本發(fā)明涉及一種抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體制備方法及其應用。
背景技術(shù)：
上呼吸道病毒感染，以及繼發(fā)性細菌感染的發(fā)病無時間、季節(jié)特點，常年發(fā)生，且發(fā)病人群無選擇性，人人均可發(fā)病，并可反復發(fā)生。感冒為上呼吸道感染，感冒通常可由季節(jié)發(fā)病的流感病毒，以及常年非季節(jié)性發(fā)病的鼻病毒，冠狀病毒、呼吸道合胞病毒及腺病毒等引起，然而病毒感染導致機體抵抗力下降，繼而引發(fā)存在于上呼吸道或外來的肺鏈菌、葡萄球菌繼發(fā)感染導致上呼吸道炎癥。病毒感染目前無有效藥物可用，過早采用抗菌素預防則不允許，甚至導致耐藥菌株的產(chǎn)生以及菌群失調(diào)。因此迫切需要解決這個既能控制病毒反復感染細胞，又可預防繼發(fā)性細菌感染且不破壞機體微生態(tài)環(huán)境的防治手段和方法。
流感病毒、鼻病毒、冠狀病毒、腺病毒等是目前引發(fā)流行性感冒和普通感冒的病毒，且每種病毒均有多種抗原有一些不同的亞型，因此采用病毒疫苗接種預防效果無法達到理想效果，甚至幾乎無效。感冒的局部癥狀是鼻塞、流涕、打噴嚏，全身癥狀是發(fā)燒、肌肉和骨頭酸痛、倦怠。
病毒感冒后2-3天由于炎癥局部組織水腫，細胞抵抗力下降，繼而引發(fā)存在于上呼吸道或外來的肺鏈菌、葡萄球菌繼發(fā)感染，從而導致上呼吸道炎癥進一步發(fā)展加重，不僅上呼吸道，而且炎癥蔓延至下午呼吸道，出現(xiàn)咽喉腫痛、咳嗽、咳痰，毒血癥反應，白細胞升高，發(fā)熱加劇。因此控制病毒感染是其炎癥控制的關(guān)鍵。
根據(jù)這一客觀存在，加之目前無針對病毒的特異性藥物，以及疫苗主動免疫機體存在產(chǎn)生特異性抗體的能力和種類的差異，因此被動免疫防治感冒和繼發(fā)性細菌感染則顯得尤為重要和療效突出。病毒疫苗是人類感染病毒的重組亞單位疫苗或減毒病毒疫苗，由于長期感染人體，故人對其抗原常常產(chǎn)生耐受不予識別，或者識別的抗原決定簇有限，所以免疫效果不佳，預防效果不理想，甚至幾乎無效。鑒于此，我們發(fā)明了采用種屬關(guān)系相距甚遠的禽類動物，即母雞，作為產(chǎn)生抗體的母體，使用人源性感染的流感病毒、鼻病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒及腺病毒等作為免疫原免疫母雞，使其產(chǎn)生抗更多種類的抗原決定簇抗體和更高效價的穩(wěn)定抗體(IgY)，同時也能產(chǎn)生抗不同亞型病毒和細菌的共同抗原決定簇抗體，這一策略可以解決疫苗不理想的難題。
事實上，無論是病毒，如流感病毒、鼻病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒及腺病毒等，還是細菌，如鏈球菌和葡萄球菌等都具有許多致病性亞型，而且這些亞型之間均有共同的抗原決定簇和抗原性(交叉抗原)，原因是它們除了具有各自特異性的抗原或稱識別抗原外，還存在著大量的不同種和型的家族遺傳的共同抗原。因此，抗共同抗原決定簇抗體就可以和所有亞型病毒或細菌結(jié)合，產(chǎn)生抗原—抗體反應，達到消除不同亞型的病毒和細菌之目的。
雞與哺乳動物由于種系進化差異的關(guān)系，其對同一種抗原誘導產(chǎn)生抗體的能力和產(chǎn)生抗不同抗原決定簇的抗體的能力與哺乳動物差異很大。雞較哺乳動物(兔)對哺乳動物類的抗原有更好的免疫應答反應，對同一種抗原產(chǎn)生的不同抗原決定簇的抗體種類和數(shù)量都不同。雞比哺乳動物能產(chǎn)生抗更多抗原決定簇的抗體，尤其是對哺乳動物的保守的抗原更是如此，哺乳動物不能產(chǎn)生抗體而雞則能產(chǎn)生很高效價的特異性雞卵黃免疫球蛋白(IgY)抗體(Chicken IgY: utilizing the evolutionary difference. Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 1990;13(4):199-201.Chicken antibodies: a clinical chemistry perspective. Larsson A.Ups J Med Sci. 1999;104(3):179-89. Comparative studies on the purity and specificity of yolk immunoglobulin Y isolated from eggs laid by hens immunized with Toxoplasma gondii antigen. Zentralbl Bakteriol Mikrobiol Hyg [A]. 1987，267(2):247-53.)。因此使用人源性的病毒和細菌免疫母雞可以產(chǎn)生比人更多數(shù)量和抗更多不同抗原決定簇的抗體。
