本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種白僵菌分離擴繁方法。

背景技術(shù)：

白僵菌是一種子囊菌類的蟲生真菌，主要種類包括球孢白僵菌和布氏白僵菌等，常通過無性繁殖生成分生孢子，菌絲有橫隔有分枝。白僵菌可以侵入6個目15科200多種昆蟲、螨類的蟲體內(nèi)大量繁殖，同時產(chǎn)生白僵素(非核糖體多肽類毒素)、卵孢霉素(苯醌類毒素)和草酸鈣結(jié)晶，這些物質(zhì)可引起昆蟲中毒，打亂新陳代謝以致死亡。其中，球孢白僵菌為子囊菌類的真菌，可工業(yè)化培養(yǎng)生產(chǎn)，人們利用其產(chǎn)生的分子孢子可加工成微生物殺蟲劑。

中藥白僵蠶也是基于白僵菌的以上特性產(chǎn)生的，昆蟲家蠶的幼蟲在未吐絲前，因感染白僵菌而發(fā)病致死，蟲體僵化即為白僵蠶，外用其藥，味咸、辛，性平，可治面上黑及礙容性疾病，白僵蠶含有氨基酸和活性絲光素，有營養(yǎng)皮膚和美容作用；所含蛋白質(zhì)有刺激上皮脂腺，調(diào)節(jié)性激素分泌的作用，因而對女性性激素分泌失調(diào)引起的黃褐斑有一定療效；含維生素E，能清除自由基，抗脂質(zhì)氧化形成的老年斑；所含的活性絲光素能促使皮膚細胞新生，調(diào)節(jié)皮脂，改善皮膚微循環(huán)，可增白防曬，消除色素沉著，保持皮膚彈性。人工培養(yǎng)白僵菌，并采用白僵菌感染家蠶即能得到工業(yè)化的白僵蠶產(chǎn)品，因此，白僵菌的分離擴繁生產(chǎn)過程尤為重要。然而，現(xiàn)有白僵菌的分離及擴繁生產(chǎn)周期較長，在生產(chǎn)過程中易受雜菌污染，白僵菌產(chǎn)量不高，質(zhì)量并不穩(wěn)定，成本也較高。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本申請?zhí)峁┮环N白僵菌分離擴繁方法，所述方法的工藝簡單，生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)周期短，提高了生產(chǎn)效率，顯著減少雜菌污染，成功率高，擴繁后的白僵菌質(zhì)量穩(wěn)定。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是一種白僵菌分離擴繁方法，所述方法包括以下步驟：

(1)白僵菌孢子液制備：用無菌接種環(huán)從白僵蠶表面挑取3—4環(huán)分生孢子粉，置于無菌水中，振蕩10—15min，直至均勻，得白僵菌孢子液；

(2)分離純化培養(yǎng)：將步驟(1)得到的白僵菌孢子液接種于選擇培養(yǎng)基中，在25—26℃條件下培養(yǎng)4—6天，得白僵菌菌種，所述選擇培養(yǎng)基的組分包括：PDA培養(yǎng)基，補充龍膽紫、苯菌靈、脫氧膽酸鈉、頭孢霉素、放線菌酮、多果定中的至少一種；

(3)一次擴大培養(yǎng)：將步驟(2)得到的白僵菌菌種接種于液體培養(yǎng)基中，在24—25℃、振蕩條件下培養(yǎng)2—3天，得到白僵菌菌絲體，所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖4—6份、馬鈴薯汁5—10份、蛋白胨2—10份、頭孢霉素1—2份、BaCl₂1—2份、CaCl₂1—2份、無菌水20—80份；

(4)二次擴大培養(yǎng)：將步驟(3)得到的白僵菌菌絲體接種于固體培養(yǎng)基中，在25—26℃條件下培養(yǎng)5—9天，得到擴繁后的白僵菌，所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖2—5份、豆粕3—8份、玉米粉10—20份。

優(yōu)選的，步驟(2)中所述選擇培養(yǎng)基的組分包括：PDA培養(yǎng)基，補充苯菌靈、脫氧膽酸鈉、頭孢霉素中的至少一種。

更為優(yōu)選的，步驟(2)中所述選擇培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：PDA培養(yǎng)基，補充脫氧膽酸鈉2—4份、頭孢霉素3—5份。

更為優(yōu)選的，步驟(2)中所述選擇培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：PDA培養(yǎng)基，補充苯菌靈1—2份、脫氧膽酸鈉2—4份。

優(yōu)選的，步驟(3)所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖5份、馬鈴薯汁7份、蛋白胨8份、頭孢霉素2份、BaCl₂1份、CaCl₂2份、無菌水70份。

