1.一種從動物肺中提取肝素鈉的方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)絞碎打漿:動物肺經(jīng)預(yù)處理、絞碎、勻漿后加水,攪拌混勻,得到肺漿液;
(2)酶解脫脂:用NaOH調(diào)節(jié)步驟(1)中的肺漿液的pH值至8.5 -9.2,升溫至40-45℃,加入脂肪酶,保溫酶解,過濾,收集濾渣,加水?dāng)嚢璧妹撝螡{液;
(3)鹽解提取:往步驟(2)中的脫脂肺漿液中加入氯化鈉,調(diào)節(jié)pH值,升溫至50-55℃并保溫,再升溫并進行過濾,得到鹽解液;
(4)酶解除蛋白:將步驟(3)中的鹽解液降溫至55℃,調(diào)節(jié)pH值至8.0-9.0,加入蛋白酶,保溫酶解,然后升溫滅酶并進行過濾,得到酶解液;
(5)吸附:將步驟(4)中的酶解液降溫至60℃,調(diào)整其鹽度和pH值,加入D-254樹脂,保溫吸附處理10-12小時后,收集吸附后的樹脂;
(6)洗脫:
(6-1):用水反復(fù)沖洗步驟(5)中的吸附后的樹脂至水變清為止,濾干樹脂,再以完全浸沒樹脂為量,加入質(zhì)量分數(shù)為5-7%的氯化鈉溶液,溫度保持在50-55℃,攪拌30-60min,濾干得洗滌后的樹脂;
(6-2):以完全浸沒步驟(6-1)中的洗滌后的樹脂為量,加入質(zhì)量分數(shù)為20-25%的氯化鈉溶液,溫度保持在50-55℃,攪拌3-4小時后,分離樹脂,收集洗脫液;
(6-3):重復(fù)步驟(6-2)一次,將兩次收集的洗脫液合并,并用100目濾袋過濾,收集洗脫液待用;
(7)調(diào)酸除蛋白:往步驟(6-3)中的洗脫液加入其重量0.1-0.3%的保護劑攪拌均勻后,用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3.0-3.5,靜置10分鐘,用100目濾袋過濾,收集濾液待用;
(8)調(diào)堿除蛋白:用NaOH調(diào)節(jié)步驟(7)中的濾液的pH值至11.0,攪拌均勻后靜置30分鐘,用100目濾袋過濾,收集濾液待用;
(9)沉淀脫鹽:用稀鹽酸調(diào)節(jié)步驟(8)中的濾液的pH值至7.0-8.0,加入其體積1.8-2.2倍的質(zhì)量分數(shù)為80-85%的預(yù)冷過的乙醇,攪拌均勻后密封沉淀18-24小時,傾出上層乙醇清液,收集沉淀物待用;
(10)復(fù)沉精制:
(10-1):往步驟(9)中的沉淀物中加入其重量10倍的質(zhì)量分數(shù)為3%的氯化鈉溶液,攪拌溶解后,升溫至80℃并保溫,然后降溫并進行過濾,收集濾液,加入乙醇,靜置,收集沉淀物;
(10-2):往步驟(10-1)中的沉淀物中加入其重量10倍的質(zhì)量分數(shù)為3%的氯化鈉溶液,充分攪拌溶解后,升溫至80℃并保溫,然后降溫并進行過濾,收集濾液,加入乙醇,靜置,收集沉淀物;
(11)脫水干燥:往步驟(10-2)中的沉淀物中加入其重量2倍的質(zhì)量分數(shù)為95-100%的乙醇脫水2-3次,收集沉淀物,置于60-70℃下干燥10-15小時即得肝素鈉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從動物肺中提取肝素鈉的方法,其特征在于,在上述步驟(1)中,在所述動物肺經(jīng)預(yù)處理、絞碎、勻漿后加水,攪拌混勻,得到肺漿液的過程中,具體包括以下步驟:取新鮮(或經(jīng)冷凍保存后自然解凍)動物肺清洗去污,剝離氣管,去除皮質(zhì)脂肪,用斬拌機絞碎成肉糜狀,再經(jīng)細磨機研磨勻漿5-10min,得到肺漿料,然后添加肺漿料2-3倍重量的水,攪拌混勻,得到肺漿液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從動物肺中提取肝素鈉的方法,其特征在于,在上述步驟(2)中,在