根據(jù)上述事實，采用一株病毒或細菌免疫的特異性雞卵黃免疫球蛋白(IgY)抗體就可以治療這類病毒或細菌引起的疾病，例如：特異性抗輪狀病毒雞卵黃免疫球蛋白(IgY)抗體能有效地治療所有由輪狀病毒引起的秋季腹瀉(Randomized, placebo-controlled, clinical trial of hyperimmunized chicken egg yolk immunoglobulin in children with rotavirus diarrhea. J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2001; 32(1):19-25)；一株變型鏈球菌免疫母雞產(chǎn)生的特異性抗變型鏈球菌雞卵黃免疫球蛋白(IgY)抗體能有效地治療所有由變型鏈球菌引起的齲齒，甚至是緣遠鏈球菌引起的齲齒；一株綠膿桿菌免疫母雞產(chǎn)生的特異性抗綠膿桿菌雞卵黃免疫球蛋白(IgY)抗體能有效地預防膽囊纖維化患者綠膿桿菌感染(Oral administration of specific yolk antibodies (IgY) may prevent Pseudomonas aeruginosa infections in patients with cystic fibrosis: A phase I feasibility study. Pediatr Pulmonol. 2003; 35(6):433-40)；一株幽門螺桿菌免疫母雞產(chǎn)生的特異性抗幽門螺桿菌雞卵黃免疫球蛋白(IgY)抗體能有效地治療所有由幽門螺桿菌引起的胃炎，減輕幽門螺桿菌炎癥反應(Effect of dietary anti-Helicobacter pylori-urease immunoglobulin Y on Helicobacter pylori infection. Aliment Pharmacol Ther. 2004; 20 Suppl 1:185-92)。
特異性雞卵黃免疫球蛋白(IgY)抗體與病毒和細菌表面抗原發(fā)生特異性抗原—抗體結(jié)合，其改變病毒和細菌表面結(jié)構(gòu)、抑制病毒和細菌與靶細胞結(jié)合、抑制病毒和細菌的活性、阻止病毒進入細胞、抑制細菌生長、排斥了病毒和細菌在炎癥部位的存在，抗原—抗體結(jié)合改變了病毒和細菌表面結(jié)構(gòu)和電場，促進分葉核細胞和巨噬細胞等吞噬病毒和細菌，并清除之。因此，抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體與目前的抗病毒和抗菌素作用原理完全不同，而且完全不會誘發(fā)耐藥毒株和菌株的產(chǎn)生。同時避免了抗菌素濫用和廣泛的耐藥菌株發(fā)生。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的是提供一種抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體及其制備方法，并用這種抗體制劑防治由感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌，以及與之具有共同抗原決定簇的病毒和細菌引起的上呼吸道感染性炎癥，如：感冒，急、慢性鼻炎，鼻竇炎，扁桃體炎，咽炎、喉炎、支氣管炎等。
本發(fā)明的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體，其制備方法是：
（1）免疫原制備：
取流感病毒甲1型病毒10~20份、流感病毒甲3型病毒20~30份、流感病毒乙型病毒5~10份、鼻病毒10~20份、冠狀病毒10~20份、呼吸道合胞病毒5~10份、腺病毒5~10份、肺炎鏈球菌10~20份、金黃色葡萄球菌20~30份混合成病毒+細菌液；
將等量體積的病毒+細菌液與等量體積的福氏完全佐劑混合，攪拌乳化，制成油包水福氏完全佐劑免疫原；
將等量體積的病毒+細菌液與等量體積的福氏不完全佐劑混合，攪拌乳化，制成油包水福氏不完全佐劑免疫原；
每毫升福氏完全佐劑免疫原和福氏不完全佐劑免疫原中均含有病毒20～200μg+細菌10億～50億；
（2）免疫：
將福氏完全佐劑免疫原皮下和肌肉10～100點注射給產(chǎn)蛋母雞，每只產(chǎn)蛋母雞注射1ml～1.5ml免疫原，然后每隔一周使用福氏不完全佐劑免疫原1ml皮下和肌肉20～60點注射給產(chǎn)蛋母雞共計五次，此后每隔一個月再使用福氏不完全佐劑免疫原1ml皮下和肌肉10～40點注射給產(chǎn)蛋母雞加強免疫五次；
第一次免疫后第20天收集免疫母雞的雞蛋，第一次免疫后第28天至第360天的免疫母雞的雞蛋均有高效價的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體；
（3）抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物的制備：
收集免疫20天后的免疫母雞的雞蛋，雞蛋表面用水洗凈、70%酒精浸泡，去蛋殼取蛋黃，去除蛋黃膜取蛋黃液，將蛋黃液與蒸餾水按體積比1:3～11的比例加蒸餾水攪拌，并用1N HCl調(diào)節(jié)酸堿度至pH4.8～5.5，在溫度4℃下靜置過夜；
將蛋黃稀釋液在4℃高速離心15分鐘取上清，然后經(jīng)截留分子量為10~50kDa的中空纖維超濾器中超濾濃縮10～20倍，再加入0.02%～5.0%的氯已定，并使用1N NaOH調(diào)節(jié)酸堿度至pH7.0～7.5，且在4℃靜置過夜；之后高速離心10-15分鐘取上清，將上清經(jīng)0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，即得抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物。
所述的免疫中的產(chǎn)蛋母雞包括普通環(huán)境下飼養(yǎng)、清潔環(huán)境下飼養(yǎng)、以及SPF環(huán)境下飼養(yǎng)的萊杭雞、海蘭褐雞、羅曼雞、明星雞、以及家養(yǎng)的土雞。
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體的純品制備方法，包括如下步驟：
