本發(fā)明涉及抗氧化劑制備領(lǐng)域，具體涉及一種硒多糖鐵抗氧化劑的制備方法。
背景技術(shù)：
：掃帚菜，又名地膚，別名掃帚苗、鐵掃帚、野菠菜，藜科一年生草本植物，主要生長(zhǎng)在田邊、路旁、荒地、村落及庭院內(nèi)。掃帚菜的營(yíng)養(yǎng)成分較為齊全，一些維生素、氨基酸、微量元素的含量較常見(jiàn)蔬菜含量要高,并且有一定的藥用價(jià)值，掃帚菜有清濕熱和利小便的功能，掃帚菜是補(bǔ)充人體營(yíng)養(yǎng)及保健的綠色食品。鐵元素是維持機(jī)體正常生理功能和生化代謝所必需的微量元素，是體內(nèi)多種細(xì)胞酶的構(gòu)成組分，在細(xì)胞的生物氧化代謝中發(fā)揮著重要作用中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)1998年10月修訂的“每日膳食營(yíng)養(yǎng)素供給量”已將硒列為15種每日膳食營(yíng)養(yǎng)素之一。硒在人體內(nèi)無(wú)法合成，所以要滿足人體對(duì)硒的需求，就需要每天補(bǔ)充硒?？茖W(xué)考察表明，硒還可以與其他的一些重金屬元素有拮抗作用，所以食用富硒食品既可以增強(qiáng)體質(zhì)，達(dá)到預(yù)防疾病的目的，還可以預(yù)防人體重金屬元素中毒?？寡趸瘎┦侵改芊乐够蜓泳徥称费趸岣呤称返姆€(wěn)定性和延長(zhǎng)貯存期的食品添加劑?？寡趸瘎┑恼_使用不僅可以延長(zhǎng)食品的貯存期、貨架期，給生產(chǎn)者、消費(fèi)者帶來(lái)良好的經(jīng)濟(jì)效益，而且給消費(fèi)者帶來(lái)更好的食品安全。因此，研發(fā)一種食品抗氧化劑，使其不僅具有提高機(jī)體抗氧化性能的作用，又可以作為補(bǔ)硒劑和補(bǔ)鐵劑，具有重要的意義。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種硒多糖鐵抗氧化劑的制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種硒多糖鐵抗氧化劑的制備方法，其特征在于：其包括以下步驟：1)掃帚菜葉前處理：將掃帚菜葉洗凈，自然晾干，粉碎；然后在無(wú)水乙醇中加入上述粉碎后的掃帚菜葉，浸泡，過(guò)濾并收集濾渣，濾渣用石油醚進(jìn)行脫脂脫色并干燥，將干燥后的濾渣置于燒瓶中，采用超聲裝置進(jìn)行加熱回流；回流結(jié)束后收集濾液，在濾液中加入一定體積的氯仿和正丁醇進(jìn)行震蕩，然后離心除去蛋白和有機(jī)溶劑并抽濾，得到掃帚菜多糖提取液；2)制備硒多糖鐵抗氧化劑：在燒杯中加入硝酸溶液和鐵粉，反應(yīng)一段時(shí)間后，加入硒源和三聚磷酸鈉，所述硒源為亞硒酸鈉、亞硒酸氫鈉或硒酸鉀，所述鐵粉、硒源和三聚磷酸鈉的質(zhì)量比為1：0.9-1：0.2-0.5，然后將燒杯置于65-70℃的超聲清洗機(jī)中超聲5-10min；超聲結(jié)束后加入步驟1)制備的掃帚菜多糖提取液，所述掃帚菜多糖提取液與鐵粉的比例為20～25mL：0.02g；保持65-70℃恒溫，繼續(xù)超聲30-35min；超聲結(jié)束后，往反應(yīng)體系中加入氫氧化鈉溶液，當(dāng)反應(yīng)出現(xiàn)棕紅色沉淀時(shí)，停止加入氫氧化鈉溶液，靜置，離心，收集濾液，往濾液中加入4倍體積的無(wú)水乙醇，混勻后置于-4℃條件下，靜置過(guò)夜，過(guò)濾，收集沉淀并進(jìn)行冷凍干燥，得到硒多糖鐵抗氧化劑。所述步驟1)，粉碎后的掃帚菜葉在無(wú)水乙醇中的浸泡時(shí)間為30-40min。