優(yōu)選的，步驟(4)所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖3.5份、豆粕7份、玉米粉15份。

優(yōu)選的，所述白僵菌孢子液制備步驟之前，先將白僵蠶表面用75％酒精消毒，再置于無菌培養(yǎng)皿中培養(yǎng)4—5天，直至白僵蠶表面長出菌絲和分生孢子。

優(yōu)選的，步驟(2)所述選擇培養(yǎng)基的制備方法為：取滅菌后冷卻至65—68℃的PDA培養(yǎng)基，加入龍膽紫、苯菌靈、脫氧膽酸鈉、頭孢霉素、放線菌酮、多果定中的至少一種，待冷卻至40—45℃時，再加入硫酸卡那霉素，待所述選擇培養(yǎng)基凝固即可。

優(yōu)選的，所述二次擴大培養(yǎng)的濕度控制在92—94％。

其中，本申請技術(shù)方案所述的白僵菌為球孢白僵菌。

所述的PDA培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的簡稱，即Potato Dextrose Agar Medium。其做法是：稱取200g洗凈去皮的馬鈴薯切成小塊，加水煮爛(煮沸20—30min，能被玻璃棒戳破即可)，用八層紗布過濾，加熱，再根據(jù)實驗需要加1—10g瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌混勻，待瓊脂溶解完后，加入葡萄糖，攪拌均勻，稍冷卻后再補足水分至1000毫升，分裝試管或者錐形瓶，加塞、包扎，115℃滅菌20分鐘后取出試管擺斜面或者搖勻，冷卻后即得。

本申請技術(shù)方案中提供了一種白僵菌的分離擴繁方法，采用白僵蠶蟲體上的孢子粉，制得白僵菌孢子液，通過在選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，對白僵菌的菌種進行分離，通過在PDA培養(yǎng)基中，補充龍膽紫、苯菌靈、脫氧膽酸鈉、頭孢霉素、放線菌酮、多果定中的至少一種的組合，通過組分之間的協(xié)同作用，能夠避免雜菌的生長，且能夠促進白僵菌孢子的生長，得到純凈的白僵菌菌體，同時分離純化后的白僵菌菌體經(jīng)過一次擴大培養(yǎng)和二次擴大培養(yǎng)，針對于白僵菌菌體本身特性設置了液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，其中液體培養(yǎng)基中含有葡萄糖、馬鈴薯汁、蛋白胨，為白僵菌菌絲體提供豐富的碳源、氮源，含有的BaCl₂和CaCl₂為菌絲生長和產(chǎn)孢提供鋇元素和鈣元素，含有的頭孢霉素能夠避免雜菌生成污染，且不會影響白僵菌菌絲體的生長，通過液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)，能夠提高菌絲生長期間的濕度，便于控制菌絲生長的溫度，加快了白僵菌菌絲體的生長；其中固體培養(yǎng)基中含有葡萄糖、豆粕、玉米粉，為菌絲生長提供碳源和氮源，此外，豆粕和玉米粉具有疏松質(zhì)地，具有較好的保濕性和透氣性，提供濕潤和透氣的環(huán)境，有利于白僵菌菌絲體的快速繁殖和產(chǎn)孢。

通過以上技術(shù)方案對白僵菌進行分離和擴繁，工藝簡單，生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)周期短，提高了生產(chǎn)效率，顯著減少雜菌污染，成功率高，擴繁后的白僵菌質(zhì)量穩(wěn)定。

具體實施方式

為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。

實施例1

本實施例所述的一種白僵菌分離擴繁方法，包括以下步驟：

(1)白僵菌孢子液制備：將被球孢白僵菌感染后的白僵蠶表面用75％酒精消毒，再置于無菌培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，直至白僵蠶表面長出菌絲和分生孢子，用無菌接種環(huán)從白僵蠶表面挑取3—4環(huán)分生孢子粉，置于無菌水中，振蕩10—15min，直至均勻，得白僵菌孢子液；

(2)分離純化培養(yǎng)：取滅菌后冷卻至65—68℃的PDA培養(yǎng)基，按重量份數(shù)計，加入脫氧膽酸鈉3份、頭孢霉素4份，待冷卻至40—45℃時，再加入硫酸卡那霉素1份，凝固后形成選擇培養(yǎng)基，將步驟(1)得到的白僵菌孢子液接種于選擇培養(yǎng)基中，在25—26℃條件下培養(yǎng)4天，得白僵菌菌種；

