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一種白僵菌分離擴繁方法與流程

文檔序號:12644335閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種白僵菌分離擴繁方法,其特征在于:所述方法包括以下步驟:

(1)白僵菌孢子液制備:用無菌接種環(huán)從白僵蠶表面挑取3—4環(huán)分生孢子粉,置于無菌水中,振蕩10—15min,直至均勻,得白僵菌孢子液;

(2)分離純化培養(yǎng):將步驟(1)得到的白僵菌孢子液接種于選擇培養(yǎng)基中,在25—26℃條件下培養(yǎng)4—6天,得白僵菌菌種,所述選擇培養(yǎng)基的組分包括:PDA培養(yǎng)基,補充龍膽紫、苯菌靈、脫氧膽酸鈉、頭孢霉素、放線菌酮、多果定中的至少一種;

(3)一次擴大培養(yǎng):將步驟(2)得到的白僵菌菌種接種于液體培養(yǎng)基中,在24—25℃、振蕩條件下培養(yǎng)2—3天,得到白僵菌菌絲體,所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括:葡萄糖4—6份、馬鈴薯汁5—10份、蛋白胨2—10份、頭孢霉素1—2份、BaCl21—2份、CaCl21—2份、無菌水20—80份;

(4)二次擴大培養(yǎng):將步驟(3)得到的白僵菌菌絲體接種于固體培養(yǎng)基中,在25—26℃條件下培養(yǎng)5—9天,得到擴繁后的白僵菌,所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括:葡萄糖2—5份、豆粕3—8份、玉米粉10—20份。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白僵菌分離擴繁方法,其特征在于:步驟(2)中所述選擇培養(yǎng)基的組分包括:PDA培養(yǎng)基,補充苯菌靈、脫氧膽酸鈉、頭孢霉素中的至少一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種白僵菌分離擴繁方法,其特征在于:步驟(2)中所述選擇培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括:PDA培養(yǎng)基,補充脫氧膽酸鈉2—4份、頭孢霉素3—5份。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種白僵菌分離擴繁方法,其特征在于:步驟(2)中所述選擇培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括:PDA培養(yǎng)基,補充苯菌靈1—2份、脫氧膽酸鈉2—4份。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白僵菌分離擴繁方法,其特征在于:步驟(3)所述液體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括:葡萄糖5份、馬鈴薯汁7份、蛋白胨8份、頭孢霉素2份、BaCl21份、CaCl22份、無菌水70份。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白僵菌分離擴繁方法,其特征在于:步驟(4)所述固體培養(yǎng)基的組分按重量份數(shù)計包括:葡萄糖3.5份、豆粕7份、玉米粉15份。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白僵菌分離擴繁方法,其特征在于:所述白僵菌孢子液制備步驟之前,先將白僵蠶表面用75%酒精消毒,再置于無菌培養(yǎng)皿中培養(yǎng)4—5天,直至白僵蠶表面長出菌絲和分生孢子。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白僵菌分離擴繁方法,其特征在于:步驟(2)所述選擇培養(yǎng)基的制備方法為:取滅菌后冷卻至65—68℃的PDA培養(yǎng)基,加入龍膽紫、苯菌靈、脫氧膽酸鈉、頭孢霉素、放線菌酮、多果定中的至少一種,待冷卻至40—45℃時,再加入硫酸卡那霉素,待所述選擇培養(yǎng)基凝固即可。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白僵菌分離擴繁方法,其特征在于:所述二次擴大培養(yǎng)的濕度控制在92—94%。

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