所述步驟1)的超聲條件為：液料比20-25mL/g，超聲功率70-80W，超聲溫度70-75℃、超聲時(shí)間20-30min。所述液料比是指水與粉碎后的掃帚菜葉的比例，單位為mL/g。進(jìn)一步，所述步驟1)的超聲條件為：液料比21mL/g，超聲功率76W，超聲溫度72℃、超聲時(shí)間24min。所述步驟2)的硝酸溶液濃度為0.5～0.8mol/L。所述步驟2)的氫氧化鈉溶液濃度為1mol/L。本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，從掃帚菜葉中提取活性物質(zhì)，并與硒源(亞硒酸鈉、亞硒酸氫鈉或硒酸鉀)、鐵粉反應(yīng)，制備得到硒多糖鐵抗氧化劑。本發(fā)明的制備體系中加入了三聚磷酸鈉，其在反應(yīng)體系中起到了螯合與增溶的作用，促進(jìn)了反應(yīng)順利進(jìn)行，制備得到的硒多糖鐵抗氧化劑在提高機(jī)體抗氧化性能的同時(shí)，還可以作為補(bǔ)硒劑和補(bǔ)鐵劑，維持機(jī)體的正常生理功能，其鐵含量為90mg/g左右，硒含量42mg/g左右。另外，產(chǎn)品中還含有從掃帚菜葉中提取的活性物質(zhì)，具有清熱解毒、利尿通淋的功效，具有一定的藥用價(jià)值。本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于：掃帚菜葉提取液與鐵離子、硒元素之間產(chǎn)生協(xié)同作用，使得合成的硒多糖鐵抗氧化劑的效果并不僅僅只是掃帚提取液、鐵元素、硒元素各自活性的簡(jiǎn)單相加，而是大大提高了原有的藥理活性，比如具有更高的抗氧化能力等?？寡趸芰y(cè)試顯示，本發(fā)明制備的硒多糖鐵抗氧化劑的抗氧化能力比同濃度的維生素C強(qiáng)8倍左右。具體實(shí)施方式一種硒多糖鐵抗氧化劑的制備方法，其特征在于：其包括以下步驟：1)掃帚菜葉前處理：將掃帚菜葉洗凈，自然晾干，粉碎；然后在無(wú)水乙醇中加入上述粉碎后的掃帚菜葉，浸泡30-40min，過(guò)濾并收集濾渣，濾渣用石油醚進(jìn)行脫脂脫色并干燥，將干燥后的濾渣置于燒瓶中，采用超聲裝置進(jìn)行加熱回流；其中，超聲條件為：液料比20-25mL/g，超聲功率70-80W，超聲溫度70-75℃、超聲時(shí)間20-30min；回流結(jié)束后收集濾液，在濾液中加入一定體積的氯仿和正丁醇進(jìn)行震蕩，然后離心除去蛋白和有機(jī)溶劑并抽濾，得到掃帚菜多糖提取液；2)制備硒多糖鐵抗氧化劑：在燒杯中加入0.5～0.8mol/L的硝酸溶液和鐵粉，反應(yīng)一段時(shí)間后，加入硒源和三聚磷酸鈉，所述硒源為亞硒酸鈉、亞硒酸氫鈉或硒酸鉀，所述鐵粉、硒源和三聚磷酸鈉的質(zhì)量比為1：0.9-1：0.2-0.5，然后將燒杯置于65-70℃的超聲清洗機(jī)中超聲5-10min；超聲結(jié)束后加入步驟1)制備的掃帚菜多糖提取液，所述掃帚菜多糖提取液與鐵粉的比例為20～25mL：0.02g；保持65-70℃恒溫，繼續(xù)超聲30-35min；超聲結(jié)束后，往反應(yīng)體系中加入1mol/L的氫氧化鈉溶液，當(dāng)反應(yīng)出現(xiàn)棕紅色沉淀時(shí)，停止加入氫氧化鈉溶液，靜置，離心，收集濾液，往濾液中加入4倍體積的無(wú)水乙醇，混勻后置于-4℃條件下，靜置過(guò)夜，過(guò)濾，收集沉淀并進(jìn)行冷凍干燥，得到硒多糖鐵抗氧化劑。DPPH自由基清除能力測(cè)試：用無(wú)水乙醇將DPPH自由基配制成1.3×10-3mol/L的母液，使用時(shí)用無(wú)水乙醇稀釋20倍，濃度為65μmol/L。取2mL樣品溶液，加入65μmmol/LDPPH自由基乙醇溶液2mL，室溫下避光靜置30min后，于517nm處測(cè)吸光度。