1.一種從茯磚茶中分離、純化冠突散囊菌及其液態(tài)培養(yǎng)方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)制備平板固態(tài)培養(yǎng)基;
(2)接種:用接種環(huán)或其它滅過(guò)菌的細(xì)簽挑取茯磚茶中的“金花”生長(zhǎng)茂盛的區(qū)域“金花”接種至步驟(1)中所得到的平板固態(tài)培養(yǎng)基;
(3)將接種后的平板固態(tài)培養(yǎng)基置于溫度為25-30℃的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng);
(4)待7-12天后平板固態(tài)培養(yǎng)基表面的冠突散囊菌菌落可辨時(shí),在無(wú)菌環(huán)境中用接種環(huán)挑取用點(diǎn)接法或劃線法轉(zhuǎn)接至按步驟(1)新做的平板固態(tài)培養(yǎng)基上;
(5)重復(fù)步驟(3)、(4)兩至四次,直到得到冠突散囊菌純菌落,則得到純化后的冠突散囊菌;
(6)將步驟(1)制備的平板固態(tài)培養(yǎng)基加熱至60-80℃將其含有的瓊脂熔化,分裝到試管中,裝量約試管體積的1/3處,滅菌之后將試管斜放待其冷卻制成斜面培養(yǎng)基;
(7)將步驟(5)中所得純化后的冠突散囊菌的菌落轉(zhuǎn)接至斜面培養(yǎng)基中,在25-30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-7天,每天觀察,生長(zhǎng)出菌落后置于冰箱中4℃保存,備用;
(8)待需要時(shí)將步驟(7)所得菌種置于溫度為25-30℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-7天,每天觀察生長(zhǎng)情況,待菌落生長(zhǎng)良好時(shí)接種到平板固態(tài)培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng),備用;
(9)配制液態(tài)的察氏培養(yǎng)基,初始pH調(diào)節(jié)至5.8左右,將所述液態(tài)的察氏培養(yǎng)基分裝至錐形瓶并滅菌,滅菌完成后冷卻;
(10)每天觀察步驟(8)平板固態(tài)培養(yǎng)基中菌落生長(zhǎng)情況,待長(zhǎng)勢(shì)良好時(shí)用接種環(huán)挑取接種至步驟(9)所得液態(tài)的察氏培養(yǎng)基中;
(11)將步驟(10)已接種的液態(tài)的察氏培養(yǎng)基置于搖床中振搖培養(yǎng),溫度為25-32℃,轉(zhuǎn)速100-150r/min;培養(yǎng)10-20天;
(12)繼續(xù)培養(yǎng)至液態(tài)的察氏培養(yǎng)基逐漸變得渾濁,在液態(tài)的察氏培養(yǎng)基變?yōu)辄S色之后,變得渾濁之前,在無(wú)菌環(huán)境中用多層紗布或60-120目濾布過(guò)濾,取濾液轉(zhuǎn)接至步驟(9)所得的新的液態(tài)的察氏培養(yǎng)基中;
(13)將步驟(12)已接種的液態(tài)的察氏培養(yǎng)基系置于搖床中繼續(xù)振搖培養(yǎng),溫度25-32℃,轉(zhuǎn)速100-150r/min;培養(yǎng)2-5天,有大量細(xì)小白色菌絲團(tuán)生長(zhǎng)出,培養(yǎng)5-10天液態(tài)的察氏培養(yǎng)基開(kāi)始變成黃色,繼續(xù)培養(yǎng),液態(tài)的察氏培養(yǎng)基顏色變深,向橙色轉(zhuǎn)變,則液態(tài)擴(kuò)大培養(yǎng)成功。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從茯磚茶中分離、純化冠突散囊菌及其液態(tài)培養(yǎng)方法,其特征在于:在所述步驟(1)中,所述平板固態(tài)培養(yǎng)基是將察氏培養(yǎng)基滅菌、分裝于培養(yǎng)皿中、平放于水平臺(tái)面、冷卻固化后制得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從茯磚茶中分離、純化冠突散囊菌及其液態(tài)培養(yǎng)方法,其特征在于:在所述步驟(12)中,所述所取的濾液與液態(tài)的察氏培養(yǎng)基的體積比1∶5-20。