本發(fā)明屬于藥物化學領域，具體涉及一種噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物、其制備方法及其醫(yī)藥用途，特別是在制備用于治療或者預防炎癥相關疾病的藥物。

背景技術：

炎癥作為一種重要的病理過程在人體中十分常見，它本身是作為機體對于外來的或者異體的刺激的一種自身免疫應答。而當這種應答失調或者過分應答導致機體的自損傷時，就演變成了炎癥。在炎癥過程中，損傷因子會直接或間接造成組織和細胞的破壞。

急性肺損傷(Acute Lung Inflammation，ALI)是由各種直接和間接致傷因素導致的肺泡上皮細胞及毛細血管內皮細胞損傷，造成彌漫性肺間質及肺泡水腫，導致急性低氧性呼吸功能不全。該疾病的死亡率可以達到30-40％。而目前臨床上還沒有有效的治療手段。ALI的發(fā)病機制非常復雜，這是由于機體常遭受內源性或外源性致病微生物及其代謝產物的侵襲，以及中毒、休克、急性胰腺炎等均可引發(fā)機體組織細胞炎癥反應，繼而引發(fā)感染、膿毒血癥等，并進一步誘發(fā)機體產生大量的炎性細胞因子主要有IL-6、IL-1β、IL-12和TNF-α等。多項臨床研究表明，由炎癥因子和趨化因子形成的復雜的網絡在介導、放大和延續(xù)急性肺損傷的過程中起重要作用。因此抑制炎癥因子的釋放成為了治療炎癥因子的重要手段。

在藥物化學研究領域中，噻唑并[3,2-a]嘧啶骨架化合物一直是藥物學家關注和研究的熱點，該母核具有多種藥理活性，包括抗病毒、抗細菌和抗腫瘤等，其中抗腫瘤方面的報道最多，如2009年，法國科學家Kolb等人發(fā)現噻唑并[3,2-a]嘧啶對CDC25磷酸酶的抑制作用(ChemMedChem，2009，4：633-648)。2014年，遵義醫(yī)學院報道了噻唑并[3,2-a]嘧啶母核化合物對前列腺癌的抑制和周期阻止作用(CN 103951681 A)。然而，目前針對噻唑并[3,2-a]嘧啶類化合物治療炎癥引起疾病，如急性肺損傷和膿毒血癥等病癥的研究報道，本發(fā)明人經過長期和艱苦的研究實驗，獲得了一類噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物。后續(xù)生物實驗發(fā)現該化合物具有抗炎活性，尤其是能用于治療由TNF-α和/或IL-6超出正常量表達和釋放導致的炎癥疾病。

技術實現要素：

本發(fā)明為解決上述技術問題，提供一種噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物及其制備方法和應用，該衍生物具有高效、廣譜的抗炎用途。

為達到上述技術目的，本發(fā)明的技術方案為：

一種噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物或其可藥用鹽，所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的結構如通式(I)所示：

式(Ⅰ)中，R¹選自取代或未取代的芳基、烷基或雜環(huán)基，所述芳基上的取代基選自鹵素、烷氧基、羥基、烯丙氧基中的一個或者多個；

所述的烷基包括鏈烷基和環(huán)烷基；

R²選自或雜環(huán)，其中，波浪線表示連接位置；

R³為C₁～C₁₂烷氧基，選自-OCH₃、-OCH₂CH₃或-OCH₂CH₂CH₃。

本發(fā)明中，“鏈烷基”是指直鏈或支鏈的烴鏈基團，僅由碳與氫原子組成，不含有不飽和性，具有一至十二個碳原子，優(yōu)選為一至八個碳原子，更優(yōu)選為一至六個碳原子，且其通過單鍵連接至分子的其余部份，例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(異丙基)、正丁基、正戊基、1，1-二甲基乙基(叔丁基)、3-甲基己基、2-甲基己基等。其中，“低級烷基”是指具有一至六個碳原子的烷基。

本發(fā)明中，所述的環(huán)烷基“環(huán)烷基”是指環(huán)狀基團，僅由碳與氫原子組成，不含有不飽和性，優(yōu)選為C3～C5環(huán)烷基，例如：環(huán)丙基、環(huán)丁基等。

“烷氧基”是指式-ORa?；鶊F，其中Ra為如上文定義的烷基，含有一至十二個碳原子。

“芳基”是指芳族單環(huán)或多環(huán)烴環(huán)系統(tǒng)，僅由氫與碳組成，且含有6至19個碳原子，其中所述環(huán)系統(tǒng)可為部份飽和。芳基基團包括但不限于如芴基、苯基及萘基的基團。

“鹵素”是指溴、氯、氟或碘。

“雜環(huán)基”是指穩(wěn)定的3-至18-元非芳香環(huán)基團，其包含二至十七個碳原子與一至十個選自氮、氧及硫的雜原子。除非本說明書中另外明確述及，雜環(huán)基可為單環(huán)、雙環(huán)、三環(huán)或四環(huán)的環(huán)系統(tǒng)，其可包含稠合的或橋接的環(huán)系統(tǒng)；且在雜環(huán)基中的氮、碳或硫原子可任選地被氧化；氮原子可任選地被季胺化；且雜環(huán)基可為部份或完全飽和。