DPPH自由基清除率按以下公式計(jì)算：清除率＝[1-(Ai-Aj)/A0]×100％式中：A0—2.0mLDPPH自由基溶液+2.0mL無(wú)水乙醇的吸光值；Ai—2.0mLDPPH自由基溶液+2.0mL樣品液的吸光值；Aj—2.0mL無(wú)水乙醇+2.0mL樣品液的吸光值。DPPH自由基清除率越大，表明抗氧化能力越強(qiáng)。實(shí)施例1一種硒多糖鐵抗氧化劑的制備方法，包括以下步驟：1)掃帚菜葉前處理：將掃帚菜葉洗凈，自然晾干，粉碎；然后在無(wú)水乙醇中加入上述粉碎后的掃帚菜葉，浸泡35min，過(guò)濾并收集濾渣，濾渣用石油醚進(jìn)行脫脂脫色并干燥，將干燥后的濾渣置于燒瓶中，采用超聲裝置進(jìn)行加熱回流；其中，超聲條件為：液料比21mL/g，超聲功率76W，超聲溫度72℃、超聲時(shí)間24min；回流結(jié)束后收集濾液，在濾液中加入一定體積的氯仿和正丁醇進(jìn)行震蕩，然后離心除去蛋白和有機(jī)溶劑并抽濾，得到掃帚菜多糖提取液；2)制備硒多糖鐵抗氧化劑：在燒杯中加入0.6mol/L的硝酸溶液和鐵粉，反應(yīng)一段時(shí)間后，加入亞硒酸鈉和三聚磷酸鈉，所述鐵粉、亞硒酸鈉和三聚磷酸鈉的質(zhì)量比為1：0.9：0.2，然后將燒杯置于65℃的超聲清洗機(jī)中超聲10min；超聲結(jié)束后加入步驟1)制備的掃帚菜多糖提取液，所述掃帚菜多糖提取液與鐵粉的比例為20mL：0.02g；保持65℃恒溫，繼續(xù)超聲35min；超聲結(jié)束后，往反應(yīng)體系中加入1mol/L的氫氧化鈉溶液，當(dāng)反應(yīng)出現(xiàn)棕紅色沉淀時(shí)，停止加入氫氧化鈉溶液，靜置，離心，收集濾液，往濾液中加入4倍體積的無(wú)水乙醇，混勻后置于-4℃條件下，靜置過(guò)夜，過(guò)濾，收集沉淀并進(jìn)行冷凍干燥，得到硒多糖鐵抗氧化劑。本實(shí)施例制備的硒多糖鐵抗氧化劑，鋅含量為89.45mg/g，硒含量41.98mg/g。將本實(shí)施例制備的硒多糖鐵抗氧化劑與維生素C進(jìn)行DPPH自由基清除能力測(cè)試。對(duì)DPPH自由基的IC50值是指DPPH自由基清除率達(dá)到50％時(shí)，所用的還原劑的濃度。表1抗氧化能力測(cè)試結(jié)果還原劑對(duì)DPPH自由基的IC50值(mg/ml)維生素C54.21硒多糖鐵抗氧化劑6.53DPPH自由基清除能力測(cè)試結(jié)果顯示，維生素C的IC50值為54.21mg/L，本實(shí)施例的硒多糖鐵抗氧化劑的IC50值為6.53mg/L，僅為維生素C的12.0％左右，即抗氧化能力提高了8.3倍。實(shí)施例2一種硒多糖鐵抗氧化劑的制備方法，包括以下步驟：1)掃帚菜葉前處理：將掃帚菜葉洗凈，自然晾干，粉碎；然后在無(wú)水乙醇中加入上述粉碎后的掃帚菜葉，浸泡40min，過(guò)濾并收集濾渣，濾渣用石油醚進(jìn)行脫脂脫色并干燥，將干燥后的濾渣置于燒瓶中，采用超聲裝置進(jìn)行加熱回流；其中，超聲條件為：液料比25mL/g，超聲功率80W，超聲溫度75℃、超聲時(shí)間20min；回流結(jié)束后收集濾液，在濾液中加入一定體積的氯仿和正丁醇進(jìn)行震蕩，然后離心除去蛋白和有機(jī)溶劑并抽濾，得到掃帚菜多糖提取液；2)制備硒多糖鐵抗氧化劑：在燒杯中加入0.5mol/L的硝酸溶液和鐵粉，反應(yīng)一段時(shí)間后，加入亞硒酸氫鈉和三聚磷酸鈉，所述鐵粉、亞硒酸氫鈉和三聚磷酸鈉的質(zhì)量比為1：1：0.5，然后將燒杯置于70℃的超聲清洗機(jī)中超聲5min；超聲結(jié)束后加入步驟1)制備的掃帚菜多糖提取液，所述掃帚菜多糖提取液與鐵粉的比例為25mL：0.02g；保持70℃恒溫，繼續(xù)超聲30min；超聲結(jié)束后，往反應(yīng)體系中加入1mol/L的氫氧化鈉溶液，當(dāng)反應(yīng)出現(xiàn)棕紅色沉淀時(shí)，停止加入氫氧化鈉溶液，靜置，離心，收集濾液，往濾液中加入4倍體積的無(wú)水乙醇，混勻后置于-4℃條件下，靜置過(guò)夜，過(guò)濾，收集沉淀并進(jìn)行冷凍干燥，得到硒多糖鐵抗氧化劑。