(3)一次擴大培養(yǎng)：將步驟(2)得到的白僵菌菌種接種于液體培養(yǎng)基中，在24—25℃、振蕩條件下培養(yǎng)2天，得到白僵菌菌絲體，所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖5份、馬鈴薯汁7份、蛋白胨8份、頭孢霉素2份、BaCl₂1份、CaCl₂2份、無菌水70份；

(4)二次擴大培養(yǎng)：將步驟(3)得到的白僵菌菌絲體接種于固體培養(yǎng)基中，在25—26℃溫度和93％濕度的條件下培養(yǎng)8天，得到擴繁后的白僵菌，所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖3.5份、豆粕7份、玉米粉15份。

本實施例所述白僵菌的分離擴繁方法，其產(chǎn)孢量為7.1×10⁹個/g固體培養(yǎng)基，孢子萌發(fā)率達96％。

實施例2

本實施例所述的一種白僵菌分離擴繁方法，包括以下步驟：

(1)白僵菌孢子液制備：將被球孢白僵菌感染后的白僵蠶表面用75％酒精消毒，再置于無菌培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，直至白僵蠶表面長出菌絲和分生孢子，用無菌接種環(huán)從白僵蠶表面挑取3—4環(huán)分生孢子粉，置于無菌水中，振蕩10—15min，直至均勻，得白僵菌孢子液；

(2)分離純化培養(yǎng)：取滅菌后冷卻至65—68℃的PDA培養(yǎng)基，按重量份數(shù)計，加入苯菌靈2份、脫氧膽酸鈉3份，待冷卻至40—45℃時，再加入硫酸卡那霉素1份，凝固后形成選擇培養(yǎng)基，將步驟(1)得到的白僵菌孢子液接種于選擇培養(yǎng)基中，在25—26℃條件下培養(yǎng)4天，得白僵菌菌種；

(3)一次擴大培養(yǎng)：將步驟(2)得到的白僵菌菌種接種于液體培養(yǎng)基中，在24—25℃、振蕩條件下培養(yǎng)2天，得到白僵菌菌絲體，所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖5份、馬鈴薯汁7份、蛋白胨8份、頭孢霉素2份、BaCl₂1份、CaCl₂2份、無菌水70份；

(4)二次擴大培養(yǎng)：將步驟(3)得到的白僵菌菌絲體接種于固體培養(yǎng)基中，在25—26℃溫度和93％濕度的條件下培養(yǎng)5天，得到擴繁后的白僵菌，所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖3.5份、豆粕7份、玉米粉15份。

本實施例所述白僵菌的分離擴繁方法，其產(chǎn)孢量為7.1×10⁹個/g固體培養(yǎng)基，孢子萌發(fā)率達96％。

實施例3

本實施例所述的一種白僵菌分離擴繁方法，包括以下步驟：

(1)白僵菌孢子液制備：將被球孢白僵菌感染后的白僵蠶表面用75％酒精消毒，再置于無菌培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，直至白僵蠶表面長出菌絲和分生孢子，用無菌接種環(huán)從白僵蠶表面挑取3—4環(huán)分生孢子粉，置于無菌水中，振蕩10—15min，直至均勻，得白僵菌孢子液；

(2)分離純化培養(yǎng)：取滅菌后冷卻至65—68℃的PDA培養(yǎng)基，按重量份數(shù)計，加入脫氧膽酸鈉2份、頭孢霉素3份，待冷卻至40—45℃時，再加入硫酸卡那霉素1份，凝固后形成選擇培養(yǎng)基，將步驟(1)得到的白僵菌孢子液接種于選擇培養(yǎng)基中，在25—26℃條件下培養(yǎng)4天，得白僵菌菌種；

(3)一次擴大培養(yǎng)：將步驟(2)得到的白僵菌菌種接種于液體培養(yǎng)基中，在24—25℃、振蕩條件下培養(yǎng)3天，得到白僵菌菌絲體，所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖4份、馬鈴薯汁2份、蛋白胨2份、頭孢霉素1份、BaCl₂1份、CaCl₂1份、無菌水20份；

(4)二次擴大培養(yǎng)：將步驟(3)得到的白僵菌菌絲體接種于固體培養(yǎng)基中，在25—26℃溫度和92％濕度的條件下培養(yǎng)6天，得到擴繁后的白僵菌，所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖2份、豆粕3份、玉米粉10份。

本實施例所述白僵菌的分離擴繁方法，其產(chǎn)孢量為6.9×10⁹個/g固體培養(yǎng)基，孢子萌發(fā)率達95％。

實施例4

本實施例所述的一種白僵菌分離擴繁方法，包括以下步驟：

(1)白僵菌孢子液制備：將被球孢白僵菌感染后的白僵蠶表面用75％酒精消毒，再置于無菌培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，直至白僵蠶表面長出菌絲和分生孢子，用無菌接種環(huán)從白僵蠶表面挑取3—4環(huán)分生孢子粉，置于無菌水中，振蕩10—15min，直至均勻，得白僵菌孢子液；

