本發(fā)明涉及聯(lián)芐類化合物及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道了如下所示的聯(lián)芐類化合物，具有抑制被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)(passivecutaneousanaphylaxis)以及抑制RBL-2H3細(xì)胞(嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞)釋放β-己糖胺酶的藥效和用途(見(jiàn)：MatsudaHetal.AntiallergicPhenanthrenesand…PlantaMed2004；70:847-855)：目前，未見(jiàn)有本發(fā)明式Ⅱ所示化合物的研究報(bào)道，更未見(jiàn)有本發(fā)明式Ⅱ所示化合物用于制備抗腫瘤藥物的研究報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種結(jié)構(gòu)和藥用價(jià)值都不同的新的聯(lián)芐類化合物：式Ⅱ所示的化合物。本發(fā)明提供的式Ⅱ所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、晶型、溶劑合物：其中，R1、R2分別獨(dú)立地選自羥基或巰基；R3、R4分別獨(dú)立地選自C1～C4烷基或鹵素取代的C1～C4烷基。進(jìn)一步的，R1、R2同時(shí)選自羥基。進(jìn)一步的，R3、R4分別獨(dú)立地選自甲基、乙基、丙基或異丙基。進(jìn)一步的，所述的化合物為本發(fā)明還提供了一種制備化合物C的方法，它包括以下步驟：i、取白及，用乙醇提取，得到乙醇提取液；ii、取乙醇提取液，濃縮，得到流浸膏；iii、將流浸膏用水分散，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，合并乙酸乙酯部分，回收溶劑，得到乙酸乙酯浸膏；iv、取乙酸乙酯浸膏，采用硅膠柱色譜，依次以石油醚-丙酮＝100:1、50:1、30:1為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，得到石油醚-丙酮＝30:1時(shí)的洗脫液Fr.16；v、Fr.16上反相聚苯乙烯型樹(shù)脂柱，依次以乙醇-水＝10:90、30:70、50:50、70:30、90:10、100:0為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，得到乙醇-水＝100:0時(shí)的Fr.16-j；vi、Fr.16-j上葡聚糖凝膠色譜柱，以二氯甲烷-甲醇＝1:1為洗脫劑，依次洗脫0.8倍柱體積、2.2倍柱體積，分別得到Fr.16-j-1、Fr.16-j-2；vii、Fr.16-j-2經(jīng)過(guò)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇＝1:0為洗脫劑，洗脫3個(gè)柱體積，回收溶劑，得到Fr.16-j-2a；Fr.16-j-2a經(jīng)過(guò)制備薄層色譜，以二氯甲烷-丙酮＝20:1為展開(kāi)劑，Rf＝0.65，分離，得到化合物C。進(jìn)一步的，步驟iv中，所述乙酸乙酯浸膏的量為155～165g，梯度洗脫的條件如下：步驟v中，所述Fr.16的量為15～20g，梯度洗脫的條件如下：本發(fā)明還提供了上述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、晶型、溶劑合物在制備治療和/或預(yù)防腫瘤的藥物中的用途。進(jìn)一步的，所述的腫瘤為癌癥。進(jìn)一步的，所述的癌癥為肺癌。本發(fā)明還提供了一種治療和/或預(yù)防腫瘤的藥物組合物，它是以上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、晶型、溶劑合物為活性成分，加上藥學(xué)上常用的輔料制備得到的制劑。本發(fā)明提供的式Ⅱ所示的新化合物，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有很好的抑制作用，特別是，對(duì)肺癌細(xì)胞具有很好的抑制作用，其IC50達(dá)到6.37μg/mL；同時(shí)，本發(fā)明化合物的制備方法簡(jiǎn)便，反應(yīng)條件溫和，便于操作和控制，能耗小，產(chǎn)率高，成本低，非常適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明中提供的化合物和衍生物可以根據(jù)IUPAC(國(guó)際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì))或CAS(化學(xué)文摘服務(wù)社，Columbus，OH)命名系統(tǒng)命名。