作為優(yōu)選，所述的R¹為取代或未取代的苯基、C₁～C₅烷基、環(huán)丙基、環(huán)己基；

所述的R³為-OCH₃、-OCH₂CH₃或-OCH₂CH₂CH₃。

作為優(yōu)選，所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物為下列中的任一化合物：

本發(fā)明還提供了一種所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的應用，所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物用于制備抗炎藥物。

作為優(yōu)選，所述的抗炎藥物用于抑制TNF-α和IL-6；

所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物選自化合物25、29、35、42和61中的一種或者多種。

作為優(yōu)選，所述的抗炎藥物用于治療由炎癥引起的急性肺損傷或由炎癥細胞因子超出正常量表達和釋放而導致的與炎癥相關的疾病。

作為進一步的優(yōu)選，所述與炎癥相關的疾病包括膿毒血癥、類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡及相關綜合征、骨關節(jié)炎、消化道炎癥、多發(fā)性肌炎、皮肌炎、血管炎性綜合征、痛風性關節(jié)炎、神經炎癥、風濕性關節(jié)炎、化學性疼痛、炎性疼痛、肉芽腫、肉芽腫性血管炎、動脈炎、皮膚炎癥、自身免疫性疾病、脂膜炎、腹膜后纖維化、肝炎、肺炎、胰腺炎、過敏性炎癥、全身炎癥反應綜合癥、敗血癥、感染性休克。

本發(fā)明還提供了一種藥物制劑，包括有效成分和藥用輔料，所述的有效成分包括所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物。

作為優(yōu)選，所述的藥物制劑為注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、軟膏劑、控釋劑、緩釋劑或納米制劑的任一種。

根據本發(fā)明的其他的實施方案，本發(fā)明涉及一類具有急性肺損傷治療作用的一類以取代哌啶酮為母核結構的單羰基姜黃素類似物及與炎癥相關疾病的治療藥物，所述疾病的病因至少部分地是由炎癥引起，所述疾病包括但不限于以下疾病：緩解類風濕關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、脊柱關節(jié)病、痛風性關節(jié)炎、風濕性關節(jié)炎、各種慢性關節(jié)炎的急性發(fā)作期或持續(xù)性的關節(jié)腫痛癥狀；治療非關節(jié)性的各種軟組織風濕性疼痛，如肩痛、腱鞘炎、滑囊炎、肌痛及運動后損傷性疼痛；急性的輕、中度疼痛，如，手術后、創(chuàng)傷后、勞損后、原發(fā)性痛經、牙痛、頭痛；缺血性再灌注，如，腦缺血再灌注、心肌缺血再灌注；動脈粥樣硬化；肝炎；淋巴炎；肺炎；痢疾；闌尾炎。

同現有技術相比，本發(fā)明的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物具有更好的抗炎活性，尤其是對TNF-α和IL-6兩種炎癥因子具有較好的抑制活性，是一種潛在的治療急性肺損傷的抗炎藥物。

附圖說明

這里所列舉的化合物只是為了更好地說明本發(fā)明的化合物類別和結構形式，并非限制本發(fā)明。

圖1所示為本發(fā)明合成的一類噻唑并[3,2-a]嘧啶類化合物的化學結構；

圖2A所示為實施例24中本發(fā)明噻唑并[3,2-a]嘧啶類化合物對LPS刺激原代巨噬細胞釋放IL-6的抑制的活性；

圖2B所示為實施例24中本發(fā)明噻唑并[3,2-a]嘧啶類化合物對LPS刺激原代巨噬細胞釋放TNF-α的抑制的活性；

圖3A所示為實施例25中本發(fā)明活性化合物25、29、35、42和61抑制LPS刺激原代巨噬細胞釋放IL-6的量效關系；

圖3B所示為實施例25中本發(fā)明活性化合物25、29、35、42和61抑制LPS刺激原代巨噬細胞釋放TNF-α的量效關系；

圖4所示為實施例26中本發(fā)明活性化合物25、29、35、42和61對人正常肝細胞HL-7702的毒性；

圖5A所示為實施例27中本發(fā)明化合物29和61在急性肺損傷模型中對大鼠肺泡灌洗液的蛋白濃度的抑制；

圖5B所示為實施例27中本發(fā)明化合物29和61在急性肺損傷模型中對大鼠大鼠肺組織濕重/干重比的影響；

圖6所示為實施例28中本發(fā)明化合物29和61緩解急性肺損傷中肺組織的病理學變化。

具體實施方式

下文將結合具體附圖詳細描述本發(fā)明具體實施例。應當注意的是，下述實施例中描述的技術特征或者技術特征的組合不應當被認為是孤立的，它們可以被相互組合從而達到更好的技術效果。

本發(fā)明的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的一般合成路線如下：

具體包括如下步驟：

(a)合成2-巰基-4-甲基-6-取代-1,6-二氫嘧啶-5-羧酸乙酯(中間體1)：在帶電磁攪拌的250ml圓底燒瓶中，加入取代苯甲醛或者雜環(huán)醛0.05mol，乙酰乙酸酯7.8g(0.06mol)，硫脲5.7g(0.075mol)，氨基磺酸3.75g(0.04mol)，無水乙醇50mL，加熱回流2h，冷卻，抽濾，水洗，干燥，得中間體1，收率為65％-90％。

