技術(shù)特征：

1.引物和探針組合，其特征在于，包括：引物一、引物二和探針一的組合；和引物三、引物四和探針二的組合；

所述引物一由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2組成，

所述引物二由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4組成，

所述探針一為SEQ ID NO:5，

所述引物三由SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7組成，

所述引物四由SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9組成，

所述探針二為SEQ ID NO:10。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物和探針組合在檢測或輔助檢測轉(zhuǎn)基因大豆DAS44406中的應(yīng)用。

3.一種試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的引物和探針組合。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還包括Mix 2和Mix 1，所述Mix 2包括dNTPs、反應(yīng)緩沖液和MgCl₂，所述Mix 1包括DNA聚合酶；

任選的，所述Mix 2和Mix 1均來自寶生物工程大連有限公司的貨號為RR060A的試劑盒中的試劑；

任選的，還包括基因組DNA提取試劑；

任選的，所述基因組DNA提取試劑來自天根生化科技(北京)有限公司的貨號為DP305-02的植物基因組DNA提取試劑盒中的試劑；

任選的，還包括Probe qPCR Mix；

任選的，所述Probe qPCR Mix來自寶生物工程(大連)有限公司的貨號為RR391S的試劑盒中的試劑；

任選的，還包括陽性對照和陰性對照；

任選的，所述陽性對照為轉(zhuǎn)基因大豆DAS44406的DNA或含轉(zhuǎn)基因大豆DAS44406的品系特異性序列的質(zhì)粒DNA，所述陰性對照不含轉(zhuǎn)基因大豆DAS44406的品系特異性序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的試劑盒在檢測或輔助檢測轉(zhuǎn)基因大豆DAS44406中的應(yīng)用。

6.一種檢測或輔助檢測轉(zhuǎn)基因大豆DAS44406的雙重巢式熒光PCR方法，其特征在于，包括使用權(quán)利要求1所述的引物和探針組合或權(quán)利要求3-4中任一項所述試劑盒的步驟。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)雙重巢式熒光PCR擴增：以生物樣品含有的DNA為模板與權(quán)利要求1所述的引物一和引物三進行第一輪雙重PCR反應(yīng)；然后以第一輪雙重PCR反應(yīng)所得的PCR產(chǎn)物為模板與引物二、引物四、探針一和探針二進行第二輪熒光PCR反應(yīng)；

2)根據(jù)雙重巢式熒光PCR擴增的結(jié)果判斷生物樣品是否含有轉(zhuǎn)基因大豆DAS44406的品系特異性序列。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，在步驟1)之前還包括在生物樣品中提取DNA的步驟；

任選的，所述在生物樣品中提取DNA是采用天根生化科技(北京)有限公司的貨號為DP305-02的植物基因組DNA提取試劑盒進行。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：所述雙重巢式熒光PCR擴增的第一輪雙重PCR反應(yīng)的反應(yīng)體系如下：

所述Mix 2包括dNTPs、MgCl₂和反應(yīng)緩沖液；

所述Mix 1包括DNA聚合酶；

所述Mix 2和Mix 1均來自寶生物工程(大連)有限公司的貨號為RR060A的試劑盒中的試劑；

任選的，所述雙重巢式熒光PCR擴增的第二輪熒光PCR反應(yīng)的反應(yīng)體系如下：

所述Probe qPCR Mix來自寶生物工程大連有限公司的貨號為RR391S的試劑盒中的試劑。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于：所述雙重巢式熒光PCR擴增的第一輪雙重PCR反應(yīng)的反應(yīng)程序如下：94℃ 5min；94℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 90s，15個循環(huán)；72℃ 5min；

所述雙重巢式熒光PCR擴增的第二輪熒光PCR反應(yīng)的反應(yīng)程序如下：95℃預變性1min；95℃15s,60℃1min，40個循環(huán)。