所述升溫至40-45℃,加入脂肪酶,保溫酶解,過濾,收集濾渣,加水?dāng)嚢璧妹撝螡{液的過程中,具體包括以下步驟:升溫至40-45℃,按每公斤肺添加1.2-2.5克的比例加入脂肪酶,保溫酶解30-60分鐘,酶解結(jié)束后用80目濾袋過濾,收集濾渣,往濾渣中加入3-5倍重量的水,攪拌均勻后得脫脂肺漿液;所述脂肪酶為堿性脂肪酶,酶活力為10000-30000U/g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從動物肺中提取肝素鈉的方法,其特征在于,在上述步驟(3)中,在所述往脫脂肺漿液中加入氯化鈉,調(diào)節(jié)pH值,升溫至50-55℃并保溫,再升溫保溫并進行過濾,得到鹽解液的過程中,具體包括以下步驟:按每公斤肺添加300-400克的比例往脫脂肺漿液中加入氯化鈉,調(diào)pH值至9.0,攪拌下升溫至50-55℃,保溫反應(yīng)3-5小時,整個反應(yīng)過程中保持pH值在8.5-9.0之間,反應(yīng)結(jié)束后快速升溫至100℃,保溫10min,趁熱用80目濾袋過濾,收集濾液得鹽解液,濾渣經(jīng)干燥可作飼料用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從動物肺中提取肝素鈉的方法,其特征在于,在上述步驟(4)中,在所述加入蛋白酶,保溫酶解,然后升溫滅酶并進行過濾,得到酶解液的過程中,具體包括以下步驟:按每公斤肺添加3-5克的比例加入2709蛋白酶,保溫50-55℃,酶解3-5小時后,升溫至85℃,保溫30min后,趁熱用100目濾袋過濾,收集濾液得酶解液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從動物肺中提取肝素鈉的方法,其特征在于,在上述步驟(5)中所述將酶解液降溫至60℃,調(diào)整其鹽度和PH值,加入D-254樹脂,保溫吸附處理10-12小時后,收集吸附后的樹脂的過程中,具體包括以下步驟:將酶解液降溫至60℃,調(diào)整其鹽度為2.0-2.8波美度,調(diào)節(jié)其PH值為8.0-8.5,然后按每公斤肺添加30-40克比例加入D-254樹脂,攪拌狀態(tài)下保持溫度55-60℃吸附處理10-12小時后,過濾,收集吸附后的樹脂。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從動物肺中提取肝素鈉的方法,其特征在于,在上述步驟(7)中,所述保護劑為亞硫酸氫鈉。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從動物肺中提取肝素鈉的方法,其特征在于,在上述步驟(10-1)中,在所述升溫至80℃并保溫,然后降溫并進行過濾,收集濾液,加入乙醇,靜置,收集沉淀物的過程中,具體包括以下步驟:升溫至80℃,保溫10分鐘后,冷卻到常溫,用100目濾袋過濾,收集濾液,再往濾液中加入其體積1-1.2倍的質(zhì)量分數(shù)為95%的預(yù)冷過的乙醇,攪拌均勻后靜置30分鐘,傾出上層乙醇清液,收集沉淀物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從動物肺中提取肝素鈉的方法,其特征在于,在上述步驟(10-2)中,在所述升溫至80℃并保溫,然后降溫并進行過濾,收集濾液,加入乙醇,靜置,收集沉淀物的過程中,具體包括以下步驟:升溫至80℃,保溫10分鐘后,冷卻到常溫,用100目濾袋過濾,收集濾液,再往濾液中加入其體積0.5-0.8倍的質(zhì)量分數(shù)為95%的預(yù)冷過的乙醇,攪拌均勻后靜置30分鐘,傾出上層乙醇清液,收集沉淀物。
10.一種根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項所述的從動物肺中提取肝素鈉的方法所制備的肝素鈉。