(b、c)一鍋法合成中間體2以及最終產物：在帶回流冷凝管和干燥管的100mL圓底燒瓶中，加入2-巰基-4-甲基-6-取代-1,6-二氫-嘧啶-5-羧酸乙酯(中間體1)0.002mol，氯乙酸乙酯0.244g(0.002mol)，吡啶0.18g(0.002mol)，無水乙醇10ml，回流4h，然后加入取代芳香醛或雜環(huán)醛0.002mol，嗎啡啉0.17g(0.002mol)，繼續(xù)回流4h，將反應液冷卻，過濾，充分水洗，冰乙酸重結晶或硅膠柱純化得最終產物，收率為15％-65％。實施例1所合成的化合物3的化學結構表征數據

化合物(3)：2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-苯基-2,3-二氫-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯：

Ethyl-(Z)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-5-phenyl-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黃色粉末，m.p；179.8-181.0℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.679(s,1H),7.460(d,J＝9.0Hz,2H),7.332-7.360(m,3H),7.273-7.302(m,2H),7.211(d,J＝7.2Hz,1H),7.053(d,J＝7.8Hz,1H),6.043(s,1H),3.992-4.072(m,2H),3.713-3.730(m,4H),3.286-3.309(m,4H),2.385(m,3H),1.089-1.389(m,3H).ESI-MS m/z:490.1(M+H)⁺,512.1(M+Na)⁺。如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例2所合成的化合物19的化學結構表征數據

化合物(19)：2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-溴苯基)-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯：

ethyl(Z)-5-(4-bromophenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

紅色粉末，40.5％yield,m.p:162.5-163.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.676(s,1H),7.547(d,J＝8.4Hz,2H),7.464(d,J＝9.0Hz,2H),7.256(d,J＝8.4Hz,2H),7.058(d,J＝9.0Hz,2H),6.008(s,1H),4.026-4.047(m,2H),3.721(t,J＝4.8Hz,4H),3.295(t,J＝4.8Hz,4H),2.384(s,3H),1.124(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.773,164.478,156.160,152.245,152.025,139.895,133.827,132.084×2,131.587×2,129.691×2,122.045,121.686,114.123×2,113.414,107.592,65.786×2,60.153,54.285,46.649×2,22.532,13.877.ESI-MS m/z:570.2(M+H)⁺,calcd for C₂₇H₂₆BrN₃O₄S:568.48.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例3所合成的化合物22的化學結構表征數據

化合物(22):2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-氟苯基)-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯：

ethyl(Z)-5-(4-fluorophenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

橙色粉末,70.3％yield,m.p:193.0-195.5℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.673(s,1H),7.458(d,J＝9.0Hz,2H),7.327-7.351(m,2H),7.167(t,J＝8.4Hz,2H),7.052(d,J＝9.0Hz,2H),6.031(s,1H),3.986-4.075(m,2H),3.717(t,J＝4.2Hz,4H),3.289(t,J＝4.8Hz,4H),2.385(s,3H),1.109(t,J＝7.2Hz,3H).ESI-MS m/z:508.3(M+H)⁺,calcd for C₂₇H₂₆FN₃O₄S:507.58.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例4所合成的化合物25的化學結構表征數據

化合物(25):2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-(3,4二甲氧基苯基)-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(3,4-dimethoxyphenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

紅色粉末，29.3％yield，m.p:105.2-106.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.689(s,1H),7.465(d,J＝9.0Hz,2H),7.057(d,J＝9.0Hz,2H),6.904(d,J＝8.4Hz,1H),6.867(s,1H),6.775(d,J＝8.4Hz,1H),5.987(s,1H),4.021-4.080(m,2H),3.720(t,J＝4.8Hz,4H),3.712(s,3H),3.702(s,3H),3.290(t,J＝4.8Hz,4H),2.383(s,3H),1.146(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.022,164.630,155.927,152.208,151.405,148.888,148.293,133.573,133.107,132.035×2,122.152,119.371,114.147×2,113.736,111.900,111.459,108.248,65.796×2,60.060,55.497,55.448,54.383,46.684×2,22.392,13.971.ESI-MS m/z:550.3(M+H)⁺,calcd for C₂₉H₃₁N₃O₆S:549.64.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例5所合成的化合物26的化學結構表征數據

化合物(26):2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-乙氧基苯基)-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(4-ethoxyphenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

橙色粉末,15.9％yield,m.p:165.1-167.5℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.657(s,1H),7.448(d,J＝9.0Hz,2H),7.187(d,J＝8.4Hz,2H),7.043(d,J＝9.0Hz,1H),6.857(d,J＝9.0Hz,1H),5.971(s,1H),4.015-4.039(m,2H),3.942-3.977(m,2H),3.715(t,J＝4.2Hz,4H),3.281(t,J＝4.2Hz,4H),2.375(s,3H),1.274(t,J＝7.2Hz,3H),1.118(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.042,164.615,158.561,155.947,152.248,151.461,133.583,132.594,132.072×2,128.764×2,122.168,114.384×2,114.184×2,113.776,108.358,65.842×2,63.074,60.097,54.174,46.722×2,22.451,14.620,13.950.ESI-MS m/z:534.3(M+H)⁺,calcd for C₂₉H₃₁N₃O₅S:533.64.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例6所合成的化合物29的化學結構表征數據

化合物(29)：2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-烯丙氧基苯基)-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(4-(allyloxy)phenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

