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煙草NtNAC096基因控制煙草衰老的應用的制作方法

文檔序號:12167281閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.煙草NtNAC096基因控制煙草衰老的應用,其特征在于,煙草NtNAC096基因的基因組DNA序列全長1203bp,其核苷酸序列如下:

其中,序列中雙下劃線標示的atg為起始密碼子,雙下劃線標示的tga為終止密碼子,單下劃線標示的部分為內含子,煙草NtNAC096基因由3個外顯子和2個內含子組成。

2.根據權利要求1所述的煙草NtNAC096基因控制煙草衰老的應用,其特征在于,上述應用包括對煙草NtNAC096基因進行基因功能分析,敲除NtNAC096基因,獲得延緩衰老的煙草植株。

3.根據權利要求2所述的煙草NtNAC096基因控制煙草衰老的應用,其特征在于,上述應用包括如下步驟:(1)煙草NtNAC096基因克隆,序列分析;(2)對NtNAC096基因進行表達分析;(3)通過構建煙草NtNAC096基因過表達載體,進行煙草NtNAC096基因功能分析;(4)利用CRISPR/Cas9基因編輯技術對煙草NtNAC096基因靶位點進行設計,構建NtNAC096基因敲除載體;對煙草品種進行遺傳轉化,獲得延緩衰老的煙草植株。

4.根據權利要求3所述的煙草NtNAC096基因控制煙草衰老的應用,其特征在于,步驟(2)對NtNAC096基因進行表達分析是用qRT-PCR方法檢測NtNAC096基因在煙草不同組織和不同葉片生育時期的表達模式。

5.根據權利要求3所述的煙草NtNAC096基因控制煙草衰老的應用,其特征在于,步驟(3)構建煙草NtNAC096基因過表達載體的方法為利用clontech infusion同源重組方法將NtNAC096構建進入過表達載體pRI101-AN,構建煙草NtNAC096基因過表達載體pRI101-NtNAC096。

6.根據權利要求3或5所述的煙草NtNAC096基因控制煙草衰老的應用,其特征在于,步驟(3)構建煙草NtNAC096基因過表達載體后,利用農桿菌介導的浸花法侵染擬南芥得到轉基因擬南芥,進行煙草NtNAC096基因功能分析。

7.根據權利要求3所述的煙草NtNAC096基因控制煙草衰老的應用,其特征在于,步驟(4)對煙草NtNAC096基因設計兩個靶位點,人工合成加接頭序列,靶位點連接到載體pORE-Cas9上,獲得pORE-Cas9/NtNAC096載體。

8.根據權利要求7所述的煙草NtNAC096基因控制煙草衰老的應用,其特征在于,步驟(4)對煙草品種進行遺傳轉化的具體操作為:pORE-Cas9/NtNAC096載體轉化農桿菌感受態(tài)LBA4404,利用農桿菌介導的煙草葉盤轉化法對煙草進行遺傳轉化,獲得延緩衰老的煙草植株。

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