1.一種卡拉白魚養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于包括以下制備步驟：
一、啤酒酵母菌的分離純化和鑒定
啤酒酵母菌的分離純化
a．采取池塘底泥，放置于無菌離心管中，帶回實驗室4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
b．取10g采取的樣品放入裝有90mL無菌水的錐形瓶中，振蕩混勻，用無菌水將樣品溶液進行梯度稀釋，即在無菌條件下用吸管吸取1mL樣品溶液，加入到裝有9mL無菌水的離心管中，充分混勻，將樣品稀釋為10-1，然后吸取1mL稀釋的樣品加入到另一裝有9mL無菌水的離心管中，稀釋成10-2，按此種方法依次稀釋至10-6；
c．取稀釋濃度為10-4、10-5和10-6的樣品溶液涂布PDA培養(yǎng)基平板，倒置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~5天；
待菌落長出后，挑選個體較大，表面光滑濕潤，呈凸起狀，中間略有凹陷的單菌落，在PDA培養(yǎng)基平板上反復(fù)劃線純化，直至得到純培養(yǎng)物，保存于甘油管和牛奶管；
菌株的生理生化鑒定
根據(jù)《真菌鑒定手冊》進行菌株的生理生化性質(zhì)測定，將鑒定結(jié)果與《真菌鑒定手冊》上所述啤酒酵母菌的生理生化特征相對照；
ITS區(qū)基因序列鑒定
用機械破碎法提取菌株基因組DNA，以真菌通用引物ITS1和ITS4為引物，基因組DNA為模板進行PCR擴增，得到500~600bp的特異性條帶，將擴增的PCR產(chǎn)物送去生工進行DNA測序，將所得到的序列導(dǎo)入NCBI中的BLAST軟件或EzTaxon server進行序列比對；
二、凝結(jié)芽孢桿菌的分離純化和鑒定
凝結(jié)芽孢桿菌的分離純化
a．采取池塘底泥，放置于無菌離心管中，帶回實驗室4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
b．取采集的樣品10g，放入已滅菌的裝有90ml蒸餾水和小玻璃珠的250mL三角瓶中，振蕩混勻后將三角瓶放置于80℃水浴鍋中，加熱20分鐘后靜置冷卻至室溫，用無菌水將冷卻后的樣品溶液進行梯度稀釋至10-7；
c．取稀釋濃度為10-5、10-6、10-7的樣品溶液涂布MRS固體培養(yǎng)基平板，倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，待菌落長出后，挑取菌體淡黃色，不透明，呈圓形、凸起、扁平狀的單菌落利用MRS培養(yǎng)基進行純化，將純培養(yǎng)物以點接法接種于含溴甲酚紫指示劑的YPD培養(yǎng)基，篩選其中的具有產(chǎn)酸能力的芽孢桿菌，37℃培養(yǎng)兩天后選取其中一株產(chǎn)生透明圈較大的菌株，保存于甘油管和牛奶管中；
菌株的生理生化鑒定
根據(jù)《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》對挑選的菌株進行生理生化特征鑒定，將生理生化鑒定結(jié)果與《伯杰細菌鑒定手冊》第八版上關(guān)于芽孢桿菌屬的描述相對照；
16S rDNA序列鑒定
使用酶解法和SDS-高鹽法相結(jié)合提取菌株的基因組DNA序列，以細菌和放線菌的通用引物PA、PB為引物，基因組DNA為模板，擴增16SrDNA片段，得到1400~1500bp的特異性片段，將擴增的PCR產(chǎn)物送去生工進行DNA測序，將所得到的序列導(dǎo)入NCBI中的BLAST軟件或EzTaxon server進行序列比對；
三、沼澤紅假單胞菌的分離純化和鑒定
沼澤紅假單胞菌的分離純化
a．采取池塘底泥，放置于無菌離心管中，帶回實驗室4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
b．取采集的底泥樣品20g，放入滅菌的500ml錐形瓶中，添加富集培養(yǎng)基至離瓶口2~3cm，然后將錐形瓶用橡膠塞和塑料膜密封營造厭氧環(huán)境，再將其放置于裝有60W白熾燈的不透明紙箱中，調(diào)節(jié)距離，使培養(yǎng)基接受的光照強度為2000~4000lx，溫度為30℃，在此條件下培養(yǎng)一周，取富集液按20%濃度再連續(xù)轉(zhuǎn)接富集兩次；
c．取步驟b富集三次后的富集液進行梯度稀釋至10-8；
d．取10-6、10-7和10-8稀釋液涂布光合細菌分離培養(yǎng)基平板，以無菌瓊脂溶液覆蓋到涂布后的分離培養(yǎng)基上，制造厭氧環(huán)境，然后將覆蓋瓊脂后的平板放置于光照強度為2000~4000lx，溫度為30℃的環(huán)境下培養(yǎng)一周，待菌落長出后，挑選淺紅色、光滑濕潤、邊緣整齊、中間有隆起的菌落，在分離培養(yǎng)基平板上劃線純化，直至得到純培養(yǎng)物，保存于甘油管和牛奶管；
菌株的生理生化鑒定