橙色粉末,40.5％yield,m.p:157.2-158.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.678(s,1H),7.463(d,J＝9.0Hz,2H),7.202(d,J＝8.4Hz,2H),7.059(d,J＝9.0Hz,2H),6.900(d,J＝8.4Hz,2H),5.968-6.032(m,1H),5.988(s,1H),5.344-5.375(dd,J 1＝17.4Hz,J 2＝1.8Hz,1H),5.220-5.240(dd,J 1＝10.8Hz,J 2＝1.8Hz,1H),4.516(d,J＝5.4Hz,2H),4.006-4.066(m,2H),3.721(t,J＝4.8Hz,4H),3.292(t,J＝4.8Hz,4H),2.383(s,3H),1.123(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.978,164.560,158.162,155.903,152.203,151.445,133.560,132.836,132.025×2,128.706×2,122.128,117.516,114.629×2,114.146×2,113.728,108.282,68.161,65.789×2,60.035,54.102,46.672×2,22.416,13.902.ESI-MS m/z:546.0(M+H)⁺,calcd for C₃₀H₃₁N₃O₅S:545.65.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例7所合成的化合物35的化學結構表征數據

化合物(35):2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-羥基苯基)-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(4-hydroxyphenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

紅色粉末,38.6％yield,m.p:206.5-208.3℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):9.533(s,1H),7.670(s,1H),7.458(d,J＝9.0Hz,2H),7.090(d,J＝8.4Hz,2H),7.055(d,J＝9.6Hz,2H),6.693(d,J＝8.4Hz,2H),5.941(s,1H),4.021-4.048(m,2H),3.720(t,J＝4.8Hz,4H),3.288(t,J＝4.8Hz,4H),2.372(s,3H),1.123(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.040,164.578,157.516,155.800,152.180,151.203,133.420,131.997×2,131.072,128.718×2,122.167,115.219×2,114.149×2,113.847,108.479,65.791×2,59.993,54.169,46.685×2,22.372,13.910.ESI-MS m/z:506.1(M+H)⁺,calcd for C₂₇H₂₇N₃O₅S:505.59.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例8所合成的化合物39的化學結構表征數據

化合物(39):2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

紅色粉末,28.2％yield,m.p:219.1-220.7℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):9.142(s,1H),7.693(s,1H),7.469(d,J＝9.0Hz,2H),7.062(d,J＝9.0Hz,2H),6.831(s,1H),6.714(d,J＝7.8Hz,1H),6.655(d,J＝7.8Hz,1H),5.957(s,1H),4.026-4.086(m,2H),3.722(s,3H),3.722(t,J＝4.8Hz,4H),3.292(t,J＝4.8Hz,4H),2.376(s,3H),1.145(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.082,164.655,155.846,152.202,151.224,147.175,146.867,133.477,132.023×2,131.625,122.180,119.678,115.589,114.164×2,113.835,111.951,108.408,65.798×2,60.024,55.624,54.403,46.697×2,22.359,13.974.ESI-MS m/z:536.1(M+H)⁺,calcd for C₂₈H₂₉N₃O₆S:535.61.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例9所合成的化合物42的化學結構表征數據

化合物(42):2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-(3,4-二羥基苯基)-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

橙色粉末,70.8％yield,m.p:154.1-156.3℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):9.023(s,1H),8.997(s,1H),7.671(s,1H),7.459(d,J＝9.0Hz,2H),7.052(d,J＝9.0Hz,2H),6.684(d,J＝2.4Hz,1H),6.642(d,J＝8.4Hz,1H),6.543-6.560(dd,J 1＝8.4Hz,J 2＝2.4Hz,1H),5.880(s,1H),4.019-4.080(m,2H),3.719(t,J＝4.8Hz,4H),3.285(t,J＝4.8Hz,4H),2.360(s,3H),1.147(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.169,164.615,155.847,152.222,150.952,145.663,145.135,133.461,132.043×2,131.513,122.216,118.515,115.406,114.632,114.193×2,113.922,108.659,65.834×2,60.076,54.236,46.729×2,22.383,13.977.ESI-MS m/z:522.3(M+H)⁺,calcd for C₂₇H₂₇N₃O₆S:521.58.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例10所合成的化合物49的化學結構表征數據

化合物(49):2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-甲基噻唑)-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-5-(4-methylthiazol-5-yl)-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

紅色粉末,50.8％yield,m.p:198.4-200.5℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.887(s,1H),7.741(s,1H),7.471(d,J＝9.0Hz,2H),7.062(d,J＝9.0Hz,2H),6.378(s,1H),4.070-4.120(m,2H),3.723(t,J＝4.8Hz,4H),3.301(t,J＝4.8Hz,4H),2.534(s,3H),2.372(s,3H),1.139(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.581,164.478,155.815,152.983,152.322,151.992,150.920,134.268,132.184×2,131.707,121.989,114.119×2,113.062,108.249,65.785×2,60.274,47.526,46.635×2,22.463,15.111,13.961.ESI-MS m/z:511.2(M+H)⁺,calcd for C₂₅H₂₆N₄O₄S₂:510.63.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例11所合成的化合物52的化學結構表征數據

化合物(52)：2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-(5-甲基呋喃)-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-5-(5-methylfuran-2-yl)-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