將氯已定處理后的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物加硫酸胺至45%~60%的飽和度攪拌，室溫靜置2～12小時，然后高速離心10分鐘，取沉淀物，將沉淀物使用蒸餾水稀釋到原體積量，再加硫酸胺至28%~35%的飽和度充分攪拌，室溫靜置2～12小時，然后高速離心10分鐘，取沉淀物，用蒸餾水溶解后采用中空纖維超濾膜超濾除鹽，即得抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體純品。
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體的純品，加入藥學上可接受的附加劑制成含有抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體的滴鼻液、噴霧劑、氣霧劑、含片和口香糖。
本發(fā)明的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物的純度，經(jīng)SDS-PAGE電泳測定IgY抗體的純度達到33%以上；本發(fā)明的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體純品的純度，經(jīng)SDS-PAGE電泳測定IgY抗體的純度達到85%以上。
本發(fā)明的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物的生物學效價經(jīng)ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實驗）方法測定，特異性抗流感病毒甲1型病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗流感病毒甲1型病毒抗原結(jié)合效價為1:256~512/mg蛋白；特異性抗流感病毒甲3型病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗流感病毒甲3型病毒抗原結(jié)合效價為1:512~1024/mg蛋白；特異性抗流感病毒乙型病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗流感病毒乙型病毒抗原結(jié)合效價為1:256~512/mg蛋白；特異性抗鼻病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗鼻病毒抗原結(jié)合效價為1:256~512/mg蛋白；特異性抗冠狀病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗冠狀病毒抗原結(jié)合效價為1:256~512/mg蛋白；特異性抗呼吸道合胞病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗呼吸道合胞病毒抗原結(jié)合效價為1:128~256/mg蛋白；特異性抗腺病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗腺病毒抗原結(jié)合效價為1:128~256/mg蛋白；特異性抗肺炎鏈球菌抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗肺炎鏈球菌抗原結(jié)合效價為1:128~256/mg蛋白；特異性抗金黃色葡萄球菌抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗金黃色葡萄球菌抗原結(jié)合效價為1:256~512/mg蛋白。
本發(fā)明的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體提純品的生物學效價經(jīng)ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實驗）方法測定，特異性抗流感病毒甲1型病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗流感病毒甲1型病毒抗原結(jié)合效價為1:1024~2048/mg蛋白；特異性抗流感病毒甲3型病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗流感病毒甲3型病毒抗原結(jié)合效價為1:2048~4096/mg蛋白；特異性抗流感病毒乙型病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗流感病毒乙型病毒抗原結(jié)合效價為1:1024~2048/mg蛋白；特異性抗鼻病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗鼻病毒抗原結(jié)合效價為1:1024~2048/mg蛋白；特異性抗冠狀病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗冠狀病毒抗原結(jié)合效價為1:1024~2048/mg蛋白；特異性抗呼吸道合胞病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗呼吸道合胞病毒抗原結(jié)合效價為1:512~1024/mg蛋白；特異性抗腺病毒抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗腺病毒抗原結(jié)合效價為1:512~1024/mg蛋白；特異性抗肺炎鏈球菌抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗肺炎鏈球菌抗原結(jié)合效價為1:512~1024/mg蛋白；特異性抗金黃色葡萄球菌抗原的生物學效價達到每毫克蛋白中的特異性抗金黃色葡萄球菌抗原結(jié)合效價為1:1024~2048/mg蛋白。