本實(shí)施例制備的硒多糖鐵抗氧化劑，鋅含量為88.39mg/g，硒含量40.31mg/g。將本實(shí)施例制備的硒多糖鐵抗氧化劑與維生素C進(jìn)行DPPH自由基清除能力測(cè)試。對(duì)DPPH自由基的IC50值是指DPPH自由基清除率達(dá)到50％時(shí)，所用的還原劑的濃度。表2抗氧化能力測(cè)試結(jié)果還原劑對(duì)DPPH自由基的IC50值(mg/ml)維生素C54.21硒多糖鐵抗氧化劑7.01DPPH自由基清除能力測(cè)試結(jié)果顯示，維生素C的IC50值為54.21mg/L，本實(shí)施例的硒多糖鐵抗氧化劑的IC50值為6.68mg/L，僅為維生素C的12.9％，即抗氧化能力提高了7.73倍。實(shí)施例3一種硒多糖鐵抗氧化劑的制備方法，包括以下步驟：1)掃帚菜葉前處理：將掃帚菜葉洗凈，自然晾干，粉碎；然后在無(wú)水乙醇中加入上述粉碎后的掃帚菜葉，浸泡40min，過(guò)濾并收集濾渣，濾渣用石油醚進(jìn)行脫脂脫色并干燥，將干燥后的濾渣置于燒瓶中，采用超聲裝置進(jìn)行加熱回流；其中，超聲條件為：液料比20mL/g，超聲功率70W，超聲溫度70℃、超聲時(shí)間30min；回流結(jié)束后收集濾液，在濾液中加入一定體積的氯仿和正丁醇進(jìn)行震蕩，然后離心除去蛋白和有機(jī)溶劑并抽濾，得到掃帚菜多糖提取液；2)制備硒多糖鐵抗氧化劑：在燒杯中加入0.8mol/L的硝酸溶液和鐵粉，反應(yīng)一段時(shí)間后，加入硒酸鉀和三聚磷酸鈉，所述鐵粉、硒酸鉀和三聚磷酸鈉的質(zhì)量比為1：1：0.35，然后將燒杯置于70℃的超聲清洗機(jī)中超聲5min；超聲結(jié)束后加入步驟1)制備的掃帚菜多糖提取液，所述掃帚菜多糖提取液與鐵粉的比例為23mL：0.02g；保持65℃恒溫，繼續(xù)超聲35min；超聲結(jié)束后，往反應(yīng)體系中加入1mol/L的氫氧化鈉溶液，當(dāng)反應(yīng)出現(xiàn)棕紅色沉淀時(shí)，停止加入氫氧化鈉溶液，靜置，離心，收集濾液，往濾液中加入4倍體積的無(wú)水乙醇，混勻后置于-4℃條件下，靜置過(guò)夜，過(guò)濾，收集沉淀并進(jìn)行冷凍干燥，得到硒多糖鐵抗氧化劑。本實(shí)施例制備的硒多糖鐵抗氧化劑，鋅含量為90.12mg/g，硒含量42.13mg/g。將本實(shí)施例制備的硒多糖鐵抗氧化劑與維生素C進(jìn)行DPPH自由基清除能力測(cè)試。對(duì)DPPH自由基的IC50值是指DPPH自由基清除率達(dá)到50％時(shí)，所用的還原劑的濃度。表3抗氧化能力測(cè)試結(jié)果還原劑對(duì)DPPH自由基的IC50值(mg/ml)維生素C54.21硒多糖鐵抗氧化劑7.53DPPH自由基清除能力測(cè)試結(jié)果顯示，維生素C的IC50值為54.21mg/L，本實(shí)施例的硒多糖鐵抗氧化劑的IC50值為8.26mg/L，僅為維生素C的13.9％左右，即抗氧化能力提高了7.2倍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3