橙色粉末,19.3％yield,m.p:200.4-201.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.757(s,1H),7.495(d,J＝9.0Hz,2H),7.070(d,J＝9.0Hz,2H),6.176(d,J＝3.0Hz,1H),6.105(s,1H),5.990(d,J＝1.8Hz,1H),4.064-4.155(m,2H),3.726(t,J＝4.8Hz,4H),3.300(t,J＝4.8Hz,4H),2.362(s,3H),2.160(s,3H),1.178(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.835,164.438,155.902,152.834,152.289,151.902,149.990,133.864,132.153×2,122.138,114.182×2,113.613,109.249,106.896,105.379,65.820×2,60.138,47.996,46.702×2,22.496,14.011,13.362.ESI-MS m/z:494.3(M+H)⁺,calcd for C₂₆H₂₇N₃O₅S:493.57.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例12所合成的化合物61的化學結構表征數據

化合物(61)：2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

紅色粉末,50.8％yield,m.p:160.3-162.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.780(s,1H),7.493(d,J＝9.0Hz,2H),7.460(d,J＝4.8Hz,1H),7.067(d,J＝9.0Hz,2H),6.992(d,J＝2.4Hz,1H),6.952-6.967(m,1H),6.350(s,1H),4.074-4.138(m,2H),3.724(t,J＝4.8Hz,4H),3.303(t,J＝4.8Hz,4H),2.400(s,3H),1.155(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.757,164.500,155.821,152.608,152.303,143.043,134.190,132.192×2,127.052,126.656,126.239,122.013,114.125×2,113.445,107.628,65.786×2,60.211,49.104,46.641×2,22.441,13.944.ESI-MS m/z:496.1(M+H)⁺,calcd for C₂₅H₂₅N₃O₄S₂:495.61.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例13所合成的化合物64的化學結構表征數據

化合物(64)：2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-環(huán)丙基-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-cyclopropyl-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黃色粉末,85.3％yield,m.p:122.6-123.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.820(s,1H),7.526(d,J＝9.0Hz,2H),7.085(d,J＝9.0Hz,2H),4.941(d,J＝7.8Hz,1H),4.144-4.238(m,2H),3.734(t,J＝4.2Hz,4H),3.330(t,J＝4.2Hz,4H),2.306(s,3H),1.264(t,J＝7.2Hz,3H),1.143-1.125(m,1H),0.289-0.433(m,4H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.638,165.341,156.527,152.825,152.350,152.221,133.580,132.089×2,122.222,114.178×2,106.441,65.809×2,60.131,53.067,46.696×2,22.278,16.628,14.130,3.043,1.418.ESI-MS m/z:454.3(M+H)⁺,calcd for C₂₄H₂₇N₃O₄S:453.55.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例14所合成的化合物65的化學結構表征數據

化合物(65)：2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-丙基-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-5-propyl-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黃色粉末,85.3％yield,m.p:135.1-136.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.789(s,1H),7.516(d,J＝8.4Hz,2H),7.083(d,J＝9.0Hz,2H),5.200(t,J＝4.8Hz,1H),4.131-4.225(m,2H),3.733(t,J＝4.2Hz,4H),3.330(t,J＝4.2Hz,4H),2.302(s,3H),1.429-1.711(m,2H),1.257(t,J＝7.2Hz,3H),1.043-1.100(m,2H),0.816(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.308,164.920,156.898,152.893,152.189,133.303,132.031×2,122.263,114.189×2,114.021,107.099,65.805×2,60.116,50.930,46.711×2,36.095,22.371,16.400,14.081,13.676.ESI-MS m/z:456.4(M+H)⁺,calcd for C₂₄H₂₉N₃O₄S:455.57.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例15所合成的化合物66的化學結構表征數據

化合物(66)：2-(4-嗎啡啉)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-環(huán)己基-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-cyclohexyl-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黃色粉末,87.2％yield,m.p:177.5-179.3℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.795(s,1H),7.520(d,J＝9.0Hz,2H),7.081(d,J＝9.0Hz,2H),5.146(d,J＝3.6Hz,1H),4.139-4.221(m,2H),3.732(t,J＝4.2Hz,4H),3.330(t,J＝4.2Hz,4H),2.290(s,3H),1.462-1.637(m,7H),1.054(t,J＝7.2Hz,3H),0.974-1.015(m,4H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.943,165.141,157.083,152.698,152.188,149.867,133.434,132.065×2,128.785,114.168×2,111.559,65.798×2,60.134,54.990,46.703×2,29.665,27.915,27.184,25.613,25.550,25.512,22.108,14.070.ESI-MS m/z:496.4(M+H)⁺,calcd for C₂₇H₃₃N₃O₄S:495.63.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例16所合成的化合物67的化學結構表征數據

化合物(67)：2-(4-甲基哌嗪-1-)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-2-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)benzylidene)-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黃色粉末，¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.745(s,1H),7.389(d,J＝9.0Hz,2H),7.198(d,J＝5.4Hz,1H),7.078(d,J＝5.4Hz,1H),6.918(d,J＝8.4Hz,2H)，6.897-6.905(m,1H)，6.325(s,1H)，4.125-4.189(m,2H),3.381(t,J＝5.4Hz,4H),2.571(t,J＝5.4Hz,4H),2.526(s,3H),2.363(s,3H),1.210(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.751,165.600,156.812,153.796,152.263,143.319,134.438,132.383×2,126.984,126.816,126.146,123.180,115.145,114.774×2,108.233,60.658,54.781×2,49.715,47.302×2,46.156,22.910,14.287.ESI-MS m/z:509.70(M+H)⁺,calcd for C₂₆H₂₈N₄O₃S₂:508.66.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例17所合成的化合物71的化學結構表征數據