關(guān)于本發(fā)明的使用術(shù)語(yǔ)的定義：除非另有說(shuō)明，本文中基團(tuán)或者術(shù)語(yǔ)提供的初始定義適用于整篇說(shuō)明書的該基團(tuán)或者術(shù)語(yǔ)；對(duì)于本文沒(méi)有具體定義的術(shù)語(yǔ)，應(yīng)該根據(jù)公開(kāi)內(nèi)容和上下文，給出本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠給予它們的含義?！叭〈笔侵阜肿又械臍湓颖黄渌煌脑踊蚍肿铀鎿Q。碳?xì)浠鶊F(tuán)中碳原子含量的最小值和最大值通過(guò)前綴表示，例如，前綴Ca～Cb烷基表明任何包含“a”至“b”個(gè)碳原子的烷基。因此，例如，C1～C4烷基是指包含1～4個(gè)碳原子的烷基，換句話說(shuō)，C1～C4烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”是指某載體、運(yùn)載物、稀釋劑、輔料，和/或所形成的鹽通常在化學(xué)上或物理上與構(gòu)成某藥物劑型的其它成分相兼容，并在生理上與受體相兼容。術(shù)語(yǔ)“鹽”和“可藥用的鹽”是指上述化合物或其立體異構(gòu)體，與無(wú)機(jī)和/或有機(jī)酸和堿形成的酸式和/或堿式鹽，也包括兩性離子鹽(內(nèi)鹽)，還包括季銨鹽，例如烷基銨鹽。這些鹽可以是在化合物的最后分離和純化中直接得到。也可以是通過(guò)將上述化合物，或其立體異構(gòu)體，與一定數(shù)量的酸或堿適當(dāng)(例如等當(dāng)量)進(jìn)行混合而得到。這些鹽可能在溶液中形成沉淀而以過(guò)濾方法收集，或在溶劑蒸發(fā)后回收而得到，或在水介質(zhì)中反應(yīng)后冷凍干燥制得。本發(fā)明中所述鹽可以是化合物的鹽酸鹽、硫酸鹽、枸櫞酸鹽、苯磺酸鹽、氫溴酸鹽、氫氟酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、草酸鹽、蘋果酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、酒石酸鹽或三氟乙酸鹽。本發(fā)明化合物或藥物組合物的施用方式?jīng)]有特別限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、和局部給藥。用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種常規(guī)惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(a)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c)保濕劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽、和碳酸鈉；(e)緩溶劑，例如石蠟；(f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤(rùn)濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；和(i)潤(rùn)滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩沖劑。固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放?？刹捎玫陌窠M分的實(shí)例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時(shí)，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物等。除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤(rùn)濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物等。用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無(wú)菌含水或無(wú)水溶液、分散液、懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無(wú)菌的可注射溶液或分散液的無(wú)菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。用于局部給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑?；钚猿煞衷跓o(wú)菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時(shí)可能需要的推進(jìn)劑一起混合。本發(fā)明所述藥學(xué)上可接受的輔料，是指除活性成分以外包含在劑型中的物質(zhì)。本發(fā)明所述藥學(xué)上可接受的輔助性成分，它具有一定生理活性，但該成分的加入不會(huì)改變上述藥物組合物在疾病治療過(guò)程中的主導(dǎo)地位，而僅僅發(fā)揮輔助功效，這些輔助功效僅僅是對(duì)該成分已知活性的利用，是醫(yī)藥領(lǐng)域慣用的輔助治療方式。