1.一種用于霍山石斛與重唇石斛的比對(duì)鑒定方法,其特征在于操作步驟如下:
(1)提取待測(cè)樣品的DNA作為模板,采用引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;
所述引物對(duì)為:上游引物CP6s:5’-GCCCATAAATGGGTTTC-3’
下游引物CP6a:5’-GCACATCCGAGCCTTA-3’;
(2)瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中含有275 bp的DNA片段,則所述待測(cè)樣品中含有霍山石斛;若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中不含有275 bp的DNA片段,則所述待測(cè)樣品為非霍山石斛。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于霍山石斛與重唇石斛的比對(duì)鑒定方法,其特征在于:步驟(1)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中,PCR反應(yīng)體系的總體積25 μL,其中0.5μL待測(cè)樣品的DNA,1.0μL含量為10 pmol的上游引物CP6s,1.0μL含量為10 pmol的下游引物CP6a,2.5μL 10×buffer緩沖液,1.5μL濃度為25 mM的氯化鎂(MgCl2)水溶液,0.5μL濃度為10 mM的dNTPs ,0.5μL濃度為5U/μL的 Taq DNA聚合酶,無菌雙蒸水補(bǔ)足至25μL;
PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件: 95 ℃ 5 min;95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,45個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于霍山石斛與重唇石斛的比對(duì)鑒定方法,其特征在于:步驟(2)的具體操作如下:取5μLPCR擴(kuò)增產(chǎn)物,用2%的瓊脂糖凝膠,在電壓80-90V下電泳30分鐘,凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照;若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中含有275 bp的DNA片段,則所述待測(cè)樣品中含有霍山石斛;若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中未含有275 bp的DNA片段,則所述待測(cè)樣品為非霍山石斛。
4.一種用于權(quán)利要求1所述霍山石斛與重唇石斛的比對(duì)鑒定的檢測(cè)試劑盒,其特征在于:將PCR反應(yīng)體系中的上游引物CP6s和下游引物CP6a分別單獨(dú)包裝;將除待測(cè)樣品的DNA、上游引物CP6s和下游引物CP6a外的其它物質(zhì)混合均勻單獨(dú)包裝;將以上分別單獨(dú)包裝的物質(zhì)放置于同一個(gè)試劑盒內(nèi),組成一個(gè)檢測(cè)試劑盒。