(2)分離純化培養(yǎng)：取滅菌后冷卻至65—68℃的PDA培養(yǎng)基，按重量份數(shù)計，加入脫氧膽酸鈉4份、頭孢霉素5份，待冷卻至40—45℃時，再加入硫酸卡那霉素1份，凝固后形成選擇培養(yǎng)基，將步驟(1)得到的白僵菌孢子液接種于選擇培養(yǎng)基中，在25—26℃條件下培養(yǎng)5天，得白僵菌菌種；

(3)一次擴大培養(yǎng)：將步驟(2)得到的白僵菌菌種接種于液體培養(yǎng)基中，在24—25℃、振蕩條件下培養(yǎng)2天，得到白僵菌菌絲體，所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖6份、馬鈴薯汁10份、蛋白胨10份、頭孢霉素2份、BaCl₂2份、CaCl₂2份、無菌水80份；

(4)二次擴大培養(yǎng)：將步驟(3)得到的白僵菌菌絲體接種于固體培養(yǎng)基中，在25—26℃溫度和94％濕度的條件下培養(yǎng)7天，得到擴繁后的白僵菌，所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖5份、豆粕8份、玉米粉20份。

本實施例所述白僵菌的分離擴繁方法，其產(chǎn)孢量為7.2×10⁹個/g固體培養(yǎng)基，孢子萌發(fā)率達96％。

實施例5

本實施例所述的一種白僵菌分離擴繁方法，包括以下步驟：

(1)白僵菌孢子液制備：將被球孢白僵菌感染后的白僵蠶表面用75％酒精消毒，再置于無菌培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，直至白僵蠶表面長出菌絲和分生孢子，用無菌接種環(huán)從白僵蠶表面挑取3—4環(huán)分生孢子粉，置于無菌水中，振蕩10—15min，直至均勻，得白僵菌孢子液；

(2)分離純化培養(yǎng)：取滅菌后冷卻至65—68℃的PDA培養(yǎng)基，按重量份數(shù)計，加入苯菌靈1份、脫氧膽酸鈉2份，待冷卻至40—45℃時，再加入硫酸卡那霉素1份，凝固后形成選擇培養(yǎng)基，將步驟(1)得到的白僵菌孢子液接種于選擇培養(yǎng)基中，在25—26℃條件下培養(yǎng)5天，得白僵菌菌種；

(3)一次擴大培養(yǎng)：將步驟(2)得到的白僵菌菌種接種于液體培養(yǎng)基中，在24—25℃、振蕩條件下培養(yǎng)3天，得到白僵菌菌絲體，所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖4份、馬鈴薯汁2份、蛋白胨2份、頭孢霉素1份、BaCl₂1份、CaCl₂1份、無菌水20份；

(4)二次擴大培養(yǎng)：將步驟(3)得到的白僵菌菌絲體接種于固體培養(yǎng)基中，在25—26℃溫度和92％濕度的條件下培養(yǎng)9天，得到擴繁后的白僵菌，所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖2份、豆粕3份、玉米粉10份。

本實施例所述白僵菌的分離擴繁方法，其產(chǎn)孢量為7.08×10⁹個/g固體培養(yǎng)基，孢子萌發(fā)率達95％。

實施例6

本實施例所述的一種白僵菌分離擴繁方法，包括以下步驟：

(1)白僵菌孢子液制備：將被球孢白僵菌感染后的白僵蠶表面用75％酒精消毒，再置于無菌培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，直至白僵蠶表面長出菌絲和分生孢子，用無菌接種環(huán)從白僵蠶表面挑取3—4環(huán)分生孢子粉，置于無菌水中，振蕩10—15min，直至均勻，得白僵菌孢子液；

(2)分離純化培養(yǎng)：取滅菌后冷卻至65—68℃的PDA培養(yǎng)基，按重量份數(shù)計，加入苯菌靈2份、脫氧膽酸鈉4份，待冷卻至40—45℃時，再加入硫酸卡那霉素1份，凝固后形成選擇培養(yǎng)基，將步驟(1)得到的白僵菌孢子液接種于選擇培養(yǎng)基中，在25—26℃條件下培養(yǎng)4天，得白僵菌菌種；