若將上述輔助性成分與本發(fā)明藥物組合物配合使用，仍然屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。附圖說(shuō)明圖1為本發(fā)明化合物C的HR-ESI-MS譜。圖2為本發(fā)明化合物C的1HNMR譜。圖3為本發(fā)明化合物C的13CNMR譜。具體實(shí)施方式本發(fā)明具體實(shí)施方式中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過(guò)購(gòu)買市售產(chǎn)品獲得。①藥材白及藥材于2012年8月購(gòu)自四川省內(nèi)江市，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)李敏教授鑒定為白及Bletillastriata(Thunb.)Rchb.f.的干燥塊莖。②試劑和填料柱層析硅膠，200～300目(試劑級(jí))，購(gòu)于青島海洋硅膠干燥劑廠；薄層層析硅膠G、GF254和H(化學(xué)純)，購(gòu)于青島海洋硅膠干燥劑廠；MCIgelCHP20P，75～150μm，為反相聚苯乙烯型樹(shù)脂，購(gòu)于日本三菱化學(xué)公司；SephadexLH-20葡聚糖凝膠，購(gòu)于瑞典Amersham公司；GF254硅膠制備薄層，購(gòu)于煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司；色譜甲醇，4L/瓶，購(gòu)于美國(guó)Fisher公司；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、甲醇等分析純?cè)噭?gòu)于成都科龍化工試劑廠。③實(shí)驗(yàn)儀器Cometro6000高效液相色譜儀(美國(guó)Cometro)；WatersSynaptG2HDMS高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜(美國(guó)Waters)；核磁共振儀：Bruker-600核磁共振儀；測(cè)定溫度：297K；以溶劑峰信號(hào)作為參照；Vector22FT-IR紅外光譜儀(瑞士Bruker)；ShimadzuUV-260紫外-可見(jiàn)分光光度儀(日本Shimadzu)；BP211D十萬(wàn)分之一電子天平(瑞士Sartorius)；R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(瑞士BUCHI)；DZG-6050型真空干燥箱(上海森信)。實(shí)施例1、化合物C的提取以及結(jié)構(gòu)鑒定(1)藥材的提取：干燥的白及藥材粗粉(3kg)，以95％乙醇回流提取3次(30L×3)，每次2h；(2)成分的分離純化：①、乙醇提取液(90L)經(jīng)減壓濃縮干燥得半固體流浸膏510g；②、將半固體流浸膏(500g)用水(5L)分散，依次用乙酸乙酯(20L)、正丁醇(20L)萃取，合并乙酸乙酯部分，減壓回收溶劑，得乙酸乙酯浸膏160g；③、采用硅膠柱色譜對(duì)乙酸乙酯浸膏(160g)進(jìn)行分離，石油醚：丙酮進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液經(jīng)薄層色譜法檢測(cè)，得到石油醚：丙酮＝30:1時(shí)的洗脫液Fr.16；梯度洗脫的條件如下：④、Fr.16組分(18g)經(jīng)過(guò)MCI處理以10％-100％v/v的乙醇水進(jìn)行梯度洗脫，并結(jié)合薄層色譜進(jìn)行檢測(cè)，分別得到10個(gè)組分Fr.16-a～Fr.16-j；梯度洗脫的條件如下：⑤、Fr.16-j組分(3.0g)經(jīng)過(guò)凝膠LH-20色譜柱，以二氯甲烷-甲醇＝1:1為洗脫劑，進(jìn)行洗脫，F(xiàn)r.16-j-1、Fr.16-j-2、Fr.16-j-3分別為洗脫0.8倍柱體積、2.2倍柱體積、3倍柱體積時(shí)依次收集的組分，其中Fr.16-j-2組分為聯(lián)芐化合物的集中部位；⑥、Fr.16-j-2組分(1.8g)經(jīng)過(guò)硅膠柱色譜，分別以二氯甲烷-甲醇1：0、200：1、100：1、50:1進(jìn)行洗脫，每個(gè)比例洗脫劑洗脫3個(gè)柱體積，減壓回收溶劑，收集1：0洗脫部位Fr.16-j-2a，以制備薄層色譜(展開(kāi)劑為二氯甲烷-丙酮＝20:1，Rf＝0.65)分離得到化合物C；白及中聯(lián)芐類化合物薄層色譜顯色時(shí)，噴以10％硫酸乙醇試液，于105℃下顯色3min多顯黃色、橘紅色至微紅色斑點(diǎn)，可以用于聯(lián)芐的追蹤檢測(cè)；化合物C分子式C23H24O4，高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)：HR-ESI-MSm/z363.1605[M-H]-(C23H23O4的計(jì)算值為363.1596)，不飽和度為12；化合物C的核磁共振氫譜(1H-NMR)和核磁共振碳譜(13C-NMR)由Bruker-AV-600核磁共振儀測(cè)定，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1；表1、化合物C的1HNMR(600MHz)和13CNMR(150MHz)inCD3COCD3的數(shù)據(jù)由上述數(shù)據(jù)確定，化合物C為3′-羥基-4-對(duì)羥基芐-3,5-二甲氧基聯(lián)芐，其結(jié)構(gòu)如下：以下通過(guò)試驗(yàn)例，具體說(shuō)明本發(fā)明的有益效果。