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用于黃瓜‘粵青1號’雜交種子純度鑒定的引物及方法與流程

文檔序號:12249795閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于黃瓜‘粵青1號’雜交種子純度鑒定的SSR引物,其特征在于,所述SSR引物可以在黃瓜‘粵青1號’雜交種子中擴增出189 bp的母本特異標記,226 bp的父本特異標記。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SSR引物,其特征在于,所述母本特異標記的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,父本特異標記的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的SSR引物,其特征在于,所述SSR引物的核苷酸序列如下所示:

85F: 5’-TCACACCTGCATTTTTCATCA-3’(SEQ ID NO .1);

85R: 5’-GAGGCGTTCTCAACATACCC-3’(SEQ ID NO.2)。

4.黃瓜‘粵青1號’雜交種子純度的鑒定方法,包括如下步驟:

(1)提取黃瓜幼苗基因組DNA;

(2)以黃瓜基因組DNA為模板,使用權(quán)利要求1-3任一項所述的SSR引物進行PCR擴增;

(3)對擴增的產(chǎn)物進行凝膠電泳;

(4)對電泳結(jié)果進行分析,只有同時具有母本和父本特異性條帶的單株才為真正的雜交種,缺少其中的任意一條帶記為假雜種,計算種子純度,其中,SSR引物產(chǎn)生189 bp的母本特異標記, 226 bp的父本特異標記。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,PCR擴增的20μl反應(yīng)體系為:基因組DNA 5ng,10×buffer(+Mg2+)2μl,dNTP 0.2mmol·L-1,SSR引物0.25 mmol·L-1,Taq 酶0.2U。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,PCR擴增的程序為:94℃預(yù)變性5min后,94℃變性40s,55℃退火40s,72℃延伸1min,30個循環(huán)后,72℃保持7min,然后置于4℃保存待檢測。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述凝膠電泳為8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。

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