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WU多瘤病毒重組抗原及其制備方法和應用與流程

文檔序號:12399241閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種WU多瘤病毒重組抗原,其特征在于:包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的WU多瘤病毒重組抗原,其特征在于:由核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的核酸片段和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的核酸片段表達得到。

3.一種WU多瘤病毒重組抗原的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:

步驟1、將核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的WU多瘤病毒VP2核酸片段和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的WU多瘤病毒STAg核酸片段鏈接,得VP2-STAg核酸片段;

步驟2、將VP2-STAg核酸片段裝入PGEX-20T質(zhì)粒,得PGEX-20T-VP2-STAg重組質(zhì)粒;

步驟3、將PGEX-20T-VP2-STAg重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌,并誘導PGEX-20T-VP2-STAg重組質(zhì)粒表達蛋白,蛋白純化后即得WU多瘤病毒重組抗原。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的WU多瘤病毒重組抗原的制備方法,其特征在于,步驟1中,核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的WU多瘤病毒VP2核酸片段由堿基序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物組制得,核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的WU多瘤病毒STAg核酸片段由堿基序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物組制得。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的WU多瘤病毒重組抗原的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:

步驟1、將堿基序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物組進行PCR反應,得WU多瘤病毒VP2核酸片段;將堿基序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物組進行PCR反應,得WU多瘤病毒STAg核酸片段;

步驟2、利用T4DNA連接酶將步驟1所得WU多瘤病毒VP2核酸片段和WU多瘤病毒STAg核酸片段進行平端鏈接,鏈接后用堿基序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.8的引物組進行擴增,得VP2-STAg核酸片段;

步驟3、VP2-STAg核酸片段和PGEX-20T質(zhì)粒分別用BamHⅠ和Xbal進行雙酶切,然后利用T4DNA連接酶進行連接反應,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化、篩選后得PGEX-20T-VP2-STAg重組質(zhì)粒;

步驟4、將PGEX-20T-VP2-STAg重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入E,coli菌株BL21的感受態(tài)細胞,IPTG誘導后表達重組蛋白,蛋白純化后即得WU多瘤病毒重組抗原。

6.權(quán)利要求1~5任一項所述的WU多瘤病毒重組抗原的應用,其特征在于:用于制備預防或治療WU多瘤病毒感染的疫苗或藥物。

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