化合物(71):2-(4-二甲氨基)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethy(Z)-2-(4-(dimethylamino)benzylidene)-7-methyl-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黃色粉末,60.2％yield,m.p:180.0-181.3℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.764(s,1H),7.389(d,J＝9.0Hz,2H),7.202(d,J＝4.8Hz,1H),7.086(d,J＝3.6Hz,1H),6.897-6.917(m,1H)，6.724(d,J＝8.4Hz,2H),6.536(s,1H)，4.122-4.208(m,2H),3.068(s,6H),2.538(s,3H),1.220(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.899,165.711,157.343,153.951,151.905,143.542,135.318,132.737×2,127.019,126.803,126.143,120.764,113.185,112.189×2,108.023,60.672,49.711,40.231×2,22.945,14.355.ESI-MS m/z:454.30(M+H)⁺,calcd for C₂₃H₂₃N₃O₃S₂:453.11.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例18所合成的化合物73的化學結構表征數據

化合物(73):2-((4-吡咯烷-1-)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-3-oxo-2-(4-(pyrrolidin-1-yl)benzylidene)-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黃色粉末,78.8％yield,m.p:158.5-158.9℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.757(s,1H),7.372(d,J＝9.0Hz,2H),7.191(d,J＝4.8Hz,1H),7.077(d,J＝4.2Hz,1H),6.892-6.907(m,1H)，6.584(d,J＝8.4Hz,2H)，6.530(s,1H)，4.125-4.181(m,2H),3.367-3.379(m,4H),2.529(s,3H)，2.031-2.053(m,4H),1.210(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.867,165.677,157.475,149.520,143.552,135.639,132.913×2,126.952,126.724,126.063,121.633,120.213,112.271×2,111.438,107.846,60.597,49.633,47.756×2,25.583×2,22.876,14.300.ESI-MS m/z:480.9(M+H)⁺,calcd for C₂₅H₂₅N₃O₃S₂:479.61.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例19所合成的化合物74的化學結構表征數據

化合物(74):2-((4-二乙氨基)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-2-(4-(diethylamino)benzylidene)-7-methyl-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黃色粉末77.2％yield,m.p:171.1-172.3℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.749(s,1H),7.368(d,J＝9.0Hz,2H),7.202(d,J＝4.8Hz,1H),7.088(d,J＝3.0Hz,1H),6.904-6.918(m,1H)，6.698(d,J＝9.0Hz,2H)，6.540(s,1H)，4.135-4.203(m,2H),3.429(q,J＝7.2Hz,4H),2.539(s,3H)，1.203-1.239(m,9H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.890,165.681,157.440,153.996,149.689,143.560,135.346,133.063×2,126.955,126.719,126.065,119.997,112.355,111.717×2,107.865,60.601,49.643,44.767×2,22.889,14.302,12.718×2.ESI-MS m/z:482.5(M+H)⁺,calcd for C₂₅H₂₇N₃O₃S₂:481.63.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例20所合成的化合物81的化學結構表征數據

化合物(81):2-((5-甲基呋喃-2-)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-2-((5-methylfuran-2-yl)methylene)-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黃色粉末,60.5％yield,m.p:150.0-151.3℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.492(s,1H),7.195(d,J＝5.4Hz,1H),7.065(d,J＝3.0Hz,1H),6.893-6.907(m,1H),6.685(d,J＝3.0Hz,1H),6.503(s,1H),6.182(d,J＝3.0Hz,1H),4.126-4.186(m,2H),2.520(s,3H),2.394(s,3H),1.210(t,J＝7.2Hz,3H).165.581,165.316,157.827,157.348,153.671,148.532,143.250,126.973,126.774,126.123,119.799,119.752,116.464,110.236,108.261,60.665,49.712,22.923,14.287×2.ESI-MS m/z:415.6(M+H)+,calcd for C₂₀H₁₈N₂O₄S₂:414.49.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例21所合成的化合物83的化學結構表征數據

化合物(83):2-((1-氫-吡咯-2-)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-2-((1H-pyrrol-2-yl)methylene)-7-methyl-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黃色粉末,39.5％yield,m.p:155.1-156.9℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):8.937(s,1H),7.711(s,1H),7.173(d,J＝4.8Hz,1H),7.050(t,J＝2.4Hz,1H),7.030(d,J＝3.6Hz,1H),6.875(t,J＝5.4Hz,1H)，6.626(t,J＝2.4Hz,1H),6.486(s,1H),6.426-6.410(m,1H),4.113-4.174(m,2H),2.501(s,3H),1.199(t,J＝7.2Hz,3H).ESI-MS m/z:415.69(M+H)⁺,calcd for C₂₀H₁₈N₂O₄S₂:414.49.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例22所合成的化合物84的化學結構表征數據

2-(4-((2-二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-2-(4-((2-(dimethylamino)ethyl)(methyl)amino)benzylidene)-7-methyl-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