試驗(yàn)例1抗腫瘤試驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)材料：①細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549來(lái)源于美國(guó)ATCC公司。②實(shí)驗(yàn)儀器HWCL-1恒溫磁力攪拌浴(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；BP211D十萬(wàn)分之一電子天平(瑞士Sartorius)；DZG-6050型真空干燥箱(上海森信)；酶標(biāo)儀(Thermo3001，ThermoFisherScientific公司)；電子天平(ESJ120-4型，沈陽(yáng)龍騰電子稱量?jī)x器有限公司)；超凈臺(tái)(MCV-B161F(T)，日本SANYO公司)；顯微鏡(PrimoVert，AxioCamERc5s，ZEISS公司)；CO2培養(yǎng)箱(HH.CP-T，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)。(2)實(shí)驗(yàn)方法：①細(xì)胞接種用0.25％胰酶消化對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞。用含10％FBS的細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)配成單細(xì)胞懸液。采用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，將狀態(tài)良好的A549腫瘤細(xì)胞接種于96孔板，使細(xì)胞密度為4×103個(gè)/mL，每孔加入細(xì)胞懸液100μL，置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h。②藥物處理每個(gè)樣品從20μg/mL開(kāi)始，用培養(yǎng)基梯度稀釋樣品，2倍稀釋，設(shè)置5個(gè)藥物濃度，每個(gè)濃度做復(fù)孔測(cè)試。以濃度為20、10、5、2.5、1.25μg/mL每孔加藥100μL，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，重復(fù)3次。陰性對(duì)照組為含有適量DMSO的培養(yǎng)基溶液，空白對(duì)照組為不含細(xì)胞的培養(yǎng)基和溶媒。將96孔板放回培養(yǎng)箱，37℃作用72h。③顯色及IC50的計(jì)算72h作用完畢后，避光條件下每孔加入MTT溶液(5g/L)20μL，繼續(xù)溫育培養(yǎng)4h后，棄掉上清液，每孔加入150μLDMSO，置于搖床上慢速振搖10min，使甲瓚充分溶解后，用酶標(biāo)儀測(cè)量570nm波長(zhǎng)處的OD值。采用改良寇氏法IC50＝log-1[Xm-i(∑P-0.5)]進(jìn)行計(jì)算，其中Xm：設(shè)計(jì)的最大濃度的對(duì)數(shù)值；i：各濃度倍比濃度的對(duì)數(shù)值；ΣP：各組生長(zhǎng)抑制率之和；0.5：經(jīng)驗(yàn)常數(shù)。通過(guò)重復(fù)三次試驗(yàn)，計(jì)算得到3個(gè)IC50值(保留兩位小數(shù))，求平均值；試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。表2、本發(fā)明聯(lián)芐類化合物C對(duì)A549腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒活性IC50NO.IC50(μg/mL)化合物C6.37上述結(jié)果表明，本發(fā)明聯(lián)芐類化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞具有很好的抑制作用，能夠用于制備抗腫瘤藥物。綜上所述，本發(fā)明提供的式Ⅱ所示的新化合物，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有很好的抑制作用，特別是，對(duì)肺癌細(xì)胞具有很好的抑制作用，其IC50達(dá)到6.37μg/mL；同時(shí)，本發(fā)明化合物的制備方法簡(jiǎn)便，反應(yīng)條件溫和，便于操作和控制，能耗小，產(chǎn)率高，成本低，非常適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3