1.用于分析大豆鐮孢根腐真菌多樣性的特異性引物組,其特征在于,其由:
具有如SEQ ID NO.1所示的第一正向引物;
具有如SEQ ID NO.2所示的第二正向引物;
具有如SEQ ID NO.3所示的第三正向引物;
具有如SEQ ID NO.4所示的第四正向引物中的一種或多種,以及
具有如SEQ ID NO.5所示的共用反向引物組成。
2.一種檢測大豆鐮孢根腐真菌的試劑盒,其特征在于,其具有權(quán)利要求1所述特異性引物組,其中,所述特異性引物組由:
具有如SEQ ID NO.1所示的第一正向引物;
具有如SEQ ID NO.2所示的第二正向引物;
具有如SEQ ID NO.3所示的第三正向引物;
具有如SEQ ID NO.4所示的第四正向引物中的一種或多種,以及
具有如SEQ ID NO.5所示的共用反向引物組成。
3.如權(quán)利要求2所述的試劑盒,其特征在于,使用其進(jìn)行PCR的條件為:
94℃預(yù)變性3min;94℃變性30s,52~56℃退火30s,72℃延伸30s,循環(huán)25~40次;72℃終延伸5min。
4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于,利用其擴(kuò)增出的條帶、條帶數(shù)量和條帶大小就可以判斷大豆鐮孢根腐真菌的數(shù)量和種類。
5.一種檢測大豆根腐病的方法,其特征在于,使用權(quán)利要求1所述的特異性引物組對待測樣本的DNA進(jìn)行多重PCR檢測,若瓊脂凝膠電泳出現(xiàn)條帶,則判斷待測樣本發(fā)生了該鐮孢菌引起的根腐病。
6.如權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,所述使用權(quán)利要求1所述的特異性引物組對待測樣本的DNA進(jìn)行多重PCR檢測的反應(yīng)體系為:
體系總量10~50μL,包括待測樣本的DNA溶液2.0~4.0μL、正向引物1.5~4.0μL、反向引物1.5~4.0μL、Tap Master Mix聚合酶混合液5.0~25.0μL、超純水0~13.0μL。
7.如權(quán)利要求6所述方法,其特征在于,所述使用權(quán)利要求1所述的特異性引物組對待測樣本的DNA進(jìn)行多重PCR檢測的反應(yīng)條件為:
94℃預(yù)變性3min;94℃變性30s,52~56℃退火30s,72℃延伸3s,循環(huán)25~40次;72℃終延伸5min。
8.一種檢測大豆根腐病的方法,其特征在于,使用權(quán)利要求2所述的試劑盒對待測樣本的DNA進(jìn)行檢測,若瓊脂凝膠電泳出現(xiàn)條帶,則判斷待測樣本發(fā)生了大豆鏈孢根腐病,并根據(jù)條帶的大小和數(shù)量,判斷病原菌的數(shù)量與種類,從而有針對性的防治大豆根腐病。
9.如權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于,所述使用權(quán)利要求2所述的試劑盒對待測樣本的DNA進(jìn)行檢測的反應(yīng)體系為:
體系總量10~50μL,包括待測樣本的DNA溶液2.0~4.0μL、正向引物1.5~4.0μL、反向引物1.5~4.0μL、Tap Master Mix聚合酶混合液5.0~25.0μL、超純水0~13.0μL。
10.如權(quán)利要求9所述方法,其特征在于,所述使用權(quán)利要求2所述的試劑盒對待測樣本的DNA進(jìn)行檢測的反應(yīng)條件為:
94℃預(yù)變性3min;94℃變性30s,52~56℃退火30s,72℃延伸3s,循環(huán)25~40次;72℃終延伸5min。