紅色粉末,50.8％yield,m.p:190.3-192.9℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.744(s,1H),7.370(d,J＝9.0Hz,2H),7.199(d,J＝5.4Hz,1H),7.078(d,J＝3.0Hz,1H),6.880-6.909(m,1H),6.716(d,J＝9.0Hz,2H),6.528(s,1H),4.125-4.188(m,2H),3.529(t,J＝7.8Hz,2H),3.054(s,3H),2.528(s,3H),2.499(t,7.2Hz,2H),2.309(s,6H),1.211(t,7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.878,165.671,157.192,153.990,150.800,143.514,135.050,132.817×2,126.954,126.732,126.069,120.729,113.186,111.974×2,107.969,60.600,56.152,50.909,49.649,46.018×2,38.818,22.942,14.296.ESI-MS m/z:512.1(M+H)⁺,calcd for C₂₆H₃₀N₄O₃S₂:510.67.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例23所合成的化合物86的化學結構表征數據

2-(4-(3-(二甲氨基)丙氧基)苯基亞甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氫-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-2-(4-(3-(dimethylamino)propoxy)benzylidene)-7-methyl-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

紅色粉末,20.5％yield,m.p:146.3-149.9℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.776(s,1H),7.428(d,J＝8.4Hz,2H),7.207(d,J＝4.8Hz,1H),7.081(d,J＝3.0Hz,1H),6.974(d,J＝9.0Hz,2H),6.903-6.917(m,1H),6.526(s,1H),4.117-4.193(m,2H),4.081(t,J＝6.0Hz,2H),2.529(s,3H),2.513(t,5.4Hz,2H),2.311(s,6H),1.994-2.039(m,2H),1.211(t,7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.580,165.508,161.105,156.338,153.575,143.068,133.966,132.301×2,127.008,126.903,126.227,125.888,117.293,115.467×2,108.517,66.488,60.710,56.274,49.769,45.413×2,27.236,22.868,14.265.ESI-MS m/z:512.9(M+H)⁺,calcd for C₂₆H₂₉N₃O₄S₂:511.66.如圖1所示為本發(fā)明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化學結構。

實施例24化合物對LPS刺激原代巨噬細胞釋放炎癥因子的抑制

采用化合物對LPS刺激原代巨噬細胞釋放炎癥因子(TNF-α和IL-6)抑制的方法測試了化合物的體外初步抗炎活性，具體方法如下：1.2×10⁶個原代巨噬細胞用DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)于37℃，24小時后更新培養(yǎng)液，并加入受測化合物(終濃度為10μM)預處理2小時，再用0.5μg/mL的LPS繼續(xù)處理22小時，收集培養(yǎng)液用ELISA法檢測TNF-α和IL-6含量；收集細胞檢測總蛋白濃度，ELISA結果用相應的總蛋白濃度相除較準，以LPS對照組的TNF-α和IL-6含量定標為100；每個化合物重復測試3次，計算平均值和誤差值?；衔飳NF-α和IL-6釋放的抑制活性見圖2。大部分有效化合物對LPS刺激的IL-6和TNF-α釋放有減少作用，效果較好的具體而言為化合物25、29、35、42和61。

實施例25活性化合物抑制LPS刺激巨噬細胞釋放炎癥因子的量效關系

進一步測試了活性化合物25、29、35、42和61抑制LPS刺激RAW264.7巨噬細胞釋放TNF-α和IL-6的量效關系，方法：同實施例24。實驗數據見圖3?；衔?5、29、35、42和61的抑制活性均具有較好的量效關系，IC₅₀基本都在2μM以下的較好水平。

實施例26活性化合物對人正常肝細胞HL-7702的毒性

將HL-7702細胞以每孔5000個細胞的密度鋪到96-孔板中，用含有5％熱滅活的血清、100U/mL的青霉素、100μg/mL鏈霉素的1640培養(yǎng)基在37℃的含5％CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。將用DMSO溶解的待測化合物加入到培養(yǎng)基中，終濃度為20μM，作用72h后進行MTT檢測。每孔中加入用生理鹽水溶解的MTT(5mg/mL)25μL培育3h。然后用100μL DMSO溶解細胞，在波長570nm下用酶標儀檢測OD值。實驗數據見圖4。待測活性化合物25、29、35、42和61對HL-7702細胞沒有表現出毒性。實施例27化合物25和61緩解急性肺損傷大鼠生理學變化

用0.5％羧甲基纖維素鈉與化合物25和61制成混懸液，于造模前連續(xù)灌胃給藥7天。各組大鼠乙醚麻醉后暴露氣管，除對照組外，其余各組氣管內緩慢滴入50μL 5mg/kg LPS，造成大鼠急性肺損傷，對照組以相同的方式滴入等量生理鹽水，縫合傷口，建立急性肺損傷模型。動物造模24h后，按照5mL/kg的劑量腹腔注射10％的水合氯醛麻醉老鼠，開胸結扎左肺，右肺用1mL生理鹽水進行支氣管肺泡灌洗，收集灌洗液，相同操作重復3次。

肺泡灌洗液收集后，4℃1000rpm離心5分鐘，取上清液，測肺泡灌洗液的蛋白濃度。肺泡灌洗液離心后，用50ul生理鹽水重懸沉淀，混勻后取20ul用細胞計數儀Standard計數肺泡灌洗液中的總細胞數。此外，取右肺上葉，濾紙吸去組織上的水分后稱取濕重，放入60℃烘烤48h以上，直到其重量不在發(fā)生變化為止，稱取干重，計算肺組織濕重/干重比(W/D)，判斷肺水腫程度。實驗數據見圖5，兩個實驗結果均表明化合物25和61在生理學上可有效緩解大鼠急性肺損傷。

