1.一種可增強(qiáng)目的基因表達(dá)的非融合表達(dá)載體，其特征在于：以pETduet-1質(zhì)粒為骨架載體，插入pETduet-1質(zhì)粒克隆位點(diǎn)1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，目的基因插入pETduet-1質(zhì)粒克隆位點(diǎn)2。
2.權(quán)利要求1所述的可增強(qiáng)目的基因表達(dá)的非融合表達(dá)載體的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：
第一步，將片段GST-CTB克隆到pETduet-1載體中構(gòu)建質(zhì)粒pETduet-GST-CTB；
第二步，將片段EGFP-CTA2-TAT克隆到pET22b載體中構(gòu)建質(zhì)粒pET22b-EGFP-CTA2-TAT，作為對照質(zhì)粒；
第三步，將片段EGFP-CTA2-TAT克隆到pETduet-GST-CTB載體中構(gòu)建質(zhì)粒pETDuet-GST-CTB/EGFP-CTA2-TAT；
第四步，將構(gòu)建好的兩個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)蛋白質(zhì)，并對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分析比較。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的可增強(qiáng)目的基因表達(dá)的非融合表達(dá)載體的制備方法，其特征在于：所述第一步，具體包括如下步驟：
(1)通過質(zhì)粒抽提試劑盒提取獲得質(zhì)粒PGEX-4T3為模板，其中，PGEX-4T3上有GST的基因序列；通過設(shè)計(jì)引物，PCR獲得BamHI-CTB-XhoI片段，將PGEX-INSITE和BamHI-CTB-XhoI同時(shí)經(jīng)過BamHI/XhoI雙酶切，獲得載體片段和PCR片段，酶切產(chǎn)物經(jīng)膠回收后用T4連接酶連接過夜，并將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)，挑選陽性克隆子，送上海生物工程公司測序，測序結(jié)果表明CTB正確連上載體PGEX，新建了質(zhì)粒PGEX-CTB；
(2)以PGEX-CTB為模板，引物序列如下：
上游引物如SEQ ID NO.2所示，下游引物如SEQ ID NO.3所示，PCR得目的片段GST-CTB，產(chǎn)物經(jīng)PCR產(chǎn)物回收試劑盒純化；
(3)pETduet-1載體和PCR產(chǎn)物GST-CTB經(jīng)Nco I和Hind III雙酶切，回收酶切產(chǎn)物，并按載體與片段1：1比例，加入T4連接酶于4℃反應(yīng)過夜，反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，Nco I和Hind III雙酶切鑒定，質(zhì)粒PCR，送上海生工測序，測序正確結(jié)果記為pETduet-GST-CTB。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的可增強(qiáng)目的基因表達(dá)的非融合表達(dá)載體的制備方法，其特征在于：所述第二步構(gòu)建質(zhì)粒pET22b-EGFP-CTA2-TAT，具體包括如下步驟：
通過NCBI，查找EGFP、CTA2、TAT基因序列，由于EGFP分子較大，為使其更好與CTA2融合，以不至于表達(dá)時(shí)發(fā)生中止，在EGFP與CTA2之間加入連接短肽GGGGS作為linker，修飾，增強(qiáng)表達(dá)穩(wěn)定性；同時(shí)EGFP與CTA2之間還加入酶切位點(diǎn)，以便于替換EGFP為目標(biāo)藥物蛋白；將基因序列串聯(lián)，并送往北京普爾普樂公司合成；合成的基因序列命名為EGFP-CTA2-TAT，并構(gòu)建到pET22b載體上，最后載體標(biāo)記為pET22b-EGFP-CTA2-TAT。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的可增強(qiáng)目的基因表達(dá)的非融合表達(dá)載體的制備方法，其特征在于：第三步具體步驟為：
(1)依托引物設(shè)計(jì)軟件primer premier 5.0，通過PCR擴(kuò)增，以pET22b-EGFP-CTA2-TAT作為模板，獲得目的片段EGFP-CTA2-TAT；
(2)擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過酶切，酶連，克隆到載體pETduet-GST-CTB多克隆位點(diǎn)2上，并轉(zhuǎn)化到感受態(tài)大腸桿菌DH5α中，通過氨芐抗性篩選陽性轉(zhuǎn)化子，通過酶切，測序鑒定是否符合預(yù)期，新構(gòu)建載體記為pETduet-GST-CTB/EGFP-CTA2-TAT。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的可增強(qiáng)目的基因表達(dá)的非融合表達(dá)載體的制備方法，其特征在于：所述第四步，具體包括如下步驟：
a)將質(zhì)粒pETDuet-GST-CTB/EGF-CTA2-TAT轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)中，通過抗氨芐青霉素抗性LB平板篩選陽性轉(zhuǎn)化子，甘油保存；
b)1：100菌液比例加入含100ug/mL的400mL LB培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2h；
c)加1mmol/L的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)；
d)SDS-PAGE和western blot分析蛋白表達(dá)情況。