(3)一次擴大培養(yǎng)：將步驟(2)得到的白僵菌菌種接種于液體培養(yǎng)基中，在24—25℃、振蕩條件下培養(yǎng)3天，得到白僵菌菌絲體，所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖6份、馬鈴薯汁10份、蛋白胨10份、頭孢霉素2份、BaCl₂2份、CaCl₂2份、無菌水80份；

(4)二次擴大培養(yǎng)：將步驟(3)得到的白僵菌菌絲體接種于固體培養(yǎng)基中，在25—26℃溫度和94％濕度的條件下培養(yǎng)8天，得到擴繁后的白僵菌，所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖5份、豆粕8份、玉米粉20份。

本實施例所述白僵菌的分離擴繁方法，其產(chǎn)孢量為7.1×10⁹個/g固體培養(yǎng)基，孢子萌發(fā)率達95％。

實施例7

本實施例所述的一種白僵菌分離擴繁方法，包括以下步驟：

(1)白僵菌孢子液制備：將被球孢白僵菌感染后的白僵蠶表面用75％酒精消毒，再置于無菌培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，直至白僵蠶表面長出菌絲和分生孢子，用無菌接種環(huán)從白僵蠶表面挑取3—4環(huán)分生孢子粉，置于無菌水中，振蕩10—15min，直至均勻，得白僵菌孢子液；

(2)分離純化培養(yǎng)：取滅菌后冷卻至65—68℃的PDA培養(yǎng)基，按重量份數(shù)計，加入頭孢霉素2份、放線菌酮3份、多果定1份，待冷卻至40—45℃時，再加入硫酸卡那霉素1份，凝固后形成選擇培養(yǎng)基，將步驟(1)得到的白僵菌孢子液接種于選擇培養(yǎng)基中，在25—26℃條件下培養(yǎng)6天，得白僵菌菌種；

(3)一次擴大培養(yǎng)：將步驟(2)得到的白僵菌菌種接種于液體培養(yǎng)基中，在24—25℃、振蕩條件下培養(yǎng)2天，得到白僵菌菌絲體，所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖5份、馬鈴薯汁7份、蛋白胨8份、頭孢霉素2份、BaCl₂1份、CaCl₂2份、無菌水70份；

(4)二次擴大培養(yǎng)：將步驟(3)得到的白僵菌菌絲體接種于固體培養(yǎng)基中，在25—26℃溫度和93％濕度的條件下培養(yǎng)7天，得到擴繁后的白僵菌，所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖3.5份、豆粕7份、玉米粉15份。

本實施例所述白僵菌的分離擴繁方法，其產(chǎn)孢量為7.06×10⁹個/g固體培養(yǎng)基，孢子萌發(fā)率達95％。

實施例8

本實施例所述的一種白僵菌分離擴繁方法，包括以下步驟：

(1)白僵菌孢子液制備：將被球孢白僵菌感染后的白僵蠶表面用75％酒精消毒，再置于無菌培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，直至白僵蠶表面長出菌絲和分生孢子，用無菌接種環(huán)從白僵蠶表面挑取3—4環(huán)分生孢子粉，置于無菌水中，振蕩10—15min，直至均勻，得白僵菌孢子液；

(2)分離純化培養(yǎng)：取滅菌后冷卻至65—68℃的PDA培養(yǎng)基，按重量份數(shù)計，加入龍膽紫1份、苯菌靈3份、多果定1份，待冷卻至40—45℃時，再加入硫酸卡那霉素1份，凝固后形成選擇培養(yǎng)基，將步驟(1)得到的白僵菌孢子液接種于選擇培養(yǎng)基中，在25—26℃條件下培養(yǎng)4天，得白僵菌菌種；

(3)一次擴大培養(yǎng)：將步驟(2)得到的白僵菌菌種接種于液體培養(yǎng)基中，在24—25℃、振蕩條件下培養(yǎng)3天，得到白僵菌菌絲體，所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖5份、馬鈴薯汁7份、蛋白胨8份、頭孢霉素2份、BaCl₂1份、CaCl₂2份、無菌水70份；

(4)二次擴大培養(yǎng)：將步驟(3)得到的白僵菌菌絲體接種于固體培養(yǎng)基中，在25—26℃溫度和93％濕度的條件下培養(yǎng)6天，得到擴繁后的白僵菌，所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括：葡萄糖3.5份、豆粕7份、玉米粉15份。

本實施例所述白僵菌的分離擴繁方法，其產(chǎn)孢量為7.0×10⁹個/g固體培養(yǎng)基，孢子萌發(fā)率達95％。

以上僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出的是，上述優(yōu)選實施方式不應視為對本發(fā)明的限制，本發(fā)明的保護范圍應當以權(quán)利要求所限定的范圍為準。對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。