1.一種篩選高二羥基兒茶素茶樹的類黃酮3′,5′-羥化酶基因功能標(biāo)記,其特征在于該功能標(biāo)記的上游引物序列如SEQ ID No.1所示,下游引物如SEQ ID No.2所示。
2.一種篩選高二羥基兒茶素茶樹的類黃酮3′,5′-羥化酶基因功能標(biāo)記在篩選具有高二羥基兒茶素茶樹中的應(yīng)用,其特征在于該功能標(biāo)記的上游引物序列如SEQ ID No.1所示,下游引物如SEQ ID No.2所示。
3.如權(quán)利要求2所述的一種篩選高二羥基兒茶素茶樹的類黃酮3′,5′-羥化酶基因功能標(biāo)記在篩選具有高二羥基兒茶素茶樹中的應(yīng)用方法,其特征在于包括以下步驟:
利用功能標(biāo)記對(duì)各茶樹材料中的F3′5′H基因起始密碼子ATG下游676 bp至下游871 bp的DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增、酶切和瓊脂糖凝膠分析,如擴(kuò)增產(chǎn)物酶切后顯示為196bp的片段則該茶樹確定為低二羥基兒茶素茶樹,如擴(kuò)增產(chǎn)物酶切后顯示為176bp的片段則該茶樹確定為高二羥基兒茶素茶樹。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用方法,其特征在于所述的PCR擴(kuò)增的體系和反應(yīng)程序?yàn)椋篜CR反應(yīng)體系:32 μL ddH2O,2 μL DNA,5 μL 10×PCR Buffer,4 μL 25 mM MgCl2,5 μL 2 Mm dNTP,1μL KOD-Plus-Neo酶,10 μM 的上、下游引物各3 μL;PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃ 2 min,然后進(jìn)行以下循環(huán),94℃ 15 sec,58℃ 25 sec,68℃ 5 sec,共 35個(gè)循環(huán);最后68℃延伸2min;所述的酶切和瓊脂糖凝膠條件為:PCR產(chǎn)物10 μL,內(nèi)切酶EcoRI 10U,內(nèi)切酶緩沖液2μL,用ddH2O補(bǔ)齊至20μL酶切體系;酶切反應(yīng)時(shí)間為1小時(shí),溫度為37℃,擴(kuò)增產(chǎn)物在3%的瓊脂糖膠電泳分離。