本發(fā)明的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體局部施于鼻腔、口腔、咽喉及支氣管黏膜，既無全身用藥的局限性和副作用，又有局部用藥起效快、用藥量少、療效好、不破壞鼻腔、口腔、咽喉、支氣管內(nèi)正常微生態(tài)環(huán)境的優(yōu)點?？垢忻安《炯胺捂溇⑵咸亚蚓鷱秃螴gY抗體提取物不產(chǎn)生急性毒性反應和慢性毒性反應，屬于實際無毒級；抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體提取物三致試驗陰性，屬于無致畸、致癌、致突變的制品。
具體實施方式
實施例1：
制備2000克抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物生產(chǎn)工藝流程：
（1）免疫原的制備：
流感病毒甲1型病毒10份、流感病毒甲3型病毒20份、流感病毒乙型病毒5份，鼻病毒10份，冠狀病毒10份，呼吸道合胞病毒5份，腺病毒5份，肺炎鏈球菌15份，金黃色葡萄球菌20份混合后經(jīng)石炭酸滅活處理；
將500ml的病毒液+菌液與500ml的福氏完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，制成油包水福氏完全佐劑免疫原，福氏不完全佐劑免疫原的制備則為：將500ml的病毒液+菌液與500ml的福氏不完全佐劑混合，使用高速攪拌器攪拌乳化，制成油包水福氏不完全佐劑免疫原；
（2）免疫產(chǎn)蛋母雞：使用注射器將福氏完全佐劑免疫原皮下和肌肉50~100點注射給18周的海蘭褐產(chǎn)蛋母雞，每只注射1.5ml免疫原，然后隔一周使用福氏不完全佐劑免疫原1ml皮下和肌肉60點注射給產(chǎn)蛋母雞，共五次，此后每隔一個月再使用福氏不完全佐劑免疫原1ml皮下和肌肉40點注射給產(chǎn)蛋母雞加強免疫共五次，免疫母雞總數(shù)為500只；
（3）抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物的制備：收集第一次免疫后35～70天的免疫母雞的雞蛋，使用清水洗凈、70%的酒精進行雞蛋表面消毒，去蛋殼、取蛋黃、去除蛋黃膜取蛋黃液，將蛋黃液與蒸餾水按體積比1:10的比例加蒸餾水，充分攪拌，并使用1N HCl調(diào)節(jié)酸堿度至pH4.8~5.2，放置4℃冰柜過夜；
（4）將蛋黃稀釋液高速離心10000g，15分鐘，取上清，將上清置于截留分子量10kDa的中空纖維超濾器中超濾濃縮10倍，然后加入2.0%的氯已定，并使用1N NaOH調(diào)節(jié)酸堿度至pH7.2，并放置4℃過夜，此后高速離心10000g，15分鐘，取上清，將上清經(jīng)0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，即得抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物；抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物經(jīng)ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實驗）方法測定，每毫克蛋白的特異性抗病毒+細菌IgY抗體的效價為1:1024/mg蛋白。IgY抗體水提取物的純度經(jīng)SDS-PAGE電泳測定為33.2%。
將上述制得的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物，加硫酸胺至55%的飽和度充分攪拌，室溫靜置4小時，然后高速離心10000g 15分鐘，取沉淀，將沉淀使用蒸餾水稀釋到原體積量，再加硫酸胺至33%的飽和度充分攪拌，室溫靜置4小時，然后高速離心10000g 15分鐘，取沉淀用蒸餾水稀釋溶解后采用中空纖維超濾膜超濾除鹽，即得抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體純品?？垢忻安《炯胺捂溇?、葡萄球菌復合IgY抗體純品 經(jīng)ELISA方法測定，抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體純品中每毫克蛋白的特異性抗病毒+細菌IgY抗體的效價為1:4096/mg蛋白。IgY抗體純品中，IgY抗體的純度經(jīng)SDS-PAGE電泳測定為86.3%。
實施例2：
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體滴鼻劑：抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物0.20%、水蜜桃香精0.60%、阿斯巴甜0.12%、蒸餾水補充至100ml；
將80ml蒸餾水加入燒杯中，再依次加入上述成分，最后將蒸餾水補充至100ml，經(jīng)0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，無菌灌裝入消毒的滴鼻劑的瓶中。
實施例3：
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體口腔噴霧劑、氣霧劑：
