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一種用鏈球菌培養(yǎng)物制劑大幅提高PCV2培養(yǎng)毒價的方法與流程

文檔序號:12096949閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種能提高PCV2培養(yǎng)毒價的鏈球菌培養(yǎng)物制劑,其特征在于:由鏈球菌與貼壁細(xì)胞在維持培養(yǎng)基中共培養(yǎng)后收獲的含鏈球菌的上清液經(jīng)高溫滅活制得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鏈球菌培養(yǎng)物制劑,其特征在于:所述的鏈球菌為無乳鏈球菌。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鏈球菌培養(yǎng)物制劑,其特征在于:所述的細(xì)胞為PK-15細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鏈球菌培養(yǎng)物制劑,其特征在于:所述的貼壁細(xì)胞脫落到維持培養(yǎng)基的含量為500~1000個/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鏈球菌培養(yǎng)物制劑,其特征在于:所述的含鏈球菌的上清液中鏈球菌的含量為1億~9億個/mL。

6.權(quán)利要求1-5任一項所述的鏈球菌培養(yǎng)物制劑在提高PCV2培養(yǎng)毒價中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1-5任一項所述的鏈球菌培養(yǎng)物制劑的制備方法,其特征在于:包括如下步驟:將培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)基更換為維持培養(yǎng)基后接種鏈球菌繼續(xù)培養(yǎng),當(dāng)鏈球菌密度達(dá)到1億~9億個/mL時收獲上清液,上清液經(jīng)高溫滅活得到鏈球菌培養(yǎng)物制劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法,其特征在于:包括如下步驟:

(1)貼壁細(xì)胞制備:將PK-15細(xì)胞解凍后,培養(yǎng)于克氏瓶中,傳代培養(yǎng)至所需數(shù)量,備用;

(2)鏈球菌接種:上述貼壁細(xì)胞最后一次傳代培養(yǎng)至48小時后更換培養(yǎng)基為含血清2%以下的維持培養(yǎng)基,同時用接種環(huán)接種鏈球菌,繼續(xù)于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

(3)含鏈球菌的培養(yǎng)液收獲:當(dāng)鏈球菌密度達(dá)到1億~9億個/mL時,停止培養(yǎng),收獲上清液;

(4)滅活處理:將步驟(3)中收獲的上清液經(jīng)高溫高壓處理使上清液中的鏈球菌被徹底滅活。

9.利用權(quán)利要求1-5任一項所述的鏈球菌培養(yǎng)物制劑提高PCV2培養(yǎng)毒價的方法,其特征在于:包括如下步驟:將鏈球菌培養(yǎng)物制劑按照0.1~1%的濃度加到維持培養(yǎng)基中配成刺激PCV2產(chǎn)毒的專用培養(yǎng)基,以該專用培養(yǎng)基作為PCV2培養(yǎng)用維持培養(yǎng)基培養(yǎng)PCV2。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其特征在于:包括如下步驟:

(1)宿主細(xì)胞制備:將PK-15細(xì)胞解凍,培養(yǎng)于克氏瓶中,傳代至所需數(shù)量;

(2)病毒接種:將PCV2接種于上述PK-15細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)24小時;

(3)刺激PCV2產(chǎn)毒的專用培養(yǎng)基配制:將鏈球菌培養(yǎng)物制劑按照0.1~1%的濃度加入到維持培養(yǎng)基中,配成刺激PCV2產(chǎn)毒的專用培養(yǎng)基;

(4)刺激PCV2產(chǎn)毒的專用培養(yǎng)基使用:將上述步驟(2)中接種了PCV2并繼續(xù)培養(yǎng)了24小時的PK-15細(xì)胞的培養(yǎng)液更換為上述步驟(3)中所述的刺激PCV2產(chǎn)毒的專用培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)72~96小時。

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