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一株高產(chǎn)過(guò)氧化氫酶的黑曲霉菌株及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):12096800閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一株高產(chǎn)過(guò)氧化氫酶的黑曲霉菌株,其特征在于,所述菌株具體為黑曲霉(Aspergillus niger)LDG1,保藏編號(hào)為CGMCC No.13167。

2.權(quán)利要求1所述的黑曲霉菌株發(fā)酵生產(chǎn)過(guò)氧化氫酶的方法,其特征在于,步驟如下:

a.種子液培養(yǎng):將菌種接至種子培養(yǎng)基中,33℃,180-300rpm,發(fā)酵50h;

b.發(fā)酵罐培養(yǎng):在無(wú)菌條件下,按照7%的接種量,將種子液壓入發(fā)酵罐,進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng),33℃,300-800rpm,發(fā)酵至40h-110h,通過(guò)補(bǔ)料控制DE值在55-60之間;當(dāng)發(fā)酵至110h-170h時(shí),通過(guò)補(bǔ)料將DE值控制在35-40之間;當(dāng)發(fā)酵至170h-185h菌體自溶?chē)?yán)重,酶活無(wú)明顯提高時(shí)停止補(bǔ)料;當(dāng)發(fā)酵至185h-195h DE值降低至20時(shí)放罐;

c.提取與精制:發(fā)酵液中加入200ppm聚丙烯酰胺和2.5%珍珠巖進(jìn)行絮凝和板框壓濾,然后進(jìn)行超濾濃縮6-8倍,最后加入防腐劑和保護(hù)劑配兌并用硅藻土過(guò)濾除菌,得到過(guò)氧化氫酶成品酶制劑。

3.權(quán)利要求2所述黑曲霉菌株發(fā)酵生產(chǎn)過(guò)氧化氫酶的方法,其特征在于,培養(yǎng)基質(zhì)量體積百分百組成如下:

種子培養(yǎng)基:蔗糖4%-4.8%,葡萄糖1%-2%,硫酸鎂0.1%-0.2%,氯化鉀0.05%-0.08%,硝酸鈉0.3%-0.4%,磷酸二氫鉀0.2%-0.4%,pH 7.0;

發(fā)酵培養(yǎng)基:玉米淀粉9%-11%,玉米粉5%-8%,豆餅粉2.5%-3%,氯化鈣0.03-0.04%,硫酸銨1%-1.5%,磷酸二氫鉀0.5%-0.8%,磷酸二氫鈉0.4%-0.7%,檸檬酸鈉0.2%-0.4%,玉米漿1%-3%,pH 7.0;

補(bǔ)料培養(yǎng)基:玉米淀粉25%,玉米漿2.3%,硫酸銨0.5%,磷酸二氫鉀0.2%-0.5%,pH 7.0。

4.權(quán)利要求2所述黑曲霉菌株發(fā)酵生產(chǎn)過(guò)氧化氫酶的方法,其特征在于,防腐劑添加量為亞硝酸鈉0.1%-0.3%,苯甲酸鈉0.6%-0.8%,山梨酸鉀0.3%-0.4%。

5.權(quán)利要求2所述黑曲霉菌株發(fā)酵生產(chǎn)過(guò)氧化氫酶的方法,其特征在于,保護(hù)劑添加量為7%-9%葡萄糖和10%-15%甘油。

6.權(quán)利要求1所述高產(chǎn)過(guò)氧化氫酶的權(quán)利要求1所述的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1所述黑曲霉菌株所產(chǎn)的過(guò)氧化氫酶。

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