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MLH1基因啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)的引物和檢測(cè)方法與流程

文檔序號(hào):12412661閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.用于檢測(cè)MLH1基因啟動(dòng)子甲基化的引物,其特征在于,包括一對(duì)特異性擴(kuò)增兼并引物SEQ NO 1和SEQ NO 2,其序列為:

SEQ NO 1:5’-AAGGGTGGGGTTGGATGGY-3’;

SEQ NO 2:5’-RCRATACGATTCACCACTATCTCR-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物,其特征在于,擴(kuò)增引物同為測(cè)序引物,所述測(cè)序引物的序列為:

SEQ NO 1:5’-AAGGGTGGGGTTGGATGGY-3’;

SEQ NO 2:5’-RCRATACGATTCACCACTATCTCR-3’。

3.一種用于檢測(cè)MLH1基因啟動(dòng)子甲基化的方法,包括:

(1)提取樣本中的DNA;

(2)將步驟(1)中提取的DNA進(jìn)行亞硫酸氫鹽處理;

(3)以步驟(2)中的DNA作為模板,使用SEQ NO1和SEQ NO 2擴(kuò)增MLH1基因片段,獲得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;

(4)對(duì)步驟(3)中獲得的產(chǎn)物測(cè)序;

(5)根據(jù)步驟(4)的測(cè)序結(jié)果,得到序列CG位點(diǎn)的甲基化結(jié)果;

其所述引物序列為:

SEQ NO 1:5’-AAGGGTGGGGTTGGATGGY-3’;

SEQ NO 2:5’-RCRATACGATTCACCACTATCTCR-3’。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件為:第一階段,92-97℃預(yù)變性5-15min;第二階段,變性溫度92-97℃30sec,退火溫度62-66℃90sec,延伸溫度72℃30sec,循環(huán)12-18次,每循環(huán)一次,所述退火溫度降低0.5℃;第三階段,變性溫度92-97℃30sec,退火溫度53-57℃30sec,延伸溫度72℃30sec,循環(huán)24-34次;第四階段,72℃10min;第五階段,擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束,擴(kuò)增產(chǎn)物在4℃下保存。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述的測(cè)序?yàn)镾anger測(cè)序,測(cè)序引物為:

SEQ NO 1:5’-AAGGGTGGGGTTGGATGGY-3’;

SEQ NO 2:5’-RCRATACGATTCACCACTATCTCR-3’。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述樣本為石蠟切片樣本、全血樣本、新鮮組織樣本或細(xì)胞系樣本。

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