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抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復(fù)合IgY抗體制備方法及其應(yīng)用與流程

文檔序號:12399435閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復(fù)合IgY抗體制備方法,其特征在于:它包括以下步驟:

(1)免疫原制備:

取流感病毒甲1型病毒10~20份、流感病毒甲3型病毒20~30份和流感病毒乙型病毒5~10份,鼻病毒10~20份,冠狀病毒10~20份,呼吸道合胞病毒5~10份,腺病毒5~10份,肺炎鏈球菌10~20份,金黃色葡萄球菌20~30份混合成病毒+細菌液;

將等量體積的病毒+細菌液與等量體積的福氏完全佐劑混合,攪拌乳化,制成油包水福氏完全佐劑流感病毒及肺鏈菌、葡萄球菌免疫原;

將等量體積的病毒+細菌液與等量體積的福氏不完全佐劑混合,攪拌乳化,制成油包水福氏不完全佐劑流感病毒及肺鏈菌、葡萄球菌免疫原;

每毫升福氏完全佐劑免疫原和福氏不完全佐劑免疫原中,均含有病毒50~200μg+細菌10億~50億;

(2)免疫:

將福氏完全佐劑免疫原皮下和肌肉10~100點注射給產(chǎn)蛋母雞,每只產(chǎn)蛋母雞注射1ml~1.5ml免疫原,然后每隔一周使用福氏不完全佐劑免疫原1ml皮下和肌肉20~60點注射給產(chǎn)蛋母雞共計五次,此后每隔一個月再使用福氏不完全佐劑免疫原1ml皮下和肌肉10~40點注射給產(chǎn)蛋母雞加強免疫五次;

(3)抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復(fù)合IgY抗體水提取物的制備:

收集免疫20天后的免疫母雞的雞蛋,雞蛋表面用水洗凈、70%酒精浸泡,去蛋殼取蛋黃,去除蛋黃膜取蛋黃液,將蛋黃液與蒸餾水按體積比1:3~11的比例加蒸餾水?dāng)嚢?,并?N HCl調(diào)節(jié)酸堿度至pH4.8~5.5,在溫度4℃下靜置過夜;

將蛋黃稀釋液在4℃高速離心15分鐘取上清,然后經(jīng)截留分子量為10~50kDa的中空纖維超濾器中超濾濃縮10~20倍,再加入0.02%~5.0%的氯已定,并使用1N NaOH調(diào)節(jié)酸堿度至pH7.0~7.5,且在4℃靜置過夜;之后高速離心10分鐘取上清,將上清經(jīng)0.22μ的消毒微孔濾膜過濾除菌,即得抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復(fù)合IgY抗體水提取物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復(fù)合IgY抗體制備方法,其特征在于:所述免疫中的產(chǎn)蛋母雞包括普通環(huán)境下飼養(yǎng)、清潔環(huán)境下飼養(yǎng)、以及SPF環(huán)境下飼養(yǎng)的萊杭雞、海蘭褐雞、羅曼雞、明星雞、以及家養(yǎng)的土雞。

3.如權(quán)利要求1所述的制備方法制取的特異性抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復(fù)合IgY抗體在感冒、鼻炎、鼻竇炎、扁桃體炎、咽喉炎、支氣管炎上的應(yīng)用。

4.一種抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復(fù)合IgY抗體純品的制備方法,其特征在于:它包括如下步驟:將如權(quán)利要求(1)方法制備的抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復(fù)合IgY抗體水提取物加硫酸胺至45%~60%的飽和度充分?jǐn)嚢?,室溫靜置2~12小時,然后高速離心10分鐘,取沉淀物,將沉淀物使用蒸餾水稀釋到原體積量,再加硫酸胺至28%~35%的飽和度充分?jǐn)嚢?,室溫靜置2~12小時,然后高速離心10分鐘,取沉淀物,用蒸餾水溶解后采用中空纖維超濾膜超濾除鹽,即得抗感冒病毒及肺鏈菌、葡萄球菌復(fù)合IgY抗體純品。

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