-5.5，加入普魯蘭酶，所述普魯蘭酶的活力單位為1500U/mL，用量為0.5g普魯蘭酶/100g麥芽糊精，處理6h后，將麥芽糊精的支鏈去除，控制溫度40℃，pH5.5-6.0，加入麥芽寡糖基海藻糖合成酶與麥芽寡糖基海藻糖水解酶的粗酶液，酶活分別為150U/mg、400U/mg，用量分別為35g/100g麥芽糊精、15g/100g麥芽糊精，處理12h?？刂茰囟?0℃，pH4.0-4.5，加入糖化酶，所述糖化酶的活力單位為10萬U/mL，用量為0.1g糖化酶/100g干物質(zhì)，反應(yīng)2h，糖化結(jié)束。
第三步，滅酶、脫色：升溫80℃滅酶30min，活性炭脫色。
第四步、過濾：板框過濾除雜質(zhì)。
第五步、離交：陽離子離交去除Na+。
第六步、分離：模擬移動床分離海藻糖和葡萄糖。
第七步、海藻糖濃縮、結(jié)晶：將分離出的海藻糖105℃濃縮至75％，冷卻結(jié)晶。
第八步、海藻糖分離、干燥：分離機將海藻糖晶體與液體分離，然后流化床干燥，得海藻糖成品。
結(jié)果：海藻糖純度為99.1％，轉(zhuǎn)化率為70.5％。
實施例1：同時生產(chǎn)海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35％的淀粉)
第一步淀粉酶轉(zhuǎn)化35％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的淀粉為麥芽糊精：
在50L罐中加入30L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35％的淀粉乳，控制pH5.8，加入高溫淀粉酶后控制溫度100℃，所述高溫淀粉酶的活力單位為5000U/mL，用量為6.0g高溫淀粉酶/100g淀粉，處理3h，將淀粉液化為DE值為9.5的麥芽糊精；
第二步，去支鏈，加入混合酶，獲得海藻糖：
控制溫度60℃，pH5.0-5.5，加入普魯蘭酶，所述普魯蘭酶的活力單位為1000U/mL，用量為1.0g普魯蘭酶/100g麥芽糊精，處理6h后，將麥芽糊精的支鏈去除，控制溫度40℃，pH5.5-6.0，加入麥芽寡糖基海藻糖合成酶與麥芽寡糖基海藻糖水解酶的粗酶液，酶活分別為100U/mg、350U/mg，用量分別為40g/100g麥芽糊精、20g/100g麥芽糊精，處理6h。
第三步，流加葡萄糖氧化酶與過氧化氫酶，將產(chǎn)生的葡萄糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸鈉：罐中分別流加葡萄糖氧化酶(6500U/ml)和過氧化氫酶(37.5萬U/ml)開始反應(yīng)，流加30％的氫氧化鈉控制PH5.5-6.0，繼續(xù)反應(yīng)6h，將產(chǎn)生的葡萄糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸鈉，同時海藻糖轉(zhuǎn)化率達到78.3％，比不流加葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶時提高轉(zhuǎn)化率8％左右。
第四步，控制溫度60℃，pH4.0-4.5，加入糖化酶，所述糖化酶的活力單位為10萬U/mL，用量為0.1g糖化酶/100g干物質(zhì)，反應(yīng)2h，糖化結(jié)束，控制溫度40℃，繼續(xù)流加葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶反應(yīng)，流加30％的氫氧化鈉控制PH5.5-6.0，當(dāng)葡萄糖含量0.7g/L的時候結(jié)束反應(yīng)。
第五步，升溫80℃滅酶30min，活性炭脫色、板框過濾除雜質(zhì)后，陽離子離交去除Na+，最后模擬移動床分離海藻糖和葡萄糖酸。
第六步，將分離出的海藻糖105℃濃縮至77％，冷卻結(jié)晶后，用分離機將海藻糖晶體與液體分離，然后流化床干燥，得海藻糖成品。
將分離出的葡萄糖酸濃縮至79％，控制參數(shù)為溫度從80℃緩慢降低到35℃，晶種1％，此過程葡萄糖酸分子脫水形成葡萄糖酸內(nèi)酯；葡萄糖酸內(nèi)酯結(jié)晶液經(jīng)分離機分離后，流化床干燥，得葡萄糖酸內(nèi)酯成品。
結(jié)果：海藻糖純度為99.3％，轉(zhuǎn)化率為78.3％葡萄糖酸內(nèi)酯純度為99.1％，收率為93.5％。
實施例2：同時生產(chǎn)海藻糖與葡萄糖酸內(nèi)酯(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％的淀粉)
第一步淀粉酶轉(zhuǎn)化40％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的淀粉為麥芽糊精：
在50L罐中加入30L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％的淀粉乳，控制pH6.0，加入高溫淀粉酶后控制溫度105℃，所述高溫淀粉酶的活力單位為8000U/mL，用量為3.5g高溫淀粉酶/100g淀粉，處理4h，將淀粉液化為DE值為12.4的麥芽糊精；
第二步，去支鏈，加入混合酶，獲得海藻糖：
控制溫度60℃，pH5.0-5.5，加入普魯蘭酶，所述普魯蘭酶的活力單位為1500U/mL，用量為0.5g普魯蘭酶/100g麥芽糊精，處理6h后，將麥芽糊精的支鏈去除，控制溫度40℃，pH5.5-6.0，加入麥芽寡糖基海藻糖合成酶與麥芽寡糖基海藻糖水解酶的粗酶液，酶活分別為150U/mg、400U/mg，用量分別為35g/100g麥芽糊精、15g/100g麥芽糊精，處理6h。
第三步，流加葡萄糖氧化酶與過氧化氫酶，將產(chǎn)生的葡萄糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸鈉：罐中分別流加葡萄糖氧化酶(6500U/ml)和過氧化氫酶(37.5萬U/ml)開始反應(yīng)，流加30％的氫氧化鈉控制PH5.5-6.0，繼續(xù)反應(yīng)6h，將產(chǎn)生的葡萄糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸鈉，同時海藻糖轉(zhuǎn)化率達到77.8％，比不流加葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶時提高轉(zhuǎn)化率8％左右，控制溫度60℃，pH4.0-4.5，加入糖化酶，所述糖化酶的活力單位為10萬U/mL，用量為0.1g糖化酶/100g干物質(zhì)，反應(yīng)2h，糖化結(jié)束，控制溫度40℃，繼續(xù)流加葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶反應(yīng)，流加30％的氫氧化鈉控制PH5.5-6.0，當(dāng)葡萄糖含量0.5g/L的時候結(jié)束反應(yīng)。
第四步，升溫80℃滅酶30min，活性炭脫色、板框過濾除雜質(zhì)，陽離子離交去除Na+，最后用模擬移動床分離海藻糖和葡萄糖酸。
第五步，將分離出的海藻糖105℃濃縮至78％，冷卻結(jié)晶后，用分離機將海藻糖晶體與液體分離，然后流化床干燥，得海藻糖成品；將分離出的葡萄糖酸濃縮至82％，控制參數(shù)為溫度從80℃緩慢降低到35℃，晶種1％，此過程葡萄糖酸分子脫水形成葡萄糖酸內(nèi)酯，葡萄糖酸內(nèi)酯結(jié)晶液經(jīng)分離機分離后，流化床干燥，得葡萄糖酸內(nèi)酯成品。
結(jié)果：海藻糖純度為99.6％，轉(zhuǎn)化率為77.8％。葡萄糖酸內(nèi)酯純度為99.4％，收率為92.7％。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。