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小鼠或人類的全能性干細(xì)胞quteASCs誘導(dǎo)及培養(yǎng)建系方法與流程

文檔序號(hào):12411344閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種小鼠或人類的全能性干細(xì)胞quteASCs誘導(dǎo)及培養(yǎng)建系方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)小鼠或人類早期胚胎的準(zhǔn)備

材料來(lái)源是3-8天的小鼠早期胚胎或3-14天的人類早期胚胎;

2)ASCs過(guò)渡型干細(xì)胞誘導(dǎo)建系

將步驟1)中獲得小鼠胚胎或者人類早期胚胎在KSOM培養(yǎng)液體外培養(yǎng)2天后,通過(guò)用臺(tái)氏酸去掉胚胎的透明帶,然后把裸露的胚胎在不使用血清替代物和飼養(yǎng)層細(xì)胞的條件下,在N2B27基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加堿性纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子bFGF、激活素A的AF培養(yǎng)液中進(jìn)行干細(xì)胞誘導(dǎo)建系處理;

500ml ASCs干細(xì)胞誘導(dǎo)建系的AF培養(yǎng)液組成:

獲得的干細(xì)胞稱為ASCs過(guò)渡型干細(xì)胞;

3)quteASCs多能性干細(xì)胞誘導(dǎo)傳代

把獲得的ASCs過(guò)渡型干細(xì)胞通過(guò)Wnt基因、BMP4基因干細(xì)胞信號(hào)通路調(diào)控,進(jìn)一步誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得多能性干細(xì)胞quteASCs;具體方法為:首先,在不使用血清替代物和飼養(yǎng)層細(xì)胞的條件下,在N2B27基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加激活素A、BMP4、CHIR99021和LIF的ABCL培養(yǎng)液進(jìn)行干細(xì)胞誘導(dǎo),培養(yǎng)10-14天后ASCs細(xì)胞中開(kāi)始出現(xiàn)綠色標(biāo)記細(xì)胞GOF-GFP,把綠色細(xì)胞克隆挑出傳代或者繼續(xù)培養(yǎng)形成細(xì)胞雜合體通過(guò)流式細(xì)胞儀把綠色細(xì)胞分離純化,在同樣條件下進(jìn)行干細(xì)胞培養(yǎng)增殖傳代2-3天,用細(xì)胞消化液消化后采用同樣培養(yǎng)液和方法繼續(xù)傳代20代以上;

500ml quteASCs多能性干細(xì)胞誘導(dǎo)的ABCL培養(yǎng)液組成:

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠或人類的全能性干細(xì)胞quteASCs誘導(dǎo)及培養(yǎng)建系方法,其特征在于,所述步驟1)中,3-8天的小鼠早期胚胎來(lái)源于體外受精或者從母體子宮回收;3-14天的人類早期胚胎來(lái)源于體外受精或者從母體子宮回收。

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