根據(jù)《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》對所分離菌株進行生理生化特征鑒定，生理生化鑒定結(jié)果與《伯杰細菌鑒定手冊》第八版上關(guān)于光合細菌的描述相對照；
16SrDNA序列鑒定
采用酶解法和SDS-高鹽法相結(jié)合提取菌株的基因組DNA序列，以細菌和放線菌的通用引物PA、PB為引物，基因組DNA為模板，擴增16SrDNA片段，得到1400~1500bp的特異性片段；
將擴增的PCR產(chǎn)物送去生工進行DNA序列的測定，將所得到的序列導(dǎo)入NCBI中的BLAST軟件或EzTaxon server進行序列比對；
四、復(fù)合微生態(tài)制劑發(fā)酵液的制備
（1）啤酒酵母菌發(fā)酵液的制備
a．菌種活化：將保存的啤酒酵母菌菌種劃線接種于PDA培養(yǎng)基平板上，28℃培養(yǎng)3天，在平板上形成啤酒酵母菌單菌落；
b．一級種子液制備：制備100mL PDA液體培養(yǎng)基，裝入300mL錐形瓶中，滅菌；挑取步驟a活化的啤酒酵母菌單菌落接種于PDA液體培養(yǎng)基中，放入28℃搖床中，180rpm培養(yǎng)3天，即為一級種子液；
c．發(fā)酵液的制備：制備500mL PDA液體培養(yǎng)基，裝入1L錐形瓶中，滅菌；吸取10mL步驟b培養(yǎng)的啤酒酵母菌一級種子液，轉(zhuǎn)接到500mL PDA液體培養(yǎng)基中，放入28℃搖床中，180rpm培養(yǎng)3~5天，制得啤酒酵母菌發(fā)酵液，啤酒酵母菌發(fā)酵液中活菌數(shù)達到109cfu/mL以上；
（2）凝結(jié)芽孢桿菌發(fā)酵液的制備
a．菌種活化：將保存的凝結(jié)芽孢桿菌菌種劃線接種于MRS培養(yǎng)基平板上，37℃培養(yǎng)2天，在平板上形成凝結(jié)芽孢桿菌單菌落；
b．一級種子液制備：制備100mL MRS液體培養(yǎng)基，裝入300mL錐形瓶中，滅菌；挑取步驟a活化的凝結(jié)芽孢桿菌單菌落接種于MRS液體培養(yǎng)基中，放入37℃搖床中，180rpm培養(yǎng)2天，即為一級種子液；
c．發(fā)酵液的制備：制備500mL MRS液體培養(yǎng)基，裝入1L錐形瓶中，滅菌；吸取10mL步驟b培養(yǎng)的凝結(jié)芽孢桿菌一級種子液，轉(zhuǎn)接到制備的500mL MRS液體培養(yǎng)基中，放入37℃搖床中，180rpm培養(yǎng)2~3天，制得凝結(jié)芽孢桿菌發(fā)酵液，凝結(jié)芽孢桿菌發(fā)酵液中活菌數(shù)達到109cfu/mL以上；
（3）沼澤紅假單胞菌發(fā)酵液的制備
a．菌種活化：將保存的沼澤紅假單胞菌菌種劃線接種于光合細菌分離培養(yǎng)基平板上，上層覆蓋瓊脂，放置于光照強度2000~4000lx，溫度30℃的環(huán)境下培養(yǎng)一周，在平板上形成凝結(jié)芽孢桿菌單菌落；
b．一級種子液制備：制備400mL 光合細菌液體培養(yǎng)基，高壓滅菌后裝入300mL無菌錐形瓶中，使培養(yǎng)基離錐形瓶口大約2~3cm，用橡膠塞和塑料膜密封；挑取步驟a活化的沼澤紅假單胞菌單菌落接種于光合細菌液體培養(yǎng)基中，放置于光照強度2000~4000lx，溫度30℃的環(huán)境下培養(yǎng)一周，即為一級種子液；
c．發(fā)酵液的制備：制備1.2L 光合細菌液體培養(yǎng)基，高壓滅菌后裝入1L無菌錐形瓶中，使培養(yǎng)基離錐形瓶口大約2~3cm，用橡膠塞和塑料膜密封；吸取50mL步驟b培養(yǎng)的沼澤紅假單胞菌一級種子液，轉(zhuǎn)接到制備的光合細菌液體培養(yǎng)基中，放置于光照強度2000~4000lx，溫度30℃的環(huán)境下培養(yǎng)7~10天，制得沼澤紅假單胞菌發(fā)酵液，沼澤紅假單胞菌發(fā)酵液中活菌數(shù)達到109cfu/mL以上；
（4）微生態(tài)制劑發(fā)酵液的制備：將所述啤酒酵母菌發(fā)酵液、凝結(jié)芽孢桿菌發(fā)酵液、沼澤紅假單胞菌發(fā)酵液按照體積比1:0.7~1:3.5~4.5混合，即得到所述微生態(tài)制劑，確保其中啤酒酵母菌活菌數(shù)占總菌數(shù)的百分比為20%~30%，凝結(jié)芽孢桿菌活菌數(shù)占總菌數(shù)的百分比為30%~40%，沼澤紅假單胞菌占總菌數(shù)百分比為30%~40%。
2.如權(quán)利要求1所述一種卡拉白魚養(yǎng)殖用復(fù)合微生態(tài)制劑的應(yīng)用，其特征在于：
將1齡卡拉白魚150~200尾置于長4~6m，寬4~6m，深2~2.5m的水泥池中，采取常規(guī)飼料喂養(yǎng)，每天9:00、13:00和18:00向水泥池中各投喂一次飼料，喂養(yǎng)時間為30天，所述飼料中添加復(fù)合微生態(tài)制劑發(fā)酵液，每100kg飼料用噴霧器噴灑1~1.5L復(fù)合微生態(tài)制劑發(fā)酵液。