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一種快速鑒別豬流行性腹瀉病毒經(jīng)典株與變異株的HRM檢測引物、試劑盒及方法與流程

文檔序號:12577872閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種快速鑒別豬流行性腹瀉病毒經(jīng)典株與變異株的HRM引物,其核苷酸序列如下所示:

引物P1: CGGTTCTTTTCAAAATTTAATG(SEQ ID NO:1);

引物P2: ATACCATGAACGCCACTA(SEQ ID NO:2)。

2.一種快速鑒別豬流行性腹瀉病毒經(jīng)典株與變異株的HRM檢測試劑盒,其特征在于:該試劑盒含有權(quán)利要求1所述的引物。

3.一種快速鑒別豬流行性腹瀉病毒經(jīng)典株與變異株的HRM檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)從樣品中提取病毒核酸;

2)以核酸為模板,利用權(quán)利要求1所述的引物對P1和P2以及熒光飽和染料,進行RT-PCR擴增反應(yīng)獲得擴增產(chǎn)物;

3)對擴增產(chǎn)物進行HRM分析,確定病毒類型;

上述方法用于非疾病的診斷和治療。

4.根據(jù)權(quán)利要求3 所述的方法,其特征在于,步驟2)中RT-PCR擴增的反應(yīng)體系為:

5×buffer 4μL

dNTP 0.8μL

引物P1 0.5μL

引物P2 0.5μL

酶 0.8μL

模板 1μL

LC green 染料 1μL

ddH2O 11.4μL

Total 20μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求3 或4 所述的方法,其特征在于,步驟2)中RT-PCR擴增反應(yīng)程序如下:94℃預(yù)變性3 min ;94℃變性30s,55℃退火30s,72℃延伸35s ;循環(huán)35 次;72℃終延伸5min 。

6.根據(jù)權(quán)利要求3 所述的方法,其特征在于:步驟3)HRM分析過程中,80℃到90℃以每0.2℃/步的升溫速率進行熔解曲線分析。

7.根據(jù)權(quán)利要求3 所述的方法,其特征在于:步驟3)中HRM分析的具體分析過程為:在80~90℃熔解溫度范圍內(nèi),若待檢測樣品熔解曲線在83~83.5℃出現(xiàn)熔解峰時,判定該樣品為豬流行性腹瀉病毒經(jīng)典株;若待檢測樣品熔解曲線在84.25~84.75℃出現(xiàn)熔解峰時,判定為豬流行性腹瀉病毒變異株。

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