實施例28說明化合物25和61緩解急性肺損傷中肺組織的病理學變化

實驗數據見圖6,正常對照組大鼠肺泡腔清晰，結構完整，壁光滑；氣管滴注LPS造成急性肺損傷模型后，肺泡壁明顯水腫、增厚，炎癥細胞浸潤增加；給予化合物25和61治療后細胞水腫、增厚顯著減弱，且炎癥細胞浸潤明顯減少，與正常組差別不大，說明化合物25和61可有效緩解急性肺損傷中肺組織損傷。

綜上所述，在本發(fā)明中，由本發(fā)明實施例24可知，我們首先進行了化合物體外抗炎活性的初篩，用不同的化合物考察對LPS刺激的原代巨噬細胞釋放炎癥因子(TNF-α和IL-6)釋放的影響，本發(fā)明的噻唑并[3,2-a]嘧啶類似物具有較好的抗炎活性。以化合物25、29、35、42和61五個化合物尤為明顯。因此，我們選擇這五個化合物進一步進行了抑制LPS刺激巨噬細胞釋放炎癥因子的量效關系研究，詳情見實施例25，發(fā)現五個化合物對TNF-α和IL-6的抑制具有很好的量效關系，IC₅₀基本都在2μM以下的較好水平。同時我們也在正常人肝細胞上測試了活性化合物的毒性(詳情見實施例26)，發(fā)現這幾個活性化合物對正常細胞均沒有毒性表現。最后綜合以上的實驗結果，我們選取了29和61作為探針化合物在動物急性肺損傷模型上驗證它的抗炎活性。實驗發(fā)現化合物29和61能緩解急性肺損傷大鼠生理學變化(詳情見實施例27)，實驗結果表明：化合物29和61可有效降低肺泡灌洗液的蛋白濃度和以及顯著降低急性肺損傷導致的濕干重比值增加，這表明本發(fā)明的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物能緩解LPS導致的肺水腫。同時能緩解急性肺損傷中肺組織的病理學變化(詳情見實施例28)。H&E染色技術和熒光染色進一步觀察到應用活性化合物29和61后，肺泡壁增厚顯著減弱，且炎癥細胞浸潤明顯減少，與正常組差別不大。

實施例29

一種含有一類噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的藥物組合物，該藥物組合物包括有效成分和藥用輔料，所述有效成分為一類以噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物及其可藥用鹽中的幾種或幾種組成，所述一類噻唑并[3,2-a]嘧啶具有下列通式：

其中：R¹選自可以被1至3個相同或不同的取代基任選取代的芳基、烷基、環(huán)丙基、環(huán)己基或雜環(huán)基，所述取代基選自鹵素、烷氧基、羥基、烯丙氧基；

R²選自或雜環(huán)基，其中，波浪線表示連接位置。

R³為低級烷氧基，-O(CH₂)_nCH₃；

有效成分選自下列中的任一化合物：

本發(fā)明的藥物組合物可與現已上市的抗炎藥物聯合使用，制備得到的防治炎癥疾病類藥物的組合物，已上市的抗炎藥物包括各種甾體類抗炎藥物和非甾體類抗炎藥物；藥學上可接受的鹽是這樣一些鹽，它們保持母體化合物的理想的生物活性，并且沒有給予不希望的毒理學作用，這樣的鹽的例子包括與無機酸形成的鹽，如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸等；與有機酸形成的鹽，如乙酸、草酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、抗壞血酸等；以及由元素陰離子形成的鹽，如氯、溴和碘；

本發(fā)明藥物組合物中的藥用輔料指藥學領域常規(guī)的藥物載體，包括但不限于任何被美國食品藥物管理局批準為可接受用于人或家畜的佐劑、載體、賦形劑、助流劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、增味劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、穩(wěn)定劑、等張劑、溶劑或乳化劑。

本發(fā)明的制劑包括那些適于口服、直腸、局部、口腔、舌下、腸胃外(例如，皮下、肌肉、靜脈內)以及經皮給藥的制劑，盡管在任何給定的情況下，最適宜的路線將取決于所治療的病癥的性質和嚴重性以及取決于所使用的特定活性化合物的性質。

由本發(fā)明上述實施例可知，本發(fā)明提供一種噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的用途，進行大量噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的藥物設計、合成、藥理活性篩選，得出本發(fā)明一類噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物，并且本發(fā)明的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物具有高效、廣譜的抗炎用途。本發(fā)明還提供一種噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的藥物組合物，該藥物組合物具有高效、廣譜的抗炎用途。

上述詳細說明是針對發(fā)明的可行實施例的具體說明，該實施例并非用以限制本發(fā)明的專利范圍，凡未脫離本發(fā)明的等效實施或變更，均應當包含于本發(fā)明的專利范圍內。

另外，本領域技術人員還可在本發(fā)明權利要求公開的范圍和精神內做其它形式和細節(jié)上的各種修改、添加和替換。當然，這些依據本發(fā)明精神所做的各種修改、添加和替換等變化，都應包含在本發(fā)明所要求保護的范圍之內。