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物0.20%、薄荷油0.06%、香橙香精0.60%、水蜜桃香精0.40%、阿斯巴甜0.12%、蒸餾水補充至100ml；
將60ml蒸餾水加入燒杯中，再依次加入上述成分，最后加抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物，然后將蒸餾水補充至100ml，經(jīng)0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，無菌灌裝入消毒的噴霧劑和氣霧劑的罐中。
實施例4：
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體含片：
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體的水提取物1.0%、薄荷油0.08% 、香橙香精0.70%、水蜜桃香精 0.50%、羧甲基纖維素 0.15%、硬脂酸鎂 0.10%、山梨醇 補充至100g；
將上述含片藥物低溫制粒，然后壓成不同形狀的口含片，每片0.5g。
實施例5：
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體純品滴鼻劑：
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體純品 0.05%、水蜜桃香精 0.60%、阿斯巴甜 0.12%、蒸餾水補充至100ml；
將80ml蒸餾水加入燒杯中，再依次加入上述成分，最后將蒸餾水補充至100ml，經(jīng)0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，無菌灌裝入消毒的滴鼻劑的瓶中。
實施例6：
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體純品口腔噴霧劑、氣霧劑：
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體純品 0.05%、薄荷油 0.06%、香橙香精 0.60%、水蜜桃香精0.40%、阿斯巴甜 0.12%、蒸餾水補充至100ml；
將60ml蒸餾水加入燒杯中，再依次加入上述成分，最后加抗流感病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體純品，然后將蒸餾水補充至100ml，經(jīng)0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌，無菌灌裝入消毒的噴霧劑和氣霧劑的罐中。
實施例7：
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體純品含片：
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體純品 2.0%、
薄荷油 0.08% 、香橙香精 0.70%、水蜜桃香精 0.50%、羧甲基纖維素 0.15%、硬脂酸鎂 0.10%、山梨醇 補充至100g；
將上述含片藥物低溫制粒，然后壓成不同形狀的口含片，每片0.5g。
本發(fā)明的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體的水提取物，應用ELISA方法測定抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體結(jié)合不同抗原的生物學效價見下表：
根據(jù)上述實驗結(jié)果可以清楚地看到：⑴.發(fā)明的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物具有特異性抗流感病毒甲1型病毒、甲3型病毒、乙型病毒，鼻病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌等抗原的IgY抗體；⑵. 由上述實驗可見，本發(fā)明的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體可以治療由上述病毒及細菌引起的上呼吸道炎癥，急、慢性鼻炎、鼻竇炎、扁桃體炎、咽喉炎、支氣管炎等。
本發(fā)明的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體的純品，應用ELISA方法測定抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體結(jié)合不同抗原的生物學效價見下表：
根據(jù)上述實驗結(jié)果可以清楚地看到：⑴. 本發(fā)明的抗感冒病毒和肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水純品 具有特異性抗流感病毒甲1型病毒、甲3型病毒、乙型病毒，鼻病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌等抗原的特異性IgY抗體，且較抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物效價高。
比較不同雞種的免疫應答和產(chǎn)生抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體的能力：應用ELISA方法測定抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體結(jié)合抗原的生物學效價見下表：
根據(jù)上述實驗結(jié)果可以清楚地看到：在相同的免疫條件下，采用不同雞種制得的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物，其特異性抗流感病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體的生物學效價一致。
按本發(fā)明實驗進行十一次免疫注射的方法（第一次福氏完全佐劑免疫原免疫，然后每隔一周使用福氏不完全佐劑免疫原加強免疫五次，以后每隔一個月再用福氏不完全佐劑免疫原加強免疫五次）與傳統(tǒng)的三次免疫注射的方法的效果比較，抗流感病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物效價結(jié)果見下表：
根據(jù)上述實驗結(jié)果可以清楚地看到：按本發(fā)明的十一次免疫方法免疫的海蘭褐產(chǎn)蛋母雞與傳統(tǒng)的三次免疫方法免疫的海蘭褐產(chǎn)蛋母雞比較其特異性抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體產(chǎn)生能力的持久。并按本發(fā)明的方法制備出第一次免疫后60天的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物和330天的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物生物學效價相同。本發(fā)明的十一次免疫方法要比傳統(tǒng)的三次免疫方法好很多，其特異性抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體的生物學效價與之相比有差異十分顯著。本發(fā)明的十一次免疫方法所免疫的母雞產(chǎn)生高效價的特異性抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體的時間更長。
流感病毒甲1型病毒、甲3型病毒、乙型病毒，鼻病毒，冠狀病毒，呼吸道合胞病毒，腺病毒，肺炎鏈球菌，金黃色葡萄球菌等不同組成比例對特異性抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體產(chǎn)生的影響，第一次免疫后60天抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY水提取物結(jié)果見下表：
根據(jù)上述實驗結(jié)果可以清楚地看到：按本發(fā)明的方法制備的相同的免疫原但病毒和細菌組成比例不同，免疫產(chǎn)蛋海蘭褐母雞后，并按本發(fā)明的方法制備出第一次免疫后60天免疫母雞雞蛋的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物，其抗不同組成比的病毒和細菌IgY抗體的生物學效價不同。這說明這些病毒和細菌不僅能夠產(chǎn)生IgY抗體，而且產(chǎn)生的特異性IgY抗體的量根據(jù)各種抗原不同而相應變化的。
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體對白細胞吞噬肺炎鏈球菌的影響：按本發(fā)明的方法制備出第一次免疫后100天免疫母雞雞蛋中抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物與活肺炎鏈球菌及靜脈血混合，在37℃，5%CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中共同孵育60分鐘，結(jié)果促進了人靜脈血白細胞吞噬活肺炎鏈球菌。白細胞的吞噬率隨著IgY濃度的升高而增加，見下表：
注：細胞吞噬率(%)：1組: 3組p<0.01；1組:2組p<0.05；2組:3組p<0.01；
根據(jù)上述實驗結(jié)果可以清楚地看到：按本發(fā)明的方法制備出第一次免疫后100天免疫母雞雞蛋的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物能夠促進人外周血白細胞增強吞噬活的肺炎鏈球菌。這種調(diào)理吞噬促進作用可能與改變了細菌表面結(jié)構(gòu)和電場效應相關(guān)。這說明了按本發(fā)明的方法制備出的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物其治療由感冒病毒和肺鏈菌、葡萄球菌引起的炎癥。
抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體能有效地保護致死性流感甲1型病毒(H1N1，A/fm/1/47株)感染的小鼠：按本發(fā)明的方法制備出第一次免疫后100天免疫母雞雞蛋中抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物滴鼻于100倍致死性流感甲1型病毒(H1N1，A/fm/1/47株)感染的小鼠，其有效地保護了100倍致死劑量流感甲1型病毒(H1N1，A/fm/1/47株)感染的小鼠，見下表：
注：三組間差異顯著；其中第一組與第二組和第三組p<0.01；
根據(jù)上述實驗結(jié)果可以清楚地看到：按本發(fā)明的方法制備出第一次免疫后100天免疫母雞雞蛋的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物能夠有效地保護致死劑量流感病毒感染的小鼠。這說明了按本發(fā)明的方法制備出的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復合IgY抗體水提取物其防治感冒療效明確。